Orientador: Antonio Carlos Monteiro / Banca: Giane Serafim da Silva / Banca: Érika Barbosa Neves Graminha / Resumo: O presente estudo investigou, em condições de laboratório, a atividade patogênica de diferentes isolados dos fungos Metarhizium anisopliae, Beauveria bassiana e Paecilomyces fumosoroseus, aplicados nas concentrações de 1 x1 06 e 1 x1 08 conídios/mL nos estágios de ovo, larva L2, pupa e adulto de Chrysomya puloria. Grupos de 30 ovos, 20 larvas L2 e 20 pupas foram banhados com as suspensões de conídios e no ensaio com adultos, grupos de 30 moscas, foram pulverizados com as mesmas suspensões. Em todos os ensaios, utilizaram-se quatro repetições por tratamento. Os três fungos e seus respectivos isolados apresentaram baixa atividade patogênica para a fase de ovo. Os isolados de B. bassiana e M. anisopliae, aplicados na concentração de 108 conídios/mL, promoveram 100% de mortalidade de larvas de C. puloria. O tratamento de pupas com o isolado JAB 07 de B. bassiana, na concentração de 108 conídios/mL, reduziu significativamente a emergência de adultos. O efeito dose¬resposta foi melhor evidenciado no ensaio com adultos, pois os isolados de M. anisopliae e B. bassiana dimimuiram a sobrevivência somente quando aplicados na concentração de 108 conídios/mL. Todos os fungos se mostraram patogênicos para C. putoria, havendo diferença entre os isolados quanto a ação patogênica. Os isolados de B. bassiana e M. anisopliae foram mais eficientes, atuando principalmente nas fases de larva e adulto. P. fumosoroseus evidenciou menor atividade patogênica, apenas reduzindo a sobrevivência de adultos emergidos a partir de pupas inoculadas. A eficiência do controle foi influenciada pela concentração de conidios, obtendo-se os melhores resultados com as suspensões mais concentradas. / Abstract: The present study investigated, in laboratory conditions, the pathogenic activity of different isolates of the fungi Metarhizium anisopliae, Beauveria bassiana and Paecilomyces fumosoroseus, applied in the concentrations of 1 x1 06 and 1 x1 08 conidia/ml in the stages of egg, L2 larvae, pupa and adult of Chrysomya putoria. Groups of 30 eggs, 20 L2 larvae e 20 pupae were bathed with the conidia suspensions and in the assay with adult, graups of 30 f1ies were pulverized with the same suspensions. In ali the assays there were used four repiicates per treatment. The three fungus and their respective isolates presented low pathogenic activity for the egg stage. The isolates B. bassiana and M. anisopliae, applied in the concentration of 108 conidia/ml, promoted a 100% of C. puloria larvae morta!ity. The pupae treatment with the isolate JAB 07 of B. bassiana, in the concentration of 108 conidia/ml, decreased significantly adult emergence. The dose-response effect was better evidenced in the assay with adults, because the isolates of M. anisopliae and B. bassiana only reduced the survival when applied in the concentration of 108 conidia/ml. All fungus demonstrated to be pathogenic to C. puloria, although there is a difference between the isolates in their pathogenic activity. The isolates of B. bassiana and M. anisopliae were more efficient, mainly acting in the larva and adult stages. P. fumosoroseus evidenced lower pathogenic activity, decreasing the survival of emerged adult only through inoculated pupae. The control efficiency was influenced by the conidia concentration, obtaining the best results with the most concentrated suspension. / Mestre

Entomopathogenic nematodes (EPN) (Heterorhabditis bacteriophora and H. megidis) and entomopathogenic fungi (EPF) (Metarhizium anisopliae and Beauveria bassiana) were evaluated for efficacy against masked chafer white grub, Cyclocephala spp., under laboratory and greenhouse conditions, as well as their efficacy against various grub stages in the field.  Under both laboratory and greenhouse conditions, additive interactions were found between EPN and EPF in their combined application against Cyclocephala spp., except a few observations that showed antagonism or synergism.  Significantly greater control occurred from the combination of a nematode and a fungus compared with a fungus alone, but not compared with a nematode alone.  The combined effect did not differ significantly for nematode and fungi applied simultaneously or at different times.  EPF had no significant impact on EPN infection and production of infective juveniles (IJs) in grub carcasses.  Nematodes alone or in combination with fungi were comparable to the insecticide Merit 75 WP (imidacloprid) against 3rd instar Cyclocephala spp in the greenhouse. Efficacy of EPF and EPN varied dramatically between field sites and conditions; EPN and EPF applied alone or in combination were less effective than Merit 75 WP in >50% field trials, but some EPN + EPF treatments were more effective than the insecticide in reducing grub numbers.  EPN and EPF showed better potential than insecticides for providing extended control of white grubs in the subsequent generation.  In addition, the sub-lethal effects of EPF on southern masked chafer, C. lurida, were investigated.  Neither M. anisopliae nor B. bassiana had a sub-lethal effect on grub weight gain, adult longevity, oviposition, pupation and eclosion.  Finally, interaction between H. bacteriophora and M. anisopliae was examined to determine the potential of the nematode in improving fungal distribution in soil.  H. bacteriophora enhanced fungal distribution in sandy loam soil without grass thatch, but not in sandy soil with thatch.  In both soil types, soil depths significantly affected nematode and fungal distribution. In water profile, M. anisopliae conidia germinated hyphae that attached to sheath of H. bacteriophora IJs, which molted to detach from the fungus.  IJs mortality and virulence were not affected by the presence of M. anisopliae. / Ph. D.

O inseto vetor Diaphorina citri Kuwayama 1907 (Hemiptera: Liviidae) é considerado a principal praga da citricultura mundial. O controle desta praga é feito quase exclusivamente com inseticidas químicos, existindo a demanda por alternativas mais sustentáveis de controle. O desenvolvimento de um bioproduto a base de fungo entomopatogênico pode ser uma alternativa promissora para o manejo integrado de D. citri em pomares comerciais de citros. Assim, esse estudo teve como objetivo viabilizar a utilização do fungo entomopatogênico Isaria fumosorosea ESALQ-1296 para o controle de D. citri, avaliando: 1- a ação de adjuvantes na adesão e germinação de I. fumosorosea em ninfas e adultos de D. citri; 2- a relação entre a viabilidade dos conídios e a mortalidade de D. citri; 3- o efeito da umidade relativa do ar e da radiação ultravioleta na eficácia de I. fumosorosea em condições de laboratório; 4- o período entre a aplicação de fungicidas químicos e I. fumosorosea em campo; 5- a seletividade de I. fumosorosea aos inimigos naturais Tamarixia radiata e Ceraeochrysa cincta em condições de laboratório; 6- o volume de calda adequado para as aplicações de I. fumosorosea para o controle de D. citri em pomares comerciais; 7- a eficiência de I. fumosorosea no manejo de D. citri e seu efeito em outras espécies de artrópodes em dois sistemas de produção de citros. Análises por microscopia eletrônica de varredura revelaram que a adição dos adjuvantes KBRAdj e Silwet L-77 acelerou o desenvolvimento dos conídios de I. fumosorosea na cutícula de todos os estágios do inseto em comparação com o Tween 80. As formulações de I. fumosorosea com KBRAdj 0,075% apresentaram melhor desempenho no controle de D. citri em todos os níveis de umidade, mas especialmente em períodos de baixa umidade relativas (≤50%) e sob exposição à radiação UV-B (> 2 horas) em relação a aplicação com Tween. Os fungicidas Kumus® DF, Kocide® WDG, Nativo®, Flint 500® WG não influenciaram no desempenho do entomopatógeno quando esses foram pulverizados um dia antes ou após a aplicação do fungo sobre os adultos de D. citri. Nos estudos de seletividade foi demonstrado que a maioria das misturas de I. fumosorosea com os adjuvantes foi inócua para os adultos de T. radiata e as larvas neonatas de C. cincta. Em pomares comerciais, foi demostrado que as aplicações de I. fumosorosea foram mais eficientes no volume de 60 mL.m-3 de área de copa. Na área com produção orgânica de citros foi verificado que as aplicações de I. fumosorosea reduziram significativamente a população natural de D. citri e do ácaro da leprose (Brevipalpus spp.). Já na área com produção convencional de citros foi observado que as pulverizações de I. fumosorosea reduziram significativamente a população do ácaro da falsa ferrugem (Phyllocoptruta oleivora) e a população de D. citri foi extremamente baixa em todos os tratamentos. As aplicações de I. fumosorosea não apresentaram efeitos negativos nas populações dos predadores joaninhas, crisopídeos e hemerobídeos. Portanto, conclui-se que a utilização do fungo I. fumosorosea no manejo de D. citri pode ser uma tática sustentável para minimizar as aplicações sistemáticas de pesticidas, diminuindo seus impactos no agroecossistema. / The insect vector Diaphorina citri Kuwayama 1907 (Hemiptera: Liviidae) is the main citrus pest in the world. The control of this pest is done almost exclusively with chemical insecticides, and there is a demand for more sustainable control alternatives. The development of a bioproduct based on entomopathogenic fungi may be a promising alternative for the integrated management of D. citri in commercial citrus orchards. The objective of this study was to evaluate important parameters to increase efficiency of applications of the entomopathogenic fungus Isaria fumosorosea ESALQ-1296 for the control of D. citri. The following studies have been developed: 1- the action of adjuvants on adhesion and germination of I. fumosorosea on nymphs and adults of D. citri; 2- the relationship between the conidia viability and the mortality of D. citri; 3- the effect of relative air humidity and ultraviolet radiation on the efficacy of I. fumosorosea under laboratory conditions; 4 - the period between the application of chemical fungicides and I. fumosorosea in field; 5- the selectivity of I. fumosorosea to the natural enemies Tamarixia radiata and Ceraeochrysa cincta under laboratory conditions; 6 - the volume of syrup suitable for I. fumosorosea applications for the control of D. citri in commercial orchards; 7- the efficiency of I. fumosorosea to management of D. citri and its effect against other species of arthropods in two systems of citrus production. Scanning electron microscopy analysis revealed that the addition of the adjuvants KBRAdj and Silwet L-77 accelerated the development of I. fumosorosea conidia on the cuticle of all stages of the insect compared to Tween 80. The formulations of I. fumosorosea with KBRAdj 0.075% showed better performance in controling D. citri at all moisture levels, but especially in periods of low relative humidity (≤50%) and exposure to UV-B radiation (> 2 hours) compared to Tween application. The fungicides Kumus® DF, Kocide® WDG, Nativo®, Flint 500® WG did not influence the performance of the entomopathogen when they were sprayed the day before or after application of the fungus on D. citri adults. In the selectivity studies, it was shown that most of the mixtures of I. fumosorosea with the adjuvants were innocuous for the adults of T. radiata and the neonates of C. cincta. In commercial orchards, it was demonstrated that I. fumosorosea applications were more efficient in the volume of 60 mL.m-3 of leaves. In the area with organic citrus production it was verified that I. fumosorosea applications significantly reduced the natural population of D. citri and the false spider mite (Brevipalpus spp.). In the area with conventional citrus production it was observed that sprays of I. fumosorosea significantly reduced the population of the false rust mite (Phyllocoptruta oleivora) and D. citri population was extremely low in all treatments. The applications of I. fumosorosea did not present negative effects in the populations of the ladybirds, lacewings and hemerobide predators. Therefore, it is concluded that the use of I. fumosorosea fungus in the management of D. citri can be a sustainable tactic to minimize the systematic applications of pesticides, reducing their impacts on the agroecosystem.

Os fungos entomopatogênicos, como Metarhizium anisopliae, têm despertado grande interesse como agentes no controle de insetos-pragas. Estas espécies de fungos são especializadas na secreção de um complexo enzimático constituído de proteases, lipases e quitinases, entre outras, estando relacionadas com patogenicidade e virulência. Neste contexto a foi analisada a secreção de quitinases pelos isolados IBCB 167, IBCB 360, IBCB 384 e IBCB 425 de M. anisopliae var. anisopliae, como identificado molecularmente. Contudo, alguns aspectos morfológicos analisados mostram pequenas diferenças entre estes isolados. Para produção de quitinases, os isolados foram cultivados em fermentação submersa na presença e ausência de indutores e em fermentação em estado sólido, tendo crisálida como substrato. A maior síntese de quitinase intracelular foi obtida para IBCB 425 no meio contendo extrato de levedura mais glicose (EG). Visando a produção da enzima extracelular e disponibilidade de fonte de carbono, o meio extrato de levedura mais crisálida (EC), sob agitação foi padronizado para fermentação submersa (FSbm). Os maiores níveis enzimáticos intracelulares para os isolados IBCB 167, IBCB 360, IBCB 384 e IBCB 425 foram obtidos entre 72 h e 216 h e para a forma extracelular entre 96h e 144h. A produção quitinásica em fermentação sólida (FSS) utilizando crisálida como fonte de carbono foi otimizada por delineamento composto central rotacional (DCCR, tendo como variáveis o tempo de crescimento e umidade. O melhor produtor de quitinase em FSS foi o isolado IBCB 360. A análise do secretoma mostrou um maior número de proteínas quando os isolados foram cultivados na presença do indutor, com destaque para o isolado IBCB 425. A maioria das proteínas secretadas pelos isolados IBCB 167 e IBCB 384, foram identificadas, estando entre elas a endo-N-acetyl--D-glucosaminidase, enzima do complexo quitinolítico. As quitinases produzidas pelos quatro isolados foram parcialmente purificadas em DEAE Celulose, obtendo-se dois picos de atividade quitinásica. O processo de purificação foi continuado para o IBCB 384 em coluna de exclusão molecular, obtendo se um único pico de atividade quitinásica, analisado por electrospray. A temperatura ótima de atividade para as quitinases produzida em FSS pelos isolados IBCB 167, IBCB 360, IBCB 384 e IBCB 425 variou de 50ºC a 60ºC e pH ótimo de atividade ficou na faixa de 5,0 - 5,5. As quitinases dos isolados mantiveram-se estáveis nas temperaturas de 30ºC e 40ºC e em uma ampla faixa de pH. Os sais BaCl2 e MnCl2 ativaram as quitinases dos isolados IBCB 167 e IBCB 425. Além disso, todas as quitinases foram tolerantes ao - mercaptoetanol. O comportamento cinético de todas as quitinases foi Michaeliano e a maior afinidade pelo substrato foi para a quitinase do isolado IBCB 360. Já os experimentos in vivo e in vitro mostraram que o isolado IBCB 425 foi melhor na fase pré-infecção e isolado IBCB 384 foi melhor na fase pós infecção, sendo o mais virulento. Portanto, os isolados M. anisopliae têm se mostrado como bons produtores de quitinases, com boa estabilidade a temperatura e pH além de outras características distintas que provavelmente estão relacionadas com o potencial de patogenicidade e virulência de cada isolado. / Entomopathogenic fungi such as Metarhizium anisopliae, have been attracting great interest as agents to control insect pests. These species of fungi are specialized in the secretion of an enzymatic complex consisting of proteases, lipases and chitinases, among others which are related to pathogenicity and virulence. In this context the secretion of chitinase by IBCB 167, IBCB 360, IBCB 384 and IBCB 425 isolated from M. anisopliae var. anisopliae molecularly identified, were analyzed. However, some structural features analyzed showed small differences among these isolates. For chitinase production, the isolates were grown in submerged culture in the presence and absence of inducers and under solid state fermentation with chrysalis as substrate. The enhanced synthesis of intracellular chitinase was obtained with IBCB 425 using yeast extract plus glucose (EG). Aiming to produce the extracellular enzyme and the carbon source available, the medium yeast extract and chrysalis (EC), was standardized to SbmF. The high intracellular enzymes levels produced by IBCB 167, IBCB 360, IBCB 384 and IBCB 425 isolates were obtained between 72 h and 216 h and for the extracellular form between 96h and 144h. The chitinase production in SSF using chrysalis as carbon source was optimized by CCRD, having the time of growth and moisture as variables. The best producer of chitinase in SSF was the isolated IBCB 360. The analysis of the secretome showed a great number of proteins when the isolates were grown in the presence of the inducer, especially for the isolated IBCB 425. Most of the proteins secreted by IBCB 167 and IBCB 384 isolates were identified. Among these proteins the endo-N-acetyl--D-glucosaminidase was identified, enzyme that participates in the chitinulitic complex. Chitinases produced by the isolates were partially purified on DEAE - cellulose, yielding two peaks of chitinase activity. The purification process was continued for IBCB 384 isolated using molecular exclusion chromatographic column, yielding only one peak of chitinase activity, analyzed by electrospray. The optimal temperature for the chitinase activity from IBCB 167, IBCB 360, IBCB 384 and IBCB 425 isolates obtained in SSF, ranged from 50 ºC to 60 ºC and the optimum pH of activity was 5.0 to 5.5. All chitinases were stable at 30 ºC and 40 ºC, and wide pH range. The BaCl2 and MnCl2 salts activated the chitinases of IBCB 167 and IBCB 425 isolates. In addition, all chitinases were mercaptoethanol tolerant. The kinetic behavior of all chitinases was Michaelian with the highest affinity to the substrate observed for the chitinase of isolated IBCB 360. The in vivo and in vitro experiments showed that isolated IBCB 425 was better in pre -infection phase and the isolated IBCB 384 was better in the post infection phase. Therefore, the M. anisopliae isolates were good producers of chitinases with interesting temperature and pH stability, and other different characteristics that are probably related to the potential pathogenicity and virulence of each isolate.

A região espaçadora ITS rDNA tem sido utilizada como uma importante ferramenta molecular para a identificação de fungos. Neste estudo a região ITS1 - 5.8S - ITS2 foi analisada em diferentes espécies do fungo entomopatogênico Metarhizium incluindo M. anisopliae, M. album e M. flavoviride com o objetivo de se construir primers específicos para a detecção e identificação do fungo no interior de larvas infectadas de Diatraea saccharalis. A amplificação desta região produziu um fragmento único de aproximadamente 540 pb para as linhagens E9, B/Vi e C, e de 600 pb para a linhagem 14 de M. anisopliae var. anisopliae; de 650 bp para M. album e 600 pb para M. flavoviride. Os produtos de PCR obtidos foram digeridos com diferentes enzimas de restrição Afa I, Alu I, Dde I, Hae III, Hpa II e Sau 3A I; e os perfis de PCR-RFLP mostraram nítidas diferenças entre as espécies analisadas. O sequenciamento da região ITS1 - 5.8S - ITS2 permitiu o desenho de primers específicos para as linhagens de M.a. var. anisopliae do Brasil e da Austrália. A amplificação não ocorreu em linhagens de M. álbum, M. flavoviride e Beauveria bassiana. Os DNAs extraídos de larvas infectadas pelas linhagens E9, B/Vi e C do Brasil e linhagem 14, da Austrália, foram testados utilizando-se os primers desenvolvidos. Em todos os experimentos o fungo M.a. var. anisopliae foi detectado 48 horas após a inoculação. A técnica molecular empregada neste estudo permite a rápida e segura detecção e identificação de M.a. var. anisopliae em bioensaios de laboratório e de campo, programas de manejo de pragas e estudos de epizootiologia. / The ITS rDNA have been used as an important molecular tool for fungi identification. In this study the ITS1 - 5.8S - ITS2 rDNA regions were analyzed in different species of the entomopathogenic fungus Metarhizium including M. anisopliae, M. album and M. flavoviride, in order to construct specific primers for their detection and identification within infected Diatraea saccharalis larvae. The amplification of this region yielded a unique fragment of approximately 540 bp for E9, B/Vi and C, and 600 bp for strain 14 of M. anisopliae var. anisopliae; of 650 bp for M. album and 600 bp for M. flavoviride. The PCR products were digested with the different restriction endonucleases Afa I, Alu I, Dde I, Hae III, Hpa II and Sau 3A I; and the PCR-RFLP profiles showed clear differences amongst the species. The sequencing of the ITS-5.8S rDNA regions allowed for the design of specific primers for M. anisopliae var. anisopliae. The amplification was not observed with M. album, M flavoviride and Beauveria bassiana strains. DNAs extracted from infected larvae by E9 and C strains from Brazil and the strain 14 from Australia in individual bioassays were tested using previously designed specific primers. In all experiments, the fungus was detected after 48 hours of post-inoculation. This molecular technique allows a fast and secure detection and identification of the entomopathogen in bioassays, in pest management programs and epizootiology.

A região espaçadora ITS rDNA tem sido utilizada como uma importante ferramenta molecular para a identificação de fungos. Neste estudo a região ITS1 - 5.8S - ITS2 foi analisada em diferentes espécies do fungo entomopatogênico Metarhizium incluindo M. anisopliae, M. album e M. flavoviride com o objetivo de se construir primers específicos para a detecção e identificação do fungo no interior de larvas infectadas de Diatraea saccharalis. A amplificação desta região produziu um fragmento único de aproximadamente 540 pb para as linhagens E9, B/Vi e C, e de 600 pb para a linhagem 14 de M. anisopliae var. anisopliae; de 650 bp para M. album e 600 pb para M. flavoviride. Os produtos de PCR obtidos foram digeridos com diferentes enzimas de restrição Afa I, Alu I, Dde I, Hae III, Hpa II e Sau 3A I; e os perfis de PCR-RFLP mostraram nítidas diferenças entre as espécies analisadas. O sequenciamento da região ITS1 – 5.8S – ITS2 permitiu o desenho de primers específicos para as linhagens de M.a. var. anisopliae do Brasil e da Austrália. A amplificação não ocorreu em linhagens de M. álbum, M. flavoviride e Beauveria bassiana. Os DNAs extraídos de larvas infectadas pelas linhagens E9, B/Vi e C do Brasil e linhagem 14, da Austrália, foram testados utilizando-se os primers desenvolvidos. Em todos os experimentos o fungo M.a. var. anisopliae foi detectado 48 horas após a inoculação. A técnica molecular empregada neste estudo permite a rápida e segura detecção e identificação de M.a. var. anisopliae em bioensaios de laboratório e de campo, programas de manejo de pragas e estudos de epizootiologia. / The ITS rDNA have been used as an important molecular tool for fungi identification. In this study the ITS1 - 5.8S – ITS2 rDNA regions were analyzed in different species of the entomopathogenic fungus Metarhizium including M. anisopliae, M. album and M. flavoviride, in order to construct specific primers for their detection and identification within infected Diatraea saccharalis larvae. The amplification of this region yielded a unique fragment of approximately 540 bp for E9, B/Vi and C, and 600 bp for strain 14 of M. anisopliae var. anisopliae; of 650 bp for M. album and 600 bp for M. flavoviride. The PCR products were digested with the different restriction endonucleases Afa I, Alu I, Dde I, Hae III, Hpa II and Sau 3A I; and the PCR-RFLP profiles showed clear differences amongst the species. The sequencing of the ITS-5.8S rDNA regions allowed for the design of specific primers for M. anisopliae var. anisopliae. The amplification was not observed with M. album, M flavoviride and Beauveria bassiana strains. DNAs extracted from infected larvae by E9 and C strains from Brazil and the strain 14 from Australia in individual bioassays were tested using previously designed specific primers. In all experiments, the fungus was detected after 48 hours of post-inoculation. This molecular technique allows a fast and secure detection and identification of the entomopathogen in bioassays, in pest management programs and epizootiology.

Resumo: Nos últimos anos o ataque da Dactylopius opuntiae, conhecida como cochonilha-do-carmim, à palma forrageira no Nordeste, tem causado grandes prejuízos principalmente na região da Paraíba, Pernambuco e Alagoas. Uma alternativa em desenvolvimento para o controle da praga é a seleção de fungos patogênicos e virulentos ao inseto. Neste estudo foi proposta a avaliação de produtos a serem usados como componentes da formulação de bioinseticidas, para o preparo de caldas a serem aplicadas no controle da cochonilha. Foi utilizado o isolado LCB63 de Beauveria bassiana previamente selecionado quanto à patogenicidade e virulência ao inseto. Avaliou-se a exposição do isolado a diferentes concentrações (0,005, 0,01, 0,05, 0,1, 0,5 e 1,0%) de surfactantes (Unitol L/20, Ultranex NP/100, Ultratan D, Surfon 3403, Surfon 5409, Sabão OMO®, Detergente neutro Ypê®) através do crescimento de colônias, germinação após exposição temporária aos produtos e a influência do balanço hidrofílico-lipofílico (HLB) na dispersão e viabilidade de conídios. Em outro experimento, avaliou-se a tolerância dos conídios do isolado à radiação solar e ultravioleta em fluxo laminar sob efeito de diferentes concentrações de fotoprotetores (Neo Heliopan AV, Neo Heliopan E1000, Oxibenzona, Amido e Leite) em diferentes períodos de exposição. Finalmente, verificou-se a mortalidade de ninfas de D. opuntiae utilizando-se formulações contendo os surfactantes e fotoprotetores que apresentaram os melhores resultados nos experimentos anteriores. Unitol L/20 e Ultranex NP/100 não apresentaram efeito deletério na formação de colônias, e Surfon 5409, detergente neutro Ypê® e sabão OMO®, apresentaram grande toxicidade ao fungo. Não houve interferência de Unitol L/20, Ultranex NP/100 e Ultratan D na germinação dos conídios nos primeiros 10 minutos de exposição aos surfactantes... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: For the last years the attack of Dactylopius opuntiae know as Carmine cochineal to forage palm, in northern states of Brazil, have causes great prejudice, mainly in the regions of Paraíba, Pernambuco e Alagoas. One developing alternative for the control of this pest is the selection of pathogenic and virulent fungi to the insect. This study proposed the evaluation of products to be used as compounds in the formulation of bioinsecticides, for the preparation of broths applied in the control of cochineal. The isolate LCB63 of Beauveria bassiana previously selected for its pathogenicity and virulence to the insect, was used. The exposition of the isolate in different concentrations (0.005, 0.01, 0.05, 0.1, 0.5 and 1.0%) of surfactants (Unitol L/20, Ultranex NP/100, Ultratan D, Surfon 3403, Surfon 5409, OMO® washing powder, Ypê® neutral detergent) was evaluated through the colonies growth, germination after temporary exposition to the products and influence of the hydro-lipofilic balance (HLB) in the dispersion and viability of the conidia. Another experiment evaluated the tolerance of the conidia to solar radiation and ultraviolet in laminar flow hood, under the effect of different photoprotector concentrations (Neo Heliopan AV, Neo Heliopan E1000, Oxibenzona, starch and milk) with different exposition timing. Finally, the mortality of D. opuntiae in the nymph stage was verified by using the formulations containing the surfactants and the photoprotectors that demonstrated the best results in the previous experiments. Unitol L/20 and Ultranex NP/100 didn't show a deleterious effect in the formation of the colonies, while Surfon 5409, Ypê® neutral detergent and OMO® washing powder showed great toxicity to the fungus. There was no interference of Unitol L/20, Ultranex NP/100 and Ultratan D in the conidia germination during the first ten minutes of exposition to the surfactants... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Antônio Carlos Monteiro / Coorientador: Carlos Alberto Tuão Gava / Banca: Margarete Camargo / Banca: Larte Antonio Machado / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:23Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-07-10Bitstream added on 2014-06-13T18:56:04Z : No. of bitstreams: 1 yoshida_l_me_jabo.pdf: 663799 bytes, checksum: 4dc9e1d64b26d27a609814b1eb9e7c39 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O presente estudo investigou, em condições de laboratório, a atividade patogênica de diferentes isolados dos fungos Metarhizium anisopliae, Beauveria bassiana e Paecilomyces fumosoroseus, aplicados nas concentrações de 1 x1 06 e 1 x1 08 conídios/mL nos estágios de ovo, larva L2, pupa e adulto de Chrysomya puloria. Grupos de 30 ovos, 20 larvas L2 e 20 pupas foram banhados com as suspensões de conídios e no ensaio com adultos, grupos de 30 moscas, foram pulverizados com as mesmas suspensões. Em todos os ensaios, utilizaram-se quatro repetições por tratamento. Os três fungos e seus respectivos isolados apresentaram baixa atividade patogênica para a fase de ovo. Os isolados de B. bassiana e M. anisopliae, aplicados na concentração de 108 conídios/mL, promoveram 100% de mortalidade de larvas de C. puloria. O tratamento de pupas com o isolado JAB 07 de B. bassiana, na concentração de 108 conídios/mL, reduziu significativamente a emergência de adultos. O efeito dose¬resposta foi melhor evidenciado no ensaio com adultos, pois os isolados de M. anisopliae e B. bassiana dimimuiram a sobrevivência somente quando aplicados na concentração de 108 conídios/mL. Todos os fungos se mostraram patogênicos para C. putoria, havendo diferença entre os isolados quanto a ação patogênica. Os isolados de B. bassiana e M. anisopliae foram mais eficientes, atuando principalmente nas fases de larva e adulto. P. fumosoroseus evidenciou menor atividade patogênica, apenas reduzindo a sobrevivência de adultos emergidos a partir de pupas inoculadas. A eficiência do controle foi influenciada pela concentração de conidios, obtendo-se os melhores resultados com as suspensões mais concentradas. / The present study investigated, in laboratory conditions, the pathogenic activity of different isolates of the fungi Metarhizium anisopliae, Beauveria bassiana and Paecilomyces fumosoroseus, applied in the concentrations of 1 x1 06 and 1 x1 08 conidia/ml in the stages of egg, L2 larvae, pupa and adult of Chrysomya putoria. Groups of 30 eggs, 20 L2 larvae e 20 pupae were bathed with the conidia suspensions and in the assay with adult, graups of 30 f1ies were pulverized with the same suspensions. In ali the assays there were used four repiicates per treatment. The three fungus and their respective isolates presented low pathogenic activity for the egg stage. The isolates B. bassiana and M. anisopliae, applied in the concentration of 108 conidia/ml, promoted a 100% of C. puloria larvae morta!ity. The pupae treatment with the isolate JAB 07 of B. bassiana, in the concentration of 108 conidia/ml, decreased significantly adult emergence. The dose-response effect was better evidenced in the assay with adults, because the isolates of M. anisopliae and B. bassiana only reduced the survival when applied in the concentration of 108 conidia/ml. All fungus demonstrated to be pathogenic to C. puloria, although there is a difference between the isolates in their pathogenic activity. The isolates of B. bassiana and M. anisopliae were more efficient, mainly acting in the larva and adult stages. P. fumosoroseus evidenced lower pathogenic activity, decreasing the survival of emerged adult only through inoculated pupae. The control efficiency was influenced by the conidia concentration, obtaining the best results with the most concentrated suspension.

Resumo: Este trabalho objetivou avaliar o efeito da aplicação de Metarhizium anisopliae em pastagem de Brachiaria decumbens naturalmente infestada, submetida ao pastejo com bovinos, visando o controle do carrapato Boophilus microplus. O estudo foi realizado no período de maio de 2006 a março de 2007, em pastagem de B. decumbens, implantada em solo de textura argilosa da Fazenda do Glória, pertencente à Universidade Federal de Uberlândia (UFU), em Uberlândia, MG. Utilizou-se população de B. microplus naturalmente existente na pastagem com área de 12.000 m2 e 24 novilhos mestiços com cerca de 1 ano de idade, como hospedeiros experimentais. A randomização dos animais foi feita pela contagem de fêmeas ingurgitadas (instar entre 4,5 a 8 mm de comprimento), no terceiro, segundo e primeiro dias anteriores à primeira aplicação do fungo na pastagem. A área da pastagem foi então dividida em dois pastos com 6.000 m2, e grupos homogêneos de 12 animais foram introduzidos em cada pasto, determinando-se por sorteio o pasto tratado e o controle. Para pulverizar o pasto tratado, foram utilizados 5 a 6 kg de arroz contendo o isolado E9 de M. anisopliae esporulado, com os quais se produziu 400 L de suspensão conidial, quantidade suficiente para pulverizar, em média, 66,7 mL de suspensão por metro quadrado de pasto ...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In this work the efficacy of spraying Brachiaria decumbens pasture with Metarhizium anisopliae against natural infestation with the cattle tick Boophilus microplus was evaluated. The study was conducted from May 2006 to March 2007 at the Gloria farm from the Federal University of Uberlândia, in Uberlândia, Minas Gerais, Brazil. Experimental pasture of 12.000 m2, naturally infested with B. microplus and had 24 one year old mixed breed bovines was used. The area was halved in two pastures of 6.000 m2 and each pasture received 12 animals. Tick susceptibility of bovines of each area was similar. Pastures were than sprayed with either a conidial suspension of E9 M. anisopliae isolate (treated pasture) or the conidial suspension vehicle without the fungus (control pasture). Pastures were sprayed 12 times with 21 day intervals between applications. Bovines remained on the pasture during the spraying. Fungus persistence on the soil and the grass was evaluated on first, seven and 14 days after each spraying. Pasture infestation with larvae and animal infestation with engorging female ticks were evaluated 17, 19, 21, 26 and 33 days after each pasture treatment ...(Complete abstract, click electronic access below) / Orientador: Antõnio Carlos Monteiro / Coorientador: Matias Pablo Juan Szabó / Banca: Marcelo Bahia Labruna / Banca: Márcio Botelho de Castro / Banca: Luís Garrigos Leite / Banca: Ely Nahas / Doutor

O inseto vetor Diaphorina citri Kuwayama 1907 (Hemiptera: Liviidae) é considerado a principal praga da citricultura mundial. O controle desta praga é feito quase exclusivamente com inseticidas químicos, existindo a demanda por alternativas mais sustentáveis de controle. O desenvolvimento de um bioproduto a base de fungo entomopatogênico pode ser uma alternativa promissora para o manejo integrado de D. citri em pomares comerciais de citros. Assim, esse estudo teve como objetivo viabilizar a utilização do fungo entomopatogênico Isaria fumosorosea ESALQ-1296 para o controle de D. citri, avaliando: 1- a ação de adjuvantes na adesão e germinação de I. fumosorosea em ninfas e adultos de D. citri; 2- a relação entre a viabilidade dos conídios e a mortalidade de D. citri; 3- o efeito da umidade relativa do ar e da radiação ultravioleta na eficácia de I. fumosorosea em condições de laboratório; 4- o período entre a aplicação de fungicidas químicos e I. fumosorosea em campo; 5- a seletividade de I. fumosorosea aos inimigos naturais Tamarixia radiata e Ceraeochrysa cincta em condições de laboratório; 6- o volume de calda adequado para as aplicações de I. fumosorosea para o controle de D. citri em pomares comerciais; 7- a eficiência de I. fumosorosea no manejo de D. citri e seu efeito em outras espécies de artrópodes em dois sistemas de produção de citros. Análises por microscopia eletrônica de varredura revelaram que a adição dos adjuvantes KBRAdj e Silwet L-77 acelerou o desenvolvimento dos conídios de I. fumosorosea na cutícula de todos os estágios do inseto em comparação com o Tween 80. As formulações de I. fumosorosea com KBRAdj 0,075% apresentaram melhor desempenho no controle de D. citri em todos os níveis de umidade, mas especialmente em períodos de baixa umidade relativas (≤50%) e sob exposição à radiação UV-B (> 2 horas) em relação a aplicação com Tween. Os fungicidas Kumus® DF, Kocide® WDG, Nativo®, Flint 500® WG não influenciaram no desempenho do entomopatógeno quando esses foram pulverizados um dia antes ou após a aplicação do fungo sobre os adultos de D. citri. Nos estudos de seletividade foi demonstrado que a maioria das misturas de I. fumosorosea com os adjuvantes foi inócua para os adultos de T. radiata e as larvas neonatas de C. cincta. Em pomares comerciais, foi demostrado que as aplicações de I. fumosorosea foram mais eficientes no volume de 60 mL.m-3 de área de copa. Na área com produção orgânica de citros foi verificado que as aplicações de I. fumosorosea reduziram significativamente a população natural de D. citri e do ácaro da leprose (Brevipalpus spp.). Já na área com produção convencional de citros foi observado que as pulverizações de I. fumosorosea reduziram significativamente a população do ácaro da falsa ferrugem (Phyllocoptruta oleivora) e a população de D. citri foi extremamente baixa em todos os tratamentos. As aplicações de I. fumosorosea não apresentaram efeitos negativos nas populações dos predadores joaninhas, crisopídeos e hemerobídeos. Portanto, conclui-se que a utilização do fungo I. fumosorosea no manejo de D. citri pode ser uma tática sustentável para minimizar as aplicações sistemáticas de pesticidas, diminuindo seus impactos no agroecossistema. / The insect vector Diaphorina citri Kuwayama 1907 (Hemiptera: Liviidae) is the main citrus pest in the world. The control of this pest is done almost exclusively with chemical insecticides, and there is a demand for more sustainable control alternatives. The development of a bioproduct based on entomopathogenic fungi may be a promising alternative for the integrated management of D. citri in commercial citrus orchards. The objective of this study was to evaluate important parameters to increase efficiency of applications of the entomopathogenic fungus Isaria fumosorosea ESALQ-1296 for the control of D. citri. The following studies have been developed: 1- the action of adjuvants on adhesion and germination of I. fumosorosea on nymphs and adults of D. citri; 2- the relationship between the conidia viability and the mortality of D. citri; 3- the effect of relative air humidity and ultraviolet radiation on the efficacy of I. fumosorosea under laboratory conditions; 4 - the period between the application of chemical fungicides and I. fumosorosea in field; 5- the selectivity of I. fumosorosea to the natural enemies Tamarixia radiata and Ceraeochrysa cincta under laboratory conditions; 6 - the volume of syrup suitable for I. fumosorosea applications for the control of D. citri in commercial orchards; 7- the efficiency of I. fumosorosea to management of D. citri and its effect against other species of arthropods in two systems of citrus production. Scanning electron microscopy analysis revealed that the addition of the adjuvants KBRAdj and Silwet L-77 accelerated the development of I. fumosorosea conidia on the cuticle of all stages of the insect compared to Tween 80. The formulations of I. fumosorosea with KBRAdj 0.075% showed better performance in controling D. citri at all moisture levels, but especially in periods of low relative humidity (≤50%) and exposure to UV-B radiation (> 2 hours) compared to Tween application. The fungicides Kumus® DF, Kocide® WDG, Nativo®, Flint 500® WG did not influence the performance of the entomopathogen when they were sprayed the day before or after application of the fungus on D. citri adults. In the selectivity studies, it was shown that most of the mixtures of I. fumosorosea with the adjuvants were innocuous for the adults of T. radiata and the neonates of C. cincta. In commercial orchards, it was demonstrated that I. fumosorosea applications were more efficient in the volume of 60 mL.m-3 of leaves. In the area with organic citrus production it was verified that I. fumosorosea applications significantly reduced the natural population of D. citri and the false spider mite (Brevipalpus spp.). In the area with conventional citrus production it was observed that sprays of I. fumosorosea significantly reduced the population of the false rust mite (Phyllocoptruta oleivora) and D. citri population was extremely low in all treatments. The applications of I. fumosorosea did not present negative effects in the populations of the ladybirds, lacewings and hemerobide predators. Therefore, it is concluded that the use of I. fumosorosea fungus in the management of D. citri can be a sustainable tactic to minimize the systematic applications of pesticides, reducing their impacts on the agroecosystem.