Records of embryo production in Red Brahman donor cows (n=50) and F1 recipients (n=531) were evaluated from the collection day to the birth of the embryo produced. The effects of the sire of the donor and the embryo, protocol, season-protocol, and body condition of the donor on the total number of good, degenerated, unfertilized, and total embryos were evaluated. The number of donors collected for protocols 1, 2, and 3 were 50, 39, and 46 respectively. The production of good transferable embryos, and embryos/collection for protocols 1, 2, and 3 were 171 (4.6), 152 (4.6), and 208 (6.3) respectively. The final status of each recipient was recorded as non-pregnant, resorption, abortion, and live calf. The model used to analyze pregnancy state was: protocol, embryo stage, embryo quality, corpora lutea size, and season. The effects of sire of the embryo, season-protocol, protocol, embryo stage, embryo quality, body condition score, and corpora lutea size on gestation length and birth weight were analyzed. Season-protocol affected (P<0.05) the number of degenerated embryos. Mean number of degenerated embryos were higher (P<0.05) during winter for protocols 2 and 3 than during other seasons. The ratio for good embryos differed (P<0.01) by sire of donor. The final status of recipients was affected (P<0.01) by protocol. The maximum percentage of live calves and the minimum percentage of non-pregnant recipients were achieved for protocol 3. Gestation length differed (P<0.01) by sire of the embryo, season-protocol, protocol, and body condition score. Spring-protocol 3 resulted in the shortest while Fall-protocol 2 resulted in the longest mean gestation length. Calf birth weight differed (P<0.05) by season-protocol and by embryo quality. The lightest birth weights resulted from embryo quality grade 2 and from spring-protocol 3. These results indicate that using protocols that combine 17??-estradiol, FSH and GnRH (protocol 3) during the spring in conjunction with selection for sire of donor can increase embryo production by Red Brahman cows. Use of protocol 3 with donors in the spring, selection of embryo sire for short gestation length and transfer of quality grade 2 embryos can be used to minimize the incidence of dystocia in recipients.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-03-02Bitstream added on 2014-06-13T19:45:12Z : No. of bitstreams: 1 perini_ap_dr_jabo.pdf: 421844 bytes, checksum: 8711bc62b0ce38924a7b61b38ef31cf7 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Foram estudadas modificações feitas no tempo de maturação in vitro de oócitos bovinos, incubação dos espermatozóides e separação dos mesmos por gradiente de densidade de PercollTM, bem como a associação dessas técnicas antes da fecundação para que se consiga desviar a proporção sexual dos embriões para fêmeas. O controle de qualidade foi feito em cada etapa dos procedimentos avaliando-se os parâmetros de motilidade, vigor e concentração dos espermatozóides, bem como taxa de clivagem e produção in vitro dos embriões. A proporção sexual foi avaliada pela técnica da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) e por transferências de embriões em receptoras. Pela técnica da PCR concluiu-se que a incubação dos espermatozóides em meio FIV sem heparina por 12 horas, desviou 59% o sexo dos embriões para fêmeas, a diminuição do tempo de maturação não desviou e essas duas técnicas associadas a centrifugação em gradiente não aumentaram o desvio da proporção sexual, porém o gradiente de sexagem foi eficaz em sexar 64% dos espermatozóides para fêmeas. Obteve-se uma taxa média de prenhez de 36,73% e uma proporção de fêmeas de 88,88% com embriões produzidos a partir da associação da redução no tempo de maturação dos oócitos ao gradiente de sexagem / Were studied modifications made at the time of in vitro maturation of oocytes, sperm incubation and separation thereof by density gradient PercollTM as well as the combination of these techniques prior to fertilization to be able to divert the sex ratio of embryos females. Quality control was done at each stage of the procedures by evaluating the parameters of motility, vigor and concentration of spermatozoa and rate of cleavage and in vitro production of embryos. The sex ratio was assessed by means of Polymerase Chain Reaction (PCR) and embryo transfer into recipients. By the technique of PCR it was found that incubation of spermatozoa in IVF medium without heparin for 12 hours, 59% deviated sex of embryos for females, the reduction time of maturation is not shifted and associated with these two techniques do not increase the deviation of the sex ratio by gradient centrifugation, but the gradient was effective in sexing 64% of sperm to females. We obtained a mean pregnancy rate of 36.73% and a ratio of 88.88% of females with embryos produced from the combination of the reduction in the time of oocyte maturation to the gradient of sexing

Foram avaliados os efeitos do intervalo entre aspirações foliculares (IEA; OPU) e do tratamento com somatrotopina bovina recombinante (bST) na produção in vitro de embriões bubalinos. Dezesseis fêmeas foram distribuídas aleatoriamente em quatro grupos (fatorial 2x2): (1) G-Cont7: sessões de OPU uma vez por semana; (2) G-bST7: sessões de OPU uma vez por semana + 500mg de bST a cada 14 dias; (3) G-Cont14: sessões de OPU a cada 14 dias e (4) G-bST14: sessões de OPU + 500mg de bST a cada 14 dias. Os animais do G-Cont7 e G-bST7 foram submetidos a 16 sessões de OPU, e os animais do G-Cont14 e G-bST14 a oito sessões de OPU. Nas sessões realizadas uma vez por semana (G-s/bST) reduziu-se o número de folículos aspirados, de oócitos totais recuperados e de oócitos viáveis (P0,004). O tratamento com bST aumentou o número de folículos aspirados (P<0,0001), o total de oócitos recuperados e a taxa de recuperação (P=0,07). No entanto, nem o IEA e nem o tratamento com bST aumentaram a produção in vitro de embriões bubalinos. / It was evaluated the effect of OPU interval and bST treatment on embryo production in buffalo. Sixteen females were randomly assigned in 4 groups, in a 2x2 factorial experimental design: (1) G-Cont7: OPU session each seven days; (2) G-bST7: OPU session each seven days plus 500mg of bST each 14 days; (3) G-Cont14: OPU session each 14 days and (4) G-bST14: OPU session plus 500mg of bST each 14 days. Animals of G-Cont7 and G-bST7 were submitted to 16 OPU sessions, and those of G-Cont14 and G-bST14 to 8 OPU sessions. The OPU session performed every week (G-s/bST) decreased the number of aspirated follicles, and the number of total and viable recovery oocytes (P0.004). The treatment with bST increased the number of aspirated follicles (P<0.0001), the number of recovery oocytes and the oocyte recovery rate (P=0.07). However, neither OPU interval nor bST treatment increased the in vitro embryo production in buffalo.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-06-13Bitstream added on 2014-06-13T19:38:30Z : No. of bitstreams: 1 bastos_mr_me_botfmvz.pdf: 790909 bytes, checksum: 06b5f7cf1b70d4316f61ff63d1907d62 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Objetivou-se avaliar o efeito da condição corporal e/ou da alta ingestão de matéria seca (AIMS) na produção in vivo de embriões de fêmeas bovinas superovuladas. Em um primeiro experimento, 14 vacas Simental x Nelore não-lactantes com elevado escore de condição corporal (ECC) foram divididas em grupos de Manutenção=M ou alta ingestão de matéria seca=AIMS. As vacas do grupo AIMS receberam dieta com 180% da manutenção, entre 7 dias antes do início da superovulação (SOV) e o final das aplicações de FSH. O grupo M recebeu dieta de manutenção. O número de folículos recrutados e ovulados não diferiu entre os grupos (P>0,10). Entretanto, os números de estruturas totais e embriões viáveis colhidos foram maiores no grupo M (P<0,05). Em um segundo experimento avaliou-se a influência do ECC associado ou não da AIMS na produção embrionária em 36 novilhas Nelore. AIMS ocorreu por 14 dias antes do início da SOV. Após colheita, os embriões viáveis foram congelados para posterior cultivo até eclosão. Não houve diferença entre os grupos na população folicular ao início da SOV, na resposta superestimulatória ou superovulatória, nem no número ou qualidade dos embriões colhidos. As novilhas com <ECC apresentaram maiores concentrações séricas de IGF-I, entretanto as com >ECC tiveram insulina mais alta. Os embriões dos animais com >ECC apresentaram diâmetro, taxas de eclosão e expressão relativa de mRNA do gene BAX superiores após cultivo do que os coletados no grupo com <ECC. Os resultados conflitantes entre os experimentos e com dados da literatura sugerem haver diferentes respostas à alimentação dependendo da raça ou estado nutricional na produção embrionária. / The aim of this study was to investigate the effect of body condition and/or high dry matter intake (flushing) on in vivo embryo production in superovulated female cattle. A first experiment used 14 non-lactating Nelore x Simmental cows with a high body condition score (BCS) divided into Maintenance=M or Flushing=F groups. Seven days prior to onset of superovulation (SOV) until the last day of treatment with FSH, group F cows were fed a diet to achieve 180% of maintenance. Group M cows were fed a maintenance diet. The number of recruited or ovulated follicles did not differ between groups (P>0.10). However, the total number of embryos/ova and the number of viable embryos recovered were greater in the M group (P<0.05). A second study investigated whether differences in BCS, associated or not with nutritional flushing, influence the embryo production in 36 Nelore heifers. Nutritional flushing was conducted during 14 days prior to the onset of SOV. After recovery, viable embryos were frozen to be subsequently cultured until hatching. There was no difference among groups for follicle population at onset of SOV, superstimulatory or superovulatory responses, nor number or quality of recovered embryos. Heifers with <BCS had grater blood concentrations of IGF-I, whereas heifers with >BCS had grater insulin. Embryos collected from >BCS heifers had greater diameter, hatching rates and relative expression of the BAX gene mRNA than the ones recovered from <BCS heifers. The conflicting results between the experiments and also in relation to data from the literature suggest that there are different responses to diets depending on animal breed or nutritional status on embryo production.

Orientador: Vera Fernanda Martins Hossepian de Lima / Banca: Simone Cristina Méo Niciura / Banca: Juliana Corrêa Borges Silva / Banca: Wilter Ricardo Russiano Vicente / Banca: Paulo Henrique Franceschini / Resumo: Foram estudadas modificações feitas no tempo de maturação in vitro de oócitos bovinos, incubação dos espermatozóides e separação dos mesmos por gradiente de densidade de PercollTM, bem como a associação dessas técnicas antes da fecundação para que se consiga desviar a proporção sexual dos embriões para fêmeas. O controle de qualidade foi feito em cada etapa dos procedimentos avaliando-se os parâmetros de motilidade, vigor e concentração dos espermatozóides, bem como taxa de clivagem e produção in vitro dos embriões. A proporção sexual foi avaliada pela técnica da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) e por transferências de embriões em receptoras. Pela técnica da PCR concluiu-se que a incubação dos espermatozóides em meio FIV sem heparina por 12 horas, desviou 59% o sexo dos embriões para fêmeas, a diminuição do tempo de maturação não desviou e essas duas técnicas associadas a centrifugação em gradiente não aumentaram o desvio da proporção sexual, porém o gradiente de sexagem foi eficaz em sexar 64% dos espermatozóides para fêmeas. Obteve-se uma taxa média de prenhez de 36,73% e uma proporção de fêmeas de 88,88% com embriões produzidos a partir da associação da redução no tempo de maturação dos oócitos ao gradiente de sexagem / Abstract: Were studied modifications made at the time of in vitro maturation of oocytes, sperm incubation and separation thereof by density gradient PercollTM as well as the combination of these techniques prior to fertilization to be able to divert the sex ratio of embryos females. Quality control was done at each stage of the procedures by evaluating the parameters of motility, vigor and concentration of spermatozoa and rate of cleavage and in vitro production of embryos. The sex ratio was assessed by means of Polymerase Chain Reaction (PCR) and embryo transfer into recipients. By the technique of PCR it was found that incubation of spermatozoa in IVF medium without heparin for 12 hours, 59% deviated sex of embryos for females, the reduction time of maturation is not shifted and associated with these two techniques do not increase the deviation of the sex ratio by gradient centrifugation, but the gradient was effective in sexing 64% of sperm to females. We obtained a mean pregnancy rate of 36.73% and a ratio of 88.88% of females with embryos produced from the combination of the reduction in the time of oocyte maturation to the gradient of sexing / Doutor

Foram avaliados os efeitos do intervalo entre aspirações foliculares (IEA; OPU) e do tratamento com somatrotopina bovina recombinante (bST) na produção in vitro de embriões bubalinos. Dezesseis fêmeas foram distribuídas aleatoriamente em quatro grupos (fatorial 2x2): (1) G-Cont7: sessões de OPU uma vez por semana; (2) G-bST7: sessões de OPU uma vez por semana + 500mg de bST a cada 14 dias; (3) G-Cont14: sessões de OPU a cada 14 dias e (4) G-bST14: sessões de OPU + 500mg de bST a cada 14 dias. Os animais do G-Cont7 e G-bST7 foram submetidos a 16 sessões de OPU, e os animais do G-Cont14 e G-bST14 a oito sessões de OPU. Nas sessões realizadas uma vez por semana (G-s/bST) reduziu-se o número de folículos aspirados, de oócitos totais recuperados e de oócitos viáveis (P0,004). O tratamento com bST aumentou o número de folículos aspirados (P<0,0001), o total de oócitos recuperados e a taxa de recuperação (P=0,07). No entanto, nem o IEA e nem o tratamento com bST aumentaram a produção in vitro de embriões bubalinos. / It was evaluated the effect of OPU interval and bST treatment on embryo production in buffalo. Sixteen females were randomly assigned in 4 groups, in a 2x2 factorial experimental design: (1) G-Cont7: OPU session each seven days; (2) G-bST7: OPU session each seven days plus 500mg of bST each 14 days; (3) G-Cont14: OPU session each 14 days and (4) G-bST14: OPU session plus 500mg of bST each 14 days. Animals of G-Cont7 and G-bST7 were submitted to 16 OPU sessions, and those of G-Cont14 and G-bST14 to 8 OPU sessions. The OPU session performed every week (G-s/bST) decreased the number of aspirated follicles, and the number of total and viable recovery oocytes (P0.004). The treatment with bST increased the number of aspirated follicles (P<0.0001), the number of recovery oocytes and the oocyte recovery rate (P=0.07). However, neither OPU interval nor bST treatment increased the in vitro embryo production in buffalo.

O status oxidativo do espermatozoide atua sobre ele de diferentes formas, desde a capacitação até a fecundação do oócito. No entanto, as espécies reativas de oxigênio (EROs) podem ser benéficas ou prejudiciais dependendo do contexto celular. Tendo em vista a baixa proteção antioxidante do sêmen criopreservado, associado às sucessivas manipulações que antecedem a fecundação in vitro, entender como esta célula se comporta em um ambiente oxidante e os impactos deste sobre o embrião é de suma importância. Com isto, o objetivo deste trabalho foi propor um modelo dose-dependente para o estudo do estresse oxidativo sobre o espermatozoide e possível impacto no desenvolvimento embrionário. Para isto, no experimento 1, palhetas de sêmen criopreservado de touros (n=5) da raça Nelore foram submetidas à incubação por 1 hora a 38,5 &ordm;C e 5% CO2, com doses crescentes de peróxido de hidrogênio (0; 12,5; 25; e 50 &micro;M). Ao final da incubação, os parâmetros de motilidade foram avaliados pelo sistema Computer Assisted System Analysis (CASA). No experimento 2, foram escolhidas duas doses de peróxido de hidrogênio com base nos resultados do experimento 1: alta (50 &micro;M), baixa (12,5 &micro;M) e também um controle (0 &micro;M). Os espermatozoides foram incubados com as respectivas doses de peróxido de hidrogênio por 1 hora, e ao final da incubação foram utilizados para a fecundação in vitro (D=0). Neste experimento, além das análises do CASA, foram feitas avaliações do status oxidativo (CellROX® green e 2&#x27;-7&#x27;diacetato de diclorofluoresceína - DCFH), do potencial mitocondrial (JC-1), da cromatina (LA) e da capacitação espermática (clortetraciclina). Os embriões foram avaliados com relação à taxa de clivagem rápida (30 horas pós-inseminação), taxa de clivagem (D=3), taxa de desenvolvimento (D=5) e taxa de blastocisto (D=8). Para análise estatística foi utilizado o modelo de regressão polinomial, considerando p&le;0,05. Tanto no experimento 1 quanto no experimento 2 houve detrimento dose-dependente do peróxido de hidrogênio sobre o padrão de movimento e de porcentagem de células móveis. Houve aumento dose-dependente da porcentagem de células positivas para CellROX&reg; células capacitadas e positivas para o LA. Com relação às taxas de clivagem e de blastocisto, houve diminuição da porcentagem de embriões clivados e de blastocistos, conforme a dose de peróxido de hidrogênio foi aumentada. Referente à taxa de desenvolvimento embrionário, houve bloqueio das estruturas em 2-4 células. Nestas condições, o espermatozoide quando exposto a um ambiente oxidante, apresenta alterações no padrão de motilidade, no status oxidativo e na capacitação, sendo que estas interferem de forma negativa no desenvolvimento embrionário, desde o início da clivagem até a formação do blastocisto. / Oxidative status may influence spermatozoa by distinct mechanisms, from capacitation to oocyte fertilization. However, reactive oxygen species (ROS) could be beneficial or harmful depending on cellular context. Due to the low levels of antioxidant enzymes of cryopreserved semen, associated to successive manipulations prior to in vitro fertilization (IVF), it is momentous to understand the mechanism involved on sperm status in such conditions and the further impact on embryo development. The present study aimed to assess the possible impact of a dose-dependent model for sperm oxidative stress on embryo development. In experiment 1, straws from five Nelore bulls were subjected to a 1 hour incubation at 38,5 &ordm;C and 5% CO2, with increase doses of hydrogen peroxide (0; 12,5; 25; e 50 &microM). At the end of incubation period, motility parameters were evaluated by Computed Assisted System Analysis (CASA). Based on the results of the experiment 1, experiment 2 was designed to study a high (50 &micro;M) and a low (12,5 &micro;M) dose of hydrogen peroxide and also a control (0 &micro;M). Sperm samples were incubated with each dose for 1 hour and subsequently used for in vitro fertilization (D=0). Samples were analyzed by CASA, oxidative status (CellROX&reg; green and 2&#x27;-7&#x27; diclorofluorescein diacetate - DCFH), mitochondrial potential (JC-1), chromatin (LA) and sperm capacitation status (chlortetraciclin). Embryos were evaluated based on fast cleavage rate (30 hours pos-insemination), cleavage rate (D=3), development rate (D=5) and blastocyst rate (D=8). Statistical analysis was performed by polynomial regression model, considering significant a p&le;0,05. A dose-dependent deleterious effect of hydrogen peroxide was observed on most motility variables evaluated by CASA, including the percentage of motile cells. Similarly, a dose-dependent increase was observed on the percentages of positive cells for CellROX&reg;, capacitated sperm and also for LA. A decrease on the percentage of cleaved embryos and blastocyst was observed as hydrogen peroxide increased. Interestingly, a blockage was detected during the 2-4 cell stage. In these conditions when exposed to oxidative environment, sperm may present disabled motility characteristics, oxidative status and premature capacitation and such abnormalities result on impaired embryo development, from the first cleavage to blastocyst.

Orientador: Vera Fernanda Martins Hossepian de Lima / Coorientador: Alfonso Gutiérrez Ádan / Banca: Simone Cristina Méo Niciura / Banca Beatriz da Costa Aguiar Alves Reis / Banca: Flávia Lombardi Lopes / Banca: Janete Apparecida Desidério / Resumo: O objetivo do presente estudo foi verificar se existem diferenças no desenvolvimento de embriões produzidos com sêmen sexado por centrifugação em gradiente de densidade e por citometria de fluxo e também quantificar a expressão relativa de genes importantes para o desenvolvimento embrionário. Após a sexagem os espermatozóides foram submetidos a produção de embriões in vitro. Foram avaliadas as taxas de clivagem e blastocisto para verificar a influência do método de sexagem no desenvolvimento in vitro de embriões. Os blastocistos foram coletados nos dias 7 e 8 de desenvolvimento, e submetidos a extração de RNA para a avaliação da expressão de genes relacionados a qualidade do embrião: AKR1B1, COX2, IGF2R, PLAC8 (desenvolvimento de placenta e reconhecimento da gestação), MnSOD e GPX1 (estresse oxidativo), SCL2A1 (metabolismo) e TP53 (apoptose). Os resultados não mostraram diferenças no desenvolvimento in vitro de embriões (taxas de clivagem e blastocisto) produzidos com sêmen sexado. Em relação ao padrão de expressão, a citometria de fluxo reduz os níveis de mRNA dos genes AKR1B1(P=0,023), COX2 (P=0,016). A centrifugação em gradiente de densidade aumentou os níveis de transcritos dos genes PLAC8 (P=0,007), MnSOD (P=0,013) e GLUT1 (P=0,028). Ambas as técnicas reduzem os níveis de expressão do gene TP53 (P<0,05). A técnica de sexagem por citometria de fluxo altera a expressão de genes envolvidos no processo de implantação, prejudicando o nascimento de uma cria viável. A sexagem produz embriões que não possuem alterações prejudiciais em genes envolvidos no reconhecimento da gestação e formação da placenta, os quais são muito importantes para o processo de implantação; aumenta o padrão de expressão dos genes envolvidos no processo de resposta da célula ao estresse... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The purpose of this work was evaluate differences on development of embryos produced in vitro using sorted semen by density gradient centrifugation and flow cytometry, and differences in relative abundance of important genes for embryo development. Cleavage and blastocyst rates were used to evaluate the influence of the sorting procedure on embryo development. Blastocysts of day 7 and 8 of development were collected, and expression levels quantification AKR1B1, COX2, IGF2R, PLAC8, MnSOD, GPX1, SCL2A1 and TP53, genes related to embryo quality were evaluated. The results showed no differences between the experimental groups in terms of embryo development (cleavage and blastocyst rates). In the expression pattern, flow citometry methodology reduced mRNA abundance of AKR1B1 (P=0.023) and COX2 (P=0.016). Density gradient centrifugation increased the transcripts levels of PLAC8 (P=0.007), MnSOD (P=0.013) and GLUT1 (P=0.028). Both sorting process reduced mRNA of TP53 (P<0.05). Flow citometry affects the expression pattern of genes involved in pregnancy recognition and placenta formation, resulting in poor quality embryo. Density gradient centrifugation methodology do not alter the expression of genes involved in embryo implantation, increases the expression pattern of genes related to oxidative response and metabolism, resulting in viable embryos. These results suggesting that density gradient centrifugation can be an alternative to flow citometry, for produce viable embryos / Doutor

O status oxidativo do espermatozoide atua sobre ele de diferentes formas, desde a capacitação até a fecundação do oócito. No entanto, as espécies reativas de oxigênio (EROs) podem ser benéficas ou prejudiciais dependendo do contexto celular. Tendo em vista a baixa proteção antioxidante do sêmen criopreservado, associado às sucessivas manipulações que antecedem a fecundação in vitro, entender como esta célula se comporta em um ambiente oxidante e os impactos deste sobre o embrião é de suma importância. Com isto, o objetivo deste trabalho foi propor um modelo dose-dependente para o estudo do estresse oxidativo sobre o espermatozoide e possível impacto no desenvolvimento embrionário. Para isto, no experimento 1, palhetas de sêmen criopreservado de touros (n=5) da raça Nelore foram submetidas à incubação por 1 hora a 38,5 &ordm;C e 5% CO2, com doses crescentes de peróxido de hidrogênio (0; 12,5; 25; e 50 &micro;M). Ao final da incubação, os parâmetros de motilidade foram avaliados pelo sistema Computer Assisted System Analysis (CASA). No experimento 2, foram escolhidas duas doses de peróxido de hidrogênio com base nos resultados do experimento 1: alta (50 &micro;M), baixa (12,5 &micro;M) e também um controle (0 &micro;M). Os espermatozoides foram incubados com as respectivas doses de peróxido de hidrogênio por 1 hora, e ao final da incubação foram utilizados para a fecundação in vitro (D=0). Neste experimento, além das análises do CASA, foram feitas avaliações do status oxidativo (CellROX® green e 2&#x27;-7&#x27;diacetato de diclorofluoresceína - DCFH), do potencial mitocondrial (JC-1), da cromatina (LA) e da capacitação espermática (clortetraciclina). Os embriões foram avaliados com relação à taxa de clivagem rápida (30 horas pós-inseminação), taxa de clivagem (D=3), taxa de desenvolvimento (D=5) e taxa de blastocisto (D=8). Para análise estatística foi utilizado o modelo de regressão polinomial, considerando p&le;0,05. Tanto no experimento 1 quanto no experimento 2 houve detrimento dose-dependente do peróxido de hidrogênio sobre o padrão de movimento e de porcentagem de células móveis. Houve aumento dose-dependente da porcentagem de células positivas para CellROX&reg; células capacitadas e positivas para o LA. Com relação às taxas de clivagem e de blastocisto, houve diminuição da porcentagem de embriões clivados e de blastocistos, conforme a dose de peróxido de hidrogênio foi aumentada. Referente à taxa de desenvolvimento embrionário, houve bloqueio das estruturas em 2-4 células. Nestas condições, o espermatozoide quando exposto a um ambiente oxidante, apresenta alterações no padrão de motilidade, no status oxidativo e na capacitação, sendo que estas interferem de forma negativa no desenvolvimento embrionário, desde o início da clivagem até a formação do blastocisto. / Oxidative status may influence spermatozoa by distinct mechanisms, from capacitation to oocyte fertilization. However, reactive oxygen species (ROS) could be beneficial or harmful depending on cellular context. Due to the low levels of antioxidant enzymes of cryopreserved semen, associated to successive manipulations prior to in vitro fertilization (IVF), it is momentous to understand the mechanism involved on sperm status in such conditions and the further impact on embryo development. The present study aimed to assess the possible impact of a dose-dependent model for sperm oxidative stress on embryo development. In experiment 1, straws from five Nelore bulls were subjected to a 1 hour incubation at 38,5 &ordm;C and 5% CO2, with increase doses of hydrogen peroxide (0; 12,5; 25; e 50 &microM). At the end of incubation period, motility parameters were evaluated by Computed Assisted System Analysis (CASA). Based on the results of the experiment 1, experiment 2 was designed to study a high (50 &micro;M) and a low (12,5 &micro;M) dose of hydrogen peroxide and also a control (0 &micro;M). Sperm samples were incubated with each dose for 1 hour and subsequently used for in vitro fertilization (D=0). Samples were analyzed by CASA, oxidative status (CellROX&reg; green and 2&#x27;-7&#x27; diclorofluorescein diacetate - DCFH), mitochondrial potential (JC-1), chromatin (LA) and sperm capacitation status (chlortetraciclin). Embryos were evaluated based on fast cleavage rate (30 hours pos-insemination), cleavage rate (D=3), development rate (D=5) and blastocyst rate (D=8). Statistical analysis was performed by polynomial regression model, considering significant a p&le;0,05. A dose-dependent deleterious effect of hydrogen peroxide was observed on most motility variables evaluated by CASA, including the percentage of motile cells. Similarly, a dose-dependent increase was observed on the percentages of positive cells for CellROX&reg;, capacitated sperm and also for LA. A decrease on the percentage of cleaved embryos and blastocyst was observed as hydrogen peroxide increased. Interestingly, a blockage was detected during the 2-4 cell stage. In these conditions when exposed to oxidative environment, sperm may present disabled motility characteristics, oxidative status and premature capacitation and such abnormalities result on impaired embryo development, from the first cleavage to blastocyst.

Orientador: Roberto Sartori Filho / Banca: José Buratini Júnior / Banca: Pietro Sampaio Baruselli / Resumo: Objetivou-se avaliar o efeito da condição corporal e/ou da alta ingestão de matéria seca (AIMS) na produção in vivo de embriões de fêmeas bovinas superovuladas. Em um primeiro experimento, 14 vacas Simental x Nelore não-lactantes com elevado escore de condição corporal (ECC) foram divididas em grupos de Manutenção=M ou alta ingestão de matéria seca=AIMS. As vacas do grupo AIMS receberam dieta com 180% da manutenção, entre 7 dias antes do início da superovulação (SOV) e o final das aplicações de FSH. O grupo M recebeu dieta de manutenção. O número de folículos recrutados e ovulados não diferiu entre os grupos (P>0,10). Entretanto, os números de estruturas totais e embriões viáveis colhidos foram maiores no grupo M (P<0,05). Em um segundo experimento avaliou-se a influência do ECC associado ou não da AIMS na produção embrionária em 36 novilhas Nelore. AIMS ocorreu por 14 dias antes do início da SOV. Após colheita, os embriões viáveis foram congelados para posterior cultivo até eclosão. Não houve diferença entre os grupos na população folicular ao início da SOV, na resposta superestimulatória ou superovulatória, nem no número ou qualidade dos embriões colhidos. As novilhas com <ECC apresentaram maiores concentrações séricas de IGF-I, entretanto as com >ECC tiveram insulina mais alta. Os embriões dos animais com >ECC apresentaram diâmetro, taxas de eclosão e expressão relativa de mRNA do gene BAX superiores após cultivo do que os coletados no grupo com <ECC. Os resultados conflitantes entre os experimentos e com dados da literatura sugerem haver diferentes respostas à alimentação dependendo da raça ou estado nutricional na produção embrionária. / Abstract: The aim of this study was to investigate the effect of body condition and/or high dry matter intake (flushing) on in vivo embryo production in superovulated female cattle. A first experiment used 14 non-lactating Nelore x Simmental cows with a high body condition score (BCS) divided into Maintenance=M or Flushing=F groups. Seven days prior to onset of superovulation (SOV) until the last day of treatment with FSH, group F cows were fed a diet to achieve 180% of maintenance. Group M cows were fed a maintenance diet. The number of recruited or ovulated follicles did not differ between groups (P>0.10). However, the total number of embryos/ova and the number of viable embryos recovered were greater in the M group (P<0.05). A second study investigated whether differences in BCS, associated or not with nutritional flushing, influence the embryo production in 36 Nelore heifers. Nutritional flushing was conducted during 14 days prior to the onset of SOV. After recovery, viable embryos were frozen to be subsequently cultured until hatching. There was no difference among groups for follicle population at onset of SOV, superstimulatory or superovulatory responses, nor number or quality of recovered embryos. Heifers with <BCS had grater blood concentrations of IGF-I, whereas heifers with >BCS had grater insulin. Embryos collected from >BCS heifers had greater diameter, hatching rates and relative expression of the BAX gene mRNA than the ones recovered from <BCS heifers. The conflicting results between the experiments and also in relation to data from the literature suggest that there are different responses to diets depending on animal breed or nutritional status on embryo production. / Mestre