Orientador: Ernesto Jose Dottaviano / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-14T16:10:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Natal_CezarLaerte_M.pdf: 3022571 bytes, checksum: e7c5a13a0e54451be0356216a782351b (MD5) Previous issue date: 1980 / Resumo: Recentemente, o sistema óptico acessório tem despertado o interesse de muitos pesquisadores, principalmente pelo fato de ocorrer em todas as classes de vertebrados. Grande número de trabalhadores anatômicos tem demonstrado que nas aves, este sistema consiste de um via bissináptica, lemniscal, com origem na retina e se projetando para o cerebelo vestibular. A nível, as células ganglionares de DOGIEL fazem sinapses com os receptores e outros circuitos retinianos e se projetam para o núcleo da raiz óptica basal. Este núcleo dá origem a um sistema de fibras musgosas aferentes ao cerebelo vestibular e complexo oculomotor, bilateralmente. A fim de se esclarecer aspectos funcionais deste sistema, foram feitos registros unitários extracelulares em 96 células do núcleo da raiz óptica basal que se projetam no cérebro vestibular de pombos. Os animais eram anestesiados com Uretana ou curarizados (Flaxedil) e mantidos com respiração artificial por fluxo unidirecional. Os principais resultados foram: 1. as latências com que as células foram ativadas antidromicamente eram em média de 2.9 ms e 1.8 ms ipsi e contralateral, respectivamente; 2. as células apresentavam campos receptivos grandes (30 a '120 GRAUS¿) localizados principalmente em regiões periféricas; 3. grande parte delas apresentava atividade espontânea inibida pela luz e seguida de resposta do tipo OFF... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Not informed. / Mestrado / Fisiologia / Mestre em Ciências Biológicas

Orientadores : Lea Rodrigues Simioni, Maria Alice da Cruz-Hofling / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-31T17:57:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Franco_YokoOshima_D.pdf: 36881160 bytes, checksum: f76f491f0939facad9ad247c1983472b (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: A bothropstoxina-I (BthTX-I), principal miotoxina do veneno de Bothrops jararacussu, tem atividades neurotóxica e miotóxica. Investigou-se a habilidade do antiveneno crotoxínico e da heparina em prevenir as atividades neurotóxica e miotóxica da BthTX-I. Preparações nervo ftênico-diaftagma (NFD) de camundongos estimuladas indiretamente (0.2 ms, O.I Hz) foram incubadas com BthTX-I (20 flglmI) ou com BthTX-I pré-incubada com antiveneno ou heparina, por 30 min a 37°C. BthTX-I (20 flg/ml) produziu 50% de bloqueio neuromuscular em preparações NFD em 31 :t 4 min, com completo bloqueio ocorrendo aos 120 mino...Observação: O resumo, na integra, podera ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Bothropstoxm-I (BthTX-I), the principal myotoxm of Bothrops jararacussu venom, has myotoxic and neurotoxic activities. The ability of crotoxm antisermn and heparin in preventing the myotoxic and neurotoxic effects of BthTX-I was investigated. Mouse phrenic nerve-diaphragm preparations (PND) stimulated indirect1y with supramaximaI stimuli (0.2 ms, 0.1 Hz) were incubated with BthTX-I (20 llg/mI) alone or with BthTX-I preincubated with antisermn or heparin for 30 min at 37°C prior to testing. BthTX-I (20 1lg/mI) produced 50% neuromuscuIar blockade in PND preparatíons in 31 ::!:4 min, with complete blockade occurring in 120 min. ...Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Doutorado / Doutor em Farmacologia

Orientador: Luiz Roberto Giorgetti de Britto / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-15T11:57:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marcondes_AnaMaria_M.pdf: 3783695 bytes, checksum: 367ebd16fe3aae3364a8c0f630036655 (MD5) Previous issue date: 1981 / Resumo: Por ter sido identificado anatomicamente em todas as classes de vertebrados com sistema visual desenvolvido, o sistema óptico acessório tem despertado, recentemente, o interesse de muitos pesquisadores. A nível retínico as células ganglionares deslocadas de DOGIEL fazem sinapses com os receptores e cutros circuitos retinianos, tendo já sido comprovado que essa categoria de células é a única que se projeta no núcleo da raiz óptica basal. Esse núcleo, por sua vez, dá origem a um sistema de fibras dirigidas ao complexo nuclear do oculomotor, cerebelo vestibular, complexo olivar inferior, pré-tecto, núcleo do troclear, núcleo intersticial e núcleo da raiz óptica basal contralateral. Apesar da quantidaded relativamente grande de dados neuro-anatômicos a respeito da organização central dessa via visual, o conhecimento de suas funções é bastante limitado. Ela tem sido apontada como participante no nistagmo optocinético e na discriminação de intensidade luminosa. Alguns estudos eletrofisiológicos demonstraram que neurônios do núcleo da raiz óptica basal parecem apresentar grandes campos receptivos e sensibilidade a estímulos em movimento. /com finalidade de esclarecer alguns aspectos funcionais desse sistema foram feitos registro unitários extracelulares de 94 células que se projetam no complexo nuclear do oculomotor de pombos, previamente anestesiados com uretana. Os principais resultados foram: as células foram ativadas antidromicamente a partir do complexo nuclear do oculomotor com latência média de 2,4 ms; ...Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Not informed. / Mestrado / Fisiologia / Mestre em Ciências Biológicas

Cardiovascular diseases are responsible for almost one third of all global deaths yearly, and therefore are largely studied. Cardiomyocytes derived from human induced pluripotent stem cells (hiPSC-CM) have emerged as an exciting technology for cardiac disease modelling and personalised therapy. Nevertheless, issues concerning functional and molecular maturation are still faced. In addition to this, differentiation protocols generally yield a heterogeneous mixed population comprised of nodal, atrial and ventricular-like subtypes, being unsuitable for therapeutic purposes. Bradykinin (BK) is a vasoactive peptide which exerts important physiological roles in the cardiovascular system, having been previously described as important for cellular, keratinocyte and skeletal muscle differentiation. This project performed in cooperation with PluriCell Biotech, a startup specialized in the production and differentiation of hiPSC-CM, has sought (1) characterizing gene and protein expression of molecular markers of maturation and of subtype specification throughout of differentiation; (2) Assessing the electrical functionality of hiPSC-CM through the characterization of subtype-specific action potentials (APs) and (3) Investigating whether the progress of hiPSCCM maturation is regulated by BK through kinin-B2 receptors (B2R). Our results have validated the model that proposes a developmental-dependent switch between skeletal (ssTnI) and cardiac (cTnI) isoforms of troponin I as differentiation progresses, at least to some extent. Furthermore, prolonged time in culture has resulted in higher levels of expression of the ventricular marker MLC2v and in increased rates of ventricular-like action APs. Electrophysiological analysis of hiPSC-CM reveals a mixed population with AP morphologies correspondent to nodal, atrial and ventricular subtypes, all showing pronounced automaticity as well as other features of immature cardiomyocytes, such as low amplitude and depolarization velocity. Such findings are coherent with those from other groups who have attempted to differentiate mature native-like cardiac cells from pluripotent stem cells sources, without fully succeeding. After showing that differentiating hiPSC-CM express a functional and responsive B2R, the receptor was subjected to chronic activation with 10µM BK and 1µM BK or inhibition with 5µM Firazyr+BK. Even though B2R modulation has not interfered negatively with differentiation yields nor cell morphology, analysis of gene andprotein expression of ssTnI or cTnI and of the ventricular marker MLC2v, have revealed no significant results in comparison to untreated controls. This suggests that BK does not interfere on hiPSC-CM maturation nor subtype specification, although we cannot rule out that it could be leading to other unexplored effects. We recommend a closer look into which intracellular signalling pathways become active upon B2R stimulation in hiPSC-CM, in order to narrow down cellular processes for further investigation. / Doenças cardiovasculares são responsáveis por quase um terço de todas as mortes globais anualmente, e por isto o sistema cardiovascular é amplamente estudado. Cardiomiócitos derivados a partir de células-tronco pluripotentes induzidas humanas (hiPSCCM) emergiram como uma promissora tecnologia para modelagem de doenças cardíacas e terapia personalizada. No entanto, desafios acerca de sua maturação funcional e molecular ainda são enfrentados. Além disso, protocolos de diferenciação geralmente levam à obtenção de populações heterogêneas contendo células com fenótipos similares aos de cardiomiócitos nodais, atriais e ventriculares sendo, portanto, inapropriadas para fins terapêuticos. A bradicinina (BK) é um peptídio vasoativo que exerce importantes papeis fisiológicos no sistema cardiovascular, além de ter sido previamente descrita como importante para a diferenciação neuronal, de queratinócitos e de músculo esquelético. Este projeto foi realizado em colaboração com a empresa PluriCell Biotech, uma startup especializada na produção e diferenciação de hiPSC-CM, e buscou (1) caracterizar a expressão gênica e proteíca de marcadores moleculares de maturação e de especificação de subtipos cardíacos durante a diferenciação; (2) avaliar a funcionalidade elétrica de hiPSC-CM por meio da caracterização de seus potenciais de ação (PAs) e (3) Investigar se o progresso da diferenciação de hiPSCCM é regulado por bradicinina por meio do receptor B2 (B2R). Nossos resultados validaram o modelo que propõe um switch na expressão das isoformas funcionais de troponina I esquelética (ssTnI) e cardíaca (cTnI), durante o desenvolvimento e diferenciação celular, pelo menos parcialmente. Além disso, tempo prolongado em cultura resultou em maiores níveis de expressão do marcador ventricular MLC2v, assim como maiores frequências de PAs com morfologias similares a de cardiomiócitos ventriculares. Análise eletrofisiológica de hiPSCCM revelam a existência de uma população mista contendo PAs correspondentes aos subtipos nodais, atriais e ventriculares, assim como pronunciada automaticidade e outros atributos típicos de cardiomiócitos imaturos, como baixa amplitude e devagar velocidade de despolarização. Estes resultados são coerentes com os de outros grupos que ainda não foram totalmente bem-sucedidos em diferenciar células cardíacas maduras similares acardiomiócitos nativos a partir de células-troncos pluripotentes. Após mostrar que as hiPSCCM expressam receptores B2 funcionais e responsivos, submetemos o receptor a uma ativação crônica com BK 10µM e BK 1µM ou inibição crônica com Firazyr 5µM + BK. Apesar da modulação do B2R não ter interferido de forma negativa no rendimento da diferenciação ou na morfologia celular, análise de expressão gênica e proteica de ssTnI e cTnI e do marcador ventricular MLC2v não revelou resultados significativos em comparação aos controles não-tratados. Isto sugere que a BK não interfere na maturação e especificação de subtipos cardíacos em hiPSC-CM, apesar de não podermos ignorar o fato de que ela poderia estar desencadeando outros efeitos inexplorados. Nós recomendamos um estudo mais aprofundado acerca de quais vias de sinalização se tornam ativas após estimulação do receptor B2 em hiPSC-CM, com o objetivo de afunilar quais processos celulares poderiam ser investigados em uma próxima etapa deste estudo.

Cardiovascular diseases are responsible for almost one third of all global deaths yearly, and therefore are largely studied. Cardiomyocytes derived from human induced pluripotent stem cells (hiPSC-CM) have emerged as an exciting technology for cardiac disease modelling and personalised therapy. Nevertheless, issues concerning functional and molecular maturation are still faced. In addition to this, differentiation protocols generally yield a heterogeneous mixed population comprised of nodal, atrial and ventricular-like subtypes, being unsuitable for therapeutic purposes. Bradykinin (BK) is a vasoactive peptide which exerts important physiological roles in the cardiovascular system, having been previously described as important for cellular, keratinocyte and skeletal muscle differentiation. This project performed in cooperation with PluriCell Biotech, a startup specialized in the production and differentiation of hiPSC-CM, has sought (1) characterizing gene and protein expression of molecular markers of maturation and of subtype specification throughout of differentiation; (2) Assessing the electrical functionality of hiPSC-CM through the characterization of subtype-specific action potentials (APs) and (3) Investigating whether the progress of hiPSCCM maturation is regulated by BK through kinin-B2 receptors (B2R). Our results have validated the model that proposes a developmental-dependent switch between skeletal (ssTnI) and cardiac (cTnI) isoforms of troponin I as differentiation progresses, at least to some extent. Furthermore, prolonged time in culture has resulted in higher levels of expression of the ventricular marker MLC2v and in increased rates of ventricular-like action APs. Electrophysiological analysis of hiPSC-CM reveals a mixed population with AP morphologies correspondent to nodal, atrial and ventricular subtypes, all showing pronounced automaticity as well as other features of immature cardiomyocytes, such as low amplitude and depolarization velocity. Such findings are coherent with those from other groups who have attempted to differentiate mature native-like cardiac cells from pluripotent stem cells sources, without fully succeeding. After showing that differentiating hiPSC-CM express a functional and responsive B2R, the receptor was subjected to chronic activation with 10µM BK and 1µM BK or inhibition with 5µM Firazyr+BK. Even though B2R modulation has not interfered negatively with differentiation yields nor cell morphology, analysis of gene andprotein expression of ssTnI or cTnI and of the ventricular marker MLC2v, have revealed no significant results in comparison to untreated controls. This suggests that BK does not interfere on hiPSC-CM maturation nor subtype specification, although we cannot rule out that it could be leading to other unexplored effects. We recommend a closer look into which intracellular signalling pathways become active upon B2R stimulation in hiPSC-CM, in order to narrow down cellular processes for further investigation. / Doenças cardiovasculares são responsáveis por quase um terço de todas as mortes globais anualmente, e por isto o sistema cardiovascular é amplamente estudado. Cardiomiócitos derivados a partir de células-tronco pluripotentes induzidas humanas (hiPSCCM) emergiram como uma promissora tecnologia para modelagem de doenças cardíacas e terapia personalizada. No entanto, desafios acerca de sua maturação funcional e molecular ainda são enfrentados. Além disso, protocolos de diferenciação geralmente levam à obtenção de populações heterogêneas contendo células com fenótipos similares aos de cardiomiócitos nodais, atriais e ventriculares sendo, portanto, inapropriadas para fins terapêuticos. A bradicinina (BK) é um peptídio vasoativo que exerce importantes papeis fisiológicos no sistema cardiovascular, além de ter sido previamente descrita como importante para a diferenciação neuronal, de queratinócitos e de músculo esquelético. Este projeto foi realizado em colaboração com a empresa PluriCell Biotech, uma startup especializada na produção e diferenciação de hiPSC-CM, e buscou (1) caracterizar a expressão gênica e proteíca de marcadores moleculares de maturação e de especificação de subtipos cardíacos durante a diferenciação; (2) avaliar a funcionalidade elétrica de hiPSC-CM por meio da caracterização de seus potenciais de ação (PAs) e (3) Investigar se o progresso da diferenciação de hiPSCCM é regulado por bradicinina por meio do receptor B2 (B2R). Nossos resultados validaram o modelo que propõe um switch na expressão das isoformas funcionais de troponina I esquelética (ssTnI) e cardíaca (cTnI), durante o desenvolvimento e diferenciação celular, pelo menos parcialmente. Além disso, tempo prolongado em cultura resultou em maiores níveis de expressão do marcador ventricular MLC2v, assim como maiores frequências de PAs com morfologias similares a de cardiomiócitos ventriculares. Análise eletrofisiológica de hiPSCCM revelam a existência de uma população mista contendo PAs correspondentes aos subtipos nodais, atriais e ventriculares, assim como pronunciada automaticidade e outros atributos típicos de cardiomiócitos imaturos, como baixa amplitude e devagar velocidade de despolarização. Estes resultados são coerentes com os de outros grupos que ainda não foram totalmente bem-sucedidos em diferenciar células cardíacas maduras similares acardiomiócitos nativos a partir de células-troncos pluripotentes. Após mostrar que as hiPSCCM expressam receptores B2 funcionais e responsivos, submetemos o receptor a uma ativação crônica com BK 10µM e BK 1µM ou inibição crônica com Firazyr 5µM + BK. Apesar da modulação do B2R não ter interferido de forma negativa no rendimento da diferenciação ou na morfologia celular, análise de expressão gênica e proteica de ssTnI e cTnI e do marcador ventricular MLC2v não revelou resultados significativos em comparação aos controles não-tratados. Isto sugere que a BK não interfere na maturação e especificação de subtipos cardíacos em hiPSC-CM, apesar de não podermos ignorar o fato de que ela poderia estar desencadeando outros efeitos inexplorados. Nós recomendamos um estudo mais aprofundado acerca de quais vias de sinalização se tornam ativas após estimulação do receptor B2 em hiPSC-CM, com o objetivo de afunilar quais processos celulares poderiam ser investigados em uma próxima etapa deste estudo.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:52Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-02-17Bitstream added on 2014-06-13T18:41:02Z : No. of bitstreams: 1 brambilla_ejs_dr_botfm.pdf: 3307631 bytes, checksum: 0e260db0e5b26d369266605cc36f3b7c (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Várias técnicas são utilizadas para o tratamento da paralisia facial, entre elas o enxerto de nervo transfacial e a transposição muscular. Estas técnicas foram associadas utilizando neurorrafia término-terminal (NTT) para tornar o músculo temporal duplamente inervado, porém, a secção de nervos saudáveis pode levar à atrofia ou enfraquecimento muscular. Os objetivos deste trabalho foram analisar a ocorrência da dupla inervação muscular através da neurorrafia término-lateral (NTL), avaliar a imediata inervação muscular através da NTL, evitando atrofia muscular e avaliar a ocorrência de degeneração Walleriana no segmento distal à NTL no nervo receptor. Foram utilizados 140 ratos Wistar divididos em sete grupos experimentais. O G1 foi o grupo controle de normalidade e o G2 o controle de desnervação. Em 80 ratos foi realizada a dupla inervação muscular (DIM) suturando o segmento proximal do nervo tibial (NT) na lateral intacta do nervo fibular comum (NFC). Estes ratos foram divididos em quatro grupos: G3 no qual os animais foram sacrificados após 120 dias; G4 onde 120 dias após a realização da DIM, o NFC foi seccionado proximal à NTL, estes animais foram sacrificados após 30 dias da secção; no G5 os animais foram sacrificados após 150 dias; no G6 120 dias após a realização da DIM, o NFC e o NT foram seccionados proximalmente à NTL e os animais foram sacrificados após 30 dias das secções; e no G7 o nervo fibular comum foi seccionado e, após 30 dias, o segmento proximal do NT foi suturado à lateral do coto distal do NFC e os animais foram sacrificados 120 dias após a NTL. Após realização dos testes da marcha e eletrofisiológico, os músculos tibiais craniais direitos (MTCD) foram removidos e pesados e os segmentos de nervo de interesse também foram coletados. Foram realizadas análises histomorfométricas das fibras do MTCD e fibras nervosas... / Among several techniques for facial palsy treatment, we have the transfacial nerve graft and the muscular transposition. Nowadays, these methods were associated using end–to–end neurorraphy (EEN). Even though the temporalis muscle became double innervated, the health nerve section possibly leads the muscular atrophy or even its weakness. The aim of this study was to analyze, through end-to-side neurorrhaphy (ESN), the double innervation of the muscle, the immediately muscular innervation and also evaluate the Wallerian degeneration occurrence in the distal segment of receptor nerve. One hundred forty Wistar rats were divided in seven experimental groups, 20 animals per group. The G1 was the sham group; G2 the control dennervation group. In 80 rats the double muscular innervations (DMI) was performed, the proximal segment of tibial nerve (TN) was sutured laterally to the intact peroneal nerve (PN). These 80 rats were divided in four groups: in G3 the animals were killed after 120 days; in G4, post 120 days, the peroneal nerve was cut proximal the ESN and after more 30 days the animals were killed; in the group G5 the rats were killed after 150 days; in G6 post 120 days, the peroneal and also the tibial nerves were cut proximal to the ESN and the animals were killed 30 days after the second surgery. Finally in the G7 the fibular nerve was sectioned and after 30 days, the proximal end of tibial nerve was sutured laterally to the peroneal distal stump. These rats (G7) were killed 120 days post ESN. The animals were submitted to walking track analysis and electrophysiological tests. After that, the right tibial cranial muscle (RTCM) was removed and the aim nerve segments were collected and weighted. The rats were killed with high doses of intraperitoneal sodium pentobarbital. Histomorphometrical analysis of TCM and nervous fiber was performed... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:03:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000431164-Texto+Completo-0.pdf: 1973877 bytes, checksum: f9ab98c6ed30c4f7dd64dc812d50d527 (MD5) Previous issue date: 2011 / One of the symptoms of Parkinson’s Disease (PD) in patients is alterations in swallowing patterns, and this contributes to social and physical problems. During outpatient treatment, it is necessary to have clinical diagnostic tools that provide data relating to the evolution of this symptom. The objective of this study is to propose a standard swallowing clinical assessment score (SCAS) in patients with PD, with a score attributed to each paramater evaluated; verify if there exists a correlation between complaints about swallowing and this clinical evaluation; verify association between complaints and the SCAS with clinical characteristics of PD, the evolution and severity of the disease, and vocal parameters related to breathing. Another aim of this study was to investigate the simultaneous eletrophysiological characteristics of swallowing and breathing. The final proposal for SCAS is a theoretical score that varies from 0 to 450 points, where 0 corresponds to swallowing with no alteration. The study evaluated 174 patients with diagnosed idiopathic PD and no correlation was found between the SCAS and complaints regarding swallowing.The cardinal symptom that was most associated to alterations in the oral and pharyngeal phase of swallowing was bradykinesia, while rigidity was correlated to the pharyngeal phase, and postural instability and gait difficulty had positive correlation with more severe parameters related to dysphagia. Autonomic symptons showed no association to the SCAS or complaints regarding swallowing. Although sialorrhea may be present from the beginning of the disease, the more severe manifestations of the ineficiency of the swallowing mechanism were not observed in the initial phases of the disease. During the eletrophysiological evaluation of the coordination between swallowing and breathing, periods of prolonged apnea during spontaneous breathing and the predominance of the inspiratory phase at the beginning of swallowing and immediately following apnea was verified. The search for a physiopathological understanding of alterations in swallowing in PD may contribute to possible pharmacological or surgical treatments, but above all, it is essential to developing a robust theoretical base underlying strategies for the rehabilitation of this function. / A alteração na deglutição em indivíduos com doença de Parkinson (DP) é parte dos sintomas não-motores desta doença e contribui para problemas de natureza física e social. Durante o acompanhamento ambulatorial, se faz necessária a utilização de ferramentas clínicas diagnósticas que forneçam dados sobre a evolução deste sintoma. O objetivo do presente estudo é propor uma padronização de escore do exame clínico da deglutição (ESED) em pacientes com DP com uma pontuação atribuída à cada parâmetro avaliado; verificar se existe correlação entre as queixas de deglutição e esta avaliação clínica; verificar a associação das queixas e do ESED com as características clínicas da DP, com a evolução e a gravidade da doença e com parâmetros vocais relacionados à respiração. Este estudo também objetivou investigar as características eletrofisiológicas simultâneas da deglutição com a respiração. A proposta final do ESED tem uma pontuação teórica que varia de 0 a 450 pontos, onde zero corresponde à deglutição sem nenhuma alteração. Foram avaliados 174 pacientes com diagnóstico de DP idiopática e não encontramos correlação entre o ESED e as queixas de alteração na deglutição.A bradicinesia foi o sintoma cardinal que mais se associou às alterações da fase oral e faríngea da deglutição, a rigidez teve associação com a fase faríngea enquanto que a instabilidade postural e a alteração da marcha tiveram forte associação com os parâmetros mais graves relacionados à disfagia. Os sintomas autonômicos não apresentaram associação com o ESED nem com as queixas de deglutição. Embora a ocorrência de sialorreia possa estar presente desde o inicio da doença, as manifestações mais graves de ineficiência do mecanismo de deglutição não foram observadas nas fases iniciais da doença. Na avaliação eletrofisiológica da coordenação da deglutição com a respiração, verificamos períodos de apneia prolongada durante a respiração espontânea e uma maior frequência da fase inspiratória no inicio da deglutição e imediatamente após a apneia. A busca pelo entendimento fisiopatológico das alterações de deglutição na DP podem contribuir para possíveis abordagens terapêuticas farmacológicas e cirúrgicas, mas sobretudo, são essenciais para o construto de bases teóricas robustas subjacentes às estratégias de reabilitação desta função.

Orientador: Fausto Viterbo / Banca: José Carlos Marques de Faria / Banca: Amilton Antunes Barreira / Banca: José Antonio Garbino / Banca: Susana Fabíola Müller / Resumo: Várias técnicas são utilizadas para o tratamento da paralisia facial, entre elas o enxerto de nervo transfacial e a transposição muscular. Estas técnicas foram associadas utilizando neurorrafia término-terminal (NTT) para tornar o músculo temporal duplamente inervado, porém, a secção de nervos saudáveis pode levar à atrofia ou enfraquecimento muscular. Os objetivos deste trabalho foram analisar a ocorrência da dupla inervação muscular através da neurorrafia término-lateral (NTL), avaliar a imediata inervação muscular através da NTL, evitando atrofia muscular e avaliar a ocorrência de degeneração Walleriana no segmento distal à NTL no nervo receptor. Foram utilizados 140 ratos Wistar divididos em sete grupos experimentais. O G1 foi o grupo controle de normalidade e o G2 o controle de desnervação. Em 80 ratos foi realizada a dupla inervação muscular (DIM) suturando o segmento proximal do nervo tibial (NT) na lateral intacta do nervo fibular comum (NFC). Estes ratos foram divididos em quatro grupos: G3 no qual os animais foram sacrificados após 120 dias; G4 onde 120 dias após a realização da DIM, o NFC foi seccionado proximal à NTL, estes animais foram sacrificados após 30 dias da secção; no G5 os animais foram sacrificados após 150 dias; no G6 120 dias após a realização da DIM, o NFC e o NT foram seccionados proximalmente à NTL e os animais foram sacrificados após 30 dias das secções; e no G7 o nervo fibular comum foi seccionado e, após 30 dias, o segmento proximal do NT foi suturado à lateral do coto distal do NFC e os animais foram sacrificados 120 dias após a NTL. Após realização dos testes da marcha e eletrofisiológico, os músculos tibiais craniais direitos (MTCD) foram removidos e pesados e os segmentos de nervo de interesse também foram coletados. Foram realizadas análises histomorfométricas das fibras do MTCD e fibras nervosas... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Among several techniques for facial palsy treatment, we have the transfacial nerve graft and the muscular transposition. Nowadays, these methods were associated using end-to-end neurorraphy (EEN). Even though the temporalis muscle became double innervated, the health nerve section possibly leads the muscular atrophy or even its weakness. The aim of this study was to analyze, through end-to-side neurorrhaphy (ESN), the double innervation of the muscle, the immediately muscular innervation and also evaluate the Wallerian degeneration occurrence in the distal segment of receptor nerve. One hundred forty Wistar rats were divided in seven experimental groups, 20 animals per group. The G1 was the sham group; G2 the control dennervation group. In 80 rats the double muscular innervations (DMI) was performed, the proximal segment of tibial nerve (TN) was sutured laterally to the intact peroneal nerve (PN). These 80 rats were divided in four groups: in G3 the animals were killed after 120 days; in G4, post 120 days, the peroneal nerve was cut proximal the ESN and after more 30 days the animals were killed; in the group G5 the rats were killed after 150 days; in G6 post 120 days, the peroneal and also the tibial nerves were cut proximal to the ESN and the animals were killed 30 days after the second surgery. Finally in the G7 the fibular nerve was sectioned and after 30 days, the proximal end of tibial nerve was sutured laterally to the peroneal distal stump. These rats (G7) were killed 120 days post ESN. The animals were submitted to walking track analysis and electrophysiological tests. After that, the right tibial cranial muscle (RTCM) was removed and the aim nerve segments were collected and weighted. The rats were killed with high doses of intraperitoneal sodium pentobarbital. Histomorphometrical analysis of TCM and nervous fiber was performed... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:05:27Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Programa de Apoio a Núcleos de Excelência (PRONEX) / As epilepsias do lobo temporal são as que apresentam maior refratariedade ao tratamento farmacológico e perfazem 2/3 das intervenções cirúrgicas de epilepsia, sendo portanto de grande custo social, econômico e psicológico. Assim, modelos animais de epilepsia do lobo temporal são de grande relevância não só para o entendimento das bases neurais dessa patologia, mas também para o desenvolvimento de abordagens terapêuticas capazes de evitar a instalação da doença. Esses são os objetivos da presente dissertação de doutorado. Após um evento traumático (no caso deste trabalho, um estado de mal epiléptico), diversas alterações morfológicas e fisiológicas acontecem, caracterizando a gênese da síndrome epiléptico (epileptogênese). Dentre as alterações podemos destacar a intensa fosforilação de proteínas em resíduos de tirosina e a ativação de diferentes segundos mensageiros. Os dois primeiros capítulos desta tese descrevem a tentativa de bloquear os processos de epileptogênese por meio da inibição da fosforilação de resíduos de tirosma através do tratamento farmacológico com inibidores das tirosina cinases, a herbimicina A e o K-252a. O terceiro capítulo analisa eletrofisiologicamente o circuito neural do giro denteado em animais que apresentavam uma mutação em um sítio inibitório da proteína cálcio/calmodulina cinase do tipo II (CaMK1I). No primeiro capítulo, mostramos que o tratamento agudo com herbimicina A (348M, 5L, icv), é capaz de bloquear a potenciação duradoura (LTP) induzida por um estímulo tetânico bem como de atenuar (~40 por cento) a ativação neuronal (expressão de c-Fos) decorrente de um estado de mal epiléptico induzido pela administração sistêmica de pilocarpina (SE). Apesar dos significativos efeitos agudos, este tratamento mostrou-se incapaz de atenuar a freqüência de crises espontâneas, bem como o padrão de morte neuronal observado após o estado de mal epiléptico induzido pela pilocarpina. Entretanto, o tratamento com herbimicina A alterou o padrão de marcação de metais pesados (Zn+2) no hilo do giro denteado e na região de CA, do hipocampo, porém não apresentou efeito sobre o padrão de brotamento das fibras musgosas observado na camada molecular do giro denteado. No segundo capítulo, mostramos que a herbimicina e o K252a modificam a atividade epileptiforme induzida pela administração intra-hipocampal de ácido caínico, sem alterar o padrão de morte neuronal. Esses resultados sugerem que o tratamento com inibidores de proteínas tirosina cinases é capaz de modificar o padrão de ativação agudo do hipocampo após um estímulo (ie., o estado de mal epiléptico ou a LTP), porém sem qualquer efeito sobre o processo de epileptogênese. No terceiro capítulo, estudamos a excitabilidade e a plasticidade do giro denteado à estimulação da via perfurante (principal aferência da formação hipocampal) em animais que apresentam uma CaMKII geneticamente modificada. Essa proteína uma vez ativada não pode ser inibida. A caracterização eletrofisiológica demonstrou que esses animais apresentam potenciais de campo evocados no giro denteado aparentemente semelhante aos animais controle (wild-type), porém sua responsividade a padrões de estimulação em salvas e sua plasticidade apresentaram clara alteração. Essa modificação foi caracterizada por uma maior variabilidade nas respostas à trens de estimulação (freqüências de 1 e 2 Hz) e maior inibição do pulso pareado em trens de estimulação (para pulsos pareados aplicados a freqüência de 5 Hz). Além disso, conforme já descrito na literatura, mostramos que a susceptibilidade a atividade epileptiforme depende do padrão de estimulação utilizado para os diferentes animais (mutantes vs. wild-type). Assim, utilizando o modelo clássico do abrasamento demonstramos que a mutação não altera a evolução da epileptogênese. Entretanto, ao utilizarmos duas variantes de um padrão de estimulação similar à freqüência teta (5Hz, Intermittent vs. Continuous theta-burst stimulations), demonstramos a importância da mutação na manutenção da excitabilidade do giro denteado. Esses resultados destacam a importância da CaMKII na atividade epileptiforme além de sugerir novas abordagens experimentais (ie., sensibilidade à padrões de estimulação eletrofisiológica) no estudo da epiloptogênese. Em resumo, os resultados apresentados nessa tese contribuem para um melhor entendimento dos fenômenos subjacentes aos processos de plasticidade neuronal e da contribuição destes para o fenômeno de epiloptogênese, além de sugerir abordagens promissoras de intervenção e estratégias farmacológicas de relevância clínica. / Temporal lobe epilepsies are highly refractory to pharmacological treatment. Up to 70% of these patients undergo chirurgical resection of temporal region, procedure with important consequences for the social, economic and psychological spheres. Experimental animal models that mimic temporal lobe epilepsy provide an insightful approach to study the neural basis of epilepsy as well as create opportunities to test promising therapeutic drugs. The present thesis tests the antiepileptogenic activity of two protein tyrosine kinase inhibitors and the relevance of Ca+2/calmodulin kinase type II (CaMKII) mutants. Multiples morphological and physiological alterations take place after a traumatic brain injury (in this thesis, the status epilepticus) leading the animal to an epileptic conditions. During this period, the epileptogenesis process, there is strong tyrsine phosphorylation with the activation of many second messengers. The first two chapters of the thesis describe experiments in which herbimycin A and K-252a, two protein tyrosine kinase inhibitors, were used to attenuate synaptic plasticity and epileptogenesis. The third chapter, the dentate gyrus network was studied after angular bundle stimulation in animals presenting one punctual mutation at the autoinhibitory phosphorylation site of the CaMKII. In the first chapter, we showed that one single herbimycin A injection (348μM, 5μL, icv) was able to attenuate long-term potentiation (LTP) in the commissural CA3 neurons and also, to decrease status epilepticus- (SE-) induced neuronal activation (c-Fos expression) in almost 40%.Although markedly acute effects, the present herbimycin A treatment was not able to diminish spontaneous seizure frequency, cell death or aberrant mossy fiber sprouting observed after the pilocarpine-induced SE. Curiously, herbimycin-treated animals presented decreased neo-Timm staining in the hilus and CA3 region despite the epileptic condition. In the second chapter, we confirmed the ability of protein tyrosine kinase inhibitors to decrease SE-induced neuronal activation. Herbimycin A icv treatment altered the kainic acid-induced epileptiform profile in EEG recordings. Cell death pattern was not altered by any pharmacological treatment. These results suggest that protein tyrosine kinase inhibitiors are able to modify the acute neuronal activation and plasticity (ictogenesis or LTP) but is ineffective in attenuating the epileptogenesis process.In the third chapter, we studied the dentate gyrus excitability and plasticity after angular bundle stimulation in CaMKII mutant animals. Once in its self-sustained mode, this mutation does not allow the reduction of the catalytic activity of the kinase. These animals present normal electrophysiological profiles (similar to wild-type animals) but with reduced amplitude. Shortterm plasticity was clearly altered. Mutant animals presented increased variability in the responses to trains of stimulation at 1 and 2 Hz, and at at 5Hz stronger paired-pulse inhibition. Accordingly to the literature, we also showed that the epileptiform susceptibility depends on the stimulation pattern used in both animals (mutants vs. wild-type). Thus, although the mutation did not altered the behavior and the electrographic kindling evolution, we showed that mutant animals were prone to afterdischarges when stimulate by an intermittent theta-burst stimulation. On the other hand, the same animals needed more bursts to induce afterdischarges when the stimulation was set in the continuos mode.Taken together, the present results contribute to a better understanding of the protein tyrosine kinase and CaMKII function in neuronal plasticity underlying the epileptogenesis process and sum efforts in searching for a clinic antiepileptogenic drug. / FAPESP: 00/10826-3 / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:05:32Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Programa de Apoio a Núcleos de Excelência (Pronex) / A epilepsia do lobo temporal vem sendo amplamente investigada com diferentes técnicas tanto em pacientes como em modelos experimentais, entre os quais se destaca aquele induzido pela pilocarpina. Assim como as estruturas hipocampais têm sido apontadas como responsáveis pela gênese do foco epiléptico, o cerebelo vem sendo considerado como uma importante estrutura de caráter inibitório, desde a primeira observação feita por Russel em 1894. Este papel se deve à presença abundante de neurônios GABAérgicos no córtex e núcleos cerebelares, com função inibitória, entre os quais se destacam os neurônios de Purkinje (NP). Os estudos eletrofisiológicos in vitro demonstraram uma alteração no padrão de disparos espontâneos dos animais com epilepsia. Contrariamente aos controles, freqüentemente as células de animas com epilepsia não disparavam potencias de ação (PA) de forma espontânea. Outro fator importante foi à diferença de potenciação dos disparos espontâneos nos grupos controle e portador de epilepsia em resposta a análogo de óxido nítrico (NO). Camundongos portadores de epilepsia aumentaram a sua freqüência de disparo em relação à linha de base, porém, este aumento foi significativamente menor do que o observado no grupo controle. A concentração dos principais aminoácidos foi quantificada pela técnica de cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC). Os resultados revelaram diferenças significativas no cerebelo entre as fases aguda e crônica do modelo. As concentrações de aspartato (ASP), glutamato (GLU), taurina (TAU) e GABA, aumentaram na fase aguda. Durante a fase crônica do modelo, houve diminuição significativa das concentrações de todos os xiv aminoácidos testados. Também podemos observar um comportamento distinto ao compararmos as análises dos aminoácidos realizadas no cerebelo e as de estudo prévio no hipocampo. Através dos estudos anatômicos, constatamos que a fase silenciosa do modelo já induz perda dos neurônios de Purkinje, que é agravada pelo aparecimento das crises espontâneas recorrentes. Essas células também comprovaram ser bastante susceptíveis aos efeitos do envelhecimento e quando este se encontra associado à epilepsia, ocorre a morte de um número próximo a 50% do total de neurônios de Purkinje. De uma maneira geral, os resultados demonstram alterações estruturais e eletrofisiológicas no cerebelo de roedores com epilepsia. Estas lesões cerebelares são posteriormente agravadas pela ação das crises epilépticas recorrentes, o que possivelmente compromete a capacidade inibitória do cerebelo. / Due to the exuberance of its inhibitory output toward deep cerebellar nuclei and extracerebellar structures, the cerebellum has been postulated to act inhibiting epileptic activity. However, and depending on the intensity and frequency of the seizures, such inhibitory capacity may be compromised by epilepsy. Epileptic cx activity generated in limbic structures could reach the cerebellum, via anatomically distant but interconnected areas, and induce severe degrees of damage. This investigation is aimed at to study the physiological and structural properties of Purkinje neurons (PN) in the model of temporal lobe epilepsy induced by pilocarpine in rodents. In the present study, using patch clamp recordings, we show differences in the spontaneous firing rate pattern of PNs recorded in adult male mice with temporal lobe epilepsy (TLE). Most PN of this group did not fire spontaneously in the presence of 50μm picrotoxin and 5mM kynurenic acid. In addition, mice with epilepsy did not show the same potentiation in spontaneous firing rate in response to NO donor analog 8p-CPT-cGMP (50µm). In addiction, the concentrations of main aminoacids were quantified trough HPLC technique. The concentrations of all aminoacids tested decreased significantly in the chronic phase of the pilocarpine model of temporal lobe epilepsy. PN loss was also investigated, the cerebellum of adult male Wistar rats were cut at 8-10 μm, stained in Nissl preparation and nucleated cells were counted during the silent and chronic phase of the pilocarpine model of TLE. The status epilepticus per se was sufficient to induce neuronal loss, which was aggravated after the beginning of spontaneous recurrent seizures. In addiction, we quantified the dendrite spines in PNs during the chronic phase of the model, however no alteration in density was observed. Taken together, the results showed different levels of alterations and damage to the cerebellar circuitry. As PNs are considered the main element in cerebellar cortex this may represent a larger cascade of events in the whole cerebellum induced by temporal lobe epilepsy. / BV UNIFESP: Teses e dissertações