Submitted by Irene Nascimento (irene.kessia@ufpe.br) on 2016-06-28T19:02:15Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Tamiris Alves Rocha-Mestrado em Bioquímica e Ficiologia 2015.pdf: 6258985 bytes, checksum: 337ba3f55e633f8d9665b955f6a0c0fd (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-28T19:02:15Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Tamiris Alves Rocha-Mestrado em Bioquímica e Ficiologia 2015.pdf: 6258985 bytes, checksum: 337ba3f55e633f8d9665b955f6a0c0fd (MD5) Previous issue date: 2015-02-24 / FACEPE / A incidência de casos de câncer vem crescendo em ritmo acelerado em todo o mundo, o que tem despertado o interesse na busca de tratamentos mais eficazes. Geralmente, as drogas utilizadas nessas terapias, causam algum tipo de efeito colateral podendo também, em certas circunstâncias, ser carcinogênicos. Desta forma ensaios para avaliar a atividade genotóxica desses fármacos são necessários para promover uma segurança na utilização desses terapêuticos. As substâncias liquênicas apresentam várias atividades biológicas, podendo ser candidatas promissoras a drogas antineoplásicas. O objetivo deste estudo foi verificar a atividade citotóxica de extratos orgânicos e ácido úsnico obtido de Cladonia substellata bem como efeitos genotóxicos deste metabólito liquênico e seus derivados pirazólicos sintéticos. Os extratos orgânicos foram obtidos a partir da extração por esgotamento a quente em aparelho de Soxhlet do talo de C. substellata. O ácido úsnico foi obtido por purificação do extrato etéreo, seguido por sucessivas cristalizações até obtenção de alto grau de pureza da substância. Os derivados pirazólicos foram sintetizados através da reação do ácido úsnico purificado com as fenil-hidrazinas substituídas e quantidade equivalentes de bicarbonato de sódio (NaHCO3). Análises cromatográficas em camada delgada (CCD) e liquida de alta eficiência (CLAE), ressonância magnética nuclear de prótons (RMN-H1) e Carbono 13 (RMN-C13), bem como infravermelho (IV) foram realizadas para confirmação estrutural da molécula do ácido úsnico purificado e dos derivados pirazólicos. O ensaio de citotoxicidade foi realizado pelo método do brometo de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazólio (MTT), avaliado os extratos orgânicos e o ácido úsnico purificado de C. substellata frente às linhagens de células tumorais NCI-H292 (carcinoma mucoepidermoide de pulmão humano), HEp-2 (carcinoma de laringe humana) e HL-60 (leucemia promielocitica aguda). Os testes de genotoxicidade in vivo, foram feitos pelo ensaio cometa e teste do micronúcleo. Os extratos orgânicos e o ácido úsnico purificado apresentaram porcentagem de inibição celular muito significativa (>70%), de modo que o extrato etéreo (100%) e o composto 3e (90,3%) apresentaram os melhores resultados para a linhagem celular MCF-7. O ácido úsnico purificado apresentou CI50 de 4, 97 μg/mL e 2,19 μg/mL às células NCI-H292 e HEp-2 respectivamente, enquanto que o extrato clorofórmico foi o que apresentou maior atividade frente à linhagem celular HL-60 com CI50 de 3,34 μg/mL. A análise estatística do ensaio cometa e teste do micronúcleo demonstrou que o ácido úsnico e todos os compostos derivados (3a-3f) não apresentaram valores significativos (p ≥ 0,05) quando comparados com o controle negativo. Desta forma, os compostos testados não foram genotóxicos e mutagênicos. Assim, os dados apresentados são animadores e ampliam os horizontes para realização de novos ensaios com o intuito de se aprofundar o conhecimento acerca destas novas moléculas. / The incidence of cancer is increasing at a rapid pace worldwide, which has raised interest in the search for more effective treatments. Generally, the drugs used in these therapies cause some kind of side effect may also in certain circumstances be carcinogenic. Thus assays for evaluating the genotoxic activity of these agents are needed to promote safety in using these therapeutics. The liquenicas substances have various biological activities and may be promising candidates for anticancer drugs. The objective of this study was to determine the cytotoxic activity of organic extracts and usnic acid obtained from Cladonia substellata and genotoxic effects of this lichen metabolite and their synthetic pyrazole derivatives. The organic extracts were obtained from hot extraction in a Soxhlet apparatus depletion of stem C. substellata. The usnic acid was obtained by purification of the ether extract, followed by repeated crystallisations to achieve high purity of substance. The pyrazole derivatives were synthesized by the reaction of purified usnic acid with the substituted phenylhydrazines and equivalent amount of sodium bicarbonate (NaHCO3). Thin layer chromatographic analysis (TLC) and high performance liquid (HPLC), nuclear magnetic resonance of protons (H1-NMR) and carbon 13 (C13-NMR) and infrared (IR) were performed to confirm the structure of the molecule purified usnic acid and pyrazole derivatives. The cytotoxicity assay was performed by the method of 3- [4,5-dimethylthiazol-2,5-diphenyltetrazolium bromide] (MTT assay), rated the organic extracts and the purified usnic acid of C. substellata front of tumor cell lines NCI-H292 (human pulmonary mucoepidermoid carcinoma), HEp-2 (human laryngeal carcinoma) and HL-60 (acute promyelocytic leukemia). The in vivo genotoxicity tests were made by the comet assay and micronucleus test. The organic extracts and purified usnic acid showed very significant percentage of cellular inhibition (> 70%), so that the ethereal extract (100%) and Compound 3e (90,3%) showed the best results for cell line MCF-7. The purified usnic acid showed IC50 4, 97 mg / mL and 2.19 mg / mL to NCI-H292 cells and Hep-2 respectively, while the chloroform extract showed the most activity against the HL-60 cell line with IC50 3.34 mg / mL. Statistical analysis of the comet assay and micronucleus test showed that the usnic acid and its derivative compounds (3a-3f) showed no significant differences (p ≥ 0.05) when compared to the negative control. Thus, the compounds tested were not genotoxic and mutagenic. Thus, the data presented are encouraging and broaden the horizons for new tests in order to increase knowledge about these new molecules.

Título original: Avaliação dos efeitos tóxicos e genéticos de microcistinas naturais e sintéticas, sob sistemas testes animais e vegetais / Orientador: Maria Aparecida Marin Morales / Coorientador: Maria do Carmo Bittencourt-Oliveira / Banca: Cesar Koppe Grisolia / Banca: Silvia Tamie Matsumoto / Banca: Dejanira de Franceschi de Angelis / Banca: Carmen Silvia Fontanetti Christofoletti / Resumo: As cianobactérias são organismos procarionte fotossintetizantes que apresentam capacidade de produzir metabólitos secundários de alto efeito tóxico para seres vivos, denominados de cianotoxinas. A presença desses organismos nos ambientes aquáticos se dá, inicialmente, pelo excesso de nutrientes, derivados, principalmente, de excessivo descarte de efluentes urbanos e industriais e de poluentes oriundos das atividades agrícolas. As cianobactérias produzem cianotoxinas do tipo endotoxinas, cuja toxicidade se dá, geralmente, quando a toxina é liberada para o meio extracelular, em decorrência de lise celular, devido ao envelhecimento ou morte das cianobactérias. São substâncias presentes nas paredes celulares de muitas cianobactérias; e exotoxinas, que apresentam uma potente ação tóxica e estão relacionadas com o metabolismo de manutenção da cianobactéria. Neste trabalho, foram desenvolvidos ensaios biológico com o organismo Allium cepa, um organismo teste muito utilizado em avaliações de ação de drogas e em ensaios ambientais, e com células hepáticas de peixe (ZFL) e humanas (HepG2) mantidas em cultura. Neste estudo foram avaliados os efeitos citotóxico, genotóxico e mutagênico da microcistina purificada, adquirida comercialmente; de amostras ambientais coletadas em um ambiente com recorrentes florações por cianobactérias; com biomassa de Microcistis aeruginosa, obtidas em laboratório, para inferir efeitos das endotoxinas produzidas por essa espécie; e com o meio de cultivo da M.... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Cyanobacteria are prokaryote photosynthetic organisms that can produce secondary metabolites with a high toxic effect on living organisms, known as cyanotoxins. The presence of these organisms in aquatic environments is initially due to nutrients excess, mainly derived from excessive disposal of urban and industrial effluents and pollutants from agricultural activities. Cyanobacteria produce cyanotoxins of two types: endotoxin, the toxicity of which generally occurs when the toxin is released into the extracellular medium because of cell lysis due to the aging or death of the cyanobacteria. They are substances present in the cell walls of many cyanobacteria; and exotoxins, which present a potent toxic action and are related to the maintenance metabolism of cyanobacteria. In this work, biological assays were developed with the organism Allium cepa, a test organism widely used in evaluations of drug action and in environmental analyses, and with hepatic fish (ZFL) and human (HepG2) cells maintained in culture. In this study the cytotoxic, genotoxic and mutagenic effects of the commercially acquired purified microcystin were evaluated; of environmental samples collected in an environment with recurrent cyanobacterial blooms; with biomass of Microcystis aeruginosa, obtained in the laboratory, to infer effects of the endotoxins produced by this species; and with M. aeruginosa culture medium, to infer the effects of the exotoxins of these prokaryotes. For this evaluation, in vivo t... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:43Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-07-19Bitstream added on 2014-08-13T18:00:52Z : No. of bitstreams: 1 000753046.pdf: 1011046 bytes, checksum: 0e27bed9fbd866a00fb519db604313c6 (MD5) / Garcinia achachairu (GAC) é uma planta de origem boliviana que vem sendo utilizada na medicina popular para o tratamento de distúrbios gástricos, reumatismo, inflamações e como cicatrizante. A caracterização fitoquímica do extrato desta planta revelou que, uma benzofenona, a Gutiferona A (GA), é um dos seus compostos majoritários, que segundo estudos recentes, apresenta importante atividade antioxidante e antimicrobiana. Considerando o interesse em se aprofundar as análises do potencial farmacológico da GA e a inexistência de estudos que avaliem a sua toxicidade genética, o presente estudo foi elaborado visando investigar o potencial genotóxico e mutagênico da GA em diferentes células de camundongos in vivo, utilizando alguns dos testes tradicionais na área de mutagênese, como o Ensaio Cometa (EC) para a verificação da genotoxicidade e o Teste do Micronúcleo (TM) para a verificação da mutagenicidade. O experimento foi conduzido com camundongos Suíços albinos machos (Mus musculus) de 12 semanas, divididos em cinco grupos, constituídos cada um por seis animais. O grupo controle negativo recebeu, via gavagem, 0,3 mL de DMSO 1%. O grupo controle positivo, recebeu intraperitonealmente, 80 mg/kg de doxorrubicina. Os grupos tratados receberam, via gavagem, 0,3 mL da GA nas doses de 15, 30 e 60 mg/kg. Para a avaliação da genotoxicidade foi coletado sangue da veia caudal dos camundongos (4 e 24 horas após o tratamento), células do fígado, medula óssea, cérebro e testículos (coletadas 24 horas após o tratamento). Para a avaliação da mutagenicidade, foram coletadas células da medula óssea 24 horas após o tratamento. A citotoxicidade foi avaliada pela contagem de 200 eritrócitos policromáticos (PCE) e normocromáticos (NCE) e determinação de sua razão (PCE/NCE). Na amostra de sangue de 4h, analisadas pelo EC, os resultados obtidos mostraram que nas doses de 30 mg/kg e 60 mg/Kg. A análise ... / Garcinia achachairu (GAC) is a native plant from Bolivia that has been used in folk medicine for the treatment of gastric disorders, rheumatism, inflammation and as a healing. The phytochemical characterization of this plant extract revealed that the benzophenone guttiferone A (GA) is one of its major compounds, which according to recent studies, has important antioxidant and antimicrobial activity. Considering the interest in deepening the analysis of the pharmacological potential of GA and the lack of studies assessing its genetic toxicity, the present study was designed in order to investigate the genotoxic and mutagenic effects of GA in different cells of mice in vivo, using some of the traditional tests in the mutagenesis area, the Comet Assay (CA) for genotoxicity evaluation and the Micronucleus Test (MT) for the mutagenicity assessment. The experiment was conducted in Swiss albino male mice (Mus musculus) with 12 weeks, divided into five groups with six animals each. The negative control group received, by oral gavage, 0.3 mL of 1% DMSO. The positive control group received, intraperitoneally, 80 mg/Kg of doxorubicin. The treated groups received 0.3 ml of GA at 15, 30 and 60 mg/kg, by gavage. For the genotoxicity evaluation, blood was collected from the tail vein of the mice (4 and 24 hours after treatment), and liver, bone marrow, brain and testicular cells were collected 24 hours after treatment. For the mutagenicity assessment, bone marrow cells were collected 24 hours after treatment. Cytotoxicity was assessed by scoring 200 consecutive polychromatic (PCE) and normochromatic (NCE) erythrocytes and their ratio (PCE/NCE) determined. For the 4 h blood sample, the results with GA at doses of 30 and 60 mg/kg showed that was a statistically significant increase in DNA damage in comparison to the negative control. For the 24 h blood sample, only 60 mg/kg dose showed significant genotoxicity. The analysis of ther ...

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:28Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-11-28Bitstream added on 2014-06-13T18:40:38Z : No. of bitstreams: 1 prieto_am_dr_arafcf.pdf: 2994693 bytes, checksum: 4a5745efb3d1e4179f19e828a3811dc8 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Trabalhos demonstraram que derivados da planta Casearia sylvestris protegem o DNA de danos. Dessa forma, este trabalho visa avaliar por quais mecanismos essa proteção ocorre. Os produtos naturais avaliados foram o extrato etanólico das folhas de C. sylvestris e os diterpenos clerodânicos obtidos deste extrato: casearinas B, D e X e caseargrewiina F. Para a avaliação dos efeitos propostos foram utilizadas como modelo as linhagens celulares HepG2, MRC5, XP4PA e Hepa 1c1c7. Primeiramente, os produtos naturais foram avaliados com relação à sua atividade citotóxica pelo teste do MTT e ensaio de sobrevivência clonogênica nos tempos de 24 e 48 h, obtendo-se o IC50 e o IC20. Em seguida, foi realizado o ensaio de genotoxicidade do cometa no tempo de 24 h utilizando-se incubação com a enzima FPG nas linhagens HepG2, MRC5 e XP4PA. Os produtos naturais se mostraram genotóxicos mesmo em pequenas concentrações. Após este ensaio, foi avaliada a antigenotoxicidade dos produtos naturais já nas concentrações pouco genotóxicas e não citotóxicas por 24 h. Para tanto, as células HepG2 foram expostas ao mutágeno peróxido de hidrogênio (H2O2 - 1mM) e pré e pós-tratadas com os produtos naturais. E, as linhagens MRC5 e XP4PA foram expostas à radiação ultravioleta C (UVC) e pré e pós-tratadas com os produtos naturais. Para a linhagem HepG2, o extrato etanólico, as casearinas B e D apresentaram inibição de danos fortes nas maiores concentrações testadas. Já para a linhagem MRC5 somente a casearina B foi capaz de produzir inibição moderada na concentração de 0,04 µM. Adicionalmente, foi verificada a resposta antiapoptótica dos produtos naturais pelo método da anexina-V-FITC/PI nas linhagens submetidas aos mesmos mutágenos do ensaio do cometa, aplicando-se o protocolo... / Studies have shown that Casearia sylvestris derivatives protect DNA from damage. Thus, the aim of this study was to evaluate the mechanisms through which this protection occurs. The samples used in this study were the ethanolic extract of C. sylvestris leaves and the clerodane diterpenes obtained from this extract, including casearins B, D and X, and caseargrewiin F. The following cell lines were used: HepG2, MRC5, XP4PA and Hepa 1c1c7. First, all samples were assessed for their cytotoxic activity by using both the MTT assay and the clonogenic survival assay after 24 and 48 h of exposure, yielding the IC50 and IC20. Afterwards, the genotoxicity of the samples was assessed within 24 h following incubation with the samples using the FPG enzyme in the cell lines HepG2, MRC5 and XP4PA. The compounds proved to be genotoxic at all concentrations tested. Subsequently, the antigenotoxicity of the samples was assessed at concentrations that were at very low levels of cytotoxic or genotoxic after 24 h. HepG2 cells were exposed to the mutagen hydrogen peroxide (H2O2, 1 mM) and either pre or post-treated with the samples. Additionally, the cell lines MRC5 and XP4PA were exposed to ultraviolet C (UVC) and either pre or post-treated with the compounds. For the ethanolic extract in the HepG2 cell line, the casearins B and D showed strong inhibition of damage at the highest concentrations tested. In the MRC5 cell line, only casearin B was able to produce moderate inhibition (at 0.04 mM). Additionally, the anti-apoptotic response of the samples was assessed by an anexinV-FITC/PI assay in cell lines that were exposed to the same mutagens used in the comet assay, followed by post-treatment with the samples. The clerodane diterpenes, at high concentrations, increased the percentage of live cells and decreased... (Complete abstract click electronic access below)

RODRIGUES, F. A. R. Biomonitoramento toxicogenético como indicador de risco à saúde por exposição ao urânio de residentes que habitam as proximidades da maior reserva de urânio do Brasil, no município de Santa Quitéria – Ceará. 2015. 137 f. Tese (Doutorado em Farmacologia) - Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2015. / Submitted by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-01-20T12:12:50Z No. of bitstreams: 1 2015_tese_farrodrigues.pdf: 5257685 bytes, checksum: 25a56d65790e77083e89f82c548b5ee8 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-01-20T12:13:03Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_tese_farrodrigues.pdf: 5257685 bytes, checksum: 25a56d65790e77083e89f82c548b5ee8 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-20T12:13:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_tese_farrodrigues.pdf: 5257685 bytes, checksum: 25a56d65790e77083e89f82c548b5ee8 (MD5) Previous issue date: 2015-04-13 / Uranium is represented in the periodic table by the letter U, being the fourth element of the actinide group. Brazil, according to INB official data, has one of the largest reserves of uranium in the world. Uranium ionizing radiation can interfere with cellular functions at all levels of cell organization, inducing chemical and radiological toxicities. Its effect on the body is cumulative, and the radiation thus exposed can affect the DNA, inducing the development of neoplasias, such as leukemias. Therefore, biomonitoring of individuals exposed to radiation is reported in the literature as essential for human monitoring. Ceará has one of the largest uranium reserves in Brazil; The Uranium deposit of Santa Quitéria. The objective of the present work is to evaluate the possible genotoxic and mutagenic effects of human exposure to uranium in the Municipality of Santa Quiteria, using Alkaline Comet Assay techniques in human lymphocytes, Micronuclei in lymphocytes, oral mucosa and human reticulocytes, Chromosomal Aberrations In human lymphocytes and protein oxidation measurement. The samples collected totaled 161 individuals, of whom 91 were residents and 70 were non-residents. The mean age of the resident population was 41.24 ± 15.00; With an exposure time of 34.93 ± 16.06. In the alkaline comet analysis, there was a statistically significant difference between the Residual and Non Resident Population Damage Indices (IDs) of 10.63 ± 0.61 and 6.34 ± 0.31, respectively. Significant differences were found when the enzymes FPG, ENDO III, hOGG1 were used in the comet test. The highest rates were found among smokers and / or alcohol users. The results of the mutagenic evaluation, with the MN test on lymphocytes, MN on reticulocytes and MN on buccal mucosa revealed that there were no significant differences between the resident and non-resident groups. However, significant differences were found among smokers and / or alcohol users. The results of chromosomal aberrations of the resident population reveal that the frequencies of chromosomal aberrations (chromosomal and chromic breaks) of the resident population groups were significantly different when compared to the non-resident population groups. There were no differences in the results of numerical aberrations and mitotic index. Residual protein oxidation measurements showed that the dosage of carbonylated protein was significantly higher when compared to the non-resident group with the resident. The highest dosages were found among smokers and / or alcohol users. It is concluded that the uranium present in the geographic region is not enough to induce breaks in the DNA molecule, interfere with the assembly of the spindle fibers and impede the progression of the cell cycle, which should reflect the low doses of radiation to which they are exposed. Lesions in DNA as well as chromosomal changes observed in exposed smokers may be due to the effect of smoking. / O Urânio é representado na tabela periódica pela letra U, sendo o quarto elemento do grupo dos actinídeos. O Brasil, segundo dados oficiais da INB, possui uma das maiores reservas mundiais de urânio. A radiação ionizante do urânio pode interferir nas funções celulares em todos os níveis de organização da célula, induzindo toxicidades química e radiológica. Seu efeito no organismo é cumulativo, e a radiação assim exposta pode afetar o DNA, induzindo o desenvolvimento de neoplasias, como as leucemias. Diante disso, o biomonitoramento de indivíduos expostos à radiação é relatado na literatura como essencial para monitorização humana. O Ceará possui uma das maiores reservas de urânio do Brasil; o depósito de Urânio de Santa Quitéria. O objetivo do presente trabalho tem como finalidade avaliar os possíveis efeitos genotóxicos e mutagênicos da exposição humana ao urânio no Município de Santa Quitéria, utilizando as técnicas de Ensaio do Cometa Alcalino em linfócitos humanos, Micronúcleos em linfócitos, mucosa oral e reticulócitos humanos, Aberrações Cromossômicas em linfócitos humanos e mensuração de oxidação protéica. As amostras coletadas totalizaram 161 indivíduos, sendo 91 residentes e 70 não residentes. A média de idade da população residente foi de 41,24 ± 15,00; com um tempo de exposição, de 34,93 ± 16,06. Na análise do cometa alcalino, houve diferença estatisticamente significante entre os Índices de Dano (IDs) das populações residentes e não residentes de 10,63±0,61 e 6,34±0,31, respectivamente. Diferenças significativas foram encontradas quando se utilizou no teste do cometa as enzimas FPG, ENDO III, hOGG1. Os maiores índices foram encontradas entre os fumantes e/ou etilistas. Os resultados da avaliação mutagênica, com o teste de MN em linfócitos, MN em reticulócitos e MN em mucosa bucal revelam que não houve diferenças significativas entre os grupos residentes e não residentes. Porém, diferenças significativas foram encontradas entre os fumantes e/ou etilistas. Os resultados de aberrações cromossômicas da população residente revelam que as frequências de aberrações cromossômicas (quebras cromossômicas e cromatídicas) dos grupos da população residente foram significativamente diferentes, quando comparado com aos grupos da população não residente. Não houve diferenças nos resultados de aberrações numéricas e índice mitótico. As mensurações de oxidação protéica de residentes revelam que a dosagem de proteína carbonilada foi significativamente maior, quando comparado o grupo não residente com o residente. As maiores dosagens foram encontradas entre os fumantes e/ou etilistas. Conclui-se que o urânio presente na região geográfica não é suficiente para induzir quebras na molécula de DNA, interferir na montagem das fibras do fuso e impedir a progressão do ciclo celular, o que deve refletir as baixas doses de radiação a que são expostas. As lesões no DNA, bem como alterações cromossômicas observadas nos fumantes expostos pode ser devido ao efeito do tabagismo.

Orientador: Edson Luis Maistro / Resumo: Cerca de 11% dos medicamentos considerados essenciais pela OMS são derivados de plantas medicinais, daí a importância do desenvolvimento de testes científicos sobre essas plantas, avaliando, além do seu real potencial farmacológico, a genotoxicidade, mutagenicidade, antigenotoxicidade, citotoxicidade, dentre outros, para esclarecer se o uso de tais plantas por seres humanos é seguro. Crataegus oxyacantha é uma planta originalmente encontrada na Europa e, devido à suas potencialidades medicinais, já há muito tempo foi introduzida no continente sulamericano. Pertencente à família Rosaceae, a árvore forma, na primavera, cachos grandes de flores brancas ou rosas de fragrância agradável, que no outono se transformam em pequenos frutos vermelhos. A importância da C. oxyacantha se dá pela presença comprovada de flavonóides, que são conhecidos por sua ação antioxidante. Devido a inexistência na literatura de estudos investigando a toxicidade genética de C. oxyacantha para os seres humanos, o presente estudo foi elaborado visando avaliar se o extrato de frutos desta planta apresenta efeitos citotóxico, genotóxico e clastogênico/aneugênico em leucócitos humanos e células HepG2 em cultura, e mutagênico em cepas de Salmonella typhimurium (teste de Ames). Os resultados da análise de genotoxicidade mostraram que o extrato não apresentou efeitos genotóxicos nas concentrações de 2,5 e 5,0 µg/ml em ambos os tipos celulares analisados, no entanto, em concentrações acima de 10 µg/ml verificou-s... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: About 11% of medicines considered essential by WHO are derived from medicinal plants, being important to develop scientific tests on these plants, evaluating several aspects as its pharmacological potential, genotoxicity, mutagenicity, antigenotoxicity, cytotoxicity, among others, to clarify if the use of such plants is safe for humans. Crataegus oxyacantha is a plant originally found in Europe and due to its medicinal potential, was at long time introduced in the South American continent. Belonging to the Rosaceae family, the tree form in the spring, large bunches of white flowers and pleasant fragrance of roses, which in autumn turn into small red fruits. The importance of C. oxyacantha is attributed to the presence of flavonoids as constituents, which are known for their antioxidant activity. Considering the absence in the literature of studies investigating the genetic toxicity of C. oxyacantha to humans, this study was designed to evaluate if the fruits extract of this plant present a cytotoxic, genotoxic and clastogenic/aneugenic effects in cultured human HepG2 and leukocytes cells, and mutagenicity in Salmonella typhimurium strains (Ames test). The results of genotoxicity analysis evidenced that the extract showed no genotoxic effects at 2.5 and 5.0 ug/ml concentrations, in both cell types tested, however, at concentrations above of 10 ug/ml significant DNA damage was observed. The micronucleus test results showed that the concentrations above of 10 ug/ml also produced... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Christiane Pienna Soares / Coorientador: Eliana Aparecida Varanda / Coorientador: Valéria Valente / Banca: Denise Crispim Tavares / Banca: Raquel Alves dos Santos / Banca: André Gonzaga dos Santos / Banca: Raquel Mantuaneli Scarel Caminaga / Resumo: Trabalhos demonstraram que derivados da planta Casearia sylvestris protegem o DNA de danos. Dessa forma, este trabalho visa avaliar por quais mecanismos essa proteção ocorre. Os produtos naturais avaliados foram o extrato etanólico das folhas de C. sylvestris e os diterpenos clerodânicos obtidos deste extrato: casearinas B, D e X e caseargrewiina F. Para a avaliação dos efeitos propostos foram utilizadas como modelo as linhagens celulares HepG2, MRC5, XP4PA e Hepa 1c1c7. Primeiramente, os produtos naturais foram avaliados com relação à sua atividade citotóxica pelo teste do MTT e ensaio de sobrevivência clonogênica nos tempos de 24 e 48 h, obtendo-se o IC50 e o IC20. Em seguida, foi realizado o ensaio de genotoxicidade do cometa no tempo de 24 h utilizando-se incubação com a enzima FPG nas linhagens HepG2, MRC5 e XP4PA. Os produtos naturais se mostraram genotóxicos mesmo em pequenas concentrações. Após este ensaio, foi avaliada a antigenotoxicidade dos produtos naturais já nas concentrações pouco genotóxicas e não citotóxicas por 24 h. Para tanto, as células HepG2 foram expostas ao mutágeno peróxido de hidrogênio (H2O2 - 1mM) e pré e pós-tratadas com os produtos naturais. E, as linhagens MRC5 e XP4PA foram expostas à radiação ultravioleta C (UVC) e pré e pós-tratadas com os produtos naturais. Para a linhagem HepG2, o extrato etanólico, as casearinas B e D apresentaram inibição de danos fortes nas maiores concentrações testadas. Já para a linhagem MRC5 somente a casearina B foi capaz de produzir inibição moderada na concentração de 0,04 µM. Adicionalmente, foi verificada a resposta antiapoptótica dos produtos naturais pelo método da anexina-V-FITC/PI nas linhagens submetidas aos mesmos mutágenos do ensaio do cometa, aplicando-se o protocolo... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Studies have shown that Casearia sylvestris derivatives protect DNA from damage. Thus, the aim of this study was to evaluate the mechanisms through which this protection occurs. The samples used in this study were the ethanolic extract of C. sylvestris leaves and the clerodane diterpenes obtained from this extract, including casearins B, D and X, and caseargrewiin F. The following cell lines were used: HepG2, MRC5, XP4PA and Hepa 1c1c7. First, all samples were assessed for their cytotoxic activity by using both the MTT assay and the clonogenic survival assay after 24 and 48 h of exposure, yielding the IC50 and IC20. Afterwards, the genotoxicity of the samples was assessed within 24 h following incubation with the samples using the FPG enzyme in the cell lines HepG2, MRC5 and XP4PA. The compounds proved to be genotoxic at all concentrations tested. Subsequently, the antigenotoxicity of the samples was assessed at concentrations that were at very low levels of cytotoxic or genotoxic after 24 h. HepG2 cells were exposed to the mutagen hydrogen peroxide (H2O2, 1 mM) and either pre or post-treated with the samples. Additionally, the cell lines MRC5 and XP4PA were exposed to ultraviolet C (UVC) and either pre or post-treated with the compounds. For the ethanolic extract in the HepG2 cell line, the casearins B and D showed strong inhibition of damage at the highest concentrations tested. In the MRC5 cell line, only casearin B was able to produce moderate inhibition (at 0.04 mM). Additionally, the anti-apoptotic response of the samples was assessed by an anexinV-FITC/PI assay in cell lines that were exposed to the same mutagens used in the comet assay, followed by post-treatment with the samples. The clerodane diterpenes, at high concentrations, increased the percentage of live cells and decreased... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Submitted by Daniella Sodre (daniella.sodre@ufpe.br) on 2015-04-13T13:41:14Z No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO Wanessa Botelho Cabral.pdf: 1347764 bytes, checksum: e922b207be73f5f6dd67b374c36e0e16 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-13T13:41:14Z (GMT). No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO Wanessa Botelho Cabral.pdf: 1347764 bytes, checksum: e922b207be73f5f6dd67b374c36e0e16 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2014-01-22 / CAPES; CNPq / Os agrotóxicos são largamente utilizados no mundo para proteger as plantações contra pragas e doenças, e na saúde pública no controle de vetores que causam doenças ao homem. Contudo, a exposição a esses produtos pode representar graves riscos à saúde humana e ao meio ambiente. Relatos da literatura sobre ação genotóxica das formulações comerciais isoladas de agrotóxicos é bastante escaça, uma vez que a maioria das pesquisas se preocupa em estudar o efeito das misturas desses compostos. Desta forma, o presente trabalho realizou um biomonitoramento in vivo, utilizando camundongos Mus musculus, para avaliar a ação genotóxica aguda, através da ingestão isolada dos agrotóxicos Ciromazina (Trigard 700 WP) e Maconzeb (Dithame NT) em baixas doses. Foram realizados os testes do micronúcleo e do ensaio cometa, para avaliar respectivamente a mutagenicidade e a genotoxicidade desses pesticidas. Sendo utilizados 80 camundongos, divididos em oito grupos contendo 10 animais (cinco machos e cinco fêmeas). As administrações foram feitas por gavagem e cada animal recebeu 1 mL da solução, de acordo com o grupo a que pertencia: o grupo controle negativo recebeu apenas o veículo de diluição (água destilada); para a Ciromazina foram usados três grupos experimentais: C1 com a concentração de 2,5.10−4 mg/Kg, o C2 com a concentração de 5.10−4 mg/Kg, e C3 com a concentração de 5.10-3 mg/Kg; para o Mancozeb foram usados também três grupos experimentais: C1 com a concentração de 3,76.10−4 mg/Kg, C2 com a concentração de 7,52.10−4 mg/Kg, e C3 com a concentração de 7,52.10-3 mg/Kg; para o grupo controle positivo foi administrado via injeção intraperitonial 20 mg/kg p.c. de ciclofosfamida. Na análise estatística, foram realizados dois testes: uma ANOVA multifatorial (Análise de variância), para comparar a ação genotóxica entre os grupos experimentais; e o teste de Mann-Whitney para verificar a influência do sexo no aparecimento do dano genético dentro de um mesmo grupo tratado. O agrotóxico Ciromazina demonstrou ser mutagênico e altamente genotóxico na concentração do grupo C2, além de apresentar uma diferença significativa entre os sexos no grupo C1. Já o pesticida Mancozeb mostrou ser genotóxico na concentração do grupo C2, e foi constatado também que houve diferença significativa entre os sexos dos individuos do grupo C3. Através desta pesquisar evidenciamos que mesmo em baixas concentrações estes pesticidas oferecem grandes riscos à saúde humana e ao meio ambiente.

Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-08-08T19:43:20Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Carolina Barbosa Cabral.pdf: 930966 bytes, checksum: 096287bf2e7cc7676b00e9b36cb6b73f (MD5) / Rejected by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br), reason: on 2018-08-13T21:22:26Z (GMT) / Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-08-13T21:33:00Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Carolina Barbosa Cabral.pdf: 930966 bytes, checksum: 096287bf2e7cc7676b00e9b36cb6b73f (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-08-17T19:18:48Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Carolina Barbosa Cabral.pdf: 930966 bytes, checksum: 096287bf2e7cc7676b00e9b36cb6b73f (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-17T19:18:48Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Carolina Barbosa Cabral.pdf: 930966 bytes, checksum: 096287bf2e7cc7676b00e9b36cb6b73f (MD5) Previous issue date: 2017-04-24 / CNPq / Os hidrocarbonetos policíclicos aromáticos (HPAs) são compostos orgânicos prioritários em estudos ambientais devido a sua toxicidade para os sistemas biológicos. Estes são conhecidos precursores de efeitos carcinogênicos e mutagênicos para animais e humanos. O estuário do Rio Potengi/Jundiaí é o mais importante do Rio Grande do Norte e, além de sevir como berçário para diversos organismos, este abriga o Porto de Natal, terminal pesqueiro, indústrias, etc., cujas atividades podem estar ameaçando a saúde deste ecossistema. Visando investigar danos genômicos em caranguejo e associar a contaminação do sedimento por HPAs no estuário do Rio Potengi - Natal (RN), foram coletados caranguejos-uçá (Ucides cordatus) e sedimentos da sua loca em 4 diferentes estações ao longo do estuário. A contaminação dos sedimentos por HPA foi avaliada em paralelo aos efeitos genotóxicos nestes caranguejos. As concentrações de HPAs foram determinadas através do método de cromatografia gasosa acoplado a um espectrômetro de massas, e as alterações genéticas foram avaliadas pelo teste de micronúcleo (macrolesões) e ensaio cometa (microlesões). As concentrações dos HPAs totais variaram de 3,25 ng g⁻¹ a 1065 ng g⁻¹, sendo uma estação classificada como pouco contaminada, e as demais como moderadamente contaminadas. Alguns compostos apresentaram concentrações acima do nível limiar de efeito adotado pela Agência Ambiental do Canadá, sugerindo que ocasionalmente podem causar efeitos tóxicos aos organismos locais. A frequência de micronúcleos nos Caranguejos-Uçá foi significativamente maior que no controle (U. cordatus coletados na Estação Ecológica da Juréia), e correlacionaram positivamente com os HPAs, sugerindo que estes sejam potenciais agentes causadores desta genotoxicidade. Os resultados do ensaio cometa não apresentaram correlação com os HPAs e nem com a frequência de micronúcleos, sugerindo que outras variáveis ambientais e/ou compostos lançados no ambiente sejam os principais responsáveis pelas microlesões observadas. Este estudo mostra que a poluição crônica por HPAs no estuário do Rio Potengi/Jundiaí está contribuindo com danos genômicos nos U. cordatus, podendo ameaçar a conservação destes organismos, que já estão na lista de espécies sobreexplotadas ou ameçadas de sobreexplotação. A abordagem utilizada neste trabalho foi eficaz na avaliação da saúde do caranguejo-Uçá, porém estudos complementares utilizando outras classes de contaminantes e outros tipos de medidas biológicas são necessárias. / Polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs) are priority organic compounds in environmental studies due to their toxic potential to biological systems. They are known carcinogenic and mutagenic precursors to animals and humans. The Potengi/Jundiaí is the most important estuary in Rio Grande do Norte and, besides serving as a nursery for various organisms, it houses the Port of Natal, fishing terminals, industries, etc., that may be threatening the health of this ecosystem. This study aimed to investigate genomic damages on crabs and test the correlation with PAH contamination in sediments from Potengi estuary, in Natal (RN). Uçá-crabs (Ucides cordatus) and sediments from their burrow were collected in 4 different stations along of estuary. PAHs concentrations were determined by gas chromatograph coupled to a mass spectrometer, and the genetic alterations were evaluated by micronucleus test (macrolesions) and comet assay (microlesions). Total PAHs ranged from 3.25 ng g⁻¹ to 1065 ng g⁻¹. One station was classified as low contaminated, and the others as moderately contaminated. Some compounds showed concentrations above threshold effects level, proposed by Environment Agency of Canada, suggesting that occasionally they may cause toxic effects to local organisms. Micronuclei frequency in Uçá crabs was significantly higher than the control site (U. cordatus collected at Juréia – Itatins Ecological Station), and a positive correlation with PAHs was observed, pointing out these compounds as important stressors to the genotoxic effects observed. There was no correlation between comet assay and PAH or micronuclei frequency, indicating that some other environmental variables and/or compounds are the major responsible for the observed microlesions. This study showed that PAHs chronically introduced in the Potengi/Jundiaí estuary may threaten the conservation of U. cordatus, which is already listed as an overexploited species or under threat of overexploitation. The methodology used was efficient in the evaluation of these crabs' health, but complementary studies investigating other classes of contaminants and others biological measures are necessary.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:16:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Jose de Souza Filho.pdf: 2614709 bytes, checksum: 05f4c3c1c352f60a58f2b188da4c4e90 (MD5) Previous issue date: 2011-01-31 / The effects of toxic, mutagenic and genotoxic on target organs and the fish genome has been the subject of many studies, especially those that seek to establish these bodies and responses of genes to environmental stimuli. Histopathological studies, mutagenic, genotoxic and Poecilia reticulata (Guppy) were motivated by the scarcity of data in the literature concerning the effects of the formulation of the herbicide Roundup Transorb®. With everything, we sought to ascertain the effects produced by this formulation that is widely used in the Midwest of the country. This study aimed to evaluate the toxicity and mutagenic and genotoxic herbicide R. Transorb® in liver, gill and erythrocytes of the guppy, calculating and applying the LC50 test micronucleus (MN) and Comet assay (AC). The toxicity bioassays were performed to calculate the LC50;12-96h, to evaluate the effects of sublethal concentrations of herbicide subjected to acute treatment. We used 36 adult fish, weighing on average 0.496 g ± 0.28 g to calculate the LC50 and 75 adult fish also carry the MN and AC. During exposure to the herbicide was observed fish behavior at all concentrations and controlled chemical and physical changes of water. The erythrocytes were obtained by centrifugation of the gills being added to precipitate fetal calf serum, and then dripped on the slides to make the smear and electrophoresis. For the analysis of plates, 75.000 cells were counted and stipulate the frequency of occurrence of Nuclear Morphological Changes (AMNs) and AC were analyzed for 100 cells per specimen. The LC50; 12, 24, 48, 72 e 96h of R. Transorb® were 11:24, 8:55, 6.5, 6.10 and 5.65μl/L, respectively, indicating that this species is very sensitive to the herbicide studied in relation to other tropical species analyzed. These factors may be related to different formulations of herbicides and their respective surfactants. It was found that the mortality rate of fish poisoned by the herbicide increased as exposure concentrations increased. The values of LC50,12-96h show a downward trend over time, suggesting that during periods of reduced exposure will require greater amounts of herbicide to cause mortality of 50% of the population of animals. Animals exposed to the herbicide showed behavioral changes varied, such as aggressiveness, irritability, loss of the escape reflex, darkening of the body surface and banging against the wall of the aquarium. In addition, R. Transorb® hitológicas induced liver changes appreciably impairing the normal functioning of this organ. In MN and EC was possible to detect significant genotoxic and mutagenic effects in erythrocytes and gill cells, occurring gradual increase in the number of cells with AMNs and ADN damage under higher concentrations,indicating concentration-dependent effect. This herbicide has acute toxicity to guppy, promoting behavioral changes, possibly acting in a manner damaging to the liver but also in the nervous system and gill. These results also suggest that the formulation of this herbicide has genotoxic and mutagenic in erythrocytes and gill cells detected by the MN and AC. Therefore, it confirms the high risk of herbicide to the environment, its contamination may present a strong threat to populations of fish and other organisms both vertebrates and invertebrates and human health. / Os efeitos de substâncias tóxicas, mutagênicas e genotóxica sobre órgãos-alvos e o genoma de peixes tem sido objeto de muitos estudos, sobretudo daqueles que buscam estabelecer respostas destes órgãos e dos genes aos estímulos ambientais. Estudos histopatológicos, mutagênicos, genotóxicos e em Poecilia reticulata (Guppy) foram motivados pela escassez de dados na literatura referente aos efeitos provocados pela formulação do herbicida Roundup Transorb®. Com tudo, pretendeu-se conhecer os efeitos produzidos por essa formulação que é bastante utilizada no Centro-Oeste do país. O presente trabalho teve como objetivo avaliar a ação tóxica, mutagênica e genotóxica do herbicida R. Transorb® em fígado, brânquia e eritrócito do guppy, calculando a CL50 e aplicando Teste de Micronúcleo (MN) e Ensaio Cometa (EC). Os bioensaios de toxicidade foram realizados para calcular a CL50,12-96h, avaliar os efeitos das concentrações subletais do herbicida submetido a tratamento agudo. Utilizou-se 36 peixes adultos, pesando em média 0,496g ± 0,28g para cálculo da CL50 e 75 peixes também adultos para realizar o MN e EC. Durante a exposição ao herbicida observou-se o comportamento dos peixes em todas as concentrações e controlada as variações químicas e físicas da água. Os eritrócitos foram obtidos pela centrifugação das brânquias sendo adicionado soro fetal bovino ao precipitado, e posteriormente gotejado sobre as lâminas para realizar o esfregaço e eletroforese. Para a análise das lâminas, foram contadas 75.000 células e estipulada a frequência de ocorrência de Alterações Morfológicas Nucleares (AMNs), e para EC foram analisadas 100 células por espécime. A CL50; 12, 24, 48, 72 e 96 h do R. Transorb® foram de 11.24; 8.55; 6.5; 6.10 e 5.65μl/L, respectivamente, indicando que esta espécie é bastante sensível ao herbicida estudado em relação às demais espécies tropicais analisadas. Esses fatores podem estar relacionados às diferentes formulações dos herbicidas e seus respectivos surfactantes. Verificou-se que a porcentagem de mortalidade dos peixes intoxicados pelo herbicida aumentou à medida que as concentrações de exposição aumentaram. Os valores da CL50; 12- 96 h apresentam tendência de queda ao longo do tempo, sugerindo que em períodos de menor exposição serão necessárias quantidades maiores de herbicida para causar a mortalidade de 50% da população de animais. Os animais expostos ao herbicida apresentaram alterações comportamentais variadas, tais como: agressividade; irritabilidade; perda do reflexo de fuga; escurecimento da superfície corporal e choque contra a parede do aquário. Além disso, o R. Transorb® induziu alterações hitológicas hepáticas prejudicando de forma sensível o funcionamento normal deste órgão. No MN e EC foi possível detectar efeitos mutagênicos e genotóxicos significativos nos eritrócitos e células da brânquia, ocorrendo aumento gradual no número de células com AMNs e com danos ao DNA de acordo com aumento das concentrações, indicando efeito concentração-dependente. Este herbicida apresenta toxidade aguda para guppy, promovendo alterações comportamentais, agindo possivelmente de forma danosa não só no fígado, mas também no sistema nervoso e branquial. Tais resultados sugerem também que a formulação deste herbicida possui ação genotóxica e mutagênica em eritrócitos e células branquiais detectados através dos MN e EC. Por tanto, se confirma o alto risco deste herbicida ao meio ambiente, sua contaminação pode apresentar forte ameaça para as populações de peixes e outros organismos tanto vertebrados como invertebrados e saúde do homem.