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Caracteriza??o in vivo do destino das c?lulas-tronco da polpa dent?riaCucco, Carolina 15 June 2015 (has links)
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Previous issue date: 2015-06-15 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Teeth exhibit limited repair in response to damage, and studies have shown that dental
pulp stem cells (DPSCs) probably provide a source of cells to replace those damaged and
to facilitate repair. Additionally, in vivo transplantation into immunocompromised mice
demonstrated the ability of DPSCs to generate functional dental tissue in the form of
dentine/pulp-like complexes. Therefore, the purpose of this study was to characterize the
endothelial fate of DPSCs in vivo and to start to understand the role of Tie2/Ang-1
signaling pathway on the regulation of the endothelial differentiation of DSPCs.! DPSCs
stably transduced with LacZ were seeded into tooth slices and implanted into
immunodeficient mice for 7, 14, 21 ad 28 days. A combination of in vitro and in vivo
assays were performed to determine the role of Ang-1 in the vasculogenic fate of DPSCs.
Histologic analysis and immunohistochemistry from the retrieved tooth slices were
performed. Dental pulp stem cells seeded in tooth slice/scaffolds and transplanted into
SCID mice showed a continuous crescent number of beta-galactosidase-positive
odontoblastic and endothelial cells along the 7, 14, 21 and 28 days of the study. At 21
days beta-galactosidase-positive capillaries located close to murine blood vessels were
detected, confirming our previous report (Cordeiro et al, 2008; Sakai et al, 2010). DPSCs
exposed to Ang-1 differentiated into cells expressing VEFGR2, CD31 and Tie2.
Exposure of VEGFR1-silenced DSPC to Ang-1 and VEGF induced the activation of
STAT3, Erk and Akt, while VEGF alone inhibited the phosphorylation of STAT3. This is
consistent with the role of Akt and STAT3 in the regulation of cell survival and cell-cell
interation of DPSC through Tie2/Ang-1 signaling pathway. This study demonstrates that
Angiopoietin-1 is involved in the vasculogenic differentiation of DSPCs. / As c?lulas-tronco provenientes da polpa de dentes adultos (DPSC) s?o uma fonte
promissora de c?lulas-tronco para a terapia regenerativa. J? foi demonstrado que elas
podem se diferenciar em c?lulas endoteliais, mas os relatos histol?gicos temporais do seu
destino ainda n?o foram demonstrados. Dessa forma, o presente estudo teve como
objetivo elucidar o destino das DSPC-LacZ, bem como avaliar o efeito de algumas
mol?culas envolvidas na diferencia??o endotelial destas c?lulas. Para isso, DPSC Lac-Z
foram semeadas em scaffolds de fatias dent?rias e implantadas no subcut?neo de
camundongos imunodeficientes. 14 dias ap?s a recupera??o dos tecidos, observou-se
c?lulas beta-galagtosidase positivas alinhadas ao longo das paredes internas das fatias de
dente, sugerindo a diferencia??o destas em c?lulas semelhantes ? odontoblastos. Ainda
neste per?odo, c?lulas beta-galactosidase positivas foram localizadas pr?ximas aos vasos
sangu?neos do roedor, algumas formaram estruturas tubulares e continham elementos
celulares dentro do seu l?men. Aos 21 dias, um tecido muito semelhante a polpa dental
foi encontrado dentro das fatias dentais, e no dia 28 o n?mero de c?lulas betagalactosidade
postivas era maior do que todos os periodos anteriores. Ainda, avaliou-se o
papel da mol?cula VEGF e Ang-1 na diferencia??o endotelial destas c?lulas bem como
na fosforila??o de algumas vias de sinaliza??o. Para isso, um meio de cultura alpha-
MEM suplementado com 50 ng/mL rhVEGF + 200 ng/mL rhAng-1, foi utlizado como
est?mulo para as DPSC se diferenciarem em c?lulas endoteliais. Durante um per?odo de
28 dias as c?lulas expressaram marcadores endoteliais como VEGFR2, CD31, Ang-1 e
Ang-2. Quando utilizamos c?lulas DPSC shRNA VEGFR-1 estimuladas pelas mesmas
mol?culas, a fosforila??o de ERK e AKT foi aumentada, o que n?o ocorreu no grupo controle.
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Dilata??o mediada por fluxo da art?ria braquial e s?ndrome de pr?-ecl?mpsiaCunha Filho, Edson Vieira da 16 March 2009 (has links)
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Previous issue date: 2009-03-16 / A fun??o endotelial ? um importante fator na patog?nese de diversas altera??es, como aterosclerose, hipertens?o, doen?a coronariana, entre outras. Fisiologicamente, a gesta??o mostrase, entre outras caracter?sticas, como um estado de adapta??o da fun??o endotelial, a fim de permitir que os eventos vasculares promovidos pelo estado gestacional ocorram de maneira adequada. Por todos estes motivos, a fun??o endotelial tem sido alvo de in?meras pesquisas e, devido a sua import?ncia, torna-se imperativo que existam formas simples, reprodut?veis e n?o invasivas de acess?-la. Neste contexto ? que se situa a dilata??o mediada por fluxo da art?ria braquial (DMF), uma t?cnica ultra-sonogr?fica de simples execu??o, que permite a avalia??o da fun??o endotelial vascular, de forma n?o-invasiva e fidedigna. Entender os mecanismos adaptativos implicados na gravidez humana, especialmente da resposta vascular, ? um passo muito importante para a solu??o de um de seus problemas mais freq?entes, a pr?-eclampsia. O presente estudo ? uma revis?o sistematizada e atual da literatura que se prop?e a analisar como esta t?cnica pode ser utilizada neste per?odo da vida mulher, e quais os seus reais benef?cios.
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An?lise imunoistoqu?mica ap?s terapia fotodin?mica com cloro-alum?nio ftalocianina em tecidos gengivais de humanosMoraes, Maiara de 05 June 2014 (has links)
Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2015-10-22T17:34:42Z
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Previous issue date: 2014-06-05 / Embora a terapia fotodin?mica venha sendo utilizada como uma ferramenta ?til nos ?ltimos 30 anos em oncologia, poucos estudos cl?nicos em odontologia t?m sido conduzidos. A terapia fotodin?mica (TFD) utiliza fotossensibilizantes at?xicos e seletivos que s?o administrados nas c?lulas alvo seguida de aplica??o local de luz vis?vel, produzindo esp?cies reativas de oxig?nio capazes de ocasionar morte celular por apoptose ou necrose, de afetar a vascularidade local, al?m de exercer importantes efeitos no sistema imune. Novas gera??es de f?rmacos fotossensibilizantes, como as ftalocianinas nanoparticuladas tem apresentado excelentes resultados na atividade antitumoral e antibacteriana. Neste contexto, o presente trabalho realizou o primeiro protocolo cl?nico de aplica??o local da nanoemuls?o de cloro-alum?nio ftalocianina (AlClFc) seguida de irradia??o em gengiva de humanos, e analisou descritiva e comparativamente, por meio de imunoistoqu?mica, a express?o de RANK, RANKL, OPG e VEGF em um modelo split-mouth. Oito volunt?rios saud?veis com indica??o cl?nica de exodontia foram inclu?dos no estudo. Sete dias antes da exodontia, foi aplicado na gengiva dos participantes, 5?M de nanoemuls?o de AlClFc seguida de irradia??o com laser diodo (660nm, 100J/cm2), o lado contralateral foi utilizado como controle. Os esp?cimes teciduais foram removidos sete dias ap?s a TFD e subdivididos em dois grupos (grupo teste e grupo controle) para an?lise histol?gica e imunoistoqu?mica. Os pacientes foram monitorados no dia aplica??o, 7, 14 e 30 dias ap?s a terapia para avalia??o de efeitos adversos da terapia. Altera??es vasculares foram observadas nas amostras gengivais que receberam a TFD. ?reas de edema e congest?o vascular, al?m de intensa vasculariza??o foram visualizadas. Adicionalmente, focos de calcifica??o distr?fica em regi?o subepitelial foram visualizados nos esp?cimes do grupo teste. Os resultados demonstraram um padr?o similar dos escores de imunomarca??o de RANK, RANKL e VEGF entre os grupos teste e controle, n?o havendo diferen?a estat?stica significante (p=0.317, p=0.777, p=.814, respectivamente). RANK e RANKL exibiram imunomarca??o fraca ou ausente em todos os esp?cimes analisados. N?o houve imunomarca??o para a OPG. O VEGF mostrou imunomarca??o moderada a forte nos esp?cimes do grupo teste. Adicionalmente, o estudo cl?nico mostrou que a terapia foi bem tolerada por todos os pacientes. Os efeitos adversos foram de curta dura??o e totalmente revers?veis. Tomados em conjunto, os resultados apresentados neste estudo mostraram que o protocolo da TFD mediada por nanoemuls?o contendo AlClFc ? segura para aplica??o cl?nica em tecido gengival e, sugerem uma forte imunomarca??o para o VEGF ap?s a terapia. / Although photodynamic therapy have been used as a useful tool over the past 30 years in
oncology, few clinical trials have been conducted in dentistry. Photodynamic therapy (PDT)
uses non
-
toxic photosensitizers and
selective which are administered in target cells followed
by local application of visible light, producing reactive oxygen species capable of causing cell
death by apoptosis or necrosis, injured the local vasculature, and exert important effects on
the im
mune system. New generations of photosensitizing agents, such as nanoparticulate
phthalocyanines, has shown excellent results in antitumor and antibacterial activity . In this
context, the present work constitutes the first clinical protocol of local appli
cation of
nanoemulsion chloro
-
aluminum phthalocyanine (AlClFc) followed by irradiation in human
gingiva, and analyzed descriptively and comparatively , by means of immunohistochemistry ,
the expression of RANK , RANKL , OPG and VEGF in a split
-
mouth model
.
Eight healthy
volunteers with clinical indication for extraction were included in the study . Seven days
before the extraction, was injected in the gingiva of participants, 5
?
M of nanoemulsion
AlClFc followed by irra
diation with diode laser (660nm
,
7
J/cm2 ), the contralateral side was
used as control. Tissue specimens were removed seven days after the TFD is performed.
Tissues sample were divided into two groups (test and con
trol groups) for histological and
immunohistochemical analysis. Patients were monitored at days, 0, 7, 14 and 30 to assess
adverse effects of the therapy. Vascular alterations were seen in gingival samples that
received PDT. Areas of edema and vascular con
gestion, and intense vascularization were
viewed .
Additionally, dystrophic calcification in subepithelial region were observed in the
test group. The results showed a similar pattern of immunostaining scores of RANK, RANKL
and VEGF between the test and co
ntrol groups, with no statistically significant difference (p =
0.317, p = 0.777, p =
0
.814, respectively). RANK and RANKL exhibited weak or absent
immunostaining in
most
specimens analyzed. There was
n
o
immunostaining for OPG. VEGF
showed moderate to stro
ng immunostaining in specimens from the test group. In addition, the
clinical study showed that therapy was well tolerated by all patients. Adverse effects were
short
-
time and completely reversible. Taken together, the results presented in this study
showe
d that PDT mediated by nanoemulsion containing AlClPc is safe for clinical application
in gingival tissue and suggests that a strong immunostaining for VEGF after therapy .
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