Em uma tentativa de definir uma bioassinatura especifíca para diagnóstico da tuberculose (TB) pulmonar, esse estudo avaliou os níveis de expressão gênica em pacientes com TB, pneumonia e asma (OPD), e também em pacientes infectados latentemente com M. tuberculosis, e em pacientes não infectados com o bacilo. Foram analisados genes alvos específicos previamente testados por Maertzrdorf el at. (2011) como uma bioassinatura que sugere a diferenciação de casos de TB pulmonar a casos de TB latente: CD64, FCGR1B, GZMA, GBP5 and LTF. Nesse estudo foram realizadas análises estatísticas randomForest para calcular a especificidade e a sensibilidade de cada combinação feita entre os genes CD64, GZMA e GBP5, visando discriminar a diferença de expressão gênica entre individuos com TB e OPD. Essa bioassinatura nos proporcionou uma especificidade de 92,6% e uma sensibilidade de 95,5% para TB (o reverso para OPD). Os genes GZMA e GBP5 mostraram um poder de discriminação entre os grupos com fator de importância de 18,5 e 26,3, respectivamente para TB, e de 19,2 e 17,4, respectivamente para OPD. O gene CD64 teve seu fator de importância para TB de 8,5 e para OPD de 3,3. Nosso estudo sugere que a criação de uma ferramenta diagnóstica utilizando a bioassinatura estudada pode ser uma forma de ajudar a área clínica a diferenciar TB de OPD, apoiando a possibilidade de começar a trabalhar em níveis protéicos, com a intenção de criar ferramentas de diagnóstico mais rápidas, acessíveis e precisas, seguindo as recomendações da OMS de reduzir a incidência da TB no mundo. / In this study, in an attempt to define a TB-specific biosignature for diagnostics, we evaluated gene expression in TB, pneumonia and asthma patients, as well as healthy donors with latent M. tuberculosis infection (LTBI) and healthy non-infected donors (NIDs). We decided to pursue a targeted approach utilizing a specific set of genes previously validated by Maertzdorf et al. 2011 as a biosignature to discriminate TB patients and LTBI subjects: CD64, FCGR1B, GZMA, GBP5 and LTF. Random forest analysis was applied to calculate the specificity and sensitivity of each gene combination of CD64, GZMA and GBP5 to discriminate between TB and OPD. The combination of the 3 genes gave the highest accuracy in identifying TB and OPD patients. This biosignature gave a specificity of 92.6% and a sensitivity of 95.5% for TB (reverse for OPD). GZMA and GBP5 showed the highest discriminating power with an importance factor of 18.5 and 26.3, respectively for TB, of 19.2 and 17.4, respectively for OPD, versus CD64 importance of 8.5 for TB and 3.3 for OPD. Our study suggest that the creation of a diagnostic tool using the studied biosignature may be a way to help physician’s to differentiate TB from OPD and support the possibility to start to work at protein levels, using this to create faster, cheaper and accurate tools to diagnosis TB and to follow WHO recommendations to reduce global burden of TB incidence worldwide.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2014. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2014-11-06T13:36:54Z No. of bitstreams: 1 2014_AnaClaudiadeSouza.pdf: 3213999 bytes, checksum: c330e78f60850f7c3b109e305fe3b27c (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2014-11-13T13:01:56Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_AnaClaudiadeSouza.pdf: 3213999 bytes, checksum: c330e78f60850f7c3b109e305fe3b27c (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-13T13:01:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_AnaClaudiadeSouza.pdf: 3213999 bytes, checksum: c330e78f60850f7c3b109e305fe3b27c (MD5) / A utilização de plantas como sistema de produção de proteínas é uma alternativa que está crescendo, e se tornando um importante recurso para a expressão de proteínas de uso terapêutico e de enzimas. Progressos significativos têm sido feitos no desenvolvimento de proteínas recombinantes produzidas em cultura celular e em tecidos de plantas, além de avanços no desenho e implementação de biorreatores. Portanto, o objetivo deste estudo é utilizar sistema de planta para expressão transiente de proteínas recombinantes. Um dos objetivos específicos é expressar a proteína docapsídeo de norovirus (NV CP) para montagem de virus like particles (VLP)utilizando vetor binário e os genes de supressor viral de silenciamento gênico(SG). Outro objetivo específico é produzir o antígeno multiepitopo do vírus dadengue utilizando vetor viral baseado no Cucumber mosaic virus (CMV). Comoobjetivo específico final o vetor baseado no CMV foi testado como vetor deindução de silenciamento gênico (VIGS). Para a expressão de NV CP, asproteínas VP1 e VP2 deste vírus foram clonadas em vetor binário ecoexpressas com a proteína viral supressora de SG, 126 K de Pepper mildmottle virus, em Nicotiana benthamiana. Para visualização, as VLPs forampurificadas de folhas agroinfiltradas e observadas no microscópio eletrônico de transmissão. O uso de vetor binário e gene de supressor viral de SG foi viável para expressão e montagem de NV VLP. Para a expressão da proteínamultiepitopo do vírus da dengue, foi realizada a modificação do vetor viralbaseado no CMV. O RNA 2 do vírus foi modificado para conter os sítios declonagem, e o genoma do vírus foi clonado em vetor binário para que o mesmo pudesse ser utilizado no sistema de agroinfiltração. Os resultados demonstraram que o vetor de expressão baseado no CMV produziu a proteína de interesse com baixo rendimento e que, portanto, deve ser aprimorado. Como objetivo de testar, portanto, a viabilidade deste vetor como VIGS, o mesmo foi modificado novamente para que pudesse realizar a clonagem utilizando sistema de recombinação. Para isso, o gene da fitoeno desaturase (PDS) foi clonado neste vetor, e os resultados demonstraram que o mesmo é infeccioso,porém novos testes serão realizados para aprimorar seu uso como VIGS. ______________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The use of plant system as protein expression is an alternative strategy for themass production of therapeutic proteins and enzymes. Significant progresshave been made in producing recombinant proteins in plant cell culture and inplant tissues for the implementation as bioreactors. Therefore, the aim of thisstudy is to use plant system for transient expression of human virus antigen.One of viral proteins expressed was the capsid protein of norovirus (NV-CP) forassembly of virus like particles (VLP) using binary vector and viral suppressorsilencing gene (SG). Another protein was the dengue multi-epitope antigenusing Cucumber mosaic virus (CMV)-based viral vector. CMV-based vector wastested also as the vector induced gene silencing (VIGS) vector. For expressionof NV-CP, the gene of VP1 and VP2 protein were cloned into binary vector andco-expressed with viral protein suppressor (SG), 126K protein of Pepper mildmottle virus in Nicotiana benthamiana. To confirm the VLPs assembly, thepurified VP1 fraction was observed by transmission electron microscopy. Theresults demonstrated that the system using binary vector and SG is viable forthe expression and assembly of NV VLPs. For dengue multiepitopo proteinexpression, the CMV-based vector was modified. CMV RNA 2 segment wasmodified to contain new cloning site and virus genome was cloned into thebinary vector to be used in agroinfiltration system. The results showed thatCMV-based protein expression vector produced the target protein with lowlevels and, therefore, should be improved the system. To evaluate the viabilityof the CMV as a VIGS vector, CMV vector was modified introducing Gatewayrecombination site (Invitrogen). The phytoene desaturase (PDS) gene wascloned into this vector and infiltrated expecting photo-breeching effect resultedas gene knock-down by VIGS. The results demonstrate that it was infectious,but clear knock-down phenotype as photo-breaching was not observed. Thefurther tests are needed to enhance the effect as VIGS.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Pós-Graduação em Nanociências e Nanobiotecnologia, 2014. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2014-11-13T17:36:35Z No. of bitstreams: 1 2014_RaphaelSeverinoBonadio.pdf: 1019534 bytes, checksum: 4151703aea9e28a2d016a232274697b0 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2014-11-14T11:24:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_RaphaelSeverinoBonadio.pdf: 1019534 bytes, checksum: 4151703aea9e28a2d016a232274697b0 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-14T11:24:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_RaphaelSeverinoBonadio.pdf: 1019534 bytes, checksum: 4151703aea9e28a2d016a232274697b0 (MD5) / Introdução: Diversos estudos reportam alterações na expressão gênica em resposta àexposição de células à nanomateriais, mas até o presente momento não há nenhumestudo sobre a toxicidade a nível epigenético causada por nanoestruturas e seus efeitosem sucessivas gerações celulares. Portanto, torna-se necessário estudar esses fenômenosa fim de contribuir no desenvolvimento de nanopartículas mais adequadas paraaplicações biológicas. Objetivo: Avaliar o perfil de metilação global de DNA emcélulas MCF-7 e MCF-10A em cultivo após a cessão da exposição de nanopartículas demaghemita funcionalizadas com citrato. Materiais e métodos: As NPM-citrato foramsintetizadas pelo método de coprecipitação de Fe (II) e Fe (III) e adição direta de ácidocítrico. As caracterizações das NPM-citrato foram realizadas por microscopia (MET,HRTEM, MEV e AFM) e por diâmetro hidrodinâmico e potencial zeta. Para detectar asconcentrações sub-letais IC-10 e IC-20, foram realizados a exclusão de viabilidade porcontagem de células coradas com Azul Tripan e o ensaio de citotoxicidade peladetecção da Lactato Desidrogenase (LDH). O ensaio de proliferação celular foirealizado no sistema xCELLigence™ (Roche/ACEA). A detecção de ferro intracelularfoi realizada pelo ensaio do Azul da Prússia. O perfil de metilação global de DNA foirealizado por ensaio colorimétrico. A expressão das DNMTs foi realizada por qRTPCR.Resultados: As NPM-citrato causaram efeito citostático em células MCF-7 eMCF-10A quando administradas nas concentrações 30 e 60μgFe/mL durante 24h. Apósa cessão da exposição das NPM-citrato, verificou-se que a proliferação das célulasMCF-7 tratadas foi maior que das células não tratadas. Além disso, foi constatado queas NPM-citrato encontravam-se no interior das células durante todo o experimento e quehavia uma dinâmica de metilação de DNA, mesmo após a exposição transiente dasNPM-citrato. Também foram identificadas diferenças entre o acúmulo de transcritos deDNA metiltransferases. Discussão: Os nanomateriais possuem um risco intrínseco emaplicações biológicas, mesmo quando administrados em concentrações consideradasnão-tóxicas por meio de técnicas convencionais. Isso porque seus efeitos em sistemasbiológicos podem se estender a múltiplas gerações, mesmo durante exposiçãotransiente. Conclusão: As NPM-citrato promovem alterações significativas no perfil demetilação global de DNA em células MCF-7 e não promovem em MCF-10A e essefenômeno pode ser explorado para aplicações biomédicas futuras. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Introduction: Several studies have reported changes in gene expression in response toexposure of cells to nanomaterials, but to date there is no study on the toxicity causedby nanostructures at epigenetic level and their effects in successive cell generations.Therefore, it becomes necessary to study these phenomena in order to contribute to thedevelopment of more appropriate nanoparticles for biological applications. Objective:To evaluate the profile of global DNA methylation in MCF-7 and MCF-10A cells inculture after cessation of exposure to maghemite nanoparticles functionalized with citricacid. Methods: The NPM-citrate were synthesized by coprecipitation of Fe (II) and Fe(III) method and direct addition of citric acid. The characterizations of NPM-citratewere performed by microscopy (TEM, HRTEM, SEM and AFM) and by analysis of thehydrodynamic diameter and zeta potential. To detect the sub-lethal concentrations IC-10and IC-20, we performed the counting of the cells stained with Trypan Blue andcytotoxicity assay for detection of lactate dehydrogenase (LDH). The cell proliferationassay was performed in xCELLigence ™ (Roche / ACEA) system. Detection ofintracellular iron assay was performed by Prussian Blue. The profile global DNAmethylation was performed by colorimetric assay. The expression of DNMTs wasperformed by qRT-PCR. Results: NPM-citrate caused cytostatic effect on MCF-7 andMCF-10A cells when given at concentrations of 30 and 60μgFe/ml for 24h. After thetransfer of the NPM-citrate exposure, it was found that the proliferation of MCF-7treated cells was higher than untreated cells. Furthermore, it was found that the NPMcitrateis found inside the cells throughout the experiment and had a dynamic DNAmethylation even after transient exposure of NPM-citrate. Differences between thetranscript accumulation of DNA methyltransferases were also identified. Discussion:The combination of nanotechnology and epigenetics is still poorly understood becausethese are frontier areas of knowledge. Thus, nanomaterials have an intrinsic risk inbiological applications, even when administered in non-toxic concentrations consideredby conventional techniques. This is because their effects on biological systems can beextended to multiple generations, even during transient exposure. Conclusion: TheNPM-citrate promote significant changes in global DNA methylation in MCF-7 cellsand do not promote in MCF-10A and this phenomenon can be exploited for futurebiomedical applications.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2013. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2013-04-17T16:32:00Z No. of bitstreams: 1 2013_CarolinaAmaroMoura.pdf: 3170359 bytes, checksum: e846389c8492193330a8768a4450adcb (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-05-07T11:29:59Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_CarolinaAmaroMoura.pdf: 3170359 bytes, checksum: e846389c8492193330a8768a4450adcb (MD5) / Made available in DSpace on 2013-05-07T11:29:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_CarolinaAmaroMoura.pdf: 3170359 bytes, checksum: e846389c8492193330a8768a4450adcb (MD5) / Modificações epigenéticas estão relacionadas a padrões de expressão gênicas diferentes. A desregulação nos processos epigenéticos, incluindo metilação nas caudas de histona, tem sido associada à biologia das lesões cancerosas e seus resultados clínicos. Até agora, diversos genes codificadores de metiltransferases tem sido descritos e associados à carcinogênese mamária. Os genes codificadores de metiltransferases de lisina de histonas apresentam um domínio SET o qual é capaz de metilar resíduos de lisina nas caudas das histonas. A desregulação neste processo de metilação pode mudar a conformação da cromatina e permitir a transcrição de genes que agem na carcinogênese. Proteínas que contêm os domínios SET e MYND (SMYDs) constituem uma família de cinco proteínas altamente conservadas desde leveduras até vertebrados, e nem todas foram completamente caracterizadas. O gene SMYD4 humano está localizado no cromossomo 17 (17p13.3), em uma região que perde comumente a heterozigosidade em cânceres de mama. No presente estudo, investigou-se o perfil de expressão do gene SMYD4 em tumores de mama e seus tecidos não tumorais adjacentes, em sete diferentes linhagens celulares de câncer de mama e em treze diferentes tecidos humanos não cancerosos. Além disso, foram utilizadas células estáveis com SMYD4 superexpresso na investigação da localização subcelular de sua proteína e na análise da proliferação celular em consequência desta superexpressão. Ademais, analisou-se a consequência da inibição de expressão deste gene em linhagem celular de câncer de mama. Diante desses objetivos, descobriu-se que SMYD4 está frequentemente hipoexpresso em cânceres de mama, comparado às contrapartes não tumorais, e diminuídos em todas as linhagens celulares de câncer de mama. Interessantemente, há uma maior expressão nos tecidos mamários em comparação a todos os outros analisados. Além disso, observou-se maior proliferação em células com expressão do SMYD4 silenciada. Os resultados demonstram novos caminhos na elucidação do papel de SMYD4, evidenciando a importância de sua hipoexpressão na progressão do câncer de mama. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Epigenetic modifications are related to different gene expression patterns. Misregulation of epigenetic processes, including methylation in histone tails, has been associated to the biology of cancer and their clinical outcome. Up to date, several methyltransferase genes have been described to be involved in breast carcinogenesis. Histone lysine methyltransferase genes encode proteins containing a SET domain with the ability to methylate lysine residues in histone tails. Misregulation on this methylation process can change the chromatin conformation and allow transcription of genes that operate in carcinogenesis. SET and MYND domain proteins (SMYDs) are a family of five proteins highly conserved from yeast to vertebrates, which have not yet been fully characterized. Human SMYD4 gene is located at chromosome 17 (17p13.3) which is a region commonly exhibiting loss of heterozygosity in breast cancers. In the present study it was investigated the expression profile of SMYD4 in breast tumors and its adjacent non-tumor tissues, in seven different breast cancer cell lines and in thirteen human normal tissues. In addition it was used stable cell lines overexpressing SMYD4 to investigate its subcellular localization, as well as its impact on cellular growth behavior before SMYD4 overexpression. It was also analyzed the effects of SMYD4 inhibition on the proliferation of a breast cancer cell line. It was found that SMYD4 is frequently downregulated in breast cancers compared to its non-cancerous counter-parts and frequently decreased in all breast cancer cell lines. Interestingly, it showed a higher expression in breast tissues comparing to all normal tissues analyzed. In addition it was found an increased proliferation in cells with silenced expression of SMYD4. These results shed new lights on the role of SMYD4, evidencing the importance of its downregulation for breast cancer progression.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Psicologia, Departamento de Processos Psicológicos Básicos, 2011. / Submitted by alcianira lima persch (alcyrpl@yahoo.com.br) on 2011-06-28T20:29:49Z No. of bitstreams: 1 2011_BibianeDemos.pdf: 2564047 bytes, checksum: 97b9b2a9bf641f22916bd222874a0c57 (MD5) / Approved for entry into archive by Elna Araújo(elna@bce.unb.br) on 2011-06-29T16:59:58Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_BibianeDemos.pdf: 2564047 bytes, checksum: 97b9b2a9bf641f22916bd222874a0c57 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-06-29T16:59:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_BibianeDemos.pdf: 2564047 bytes, checksum: 97b9b2a9bf641f22916bd222874a0c57 (MD5) / Os sintomas não motores, associados à lesão cerebral, frequentes na doença de Parkinson são causados por disfunções cognitivas, comportamentais e autonômicas. O reconhecimento de expressões emocionais faciais vem sendo amplamente discutido como um déficit existente nessa população, visto que, as áreas cerebrais de reconhecimento de expressões emocionais podem estar afetadas na doença de Parkinson. A medicação dopaminérgica utilizada no tratamento da doença é outro fator que pode interferir no reconhecimento das expressões emocionais. Os estudos, por vezes, são inconclusivos ao definir o grau e a seletividade do enfraquecimento no reconhecimento emocional de faces. O presente estudo, verificou reconhecimento das 6 expressões emocionais faciais universais (alegria, tristeza, raiva, medo, nojo e surpresa) em 19 indivíduos com doença de Parkinson e 22 de grupo controle. Para isso, foi utilizado um teste de percepção emocional de faces (TEPEF) desenvolvido por nossa equipe de pesquisadores. Os parkinsonianos apresentaram menor porcentagem de reconhecimento nas expressões de surpresa e raiva. As expressões de tristeza e raiva tiveram correlação positiva. Os resultados sugerem que a baixa evolução da doença nessa população e o efeito da medicação dopaminérgica podem ter interferido no desempenho do grupo experimental em relação ao controle. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Non-motor symptoms are common in the Parkinson disease and are caused by cognitive and autonomic and behavioral impairment associated with cerebral damage. The recognition of emotional expressions of the face is widely argued as being an existing deficit in this population, since the cerebral areas of recognition of emotional expressions can be affected by the Parkinson disease. The dopaminergic medication that is used in the treatment of the disease is a factor that can intervene with the recognition of the emotional expressions. The results, are inconclusive when defining the degree and the selectivity of weak recognition of emotional expressions on the face. The present study verified recognition of the 6 universal emotional expressions on the face on 19 individuals with the Parkinson disease and 22 in a control group. The perception of facial expressions program (TEPEF) was developed by our team of researchers. The test subjects with the Parkinson disease had presented the worst index for recognition in the sad and anger expressions and some emotions were positively correlated. The results suggest that low progression rate of the disease in the population and the effect of dopaminergic medication may have interfered in the performance of the experimental group when comparing it to the control group.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, 2011. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2012-01-13T13:54:29Z No. of bitstreams: 1 2011_RafaelPlakoudiSoutoMaior.pdf: 21698392 bytes, checksum: 20d3c5fb58d88ae54b47ae9f945f6f49 (MD5) / Approved for entry into archive by Patrícia Nunes da Silva(patricia@bce.unb.br) on 2012-01-18T19:18:23Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_RafaelPlakoudiSoutoMaior.pdf: 21698392 bytes, checksum: 20d3c5fb58d88ae54b47ae9f945f6f49 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-01-18T19:18:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_RafaelPlakoudiSoutoMaior.pdf: 21698392 bytes, checksum: 20d3c5fb58d88ae54b47ae9f945f6f49 (MD5) / Mecanismos de defesa em primatas dependem do reconhecimento rápido de potenciais predadores e pistas sociais de coespecíficos como expressões faciais de emoção. O complexo amigdaloide (AM) é considerado o centro da circuitaria neural responsável pela detecção de ameaça. Apesar de ser essencial no processamento de estímulos emocionais, a AM parece não estar envolvida nas primeiras etapas deste processo. Várias linhas de investigação vêm recentemente indicando que a via colículo-pulvinar pode preencher essa lacuna, especialmente durante a infância. Para avaliar a contribuição de ambas estruturas (colículo superior e pulvinar) no processamento de estímulos relevantes para sobrevivência, o presente trabalho divide-se em dois estudos. No primeiro estudo, a atividade elétrica individual de neurônios do pulvinar foi registrada durante o reconhecimento de faces emocionais em uma tarefa de escolha diferente do modelo. Nesta tarefa, foram utilizadas faces com diferentes expressões emocionais (tristeza, raiva, alegre, surpresa e neutra), além de figuras geométricas simples como controle de estímulo. De um total de 184 neurônios registrados das regiões lateral e medial do pulvinar de dois macacos japoneses (Macaca fuscata), 22% respondiam a estímulos visuais. Os resultados indicam que 43,9% destes “neurônios visuais” responderam diferencialmente a expressões emocionais de faces. A latência das respostas neuronais no pulvinar variou largamente: o início de disparos para 16 neurônios (39,0%) ocorreu antes de 100 ms, ao passo que, para 13 neurônios (31,7%), ocorreu depois de 300 ms. Essa distribuição variada de latências sugere que os neurônios do pulvinar intermediam conexões intracorticais assim como uma via subcortical mais rápida para a AM. No segundo estudo, filhotes de macaco-prego (Cebus spp.) foram submetidos à lesão neurotóxica bilateral do colículo superior. O comportamento social deles foi avaliado no próprio viveiro (comportamento espontâneo), assim como em dois testes sociais: dominância social e interação com adultos estranhos. Eles também foram testados em um paradigma de conflito ameaça-recompensa em que uma recompensa (comida) foi apresentada junto com um estímulo de ameaça (modelo de serpente de borracha). Os resultados dos testes comportamentais sugerem que a lesão no colículo superior não altera os níveis de interação social. Entretanto os animais lesados mostraram uma clara desinibição comportamental em relação a serpente. Falta de inibição nesta tarefa foi observada até um ano após o primeiro teste. Esse duradouro déficit de reconhecimento de um predador natural é similar ao aspecto de docilidade da Síndrome de Klüver-Bucy e indica um papel importante do colículo superior no reconhecimento de ameaças. Em conjunto, os resultados dos dois estudos sugerem que a via colículo-pulvinar exerce um papel importante no processamento de estímulos relevantes para a sobrevivência, sejam pistas sociais e/ou estímulos de ameaça. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Defense mechanisms in primates rely on the fast recognition of potential predators and social cues of conspecifics such as facial expressions of emotions. The neural circuitry responsible for the detection of threat is generally thought to be centered on the amygdala. Although it is a pivotal structure in the processing of emotional stimuli, the amygdala does not seem necessary for the early stages of this process. Converging findings from several lines of investigation have been pointing to the colliculo-pulvinar pathway as a possible candidate to fill in this gap, especially during infancy. To evaluate the contribution of both structures (superior colliculus and pulvinar) to the processing of survival-relevant stimuli, the present work is divided into two studies. In the first study, we recorded single-unit activity of pulvinar neurons in two japanese monkeys (Macaca fuscata) during recognition of emotional faces in a delayed non-match-to-sample (DNMS) task, using human face stimuli with differing emotional expressions (sad, angry, happy, surprised and neutral) and simple geometric pattern control figures. From a total of 184 single neurons sampled from lateral and medial pulvinar, 22% were “visually responsive”. The results thus indicate that 43.9% of the visually responsive pulvinar neurons differentially responded to the emotional expressions of human faces. Response latencies of the pulvinar neurons to these facial stimuli ranged very widely; firing onsets for 16 (39.0%, 16/41) neurons were shorter than 100 ms, while for 13 (31.7%, 13/41) it was greater than 300 ms. This wide distribution of response latencies in pulvinar neurons suggests that pulvinar neurons might mediate intracortical connections as well as the fast subcortical pathway to the amygdala. In the second study, infant capuchin monkeys (Cebus spp.) were submitted to bilateral neurotoxic lesion of the superior colliculus. Their social behavior was analyzed in their home cage (spontaneous behavior) as well as in two social tests: social dominance and interaction with strange adults. They were also tested in a threat-reward conflict test where food reward was presented with a threatening stimulus (rubber snake). Results from social behavioral tests suggest that superior colliculus lesion does not affect spontaneous social interaction. Nevertheless, lesioned monkeys were uninhibited by a snake in a food-reward retrieval task. Lack of inhibition in the task was observed over the course of one year. The long lasting recognition impairment of a natural predator observed here is similar to the tameness aspects of Klüver–Bucy syndrome, indicating an important role of this structure in threat recognition. Taken together, results from both studies indicate that the colliculo-pulvinar pathway plays an important role in the processing of survival-relevant stimuli, either social cues and/or threatening stimuli.

O retinol (vitamina A) exerce papéis fundamentais na regulação de processos celulares, tais como crescimento, divisão e apoptose. Os efeitos do retinol em nível celular são classicamente atribuídos à ativação de receptores nucleares da família dos receptores esteróides, conhecidos como RAR e RXR. Esses receptores são ativados por diferentes isômeros do ácido retinóico, que é considerado o produto mais biologicamente ativo da metabolização do retinol. No entanto, trabalhos recentes vêm identificando que o retinol também exerce funções biológicas por mecanismos independentes da transcrição gênica pela ativação desses receptores. Esta ação não clássica vem sendo chamada como ação não-genômica da vitamina A, e o mecanismo pelo qual isto acontece ainda é desconhecido. Neste trabalho, nós propomos que o mecanismo de ação não-genômica da vitamina A é mediado pela ativação redox dependente de rotas de sinalização citoplasmáticas, tais como ERK1/2, c-Src e PKC. Este efeito redox dependente está associado à modulação do cálcio extracelular e afeta a regulação do ciclo celular e ativação enzimática pós-transcricional. / Retinol (vitamin A) exerts fundamental roles in the regulation of cell processes such as growth, cell division and apoptosis. The effects of retinol at cellular level are classically ascribed to gene transcription mediated by nuclear receptors from the family of the steroid receptors, known as RAR and RXR. These receptors are activated by different isomeric forms of retinoic acid, the main metabolite of retinol. However, recent works have identified non-classical actions by retinol, involving mechanisms independent of the RAR/RXRmediated gene transcription. These actions have been referred to as non-genomic actins of vitamin A, and the exact mechanism of these actions is still unknown. In the present work, we propose that the mechanism of non-genomic action by retinol involves the redoxdependent activation of cytoplasmic signaling pathways. This redox-dependent effect is associated to modulation of extracellular calcium and affects cell cycle regulation and posttranscriptional enzyme activation.

Um dos principais avanços da era pós-genômica consiste na possibilidade da análise da expressão global de genes pela tecnologia de microarranjos de DNA, a qual permite a investigação simultânea do perfil de transcrição de milhares de genes. Com os microarranjos, tornou-se possível comparar os padrões de expressão entre indivíduos de diferentes espécies, de diferentes órgãos/tecidos dentro de uma mesma espécie ou diferentes tecidos submetidos a várias situações e tratamentos e, ainda, analisar os genes de proteínas potencialmente reguladoras da transcrição, os fatores de transcrição. Uma etapa fundamental após a análise dos resultados dos microarranjos consiste na validação experimental dos dados de expressão gênica. Esta validação é realizada pela utilização da técnica de qRT-PCR (“Real Time Quantitative RT-PCR”) um método que, atualmente, apresenta maior sensibilidade e especificidade na análise de transcritos. A qRT-PCR necessita, entretanto, de normalização para uma leitura adequada dos dados. Essa normalização tornou-se bastante específica já que depende da disponibilidade de genes que apresentem transcritos com expressão uniforme em todas as células do organismo ou entre as espécies que estão sendo analisadas, bem como durante várias fases do desenvolvimento e sob diferentes condições ambientais. São os chamados genes-referência ou housekeeping. Entretanto, alguns trabalhos vêm constatando que os genes-referência utilizados na era prégenômica não apresentam expressão estável entre tecidos e genótipos e, por este motivo, não são adequados como controles em qRT-PCR. O objetivo desse trabalho foi investigar a estabilidade de expressão de genes constitutivos freqüentemente utilizados como controles internos em estudos de expressão gênica e selecionar novos genes-referência para Eucalyptus por meio de experimentos de qRT-PCR para a sua utilização na validação de experimentos de microarranjos do Projeto Genolyptus. Como resultados das análises de qRT-PCR, foi possível observar que para xilemas de E. globulus e xilemas e folhas maduras de E. grandis, os genes EuC12, At2g28390, EuC10, Histona H2B, Gliceraldeído- 3-fosfato-desidrogenase (GAPDH), EuC06 e EuC09 foram os que demonstraram, respectivamente, menor variação em suas expressões, caracterizando-se como constitutivos para estes tecidos. De acordo com os resultados encontrados nas análises com cDNAs derivados de folhas e xilemas de E. grandis, somente EuC12 e At2g28390 demonstraram invariabilidade de expressões entre os tecidos. Dois tradicionais genes constitutivos, Histona H2B e GAPDH, apresentaram uma variação considerável nas suas expressões entre os tecidos. Os genes selecionados, servirão como controles internos em todas as qRTPCRs subseqüentes nas avaliações de dados gerados pelos microarranjos de DNA para todos os demais genes sob análise no Projeto Genolyptus, e demais linhas de investigação de Eucalyptus. Paralelamente realizou-se, ainda, a seleção e análise de treze genes com expressão diferencial significativa entre tecidos vasculares das espécies de E. grandis e E. globulus. Estes foram selecionados com base nos resultados de microarranjos do Genolyptus e terão seus padrões de expressão analisados por qRT-PCR. / One of the most important advances of post-genomic era is the possibility of global gene expression analysis by DNA microarray technology, which allow verifying transcription profile for thousand genes simultaneously. Microarray allows comparing expression patterns among individuals from distinct species, from distinct organs/tissues within of the same specie or distinct tissues submitted across a wide range of developmental and environmental conditions, beyond genes of proteins mighty involved in transcriptional regulation, the transcription factors. A basic stage of microarray analysis is the experimental validation from gene expression data. This validation is carried out by the use of qRT-PCR (“Real Time Quantitative RT-PCR”) technique witch is the method that currently presents greater sensitivity and specificity in transcript analysis. However, qRTPCR needs normalization for an accurate data interpretation. This data normalization is specific since it depends on the availability of a gene which displays highly uniform expression in all organism cells, between species under analysis, during various phases of development and under different environmental conditions. They are known as reference or housekeeping genes. However, some studies come evidencing that reference genes normally used in pre-genomic era doesn’t show steady expression between tissues and genotypes and, for this reason, are not suitable as controls in qRT-PCR. The objective of this work was to investigate the expression stability of housekeeping genes often used as internal controls in genetic expression studies and select novel genes for Eucalyptus by qRT-PCR for its use in the validation of Genolyptus Project microarray experiments. As results it was possible to identified histone, EuC06, EuC09, EuC10, EuC12, At2g28390 and GAPDH as the most stably expressed genes between E. globulus xylems and E. grandis xylems and mature leafs, as well pointing them out as control genes for these tissues. In accordance with the results found in the analysis with cDNAs derived from E. grandis leaves and xylems, only EuC12 and At2g28390 had demonstrated expression invariability between tissues. We found out that two traditional housekeeping genes, Histone and GAPDH, shown a considerable expression variation between those tissues. According to our analysis the selected genes will serve as internal controls in all subsequent qRT-PCRs, in microarray data evaluation to other genes under investigation in Genolyptus Project as well as another research lines in Eucalyptus. At the same time, we selected and analyzed thirteen genes with significant differential expression between E. grandis and E. globulus vascular tissues. These had been selected on the basis of the results of Genolyptus microarrays. Their expression patterns will be analyzed by qRTPCR.

Em uma tentativa de definir uma bioassinatura especifíca para diagnóstico da tuberculose (TB) pulmonar, esse estudo avaliou os níveis de expressão gênica em pacientes com TB, pneumonia e asma (OPD), e também em pacientes infectados latentemente com M. tuberculosis, e em pacientes não infectados com o bacilo. Foram analisados genes alvos específicos previamente testados por Maertzrdorf el at. (2011) como uma bioassinatura que sugere a diferenciação de casos de TB pulmonar a casos de TB latente: CD64, FCGR1B, GZMA, GBP5 and LTF. Nesse estudo foram realizadas análises estatísticas randomForest para calcular a especificidade e a sensibilidade de cada combinação feita entre os genes CD64, GZMA e GBP5, visando discriminar a diferença de expressão gênica entre individuos com TB e OPD. Essa bioassinatura nos proporcionou uma especificidade de 92,6% e uma sensibilidade de 95,5% para TB (o reverso para OPD). Os genes GZMA e GBP5 mostraram um poder de discriminação entre os grupos com fator de importância de 18,5 e 26,3, respectivamente para TB, e de 19,2 e 17,4, respectivamente para OPD. O gene CD64 teve seu fator de importância para TB de 8,5 e para OPD de 3,3. Nosso estudo sugere que a criação de uma ferramenta diagnóstica utilizando a bioassinatura estudada pode ser uma forma de ajudar a área clínica a diferenciar TB de OPD, apoiando a possibilidade de começar a trabalhar em níveis protéicos, com a intenção de criar ferramentas de diagnóstico mais rápidas, acessíveis e precisas, seguindo as recomendações da OMS de reduzir a incidência da TB no mundo. / In this study, in an attempt to define a TB-specific biosignature for diagnostics, we evaluated gene expression in TB, pneumonia and asthma patients, as well as healthy donors with latent M. tuberculosis infection (LTBI) and healthy non-infected donors (NIDs). We decided to pursue a targeted approach utilizing a specific set of genes previously validated by Maertzdorf et al. 2011 as a biosignature to discriminate TB patients and LTBI subjects: CD64, FCGR1B, GZMA, GBP5 and LTF. Random forest analysis was applied to calculate the specificity and sensitivity of each gene combination of CD64, GZMA and GBP5 to discriminate between TB and OPD. The combination of the 3 genes gave the highest accuracy in identifying TB and OPD patients. This biosignature gave a specificity of 92.6% and a sensitivity of 95.5% for TB (reverse for OPD). GZMA and GBP5 showed the highest discriminating power with an importance factor of 18.5 and 26.3, respectively for TB, of 19.2 and 17.4, respectively for OPD, versus CD64 importance of 8.5 for TB and 3.3 for OPD. Our study suggest that the creation of a diagnostic tool using the studied biosignature may be a way to help physician’s to differentiate TB from OPD and support the possibility to start to work at protein levels, using this to create faster, cheaper and accurate tools to diagnosis TB and to follow WHO recommendations to reduce global burden of TB incidence worldwide.

Orientador : Laura Maria Mariscal Ottoboni / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-28T01:51:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bergamo_RogerioFaria_M.pdf: 6051631 bytes, checksum: 9711522de3b435ba4b70b90f01650401 (MD5) Previous issue date: 2001 / Mestrado