Made available in DSpace on 2015-06-17T19:34:00Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-02-13. Added 1 bitstream(s) on 2015-06-18T12:47:37Z : No. of bitstreams: 1 000830299.pdf: 772512 bytes, checksum: cced1cd5ada16b8ba16567307e576668 (MD5) / A hipótese do trabalho se baseou em que a adição de avilamicina (antibiótico promotor de crescimento), Bacillus subtilis (probiótico) e óleos essenciais (carvacrol, cinamaldeído, cineol e extrato de pimenta), elevam o desempenho zootécnico de frangos a partir de benefícios na mucosa intestinal e na microbiota a ela associada. No Capítulo 1 apresentamos uma revisão bibliográfica sobre o assunto, a qual nos permitiu desenhar a referida hipótese. Os objetivos específicos do presente estudo foram avaliar o efeito destes aditivos alimentares aos 7, 21 e 42 dias de vida sobre: 1) o desempenho zootécnico; 2) os níveis de RNAm dos genes SLC15A1, SLC5A1, SLC2A2, ATP1A1, (respectivamente codificadores de PepT1, SGLT1, GLUT2 e Na-K-ATPase) na mucosa do jejuno; 3) atividades de fosfatase alcalina, maltase e aminopeptidase nas membranas da borda em escova no jejuno; 4) absorção de glicose intestinal in-vitro. 5) número de cópias do 16S DNAr de grupos bacterianos de maior predominância na mucosa do íleo; 6) morfometria das vilosidades intestinais; Todos os dados foram avaliados em função do tempo, exceto os dados de desempenho. Para tanto, 1320 frangos foram divididos entre cinco tratamentos de acordo com a suplementação [dieta basal como controle (CON); Bacillus subtilis (BS); Bacillus-subtilis + óleo essencial (BS + OEs); óleos essenciais (OEs); avilamicina como controle positivo (AVI)]. Os resultados do Capítulo 2 demonstraram que a suplementação de AVI e OEs na ração de frangos de 1 a 42 dias de idade promove maior atividade de fosfatase alcalina intestinal e aminopeptidase, enquanto a adição de Bacillus subtilis promove maior quantidade de RNAm do gene codificador do transportador de peptídeos 1 (SLC15A1). No Capítulo 3 evidenciou-se que a suplementação com BS ou OEs promove alterações momentâneas na morfometria intestinal dos frangos. Os Lactobacillus predominam na mucosa do íleo, e sua maior ... / It was hypothesized that, when added to the feed, avilamycin (antibiotic growth promoter), Bacillus subtilis (probiotic) and essential oils (carvacrol, cinnamaldehyde, cineol and pepper extract) increase growth performance of broilers through benefits on intestinal mucosa and its microbiota. In Chapter 1 we present a literature review on the subject, which allowed us to draw such hypothesis. The specific objectives of this study were to evaluate the effect of these feed additives nat 7 21 and 42 days of life on: 1) the growth performance; 2) SLC15A1, SLC5A1, SLC2A2, ATP1A1 mRNA levels (respectively encoding PepT1, SGLT1, GLUT2 and Na-K-ATPase) in the jejunum; 3) activities of alkaline phosphatase, maltase and aminopeptidase from the brush border membranes of the jejunum; 4) intestinal glucose absorption of in vitro; 5) 16S rDNA copy numbers of the major bacterial groups in association with the ileum mucosa. 6) morphology of the intestinal villi; All data were also evaluated over the time course, except for the performance data. Therefore, 1320 broiler chickens were divided among five treatments, according to supplementation [basal diet as control (CON); Bacillus subtilis (BS); Bacillus subtilis + essential oils (BS + EOs); essential oils (EOs); avilamycin as positive control (AVI)]. The results of Chapter 2 demonstrated that supplementation of BS promoted greater expression of SLC15A1, while EOs and AVI increased the activities of both IAP and APN. Analysis over time revealed an increase in the amount of mRNA MGAM, SLC2A2, SLC15A1, SLC5A1 and SI from seven to 42 days. IAP was reduced after seven days, while MALT increased with age. Addition of Bacillus subtilis or essential oils in the diet induces changes in the expression of genes and activities of enzymes related to sugars and peptides utilization, but did not improve growth performance. In Chapter 3 it was shown that supplementation with BS or EOs supplementation promotes momentary ...

Made available in DSpace on 2014-12-02T11:16:51Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-07-25Bitstream added on 2014-12-02T11:21:19Z : No. of bitstreams: 1 000795286.pdf: 856820 bytes, checksum: fd0317c7227adc20f9ad700bd6b3711b (MD5) / Este estudo foi conduzido para avaliar o efeito da substituição parcial ou total e a inclusão de protease, xilanase e fitase em dietas para frangos de corte. O esquema fatorial utilizado foi 3 × 2, com três níveis de substituição de milho por sorgo (0, 50% e 100%) e inclusão ou não das enzimas exógenas. O ganho de peso foi elevado com o uso de enzimas exógenas na dieta. A substituição total de milho por sorgo nas dietas prejudicou o ganho de peso aos 14 e 35 dias, porém não afetou o desempenho das aves considerando-se os períodos de um a 21 e um a 42 dias. Houve interação entre nível de sorgo e inclusão de enzimas sobre a metabolizabilidade de matéria seca e energia bruta da dieta. A inclusão de enzimas melhorou a metabolizabilidade de matéria seca e energia bruta na fase de 11 a 21 dias apenas em dietas à base de sorgo. A substituição de milho por sorgo reduziu os coeficientes de metabolizabilidade de proteína bruta nas fases de 11 a 21 dias e de 25 a 35 dias. Na fase de 11 a 21 dias, a inclusão de enzimas melhorou a metabolizabilidade da proteína bruta e aos 21 dias diminuiu os pesos relativos de moela e intestino delgado. O uso de enzimas melhorou a metabolizabilidade da energia bruta de 25 a 35 dias. Não houve efeito das dietas sobre o peso de órgãos aos 42 dias. A substituição de milho por sorgo reduziu a umidade da cama e a adição de enzimas exógenas nas dietas aumentou a umidade da cama. A substituição de milho por sorgo e o uso de enzimas diminuiu o custo da ração e melhorou a lucratividade. Portanto, a substituição total de milho por sorgo é viável e a inclusão de protease, xilanase e fitase nas dietas para frangos de corte melhora o desempenho considerando-se o período de 1 a 42 dias / A study was conducted to determine the influence of replacing maize with sorghum without or with a combination of exogenous protease, xylanase and phytase on broiler performance. The experimental design was a 3 × 2 factorial arrangement of treatments, which included three replacement levels of maize with sorghum (0, 50% and 100%) without or with exogenous enzymes. Weight gain was improved with enzymes supplementation. Total maize replacement with sorghum impaired weight gain from one to 14- and from one to 35-days post-hatch but did not affect performance at 21 and 42 days post-hatch. There was interaction between maize replacement level and enzyme supplementation for dry matter and gross energy metabolizability. Exogenous enzymes improved dry matter and gross energy metabolizability from 11 to 21 days post-hatch only in sorghum-based diet. Maize replacement with sorghum reduced crude protein metabolizability from 11 to 21 days and 25 to 35 days post-hatch. From 11 to 21 crude protein and from 25 to 35 days post-hatch gross energy metabolizability were improved and at day-21 post-hatch, relative gizzard and small intestine weights were decreased by exogenous enzymes. Litter moisture was decreased by maize replacement with sorghum and increased by exogenous enzymes. Maize replacement with sorghum and enzymes inclusion decreased feed cost and increased profitability. Overall, the results suggest that sorghum can replace maize and a combination of exogenous protease, xylanase and phytase improve broiler performance from one to 42 days post-hatch

Orientador: Renato Luis Furlan / Coorientador: Luiz Roberto Furlan / Banca: João Martins Pizauro Júnior / Banca: Marcos Túlio Oliveira / Banca: Douglas Emygdio de Faria / Banca: Rafael Simone Saia / Resumo: A hipótese do trabalho se baseou em que a adição de avilamicina (antibiótico promotor de crescimento), Bacillus subtilis (probiótico) e óleos essenciais (carvacrol, cinamaldeído, cineol e extrato de pimenta), elevam o desempenho zootécnico de frangos a partir de benefícios na mucosa intestinal e na microbiota a ela associada. No Capítulo 1 apresentamos uma revisão bibliográfica sobre o assunto, a qual nos permitiu desenhar a referida hipótese. Os objetivos específicos do presente estudo foram avaliar o efeito destes aditivos alimentares aos 7, 21 e 42 dias de vida sobre: 1) o desempenho zootécnico; 2) os níveis de RNAm dos genes SLC15A1, SLC5A1, SLC2A2, ATP1A1, (respectivamente codificadores de PepT1, SGLT1, GLUT2 e Na-K-ATPase) na mucosa do jejuno; 3) atividades de fosfatase alcalina, maltase e aminopeptidase nas membranas da borda em escova no jejuno; 4) absorção de glicose intestinal "in-vitro". 5) número de cópias do 16S DNAr de grupos bacterianos de maior predominância na mucosa do íleo; 6) morfometria das vilosidades intestinais; Todos os dados foram avaliados em função do tempo, exceto os dados de desempenho. Para tanto, 1320 frangos foram divididos entre cinco tratamentos de acordo com a suplementação [dieta basal como controle (CON); Bacillus subtilis (BS); Bacillus-subtilis + óleo essencial (BS + OEs); óleos essenciais (OEs); avilamicina como controle positivo (AVI)]. Os resultados do Capítulo 2 demonstraram que a suplementação de AVI e OEs na ração de frangos de 1 a 42 dias de idade promove maior atividade de fosfatase alcalina intestinal e aminopeptidase, enquanto a adição de Bacillus subtilis promove maior quantidade de RNAm do gene codificador do transportador de peptídeos 1 (SLC15A1). No Capítulo 3 evidenciou-se que a suplementação com BS ou OEs promove alterações momentâneas na morfometria intestinal dos frangos. Os Lactobacillus predominam na mucosa do íleo, e sua maior ... / Abstract: It was hypothesized that, when added to the feed, avilamycin (antibiotic growth promoter), Bacillus subtilis (probiotic) and essential oils (carvacrol, cinnamaldehyde, cineol and pepper extract) increase growth performance of broilers through benefits on intestinal mucosa and its microbiota. In Chapter 1 we present a literature review on the subject, which allowed us to draw such hypothesis. The specific objectives of this study were to evaluate the effect of these feed additives nat 7 21 and 42 days of life on: 1) the growth performance; 2) SLC15A1, SLC5A1, SLC2A2, ATP1A1 mRNA levels (respectively encoding PepT1, SGLT1, GLUT2 and Na-K-ATPase) in the jejunum; 3) activities of alkaline phosphatase, maltase and aminopeptidase from the brush border membranes of the jejunum; 4) intestinal glucose absorption of in vitro; 5) 16S rDNA copy numbers of the major bacterial groups in association with the ileum mucosa. 6) morphology of the intestinal villi; All data were also evaluated over the time course, except for the performance data. Therefore, 1320 broiler chickens were divided among five treatments, according to supplementation [basal diet as control (CON); Bacillus subtilis (BS); Bacillus subtilis + essential oils (BS + EOs); essential oils (EOs); avilamycin as positive control (AVI)]. The results of Chapter 2 demonstrated that supplementation of BS promoted greater expression of SLC15A1, while EOs and AVI increased the activities of both IAP and APN. Analysis over time revealed an increase in the amount of mRNA MGAM, SLC2A2, SLC15A1, SLC5A1 and SI from seven to 42 days. IAP was reduced after seven days, while MALT increased with age. Addition of Bacillus subtilis or essential oils in the diet induces changes in the expression of genes and activities of enzymes related to sugars and peptides utilization, but did not improve growth performance. In Chapter 3 it was shown that supplementation with BS or EOs supplementation promotes momentary ... / Doutor

Orientador: José Roberto Sartori / Coorientador: Vitor Barbosa Fascina / Banca: Livio Panhoza Tse / Banca: Rafael Gustavo Hermes / Banca: Ricardo de Oliveira Orsi / Resumo: Este estudo foi conduzido para avaliar o efeito da substituição parcial ou total e a inclusão de protease, xilanase e fitase em dietas para frangos de corte. O esquema fatorial utilizado foi 3 × 2, com três níveis de substituição de milho por sorgo (0, 50% e 100%) e inclusão ou não das enzimas exógenas. O ganho de peso foi elevado com o uso de enzimas exógenas na dieta. A substituição total de milho por sorgo nas dietas prejudicou o ganho de peso aos 14 e 35 dias, porém não afetou o desempenho das aves considerando-se os períodos de um a 21 e um a 42 dias. Houve interação entre nível de sorgo e inclusão de enzimas sobre a metabolizabilidade de matéria seca e energia bruta da dieta. A inclusão de enzimas melhorou a metabolizabilidade de matéria seca e energia bruta na fase de 11 a 21 dias apenas em dietas à base de sorgo. A substituição de milho por sorgo reduziu os coeficientes de metabolizabilidade de proteína bruta nas fases de 11 a 21 dias e de 25 a 35 dias. Na fase de 11 a 21 dias, a inclusão de enzimas melhorou a metabolizabilidade da proteína bruta e aos 21 dias diminuiu os pesos relativos de moela e intestino delgado. O uso de enzimas melhorou a metabolizabilidade da energia bruta de 25 a 35 dias. Não houve efeito das dietas sobre o peso de órgãos aos 42 dias. A substituição de milho por sorgo reduziu a umidade da cama e a adição de enzimas exógenas nas dietas aumentou a umidade da cama. A substituição de milho por sorgo e o uso de enzimas diminuiu o custo da ração e melhorou a lucratividade. Portanto, a substituição total de milho por sorgo é viável e a inclusão de protease, xilanase e fitase nas dietas para frangos de corte melhora o desempenho considerando-se o período de 1 a 42 dias / Abstract: A study was conducted to determine the influence of replacing maize with sorghum without or with a combination of exogenous protease, xylanase and phytase on broiler performance. The experimental design was a 3 × 2 factorial arrangement of treatments, which included three replacement levels of maize with sorghum (0, 50% and 100%) without or with exogenous enzymes. Weight gain was improved with enzymes supplementation. Total maize replacement with sorghum impaired weight gain from one to 14- and from one to 35-days post-hatch but did not affect performance at 21 and 42 days post-hatch. There was interaction between maize replacement level and enzyme supplementation for dry matter and gross energy metabolizability. Exogenous enzymes improved dry matter and gross energy metabolizability from 11 to 21 days post-hatch only in sorghum-based diet. Maize replacement with sorghum reduced crude protein metabolizability from 11 to 21 days and 25 to 35 days post-hatch. From 11 to 21 crude protein and from 25 to 35 days post-hatch gross energy metabolizability were improved and at day-21 post-hatch, relative gizzard and small intestine weights were decreased by exogenous enzymes. Litter moisture was decreased by maize replacement with sorghum and increased by exogenous enzymes. Maize replacement with sorghum and enzymes inclusion decreased feed cost and increased profitability. Overall, the results suggest that sorghum can replace maize and a combination of exogenous protease, xylanase and phytase improve broiler performance from one to 42 days post-hatch / Mestre

Submitted by Chaylane Marques (chaylane.marques@ufpe.br) on 2015-03-13T17:43:40Z No. of bitstreams: 2 ( AFONSO AGRA).pdf: 608401 bytes, checksum: 3bceafcd8dee95713ef2d89e13df29e8 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-13T17:43:40Z (GMT). No. of bitstreams: 2 ( AFONSO AGRA).pdf: 608401 bytes, checksum: 3bceafcd8dee95713ef2d89e13df29e8 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2012-02 / O controle do vetor, Aedes aegypti, é a melhor estratégia para combater as epidemias de dengue. No entanto, o uso contínuo de inseticidas sintéticos tem levado ao aparecimento de populações resistentes. Sementes de Moringa oleifera contêm as lectinas WSMoL ((watersoluble M. oleifera lectin) and cMoL (coagulant M. oleifera lectin). WSMoL tem atividade larvicida (LC50 of 0.197 mg/ml) em larvas de A. aegypti de quarto estágio (L4) susceptíveis a organofosforado (Rockfeller). Este estudo relata o efeito de cMoL (0.1–0.8 mg/ml) na sobrevivência de L4 susceptíveis (Rockefeller), bem como, o efeito de WSMoL (0.1–0.8 mg/ml) e cMoL (0.1–0.8 mg/ml) em L4 resistentes a organofosforado (Rec-R). Além disso, extratos de L4 susceptíveis (Rockefeller) e L4 resistentes a organofosforado (Rec-R) foram testados para enzimas digestivas (protease, tripsina e α-Amylase) e detoxificantes ( superoxido dismutase e α- e β-esterases) na presença de WSMoL e cMoL. cMoL não foi agente larvicida para L4 de Rockfeller. WSMoL e cMoL não promoveram mortalidade de Rec-R. WSMoL estimulou as atividades de protease, tripsina e α-Amylase de L4 de Rockfeller, enquanto cMoL inibiu estas enzimas. WSMoL não teve nenhum efeito sobre atividade de tripsina em L4 de Rec-R, porém inibiu atividade de protease e α-amylase. cMoL inibiu a atividade de tripsina, enquanto não interferiu nas proteases e α-amylase de Rec-R. cMoL inibiu atividade de SOD em Rockfeller e Rec-R mais que WSMoL., enquanto atividade de β-esterase de L4 Rockfeller foi mais inibida por WSMoL. As lectinas promoveram baixo efeito (estimulação ou inibição) na atividade de α-esterase de ambas as populações. O estudo revela que WSMoL e cMoL afetam diferentemente a sobrevivência de L4 de Rockfeller e enzimas de Rockfeller e Rec-R. A protease, tripsina e SOD foram as enzimas mais sensíveis para WSMoL e cMoL. Atividade larvicida de WSMoL em Rockfeller pode ser relacionada a estimulação da atividade de protease e tripsina.

Submitted by Luiz Felipe Barbosa (luiz.fbabreu2@ufpe.br) on 2015-04-17T14:53:53Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Tese Juliana Ferreira dos Santos final.pdf: 5689631 bytes, checksum: 516947edeb49440a0c712f852173b04f (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-17T14:53:53Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Tese Juliana Ferreira dos Santos final.pdf: 5689631 bytes, checksum: 516947edeb49440a0c712f852173b04f (MD5) Previous issue date: 2013-02-21 / FACEPE CNPq PETROBRAS e EMBRAPA / A tilápia do Nilo pode ser produzida em diferentes sistemas de cultivo e escalas, dentre eles os sistemas semi-intensivo em viveiros (SSI), e o intensivo em tanques-rede (SI). Seus manejos são completamente distintos, por isso o gerenciamento se faz necessário a fim de não desestabilizar parâmetros de crescimento e afetar os custos de produção, principalmente a ração, que pode chegar a representar até 80% destes custos. Para um menor gasto, ingredientes alternativos podem ser usados na elaboração das dietas, no entanto, eles devem apresentar resultados semelhantes ou melhores, quando comparados às dietas convencionais. Sendo assim, pretende-se avaliar se a inclusão de hidrolisado proteico de camarão (HPC) na dieta pode influenciar as atividades enzimáticas da tilápia do Nilo e avaliar a influência do SSI e do SI nos parâmetros de crescimento e nas enzimas digestivas deste peixe. Para avaliar a influência do HPC nas enzimas digestivas de juvenis de tilápia do Nilo, os cultivos foram realizados em aquários. O HPC foi incluído nas dietas nas concentrações de 0, 15, 30 e 60 g.kg-1 (HPC 0, 15, 30 e 60, respectivamente). Ao término dos ensaios (45 dias), o estômago e o intestino dos espécimes experimentais foram removidos para realização das análises. Para avaliação da influência do SSI e do SI sob os parâmetros de crescimento e as enzimas digestivas da tilápia do Nilo, os espécimes experimentais foram cultivados durante 90 dias. Foram adotados dois planos nutricionais: trifásico para SSI (ração com 35, 32 e 28% de proteína bruta – PB) e bifásico para SI (35 e 32% PB). Semanalmente foram realizadas coletas de fitoplâncton e zooplâncton, diariamente os principais parâmetros de qualidade de água foram mensurados e mensalmente foram realizadas biometrias para análise dos parâmetros de crescimento, ajustes na alimentação e remoção dos tecidos (intestino) para análises enzimáticas. A atividade de protease alcalina total foi significativamente maior nos tratamentos HPC15 e HPC60, no entanto, o efeito não foi dose-dependente. Zimograma revelou 12 bandas proteolíticas, oito delas responderam a incorporação do HPC. Já o zimograma de inibição indicou uma redução na atividade de três enzimas, uma diminuição na atividade da tripsina com o aumento da concentração de HPC, e o inverso com duas aminopeptidases. Com relação aos sistemas de criação o alimento natural foi mais abundante no SSI. Sobrevivência, eficiência proteica, eficiência alimentar e fator de condição com 31 dias de cultivo foram melhores no SSI. A relação pesocomprimento não foi alterada pelos sistemas. E quando comparado o peso relativo dos peixes do SSI e do SI com tilápias de outros ambientes ou cultivos, eles foram maiores em nove das 14 comparações. As enzimas digestivas também foram avaliadas no decorrer dos cultivos (31, 63 e 94 dias). Protease total, amilase e lipase não foram estatisticamente diferentes entre os tratamentos ao longo dos períodos analisados. No entanto, atividade de tripsina e quimotripsina foram maiores, com 31 e 63 dias de cultivo em peixes do SSI, sugerindo que o alimento natural pode ter influenciado essas atividades. Uma correlação positiva foi observada entre a concentração recomendada de aminoácidos essenciais para a tilápia do Nilo e atividade específica de aminopeptidase nos peixes do SI. Zimograma também revelou 12 bandas proteolíticas ativas em ambos os sistemas. Sendo que os valores de densidade integrada (DI) foram maiores nas bandas do SSI. Espécimes de ambos os sistemas exibiram cinco bandas com atividade amilolítica, com os maiores valores de DI aos 31 dias de cultivo. Os menores valores de DI foram observados com peixes do SSI, com 63 e 94 dias de cultivo. A comparação da eletroforese bidimensional do intestino de animais cultivados em SSI e SI mostraram um total de 1.233 spots, sendo 731 diferentes. Tilápia do Nilo demonstrou adaptação às dietas utilizadas e aos sistemas de cultivo empregados.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:51:15Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo1572_1.pdf: 9123537 bytes, checksum: 14ea19be2a4c24106f67de22123487d0 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / Empresa Brasileira de Agropecuária / Nos últimos anos, tem-se observado um aumento na demanda por produtos pesqueiros, seguido por um significativo incremento na produção mundial de organismos aquáticos. O crescimento da indústria pesqueira gera, como consequência, uma grande quantidade de resíduos e subprodutos ricos em biomoléculas, que são indevidamente descartados no ambiente. Esses resíduos podem ser usados em diversos estudos relacionados à fisiologia digestiva de espécies aquáticas de interesse comercial e ao desenvolvimento de ingredientes alternativos que possam ser usados como componentes de rações animais. O objetivo do presente trabalho foi investigar enzimas digestivas do hepatopâncreas de camarões peneídeos e avaliar o efeito de dietas com diferentes concentrações de hidrolisado protéico de camarão (HPC) sobre o crescimento, a composição corporal e a fisiologia digestiva de juvenis de Oreochromis niloticus. Amilases do hepatopâncreas dos camarões Farfantepenaeus subtilis (13g), Litopenaeus schmitti (23g) e L. vannamei (com 11 e 25g) e proteases do F. subtilis (6 e 13g) e F. paulensis (8g) foram caracterizadas a partir de estudos de atividade enzimática, inlcuindo pH e temperatura ótima, estabilidade térmica, efeito de íons metálicos e de inibidores, eletroforeses e zimogramas. Amilases de todas as espécies estudadas apresentaram atividade residual superior a 85% em pH alcalino (7,0 a 8,0), em temperatura entre 40 e 50oC e não foram termoestáveis em temperaturas superiores a 55oC. O íon Ca2+ ativou as amilases apenas na concentração de 1mM, mas inibiu a enzima nas concentrações de 5 e 10mM. Os demais íons empregados inibiram fortemente as enzimas independente da concentração utilizada. O inibidor Tipo I de alfa amilase foi altamente eficiente sobre as enzimas de F. subtilis e L. schmitti, mas os mesmos resultados não foram observados para o L. vannamei. O zimograma de atividade revelou nove isoformas de amilases para o F. subtilis, oito para o L. schmitti e sete e dez para o L. vannamei de 11 e 25g, respectivamente. Atividades de tripsina, quimotripsina e leucino aminopeptidase foram detectadas em F. subtilis e F. paulensis. As maiores atividades de todas as proteinases também ocorreram em pH alcalino (7,5 a 9,0) e temperatura de 45 a 55oC. O zimograma de atividade revelou oito bandas proteolíticas para F. paulensis e seis para F. subtilis.. As atividades de aminopeptidases (Arg, Leu, Lys, Phe, Val) e os níveis recomendados desses aminoácidos essenciais em dietas de camarões peneídeos apresentaram correlação positiva (P<0,05). Os efeitos de diferentes níveis de inclusão de hidrolisado protéico de camarão (HPC) em dietas sobre a atividade de enzimas digestivas de juvenis da tilápia do Nilo foram avaliados e correlacionados com parâmetros de crescimento com a composição corporal. O HPC foi incluído nas dietas em concentrações de 0, 1,5, 3 e 6%. Uma dieta comercial foi usada como referência. Hemoglobina, azocaseína, BApNA, SApNA, AA- naftilamidas e amido foram usados como substratos. Apesar de terem sido observadas algumas diferenças, não houve correlação entre atividade enzimática e as diferentes concentrações de HPC das dietas. O zimograma de atividade foi realizado para analisar as mudanças no perfil das proteases digestivas causadas pela inclusão do hidrolisado protéico. Foram observadas 12 bandas proteolíticas, oito das quais responderam à incorporação do HPC. O zimograma de inibição indicou uma diminuição na atividade de três enzimas com atividade de tripsina quando o nível de inclusão do HPC aumentou, enquanto que o inverso ocorreu para uma aminopeptidase. Perfis distintos de proteases foram encontrados para cada tratamento, sugerindo uma alta adaptabilidade da tilápia do Nilo às diferentes dietas. Atividades de tripsina e de aminopeptidase tiveram correlação positiva com parâmetros de crescimento e com o teor de proteína da carcaça e correlação negativa com a taxa de conversão alimentar e com o teor de lipídeos da carcaça. Uma vez que a digestão envolve a ação conjunta de diferentes enzimas, a compreensão adequada das características das enzimas envolvidas é necessária para que a capacidade digestiva das diferentes espécies possa ser estabelecida. O estudo das enzimas pode gerar informações básicas importantes para futuras pesquisas sobre nutrição das espécies, bem como servir como ferramenta para análise de diferentes dietas

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:51:42Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo3102_1.pdf: 1259276 bytes, checksum: c0878ec8ef24a46259582227748106b4 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A protease alcalina extraída do ceco pilórico do pirarucu (Arapaima gigas) foi purificada em quatro etapas: tratamento térmico, precipitação com sulfato de amônio, cromatografia de gel-filtração em coluna Sephadex® G-75 e cromatografia de afinidade em coluna benzamidina-agarose. Após as etapas de purificação aplicou-se uma amostra da proteina obtida em gel de eletroforese e verificou-se a presença de única banda que apresentou peso molecular aproximado de 28,0 kDa. Desta forma, após purificação, avaliaram-se as propriedades físico-químicas e cinéticas da enzima e o efeito de íons metálicos e de inibidores de proteases na atividade proteolítica da mesma, utilizando-se benzoyl-DL-arginine-p-nitroanilide (BApNA) como substrato. O pH e a temperatura ótima de reação encontrada foram 9,0 e 65°C, respectivamente. A enzima mostrou-se estável, após 30 min de incubação, em ampla faixa de pH alcalino (pH 6,0 a 11,5). Após 30 minutos de incubação a 60ºC, foi detectada uma perda de 10% da atividade tríptica. Os valores encontrados para os parâmetros cinéticos (Km, Kcat e Kcat/Km) foram: 0,47 ± 0,042 mM, 1,33 s-1 and 2,82 s-1 · mM-1, respectivamente, usando BApNA como substrato. A atividade tríptica mostrou-se sensível a alguns íons metálicos. A atividade tríptica foi inibida, em ordem crescente, pelos íons: Mn2+ > Ca2+ > Li+ > Cd2+ > Cu2+ > Fe2+ > Hg2+ > Zn2+ > Al3+ > Pb2+. Por outro lado, os íons K+, Mg2+ e Ba2+ não promoveram nenhum efeito na atividade da protease. A enzima foi fortemente inibida por inibidores de tripsina. Os ensaios com substrato específico e inibidores de tripsina forneceram evidências de que esta enzima é provavelmente uma tripsina-símile e suas características sugerem um forte potencial para ser utilizada em processos e produtos industriais

Quimotripsinas (EC 3.4.21.1) são serina proteinases que possuem 245 resíduos de aminoácidos arranjados em dois domínios duplo &#946;-barril, sendo que o sítio ativo está localizado entre esses dois domínios. O estudo da especificidade das endopeptidases foi facilitado pelo conceito de sítio de ligação do substrato, que corresponde ao sítio ativo daquelas enzimas. Porém, sobre as quimotripsinas de insetos, praticamente não existe informação a respeito da especificidade dos diferentes subsítios dessas enzimas. O estudo da especificidade dos subsítios das quimotripsinas dos insetos Periplaneta americana, Tenebrio molitor e Diatraea saccharalis apresentaram maior eficiência de hidrólise sobre substratos que apresentam um resíduo Tyr em P1, embora as razões Phe/Tyr para os diferentes insetos sejam bastante variadas. Estas diferenças indicam diferentes especificidades para as quimotripsinas de insetos em P1. No entanto, estas diferenças parecem não seguir a posição ocupada pelo inseto na escala evolutiva e são menos evidentes do que as verificadas para as tripsinas dos mesmos insetos, onde há troca de especificidade primária. A quimotripsina de Periplaneta americana como a de Diatraea saccharalis preferencialmente clivam substratos com Pro em P2. Porém, o mesmo não acontece com a quimotripsina de Tenebrio molitor, que apresentou maior kcat/Km para o peptídeo com Ala em P2, essa preferência pode estar relacionada à conformação da Pro que difere dos demais resíduos por ser um iminoácido. Porém, as três quimotripsinas estudadas apresentaram maior kcat/Km para o peptídeo Ile em P3 indicando que esse subsítio possui um papel fundamental na discriminação dessas enzimas por substratos com resíduos de aminoácidos específicos nessa posição. As quimotripsinas de Periplaneta americana e Diatraea saccharalis apresentaram maior kcat/Km pelo peptídeo com Ser em P1\', evidenciando que a presença de um grupo hidroxila na cadeia lateral da Ser e o baixo volume da cadeia lateral do resíduo, torna o subsítio dessas enzimas mais seletivo que a quimotripsina de Tenebrio molitor que apresentou maior kcat/Km pelo peptídeo com Ala. Dessa forma, esse estudo colabora para um melhor conhecimento da especificidade dos subsítios das endopeptidases digestivas de insetos pode dar diretrizes para a purificação ou síntese de inibidores mais eficazes com ação direta nas enzimas digestivas de insetos e serem utilizados na produção de plantas transgênicas ou utilizados como bioinseticidas. / Chymotrypsins (EC 3.4.21.1) are serine proteases with 245 amino acids disposed in two double ?-barrel domains, being the active site locate between these two domains. The specificity study of endopeptidases was facilitated by the substrate binding site concept that is the active site of these enzymes. However there is not much information about the subsites specificity of insect chymotrypsins. The specificity study of insects chymotrypsins subsites of Periplaneta americana, Tenebrio molitor and Diatraea saccharalis showed higher substrate hydrolysis efficiency with Tyr in P1, however the Phe/Tyr proportion for different insects are varied. These differences have shown different specificities for insect chymotrypsins in P1. Meanwhile, this difference does not follow the position occupied by insects in evolutive scale, and it is less clear than those showed by the same insect trypsins were there is primary specificity cross. Like Diatraea saccharalis, the Periplaneta americana chymotrypsin breaks the substrate with Pro in P2. Nevertheless the same does not happen to Tenebrio molitor chymotrypsin with the higher kcat/Km for the peptide with Ala in P2, this preference may be related to the different conformation of Pro. The three studied chymotrypsins showed higher kcat/Km for the peptide with Ile in P3, what indicates that this subsite has a key role on these enzymes discrimination for substrates with specific amino acids in this position. The Periplaneta americana and Diatraea saccharalis chymotrypsins presented higher kcat/Km for the peptide with Ser in P1` evidencing that the hydroxyl group side chain presence in Ser and low side chain volume made this subsite more selective than Tenebrio molitor chymotrypsin with higher kcat/Km by Ala peptide. This study collaborates to a best knowledge about the subsite specificities of the insect digestive endopeptidases and the best inhibitors for purification or synthesis with direct action in insect digestive enzymes and to be utilized for transgenic plants or bio-insecticides production.

O mosquito Aedes aegypti é vetor de doenças como a febre amarela, dengue, chinkungunya e zika. O sistema digestório é responsável pela digestão e absorção de nutrientes, é também uma interface com o ambiente externo sendo a porta de entrada de organismos infecciosos. A presença de duas lipases digestivas foi confirmada por qPCR, uma na fase larval (L-Aa7051) e outra na fase adulta (L-Aa7055). Estas enzimas foram agrupadas na família das lipases neutras e apresentam alterações em resíduos envolvidos na especificidade, domínio tampa e alça &#946;9. A L-Aa7055 recombinante foi expressa heterologamente em Escherichia coli na porção insolúvel, com atividade após a renaturação. Observamos que a expressão da lipase L-Aa7055 sofre uma redução de 30% na infecção Plasmodium gallinaceum, não sendo afetada pelo vírus dengue sorotipo 2 (DENV2). A digestão de lipídeos é importante na fase larval, com altos níveis de transcrito. Um estudo mais aprofundado ainda será necessário para compreender completamente o papel das lipases no processo infeccioso. / The Aedes aegypti borne diseases yellow fever, dengue fever, chinkungunya and zica are important public healthy problems. The digestion and absorption of nutrients are performed in the digestive system, which is also an external environment interface that allows the infection by pathogenic microorganisms. The presence of two digestive lipases were identified by qPCR, L-Aa7051 in the larval phase and L-Aa7055 in the adult female. The lipase sequences were grouped in the neutral family, and exhibit alterations in residues involved in specificity, lid domain and &#946;9 loop. The recombinant L-Aa7055 was expressed in the insoluble fraction, and show activity after a renaturation process. We notice that the expression levels of L-Aa7055 are reduced by 30% in the Plasmodium gallinaceum infection and were not affected by serotype 2 dengue virus (DENV2). The lipid digestion is important in the larval phase, with higher transcript levels. New studies will be necessary to the complete understanding of lipase contribution in the infectious process.