Memoria para optar al título de Químico Farmacéutico / En la práctica clínica se han observado grandes variaciones interindividuales, tanto en la respuesta como en la toxicidad asociadas con las terapias anticancerígenas. El presente trabajo tiene por objetivo estudiar la asociación entre polimorfismos genéticos en enzimas de biotransformación y la toxicidad del esquema cisplatino-etopósido-bleomicina (PEB) en pacientes con cáncer testicular y evaluar la influencia del polimorfismo genético en GSTM1 en la farmacocinética de cisplatino. Para el cumplimiento de los objetivos se realizó la genotipificación de los polimorfismos CYP3A4*1B, GSTM1 nulo, GSTT1nulo y BLMH (A1450G) realizadas mediante PCR-RFLP a partir del ADN genómico total obtenido de sangre periférica de sesenta y tres (63) pacientes con cáncer testicular. Adicionalmente, a ocho (8) pacientes reclutados se les realizó un estudio farmacocinético en donde recibieron una infusión intravenosa por 2 horas de cisplatino (100 mg/m2). Los niveles plasmáticos de cisplatino fueron medidos por cromatografía líquida de alta resolución (HPLC). Los resultados muestran que los pacientes con el genotipo GSTM1 presente experimentan más leucopenia grado 3-4 (OR=0,2058; 95% IC 0,0405-1,0459, p=0,041chi2, p=0,052 Fisher). Linfocitopenia severa fue más frecuente en pacientes con el genotipo GSTT1 nulo (OR=29, 95% IC 1,29-650,0, p=0,002chi2, p=0,095 Fisher). Los pacientes con el genotipo BLMH A/G experimentaron más toxicidad hematológica grado 3-4 (OR=7,67, 95% IC 2,14-27,35-, p=0,001chi2, p=0,002 Fisher) y leucopenia grado 3-4 (OR=29, 95% IC 1,2938-650,015, p=0,002chi2, p=0,095 Fisher). Los datos farmacocinéticos se ajustaron a un modelo de dos compartimentos, el promedio poblacional estimado para el aclaramiento (CL) fue de 9,97 L/hr y el volumen de distribución en el compartimento central (V1) fue 6,48 L. Ninguna covariable mejoró la variabilidad intersujeto asociada con los parámetros farmacocinéticos. No se observó ninguna asociación significativa entre la farmacocinética y GSTM1. En conclusión, los polimorfismos GSTM1 nulo, GSTT1 nulo y BMLH (A1450G) están relacionados con la toxicidad luego del esquema de quimioterapia en pacientes con cáncer testicular. En el estudio farmacocinético preliminar de cisplatino, ningún parámetro se ve influenciado por el genotipo GSTM1 / In the clinical practice were observed large interindividual variations both the response and the toxicity in the anticancer therapy. The present work aimed to study the association among the genetics polymorphisms in the biotransformation enzymes and toxicity in cisplatin-etoposide-bleomycin (PEB) chemotherapy in testicular cancer patients and to evaluate the influence of genetic polymorphism in GSTM1 on the pharmacokinetics of cisplatin. Genotyping of CYP3A4*1B, GSTM1 null, GSTT1 null and BLMH (A1450G) polymorphisms was performed by PCR – RFLP of genomic DNA obtained from the peripheral blood of sixty three (63) testicular cancer patients. Additionally, the eight (8) patients recruited to the pharmacokinetics study received a 2 hours intravenous infusion of cisplatin (100 mg/m2). Plasma levels of cisplatin were measured by high-performance liquid chromatography (HPLC). Results showed that the patients GSTM1 present genotype experienced more grade 3-4 leucopenia (OR=0,2058; 95% CI 0,0405-1,0459, p=0,041chi2, p=0,052 fisher). Severe linfocitopenia was more frequent in patients GSTT1 null genotype (OR=29, 95% CI 1,2938-650,015, p=0,002chi2, p=0,095 fisher). Patients BLMH A/G genotype experienced more grade 3-4 hematological toxicity (OR=7,67, 95% CI 2,14-27,35-, p=0,001chi2, p=0,002 fisher) and grade 3-4 leucopenia (OR=29, 95% CI 1,2938-650,015, p=0,002chi2, p=0,095 fisher). Dates pharmacokinetics were adjusted to a linear two-compartment model, the mean population estimates for clearence (CL) were 9,97 L/hr and central distribution volume (V1) were 6,48 L. No covariate improved the intersubject variability associated with pharmacokinetics parameters. No association among pharmacokinetics parameters and GSTM1 genotype were significant. In conclusion, GSTM1 null, GSTT1 null and BLMH A1450G polymorphisms were related with toxicity from chemotherapy testicular cancer. In the pharmacokinetics preliminary study of cisplatin, no parameters were influenced for GSTM1 genotype. Key words: Pharmacogenetics, polymorphisms, testicular cancer

Memoria para optar al título de Químico Farmacéutico / A pesar que se sabe de la existencia de importantes diferencias interindividuales en la respuesta a la mayoría de los medicamentos que se utilizan en terapéutica humana, y que justifica los distintos esquemas posológicos utilizados en diferentes poblaciones de pacientes, todavía no es posible conocer completamente sus causas. Respecto a estas diferencias interindividuales se sabe que aproximadamente el 99,9% de la secuencia del ADN de dos individuos diferentes es la misma y que una proporción significativa de las diferencias encontradas en los individuos, es decir, sus diferencias fenotípicas y/o susceptibilidades a ciertas enfermedades, radica en el 0,1% de variación; a este tipo de variaciones genéticas se les conoce como polimorfismos genéticos, los cuales representan diferentes formas en las secuencias de ADN. En el presente trabajo se analizaron seis polimorfismos de los cuales uno no fue posible llevar a cabo, de estos cinco polimorfismos restantes, se estudió la frecuencia de UGT1A1*28 (uno de los cinco mencionados) en un sub-grupo de la población general chilena, y los mismos cinco polimorfismos anteriores se analizaron en 15 pacientes con cáncer testicular que fueron tratados con el esquema Etopósido y Cisplatino (EP), mediante PCR-RFLP, SSCP y tiempo real. Los genotipos fueron estudiados en relación a toxicidad y efectividad en los pacientes con objeto de evaluar la respuesta terapéutica a la quimioterapia. Junto a esto, se analizó el perfil de toxicidad del esquema específico EP y se evaluó la existencia de relación entre genotipo y reacción adversa mediante chi-cuadrado. Finalmente, se realizó una comparación de toxicidad entre los esquemas EP y PEB (Etopósido, Cisplatino y Bleomicina) que corresponden a quince y diecinueve pacientes respectivamente. El estudio fue realizado considerando todas las normativas éticas y clínicas aplicables, incluyendo las Buenas Prácticas Clínicas, la Ley de deberes y derechos de los pacientes y la Declaración de Helsinki. De acuerdo a lo anterior, los voluntarios de la población general y los pacientes debieron firmar un consentimiento informado de acuerdo al protocolo aprobado por los comités de ética del Servicio de Salud Metropolitano Norte (SSMN) y de la Facultad de Medicina de la Universidad de Chile. Los resultados mostraron que la población chilena posee semejanza a la población española o alemana en cuanto a frecuencias para el alelo (TA)7 (31%) y (TA)6 (68,9%). Estos valores son considerablemente diferentes comparado con población asiática. En cuanto a la eficacia del tratamiento, todos los pacientes presentaron buena respuesta al tratamiento, a excepción de tres casos con DHL alta y uno con β-HCG alta en que costó llegar a valores clínicamente aceptables. Sólo un paciente presentó recidivas, diagnosticado con seminoma clásico, y que había sido sometido a cuatro ciclos de quimioterapia con buena respuesta y marcadores tumorales dentro de rangos normales, para el que finalmente se decidió realizar cuatro ciclos de cisplatino, vinblastina e ifosfamida. La toxicidad del tratamiento Etopósido y Cisplatino (EP) mostró que las reacciones adversas (RAMs) más frecuentes fueron los vómitos, náuseas, neutropenia y anemia. Estas últimas dos RAMs junto con la leucopenia, linfocitopenia, trombocitopenia y toxicidad hematológica dejan de manifiesto a las reacciones de tipo hematológicas como las de mayor consideración tanto en frecuencia como en gravedad. En este respecto se encontró que el grado de náusea que puede presentar un paciente se relaciona con el genotipo presente para el alelo MDR1 3435. Finalmente en la comparación del esquema EP vs PEB se observó que el esquema EP resulta ser más propenso a producir diarrea, cefalea, alopecia y reacciones dermatológicas que el esquema PEB. Por otra parte, el esquema EP presentó menor ocurrencia de efectos adversos tales como anemia, leucopenia, linfocitopenia, neutropenia, neutropenia febril, neurotoxicidad y trombocitopenia que el esquema PEB. En conclusión se observó que no existe asociación estadísticamente significativa entre el grado de las reacciones adversas analizadas y los polimorfismos CYP3A4*1B, CY3A5*3, UGT1A1*28 y MDR1 3435, a excepción de náuseas que se observó se encontraron asociadas con MDR1 3435. Este estudio resulta una investigación preliminar para establecer la necesidad de aumentar el número de pacientes analizados para estudios futuros con el fin de apreciar relaciones que pudieran haber sido más sutiles / Genetic variants in related proteins with etoposide pharmacokinetics and its influence in therapeutic response to patients with testicular cancer. Despite to know the existence of important interindividual differences, in response to the drugs used in human therapeutic, the ones that justify different posologic schemes used in different patients, it is not yet possible to completely understand the causes of this. Regarding these interindividual differences, it is know that about 99,9% of the DNA sequence of two different individuals; a significant proportion of the found differences come from phenotype and/or susceptibilities to certain diseases. This variation lies in 0, 1%, known as genetic polymorphisms, which represents different shapes in the DNA sequence. In this investigation, there were six polymorphisms analyzed, one of them was not possible to carry out. From the remaining five polymorphisms, the frequency of UGT1A1 * 28 was analyzed in a sub-group of the Chilean population. These five polymorphisms were analyzed in 15 patients with testicular cancer, who were treated with etoposide and cisplatin scheme (EP), using PCR-RFLP, SSCP in real time. The genotypes were studied in relation to toxicity and effectiveness in patients in order to assess the therapeutic response to chemotherapy. Alongside this, the toxicity profile of the specific scheme EP is analyzed and the existence of relationship between genotype and adverse reaction was assessed using chi-square. Finally, a comparison of toxicity between EP and PEB schemes (etoposide, cisplatin and bleomycin) corresponding to fifteen and nineteen patients was performed, respectively. The study was conducted considering all applicable ethical standards and clinics, including Good Clinical Practices, the duties and rights of patients and the Declaration of Helsinki. In relation to the last, the volunteers from the general population and patients had to sign a consent form approved by the ethical committee from the North Metropolitan Health Service (SSMN) and the Medicine Faculty, University of Chile. The results showed that the Chilean population has resemblance to Spanish or German population regarding frequencies for allele (TA) 7 (31%) and (TA) 6 (68.9%). These values are significantly different compared to Asian population. As for the effectiveness of treatment, all patients had good response to treatment, except for three cases with high DHL and one high β-HCG in which cost reach clinically acceptable values. Only one patient had recurrences diagnosed with classic seminoma, and had been subjected to four cycles of chemotherapy with good response and tumor markers within normal ranges, for which finally decided to four cycles of cisplatin, vinblastine and ifosfamide. Treatment toxicity Etoposide and Cisplatin (EP) showed that the most common adverse reactions (ADRs) were: vomiting, nausea, neutropenia and anemia. These last two RAMs with leukopenia, lymphocytopenia, thrombocytopenia and hematologic toxicity leave apparent hematological reactions, such as further consideration both in frequency and severity. In this regard, it was found that the degree of nausea that a patient may present is related to the present MDR1 genotype for the 3435 allele. Finally, in comparison to EP scheme PEB it was observed that EP scheme is more likely to produce: diarrhea, headache, alopecia and skin reactions scheme PEB. Moreover, the EP scheme had lower occurrence of adverse effects such as anemia, leukopenia, lymphopenia, neutropenia, febrile neutropenia, thrombocytopenia, neurotoxicity that scheme PEB. In conclusion, it was found that there is no statistically significant association between the degree of adverse reactions analyzed and CYP3A4 * 1B, CY3A5 * 3, UGT1A1 * 28 and MDR1 3435 polymorphisms, except for nausea which was observed were found associated with MDR1 3435. This study is a preliminary investigation to establish the need to increase the number of patients analyzed for future studies in order to assess relationships that may have been more subtle