Orientador: Jürgen Andreaus. / Dissertação (mestrado) - Universidade Regional Blumenau, Centro de Ciências Exatas e Naturais, Programa de Pós-Graduação em Química.

Tese de doutoramento. Engenharia Química e Biológica. Faculdade de Engenharia. Universidade do Porto. 2009

Orientador: João Aristeu da Rosa / Banca: Herminia Yohko Kanamura / Banca: Semiramis Guimarães Ferraz Viana / Banca: Vera Lucy de Santi Alvarenga / Banca: Lúcia Pagliusi Castilho / Resumo: Devido à baixa sensibilidade do exame parasitológico de fezes (EPF) para o diagnóstico laboratorial da giardíase, o método imunoenzimático (ELISA – Enzyme – linked immunosorbent assay) para pesquisa de coproantígenos de Giardia tem sido utilizado, mostrando alta sensibilidade e especificidade. Este trabalho foi desenvolvido com o objetivo de se avaliar a eficácia do ELISA ProSpecT Giardia (Alexon, Inc. BioBrás) anti-GSA65 (antígeno fecal específico de Giardia - peso molecular 65.000 Da) como instrumento de controle de cura da giardíase e o seu limiar de positividade. A contagem de cistos por grama de fezes foi feita utilizando a câmara de Neubauer em amostras positivas para G.lamblia de 100 pacientes. Os resultados mostraram eliminação de 3,6 x 106 cistos por grama de fezes em média. Em gráfico esses resultados desenharam uma curva assimétrica positiva, sugerindo a ocorrência de falso-negativos. Avaliou-se também a eficácia do ELISA anti-GSA65 e o método de Faust e Cols (MFc) em detectar mínimas concentrações de cistos de G. lamblia em amostras fecais. Fezes positivas foram diluídas em fezes negativas de modo a se obter amostras com 100, 1.000 e 10.000 cistos por grama de fezes. O ELISA anti-GSA65 mostrou uma positividade significativamente maior que o MFc. Amostras contendo 10.000 cistos por grama de fezes apresentaram 84,7% de positividade pelo ELISA anti-GSA65 e 34,7% pelo MFc. A eficácia do ELISA anti-GSA65, como instrumento de controle de cura após o tratamento pelo metronidazol em 91 pacientes com giardíase, foi avaliada e mostrou que o ELISA anti-GSA65 pode ser usado para monitorar a cura de pacientes utilizando apenas uma amostra fecal, coletada entre o 4º e 7º dias após o tratamento. Pelo MFc seriam necessárias a coleta de duas ou três amostras. Foi avaliada também comparativamente a eficácia do ELISA anti-GSA65 e do... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo). / Abstract: Due to the low sensitivity of the fecal examination (EPF) in detecting cysts of Giardia lamblia, the imunoenzimatic assay (ELISA enzyme linked immunosorbent assay) to detect G.lamblia coproantigens have been used and have showed high sensibility and specificity. With the ain of evaluating the efficacy of ELISA ProSpecT Giardia (Alexon, Inc. BioBrás) anti-GSA65 (Giardia stool specific antigens - molecular weigh 65.000 Da) as monitoring of the cure of giardiasis and its threshold of positivity it was developed this research. The cysts count per grama of faeces was calculated using Neubauer camera in positive fecal samples for Giardia in 100 patients. It was found a concentration of 3.6 X 106 cyst per grama of faeces as average. In a graph the data draw an assymmetrical positive curve, suggesting occurrence of false negative results. It was evaluated the efficacy of ELISA anti-GSA65, and fecal examination by Faust and colls. procedure (MFc), in detecting minimum concentrations of Giardia cysts in fecal samples. To obtain samples with 100, 1.000 and 10.000 cysts per grama, positive samples were diluted in negative samples. ELISA showed a positivity significative higher than MFc. Samples with 10.000 cystis per grama showed 84,7% of positivity by ELISA anti GSA65 and 34,7% by MFc. The efficacy of ELISA anti-GSA65 as cure monitoring after treatment with metronidazole in 91 patients with giardiasis, was evalued and showed that ELISA anti-GSA65 can be used to monitor the cure of patients, using only single sample of each patients, collected between the 4th and 7th days after treatment, whereas with MFc it would be necessary the exam of two or tree samples. It was also evaluated the efficacy of ELISA-anti-GSA65 and MFc in fecal samples of 96 patients. Considering 38 Giardia true positives and 58 true negatives, the ELISA anti-GSA65 showed 100% of sensibility... (Complete abstract, click electronic address below). / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-12T18:07:38Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo7969_1.pdf: 806259 bytes, checksum: 8d194745118d09658e82d62e5a13f592 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2003 / A enzima invertase (E.C.3.2.1.26~D?fiuctofuranosidase) catalisa a hidrólise da sacarose produzindo uma mistura equiMolar de glicose e fi?utose denominada açúcar invertido, que possui maior poder edulcorante, é mais facilmente adicionada em preparos industriais e possui maior valor agregado que a sacarose. 0 fungo Cladosporium cladosporioides possui invertase em sua constituição, sendo interessante o uso dessa biornassa como suporte de imobilização natural para tal enzima (autoimobilização). Neste trabalho, foi estabelecido o procedimento para a hidrólise enzimática da sacarose em sistema contínuo de leito fixo, utifizando?se a enzima invertase autoimobilizada no fungo Cladosporium cladosporioides. Foram realizados ensaios de caracterização da enzima ffingica, a fim de se determinar as condições que otimizam sua atividade. Foi aplicada a Técnica de Planejamento Fatorial para verificar a influência de parâmetros relevantes, tais como pH, temperatura e agitação sobre o percentual de hidrólise. A partir desse estudo, foram obtidas as condições ótimas de hidrólise, que são: pH 5,0, temperatura de 60'C e agitação de 170 rpm. Com a definição das condições ótimas de hidrólise, estudos cinéticos foram realizados em sistema descontínuo para se avaliar a influência da alta concentração de substrato na atividade enzímática, bem como determinar os parâmetros cinéticos (ia reação. A partir da linearização da curva de velocidade de reação em iiinção da concentração de substrato, foram calculadas a constante de Michaelis?Menten aparente (Km = 145,63gL?') e a velocidade máxima de reação (V.. = 0,915min~1) para a invertase auto?imobilizada. Um estudo hidrodinâmico foi realizado para a obtenção dos valores da velocidade e da altura mínimas de fluidização. Os resultados mostraram que o sistema em estudo não pode ser utilizado para leito fluidizado, uma vez que a velocidade mínima de fluidização não foi atingida. 1 0 sistema contínuo de leito fixo apresentou?se como a alternativa com melhores condições operacionais para a obtenção de açúcar invertido em concentrações de substrato elevadas, obtendo?se uma conversão de 62%, utilizando?se sacarose, 100gUI, a uma vazão de alimentação de 2,8 ~min~1. A partir dos resultados obtidos, foi proposto um modelo pseudo?homogêneo que considera os efeitos heterogêneos de acesso de substrato à estrutura celular. Tal modelo se ajustou bem aos perfis de concentração obtidos experimentalmente

Orientador: Yong Kun Park / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-14T03:45:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pastore_GlauciaMaria_D.pdf: 6939609 bytes, checksum: 5181e81e4135269cf5a0a32dc101d012 (MD5) Previous issue date: 1992 / Resumo: Um mil duzentas e oitenta e cinco linhagens de microrganismos foram isoladas de amostras de solo, frutas, resíduos industriais e testados quanto a capacidade de hidrolisar glicerídeos. Oito linhagens de Fungos foram relacionadas preliminarmente como produtoras de enzimas lipolíticas. Entre estas, uma linhagem identificada como Trichoderma sp apresentou alta produção de lipase. A enzima lipolítica de Trichoderma sp hidrolizou as ligações éster de monoleína, dioleína e do substrato paranitrofenillaurato. A enzima pode ser classificada como uma lipase (glicerol-mono éster hidrolase E.C. 3.1.1.23). Estudou-se a produção de lipase extracelular pela linhagem selecionada de Trichoderma sp e a enzima foi purificada através de fracionamento com sulfato de amônio, cromatografia em coluna de DEAE-celulose e CM-celulose. A enzima purificada foi caracterizada e apresentou atividade ótima em pH 5.6 a 40 - 45°C. A atividade enzimática foi severamente afetada pela presença de MgSO4, MnSO4, FeSO4, na concentração de 1 mM de sal em relação ao volume final da mistura de reação, enquanto que KCl, CaCl2, NiSO4, inibiram moderamente a atividade de lipase.O reagente cisteína na concentração de 1 mM em relação ao volume final da mistura de reação inibiu significativamente a atividade enzimática. Verificou-se que a lipase de Trichoderma sp hidrolisa eficientemente monoleína e paranitrofenillaurato. A enzima não tem afinidade por trioleína. A hidrólise de óleo de oliva por via enzimática foi estudada utilizando-se lipases combinadas. Foi verificado que o sistema composto de lipase de Cândida rugosa e lipase de Penicillium sp hidrolisou 95,9% do óleo com o tempo de reação de 20 horas. A esterificação enzimática de ácido graxo e glicerol por lipase de Penicillium sp foi examinada e verificou-se que a enzima esterificou cerca de 71% de monoglicerídeo após 40 horas de reação / Abstract: The screening of lipase producing microorganisms was performed using 1,283 strains of microorganism which were isolated from samples of soil, fruits, and industrial residues. It was found that eight strains of fungi produced high activity of extracellular lipase and one of them produced exceptionally high lipase activity. This strains was identified as Trichederma sp, and he lipase from the strain hydrolised only monoolein, diolein and p-nitrephenyl laurate. For this reason, the lipase was classified as monoglyecride lipase (monoacylglycerol lipase E.C. 3.1.1.23). The lipase from Tric:hederma sp, was produced by solid state fermentation and submerse fermentation. The enzyme extracts were purified by fractionation with ammonium sulfate, DEAE-cellulose and CM-cellulose column chromatography. The purified enzyme was e:haracteri2ed and found that optimum pH and temperature were 5.6 and 40-45°C. MgSO4, MnSO4 and FeSO4, 1 mM, markably inhibited enzyme activity and KCl, CaCl2 and NiS04, 1 mM, slightly inhibited, Cysteine 1 mM significantly inhibited the enzyme activity. The enzyme also efficiently hydrolised monoolein and p-nitrophenyl laurate but not triolein. It was studied a combined enzyme system, which was a mixture of triacylglycerol lipase (from Candida ruqosa) and monoacylglycerol lipase (from Penicillium sp.), for hydrolyses of olive oil. It was found that the combined enzyme system was able to hydrolyse 95.9% the oil, when the reaction time was 20 hours. Enzymatic esterification using glycerol and fatty acid by lipase from Penicillium sp was also examined. It was found that the reaction system esterified 71% monoglyceride after 40 hours of reaction time / Doutorado / Doutor em Ciência de Alimentos

Orientador: Young Kun Park / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-15T02:54:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pastore_GlauciaMaria_M.pdf: 2198397 bytes, checksum: de83c06bdf70a89eb255cf5f255e2f5e (MD5) Previous issue date: 1981 / Um mil e sessenta e sete linhagens de fungos foram isoladas do solo e.testadas quanto à capacidade de produzir ß-galactosidase. Foi encontrada uma linhagem, classificada como Scopulariopsis sp, que produz alta atividade de ß ¿galactosidase. Estudou-se a produção e a purificação de ß -galactosidase de Scopulariopsis sp e determinou-se as características da enzima purificada. A enzima foi produzida por fermentação semi-sólida, usando-se farelo de trigo para cultura do microorganismo. A enzima bruta suficientemente hidrolisa lactose em soro de leite. A enzima bruta foi purificada fracionamento, com sulfato de amônia e cromatografia em coluna por de DEAE-celulose e CM-celulose. A enzima purificada foi caracterizada verificando-se sua homogeneidade eletroforeticamente e seu peso molecular estimado ser 95 000, através do método de eletroforese em gel SDS poliacrilamida. O pH ótimo para atividade enzimática foi entre 3,6 a 5,0, usando-se ONPG (Orto-Nitrofenil ß -D-Galactoperanosideo) como substrato e com lactose como substrato o pH ótimo foi 4,5. A temperatura ótima para atividade enzimática foi 65 °C para ONPG e 55 °C para lactose. A atividade enzimática não sofre efeito pela adição de íons metálicos como CaC12, MgC12, KCl e outros reagentes como MnS04, NiS04, CuS04, porém foi verificado que AgN03 tem algum efeito inibitório sobre a atividade enzimática. Galactose inibe a ação da enzima, enquanto glicose não inibe. Dietilditiocarbamato de sódio (10mM). p-hidroximercuribenzoato (10 mM). mercaptoetanol (10 mM). não inibem a atividade enzimática Por isto, grupos sulfidrilas da molécula da enzima não estão envolvidos na atividade catalítica. A ß -galactosidase de, Scopulariopsis sp hidrolisou quase completamente (95 %) a lactose contida em soro ácido de leite (pH 4,5), após 50 horas de incubação a 55 °C, quando a atividade enzimática era 250 unidades por 100ml de soro de leite / Abstract: One thousand and sixty seven strain of fungi were isolated from soil and examined for their capacity for production of ß-galactosidase. It was found that one strain wich is classified a Scopulariopsissp has produced the highest activity of ß-galactosidase. Production and purification of ß-galactosidase from Scopulariopsis sp were attempted and characterization of the purified enzyme was performed. The enzyme was produced by semisolid fermentation using wheat bran culture of the microrganismo The crude enzyme suffici ently hydrolyzeq lactose in acid whey. The crude enzyme was purified by fractionation with ammonium sulfate, a DEAE-cellulose and CM-cellulose column graphies. The purified enzyme was characterized and found that chromato¬ was electrophoretically homogeneous and its molecular weight was estimated to be 95 000 by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis. The optimum pH of the enzyme activity was between 3,6 and 5,0 when ONPG was used as substrate, and with lactose as substrate the optimum pH was 4,5. The optimum temperature was 65 °C to ONPG and 55 °C to Lactose. The activity did not suffer any effect by the addition of metals ions as CaC12, MgCI2, KCI and others reagents such as MnS04, NiS04, CuS04 but AgN03 has some innhibitery effect on the enzyme activity. Galactose inhibits enzyme activity where as glucose did not. Sodium diethildithio carbomate (10 mM), p-hydroxymercuribenzoate (10 mM), mercaptoethanol (10 mM) did not inhibit enzyme activity. Thus sulfydryl groups molecule are not involved in the catalytic activity. The ß-galactosidase from Scopulariopsis sp, hidrolyzed quite completely (95 %) the lactose content present in acid whey (pH 4,5) after 50 hr of incubation at 55 °C, when the enzyme activity was 250 units per100 ml of acid whey / Mestrado / Mestre em Ciência de Alimentos

Orientador : Renato Bonatelli Junior / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-15T02:03:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Masiero_Marcia_M.pdf: 2086534 bytes, checksum: 30c71369e749ebcfa4a30315f456456e (MD5) Previous issue date: 1988 / Resumo: Este trabalho teve por objetivos a obtenção de mutantes auxotróficos e de resistência à drogas em Aspergillus Niger, para serem utilizados na análise genética via ciclo parassexual e estabelecimento de novos grupos de ligação numa linhagem Industrial utilizada neste laboratório. Além disso, os parentais diplóldese alguns segregantes destes cruzamentos foram analisados para produção da enzima amiloglicosidase. As mutações de resistência ao Verde Malaquita e ao Brometo de Etídio se mostraram recessiva e semi-dominante respectivamente, e as auxotróficas arg, lvs, met, mys e tio se mostraram recessivas. O gene nic3 parece ser alelo do gene nic sendo portanto denominados nicA3 e nic A1. Através de análise mitótica foi verificado que as marcas estudadas estão distribuídas em 4 grupos de ligações cenomàçiamda me que a ordem dos genes nos grupos I e IV não foi determinada. , I nic A 1, fwn,1 olv 3, mgr2, ebr5, tio1, mys1 II pab1 III lys2 IV arg1, met1 Nenhum dos diplóides ou demais linhagens ensaiadas apresentaram produção significativamente maior que a linhagem parental pabfwn. Os mutantes arg1, lys1, ebr5, tio1 e puc1, apresentaram redução na produção de amiloglicosidase, e os mutantes mgr2, met e mys, tiveram produção / Abstract: This work had been done aiming the isolation and genetical analysis or auxotrophic and resistant mutants In order to enhance the number of identified linkage groups in a industrial strain. It was also assayed the glucoamylase production or mutants, diploids and parental strains. The mutations to Ethidium Bromide and Malaquite Green resistance showed to be recessive e semi-dominant respectively, the auxotrophlc ones, arg1, met1, lys1, tio1, and mys, showed to be recessive. The gene nic3 seemed to be allele of nic1, and were denominated nic A3 and nic A1. It was possible to Identify four linkage groups in this work. The gene order in linkage groups I and IV was not determined. I nic A 1, fwn,1 olv 3, mgr2, ebr5, tio1, mys1 II pab1 III lys2 IV arg1, met1 None of the diploids or any other strain tested showed significant eleveted levels of glucoamylase-production compared to the parental strain pab1, fwn1. Mutants arg1, lys1, ebr5, tio1 and pur1, had their glucoamylase production reduced and mgr2, met1 and mys1 did not have their yields altered significantly compared to the parental / Mestrado / Genetica / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Samir Tufic Arbex / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-07-20T10:23:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_LurdesCatarinada_M.pdf: 1166757 bytes, checksum: 249a8d277676388a24f33b7cb92b15d3 (MD5) Previous issue date: 1984 / Resumo: Não informado / Abstract: Not informed. / Mestrado / Mestre em Odontologia

Orientado: Samir Tufic Arbex / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-07-16T13:38:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Busato_MaraSilviaSaldini_M.pdf: 1388590 bytes, checksum: 749c054286b5fb42a673d377b55c9919 (MD5) Previous issue date: 1985 / Resumo: Não informado / Abstract: Not informed. / Mestrado / Bases Farmacologicas para a Terapeutica Medicamentosa / Mestre em Odontologia

A Mucopolissacaridose do tipo I (MPS I) é uma doença autossômica recessiva causada pela deficiência da hidrolase lisossomal α-L-iduronidase (IDUA, EC 3.2.1.76). Essa deficiência leva ao acúmulo progressivo dos glicosaminoglicanos (GAGs) heparan e dermatan sulfato nos tecidos com subsequente alteração da função celular e dano em múltiplos órgãos. Existem evidências na literatura de que a introdução precoce da Terapia de Reposição Enzimática (TRE) leva a um melhor prognóstico, principalmente para pacientes com a forma grave da doença (Síndrome de Hurler), prevenindo ou minimizando danos irreversíveis. Tendo em vista que a maioria dos pacientes brasileiros com MPS I é diagnosticada tardiamente e não recebe tratamento imediato, o objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos da TRE na reversibilidade dos sintomas no modelo murino de MPS I. Animais com MPS I foram tratados dos 6 aos 8 meses com laronidase na dose de 1,2mg/kg a cada duas semanas e comparados com camundongos normais e MPS I não tratados de 8 meses. A TRE tardia foi efetiva na redução de GAGs urinários e viscerais. Apesar da normalização dos GAGs do miocárdio e da fração de encurtamento ventricular esquerda, a função cardíaca não foi completamente restaurada. A fração de ejeção ventricular esquerda e a razão entre aceleração e ejeção na artéria pulmonar dos camundongos tratados atingiram apenas níveis intermediários entre camundongos normais e não tratados. Não foram encontradas diferenças estatisticamente significativas na espessura da parede da aorta, mas as válvulas cardíacas foram significativamente reduzidas no grupo tratado. Uma grande variabilidade nos resultados dos testes comportamentais foi encontrada nos animais tratados. Esse achado não pode ser correlacionado com nenhuma outra variável como níveis de GAGs ou atividade de catepsina D no córtex cerebral, além da função cardíaca ou formação de anticorpos. Todos os animais que receberam laronidase desenvolveram anticorpos contra a enzima, sem que os níveis de anticorpos apresentassem correlação com os outros parâmetros analisados. Em conclusão, a administração da TRE tardia melhora diversos aspectos da doença e deve ser considerada sempre que possível. / Mucopolysaccharidosys type I (MPS I) is a rare disorder caused by deficiency of the lysosomal hydrolase α-L-iduronidase (IDUA, EC 3.2.1.76). This deficiency leads to progressive storage of glycosaminoglycans (GAGs) heparan and dermatan sulphate, with subsequent disturbances in cell function and multiorgan damage. There is a consensus in the literature that early Enzyme Replacement Therapy (ERT) leads to a better outcome, particularly in patients with the severe form of the disease (Hurler syndrome), preventing or minimizing irreversible damage. Since most Brazilian patients are diagnosed late and don’t receive immediate treatment, the aim of this study was to evaluate the effects of late ERT on symptom reversibility in a MPS I murine model. We treated 10 MPS I mice from 6 to 8 months (ERT 6-8mo) with 1.2mg laronidase/kg every 2 weeks and compared to 8 months-old wild-type (Normal) and untreated animals (MPS I). Late ERT was effective reducing urinary and visceral GAGs to normal levels. Although myocardium GAGs and left ventricular (LV) shortening fraction were normalized, cardiac function wasn’t completely restored. LV ejection fraction and acceleration/ejection ratio at the pulmonary valve reached intermediary levels between normal and untreated MPS I mice. While no significant results were found on aortic wall width, heart valves were significantly smaller in the ERT 6-8mo than in untreated mice. A wide variability was found on the behavior tests of treated animals. No correlation was found between this finding and any other variable, such as GAG levels, cerebral cortex cathepsin D activity, heart function or antibody formation. All animals treated with laronidase developed antibodies against the enzyme but no correlation was found with other parameters analyzed. In conclusion, late ERT improves many aspects of the disease and should be considered whenever possible.