Orientador: Joaquim Mansano Garcia / Banca: Maria Angélica Miglino / Banca: Paula de Carvalho Papa / Banca: César Roberto Esper / Banca: Vera Fernanda Martins Hossepian de Lima / Resumo: Devido às elevadas perdas gestacionais verificadas nas fases embrionária e fetal, principalmente em animais produzidos in vitro (TN e/ou FIV), o presente trabalho avaliou, por RIE, a participação dos produtos secretados pelas BNCs na síntese in vitro de PGF2alfa pelas células BEND e constatou que o meio condicionado, na presença de PDBu, determinou o aumento da produção de PGF2alfa (de 435,84a para 1323,94b pg/mL; p<0,05), mas não na ausência de PDBu (19,01a; 15,08a; 16,83a e 23,10a pg/mL; respectivamente para MCSS; 1:25; 1:50 e 1:100; p<0,05), indicando a participação destes produtos na modulação da síntese de PGF2alfa, provavelmente na etapa da enzima PKC. A expressão gênica relativa de LP e VEGF foi avaliada pela técnica de PCR em tempo real, em placentas de animais TN e FIV, comparados a animais MN e, embora haja uma tendência de .down-regulation. para o VEGF (-1,41a e .0,72a; respectivamente para TN e FIV, p<0,05) não se verificou diferença na expressão entre os grupos. Quanto ao LP, também não foi verificada diferença na sua expressão, embora haja uma tendência numérica de .up-regulation. em TN (+0,11) e .down-regulation. em FIV (-3,18). Estes dados confirmam a capacidade de modulação de síntese de PGF2alfa pela BNC, bem como a não diferença na expressão gênica relativa de VEGF e LP em placentas de animais TN e FIV, quando comparados à MN. / Abstract: Due to the high pregnancy failures during foetal and embryo stages, mainly in in vitro produced-animals (by NT and/or IVF), this work evaluated the BNCs products on in vitro PGF2alpha synthesis, by RIA, from BEND cells and showed that the conditioned medium, with PDBu, increased the PGF2alpha synthesis (from 435.84a to 1323.94bpg/mL, p<0.05), but not without PDBu (19.01a; 15.08a; 16.83a and 23.10a pg/mL; respectively to MCSS; 1:25; 1:50 and 1:100; p<0.05), showing the function of these cellular products on PGF2alpha synthesis modulation, probably at PKC level. The PL and VEGF relative gene expression were evaluated, by Real Time PCR, in NT and IVF placentas, compared to AI placentas and, although there was a tendency for VEGF to be down-regulated (-1,41a and .0,72a; respectively to TN and IVF, p<0,05), no differences between groups were observed. In relation to LP gene expression, although there was a tendency for upregulation in NT group (+0.11) and down-regulation in IVF (-3.18), no statistical differences were shown also. These data shown the modulation capacity on PGF2alpha synthesis by BNC, as well the no differences on relative gene expression of VEGF and PL in NT and FIV placentas, when compared to IA placentas. / Doutor

Orientador: José Buratini Junior / Banca: Sony D. Bicudo / Banca: Roberto Sartori / Banca: Marcelo Nogueira / Banca: Valério Portela / Resumo: Vários membros da família dos fatores de crescimento fibroblásticos (FGFs) estão envolvidos na regulação da função ovariana. No entanto, uma pequena subfamília dos FGFs conhecida como Fatores Homólogos aos Fatores de Crescimento Fibroblásticos (FHFs) as quais são proteínas não secretadas, estão altamente expressas no desenvolvimento e maturação do sistema nervoso. Sabe-se que nos neurônios os FHFs se ligam a proteínas mediadoras da cascata MAP quinase e a canais de sódio voltagem-dependentes, mas suas funções fisiológicas precisam ser melhor elucidadas. Ainda não foi investigada a expressão dos FHFs em tecidos reprodutivos bovinos. O objetivo deste estudo foi avaliar a expressão do RNAm dos FHFs (FHF-1 a 4) e da proteína do FHF-2, em células da granulosa (CG), células da teca (CT) e corpos lúteos (CL) bovinos, e ainda determinar se a expressão do RNAm dos FHFs em CG cultivadas é regulada na presença de FSH e IGF-1. Para tanto, CG, CT e CL foram obtidos de ovários de abatedouro para a extração do RNA total. Dez CL de cada estágio (estágio 1: corpo hemorrágico; estágio 2: CL em desenvolvimento; estágio 3: CL maduro; estágio 4: CL em regressão) foram selecionados para a extração do RNA total. CG e CT foram dissecadas individualmente de folículos antrais >5mm e submetidas ao protocolo de extração de RNA total. Os folículos foram agrupados de acordo com o diâmetro (pequeno: 5-7mm; médio: 8-10mm; grande: >10mm) e estágio de desenvolvimento (saudáveis: >1; transicional: 0,01-1; atrésicos: <0,01). As concentrações de estradiol e progesterona foram mensuradas no fluido folicular por RIA. Para investigar a regulação da expressão do RNAm dos FHFs pelo FSH e IGF-1, CG de folículos de 2 a 5mm foram cultivadas em meio suplementado com FSH (0, 0,1, 1, 10 ou 100ng/ml) ou IGF-1 (0, 5, 10, 50 ou 100 ng/ml). A expressão do RNAm dos FHFs foi examinada... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Several members of the fibroblast growth factor (FGF) family are involved in the regulation of ovarian function. However, the small FGF subfamily encodes non-secreted proteins otherwise known as FGF homologous factors (FHF) that are mostly expressed in the developing and mature nervous system. It is known that within neurons, FHFs bind to MAPK scaffold proteins and to voltage-gated sodium channels, but their physiological functions need to be elucidated. FHFs have not been investigated in bovine reproductive tissues. The small FGF subfamily that encodes non-secreted proteins otherwise known as FGF homologous factors (FHFs) has not been investigated in bovine reproductive tissues. The aims of this study were to assess FHFs (1-4) mRNA and protein (FHF-2) expression in granulosa (GC), theca cells (TC) and corpora lutea (CL) from bovine ovaries and to determine if expression in GC is regulated by FSH and IGF-1. Antral follicles and corpora lutea were dissected from bovine ovaries obtained at a local abattoir for total RNA extraction. Ten CL from each of four developmental stages (stage 1, corpus hemorragicum; 2, developing CL; 3, mature CL; and 4, regressing CL) were selected for RNA extraction. TC and GC cells were dissected from individual antral follicles larger than 5mm and submitted to total RNA extraction. Follicles were grouped according to size (small: 5-7mm; medium: 8-10mm; large: bigger than 10mm) and health status based on the ratio between concentrations of estradiol and progesterone measured by RIA in the follicular fluid (healthy: higher than 1; transitional: 0.01-1; atretic: lower than 0.01). To investigate regulation of FHFs mRNA by FSH and IGF-1, GC from small follicles (2-5 mm) were placed into serum-free medium supplemented with insulin and bovine FSH (0, 0.1, 1, 10 or 100 ng/ml) or IGF-1 (0, 5, 10, 50 or 100 ng/ml). FHFs gene expression was... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Resumo: O subtipo Anemia Refrataria com Excesso de Blastos (AREB) representa cerca de 30% dos casos de Síndromes Mielodisplásicas (SMD). Os pacientes apresentam uma sobrevida media de poucos meses e risco alto de progressão para Leucemia Mielóide Aguda. As bases moleculares da doença não estão elucidadas. O objetivo do presente trabalho foi investigar a expressão gênica das células da medula óssea (MO) de pacientes com AREB. Foi gerada a primeira biblioteca SAGE de AREB, ao diagnostico, a partir de amostras de MO de seis pacientes. A comparação entre as bibliotecas AREB e normal evidenciou genes diferencialmente expressos. Cinco genes hipo-expressos, TXNIP, SGPL1, NUMB, FOXO e MSH2, e outros cinco hiper-expressos, MIF, RHOG, ICAM3, CHI3L1 e NOTCH1 foram selecionados para validação nas amostras coletadas ao diagnostico e dos mesmos pacientes após seis meses do diagnóstico, por PCR em tempo real. O padrão de expressão dos cinco genes hipo-expressos e dois hiper-expressos, MIF e RHOG foi confirmado, ao diagnostico, em 60% dos pacientes. Os genes NUMB e RHOG mostraram o mesmo padrão de expressão após seis meses de evoluçlão da doença, enquanto o gene. NOTCH1 apresentou hiper-expressão em duas amostras. Os dados aqui obtidos mostram que a criação da biblioteca SAGE de AREB permite o estudo de genes possivelemente envolvidos na origem e evolução da doença. As células da MO de pacientes com AREB apresentam um perfil de expressão gênica diferente das celulas de MO normal. Os genes TXNIP, SGPL1, NUM e, FOXO3, e MSH2, MIF e RHOG, estão hipo e hiper-expressos, respectivamente, ao diagnóstico. NUMB e RHOG mantêm seu padrão de expressão após seis meses, mas NOTCH1 parece aumentar sua expressão após este período.,Estes resultados devem ser confirmados em um número maior de amostras, no entanto, demonstram que a expressão alterada dos genes FOXO3, NUMB, SGPL1, TXNIP, MSH2... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The refractory anemia with excess blast (RAEB) subtype represents approximately 30% of Myelodysplastic Syndrome (MDS) cases. Patients with RABE have survival rates of a few months and a high risk for progression to acute myeloid leukemia. The molecular basis of the disease is not elucidated yet. This study aimed at analyzing the gene expression profile of bone marrow (BM) cells in patients with RAEB. We created the first SAGE library of RAEB at diagnosis using the BM cells of six patients. A comparison between RAEB and normal SAGE libraries show differentially expressed genes. Five under-expressed genes, TXNIP, SGPL1, NUMB, FOXO3 and MSH2 and five over-expressed genes, MIF, RHOG, ICAM3, CHI3L1 and NOTCH1, were selected for validation using real time PCR with samples collected at diagnosis and samples from the same patients collected six months after diagnosis. The pattern of expression of the five under-expressed genes and two overexpressed genes (MIF and RHOG) was validated at diagnosis in 60% of the patients. The NUMB and RHOG genes show the same expression pattern six months after diagnosis. NOTCH1 continued over-expressed in two samples six months after diagnosis. Our results show that the creation of the RAEB SAGE library allowed an analysis of genes passively involved in the genesis and progression of disease. BM cells from patients with REAB show a different gene expression profile to normal BM. The TXNIP, SGPL1, NUMB, FOXO3, and MSH2 genes are under-expressed and MIF and RHOG are over-expressed at diagnosis. NUMB and RHOG conserved their expression pattern six months after diagnosis and NOTHC1 gene increase its expression in this period. However, the results should be confirmed in studies with a larger number of cases with abnormal expressions for the FOXO3, NUMB, SGPL1, TXNIP, MSH2, MIF, RHOG and NOTCH1 genes. As these genes may play a role in the pathogenesis and progression... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Agnes Cristina Fett Conte / Coorientador: Wilson Araújo da Silva Júnior / Banca: Octávio Ricci Júnior / Banca: Andréia Machado Leopoldino / Banca: Andréa Regina Baptista Rossit / Banca: Luis Carlos de Mattos / Doutor

Orientador: Alberto Tsuyoshi Ikeda / Resumo: Neste trabalho realiza-se um estudo do samba de bumbo na Cidade de Pirapora do Bom Jesus, Estado de São Paulo, que, desde um estudo realizado por Mário de Andrade, na década de 1930, hoje considerado "clássico", vem sendo valorizado como expressão cultural popular singularmente paulista, típica mesmo. Partindo da análise sobre a sua história na cidade, procura-se apreender as principais re-significações pelas quais essa modalidade de samba vem passando dos dias atuai, bom como as funções simbólicas que encerra no contexto em que é produzido. Basca-se, sobretudo, aferir impiricamente, por meio da pesquisa de campo, quais são os significados que o samba assume enquanto representação de "autenticidade", ligada atualmente a atividades de mercantilização da cultura, adquirindo predominantemente dimensão enquanto artigo turístico na cidade de Pirapora. / Abstract: In this work is realizes a study about samba de bumbo (bumbo's samba) in the city of Pirapora do Bom Jesus, state of São Paulo, that since a study realized by Mário de Andrade, in the decade lof 1930 nowadays considered "classic", has been valued as a popular cultural expression particulary paulista, very typical. Starting the analisysis from the history's town, it is seached to seize the mainly re-meaning that this samba's form has been through these days, the slimpolic functions that endes in the context in which it is a produced. ILt seaches, especially, to asess empirically, by the resarch's field, what are the meanings that samba takes on as the "authenticity" representation at present linket to activities of culture's merchandising, acquiting predominant dimension as a touristic article in the ciy of Pirapora. / Mestre

Orientadora: Sonia Marli Zingaretti / Banca: Cristina Lacerda Soares Petrarolha Silva / Banca: Janete Apparecida Desidério Sena / Resumo: A seca é um dos principais fatores abióticos que afetam a produtividade das plantas. Para detectar os genes expressos sob condições de deficiência hídrica desenvolveu-se uma análise da expressão gênica das plantas de cana-de-açúcar de uma cultivar tolerante (cv. SP83-2847) e outra sensível (cv. SP90-1638) à seca, utilizando macroarranjos de DNA para monitorar a expressão gênica de 3.575 clones de folhas de cana-de-açúcar e, a partir dos resultados obtidos foram selecionados dois ESTs (SCJFLR2036B11 e SCBFLR1005E12) que se apresentaram como diferencialmente expressos nas duas cultivares. Os clones foram seqüenciados e identificados e correspondem ao gene que codifica para a Nitrilase e para elementos genéticos móveis (Retrotransposon). Os dados de expressão gênica foram validados por meio de RT-PCR semiquantitativo e Southem blotting e a seqüência de nucleotídeos obtida foi utilizada nas buscas em bancos de dados e na comparação de seqüência o que contribuiu para a atribuição de função biológica. O gene similar ao da Nitrilase apresentou-se induzido tanto na situação de deficiência hídrica no cultivar sensível (SP90-1638) como no cultivar tolerante (SP83-2847) nas plantas não expostas ao déficit hídrico. O gene que codifica um elemento genético móvel (Retrotransposon) apresentou-se induzido no cultivar tolerante na situação controle em detrimento da situação estressada e invariável para cultivá-Io sensível nas duas situações. / Abstract: Drought is one of the main abiotic stresses which aftect plant productivity. To detect genes expressed under drought conditions, a gene expression study of sugarcane plants was performed, with drought tolerant (cv. SP83-2847) and sensitive (cv. SP90-1638) cultivars, using DNA macroarrays to monitor gene expression of 3.575 sugarcane leaf clones, and from the obtained results two ESTs (SCJFLR2036811 and SC8FLR1005E12) identified as difterentially expressed in both cultivars. were selected. The clones were sequenced and identified as the gene which codifies Nitrilase and mobile genetic elements (Retrotransposon). Gene expression data were confirmed by Semiquantitative RT-PCR and Southern blotting analysis, and the obtained nucleotide sequence used in database searches and in sequence comparisons, which contributed for the biological function attribution. The gene similar to Nitrilase appeared to be induced under water deficiency in the sensitive cultivar (SP90¬ 1638) as well as in the tolerant cultivar (SP83-2847) in plants not submitted to water deficit. The gene which codifies a mobile genetic element (Retrotransposon) appeared to be induced in the tolerant cultivar under the controlled condition in detriment of the stress, and unchanged for the sensitive cultivar under both conditions. / Mestre

Orientador: Eduardo Kokubun / Banca: Eliete Luciano / Banca: Rosario Dominguez Crespo Hirata / Banca: Angelina Zanesco / Banca: Mario Hiroyuki Hirata / Resumo: Estudos experimentais revelam que uma baixa aptidão cardiorrespiratória (VO2máx) está associada a distúrbios moleculares e bioquímicas que influenciam a sensibilidade e a secreção de insulina. Contudo, não está bem definido se esta associação é confundida por fatores genéticos. Utilizando o modelo de controle de casos (gêmeos monozigóticos (MZ) discordantes) este estudo, de caráter transversal, avaliou 38 pares de gêmeos MZ com idade entre 11 a 18 anos, dos quais nove pares demonstraram diferença média intra-par para o VO2máx de 13,5±3,7 ml.kg-1.min-1 (30,6±9,5%). O objetivo foi investigar o impacto da discordância no VO2máx nas concentrações bioquímicas de glicose, insulina, lipídios, leptina, interleucina 6 e na expressão do mRNA dos genes SUR1, KIR6.2, IL6, LEPTINA e PPARg, independente de efeitos genéticos. Foram obtidas as medidas antropométricas de massa corporal, estatura, circunferência da cintura (CC) e espessuras de dobras cutâneas (EDC). Um teste de esforço máximo em esteira rolante com análise direta dos gases foi utilizado para a determinação do VO2máx e uma colheita de sangue em jejum e pós-carga de glicose (TOTG) para a realização de exames laboratoriais, extração dos genes e estimativa do índice HOMA-RI e HOMA-β. A expressão do mRNA dos genes foi quantificada e avaliada por RT-PCR enquanto as variáveis laboratoriais foram determinadas por kits específicos. Os resultados revelaram maior adiposidade corporal (soma de 6 EDC), índice HOMA (RI e β), concentração sanguínea de leptina, insulina em jejum e pós-carga (2 h) favorecendo as meninas, enquanto os meninos demonstraram maior VO2máx. Correlação negativa foi observada entre o VO2máx e os indicadores de obesidade (IMC, CC e adiposidade), índice HOMA (RI e β) e concentração sanguínea de leptina, insulina em jejum e pós-carga (2 h)... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Experimental studies have shown that low cardiorespiratory fitness (VO2max) is associated with molecular and biochemical disturbances that influence insulin sensitivity and secretion. However, it is not defined whether this association is confounded by genetic factors. Using the monozygotic co-twin case-control, this cross-sectional study evaluated 38 MZ twins pairs from 11 to 18 years of age, of which nine pairs presented a mean intrapair difference in VO2max of 13.5 ± 3.7 ml.kg-1.min-1 (30.6 ± 9.5%). The objective was to investigate the impact of the discordances of VO2max on biochemical concentrations of glucose, insulin, lipids, leptin, and interleukin 6, as well as in genes SUR1, Kir6.2, IL6, leptin and PPARgamma mRNA expression, independent of genetic effects. We obtained the anthropometric measures of body weight, height, waist circumference (WC) and skinfold thickness (ST). The maximal treadmill test with direct analysis of inhaled and exhaled gases was used for determination of VO2max, as well as fasting and oral glucose tolerance tests (OGTT) blood sample collections for laboratory analysis, gene extraction and estimation of HOMA-IR and HOMA-β indexes. mRNA genes expression was quantified and evaluated by RT-PCR, while laboratory variables were determined using specific kits. The results showed greater body adiposity (sum of 6 STs), HOMA (IR and β) indexes, blood leptin concentration and fasting and post load (2 h) insulin levels in girls, while boys showed greater VO2max. Negative correlation was found between VO2max and indicators of obesity (BMI, WC and fatness), HOMA (IR and β) indexes and blood leptin concentration and fasting and post load (2 h) insulin levels and positive correlation with PPARgamma gene expression. Regarding the discordant pairs, we observed that the co-twins with the highest VO2max values (45.9 ± 10.0 ml.kg-1.min-1) had significanty... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Ana Elizabete Silva / Banca: Claudia Regina Bonini Domingos / Banca: Dorotéia Rossi Silva Souza / Banca: Eny Maria Goloni Bertollo / Banca: Cláudia Aparecida Rainho / Resumo: A carcinogênese gástrica apresenta um modelo de múltiplas etapas, que pode iniciar a partir de uma gastrite crônica, frequentemente associada à infecção pela bactéria Helicobacter pylori, e progredir para atrofia gástrica, metaplasia intestinal, displasia e câncer gástrico. Outra via, trata do surgimento do câncer gástrico a partir de um sítio de úlcera péptica benigna. Há relatos de algumas alterações genéticas bem estabelecidas nos estágios iniciais e avançados da carcinogênese gástrica, mas em lesões benignas precursoras como a metaplasia intestinal e a úlcera gástrica, relativamente pouco é conhecido. Deste modo, estudos genéticos destas lesões poderão fornecer informações importantes sobre os eventos iniciais da carcinogênese do estômago e contribuir para estratégias de diagnóstico precoce e prevenção. A partir de dados da literatura foram selecionados genes envolvidos com a carcinogênese do estômago como TERT, COX-2, NOS2, HGF, MET, KRAS, TFF1 e CLDN18, que atuam na manutenção dos telômeros, processos celulares e proteção da mucosa gástrica. Diante do exposto, este trabalho teve por objetivos avaliar mudanças de expressão gênica e protéica destes genes selecionados, em metaplasia intestinal (MI - 37 casos) e úlcera gástrica (UG - 30 casos), comparadas com suas respectivas mucosas normais (MN) e com adenocarcinoma gástrico (CG - 22 casos) e verificar possíveis correlações entre a expressão destes genes nos três grupos estudados, bem como associações entre os níveis de expressão gênica e protéica e fatores como infecção pela H. pylori e tipo histológico de MI e CG. A expressão relativa do RNAm dos referidos genes foi analisada pela técnica de PCR em tempo real, enquanto a expressão das respectivas proteínas foi avaliada por imuno-histoquímica. A avaliação da expressão gênica revelou níveis médios relativos do RNAm... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Gastric carcinogenesis presents a model of multiple steps, which can be triggered by a chronic gastritis, often associated with infection caused by the bacterium Helicobacter pylori, and progress to gastric atrophy, intestinal metaplasia, dysplasia and gastric cancer. However, another pathway has attracted interest in recent decades and refers to origin of gastric cancer from one site of benign peptic ulcer. There are reports of some well-established genetic alterations in the early stages and advanced gastric carcinogenesis, however, in precursor benign lesions as intestinal metaplasia and gastric ulcer, relatively little is known. Thus, genetic studies of these lesions may provide important information regarding the initial events of carcinogenesis of the stomach and contribute to strategies for early diagnosis and prevention. The genes selected for this study TERT, COX-2, NOS2, HGF, MET, KRAS, TFF1 and CLDN18, act, usually, in cell cycle processes, telomere maintenance and protection of the gastric mucosa. So, this study aimed to evaluate changes in gene and protein expression of these genes, altered in intestinal metaplasia (IM- 37 cases) and gastric ulcer (GU- 30 cases), compared with their corresponding normal mucosa (NM) and gastric cancer (GC - 22 cases) and to verify possible correlations between the expressions of these genes among the three groups studied, and also examine associations between gene and protein expression levels and factors such as H. pylori infection and histological type of IM and GC. The relative mRNA expression of these genes was analyzed by real time PCR, while the expression of respective proteins was assessed by immunohistochemistry. Evaluation of gene expression showed mRNA relative mean levels, increased in GC compared to NM to TERT (17.3-fold), COX-2 (27.6-fold), NOS2 (12.8-fold), HGF (1.8-fold), MET (3.5-fold) and KRAS (1.7-fold). For TFF1, there was... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Lúcia Regina Ribeiro / Banca: Daniel Araki Ribeiro / Banca: Maria Izabel Souza Camargo / Resumo: A Nutrigenômica é definida como o efeito da dieta na expressão gênica, e a extensão pela qual as diferenças genéticas entre os indivíduos influenciam a resposta a um padrão específico de dieta, à ingestão de alimentos funcionais e à suplementação de micronutrientes, em termos de um resultado para a saúde humana. A α-tomatina é um glicoalcalóide encontrado no tomate (Lycopersicon esculentum) que possui funções biológicas importantes como a redução dos níveis de colesterol LDL, inibição do crescimento de células cancerosas, estimulação do sistema imune e efeito antimetastático. O objetivo deste estudo foi avaliar a citotoxicidade da α-tomatina, os seus efeitos na proliferação celular, na indução de apoptose e expressão de RNAm dos genes APC, Ciclina A2, Catenina, CASP9, BAK, BAX e BCL-XL em células HT29. As células foram cultivadas em meio de cultura DMEM, suplementado com 10% de soro bovino fetal, e tratadas nas concentrações de 0,1, 1 e 10 μg/mL para o ensaio do MTT e proliferação celular. Na análise de apoptose morfológica utilizou-se as concentrações de 0,1, 1 e 2 μg/mL. Já para a avaliação da expressão gênica utilizou-se a concentração de 1 μg/mL. Após 12 horas de tratamento, o RNA das células foi extraído e a expressão dos genes foi avaliada através do método de PCR em tempo real. O gene GPDH foi utilizado como normalizador. A análise estatística foi realizada por ANOVA/Tukey para o ensaio do MTT. Os resultados do ensaio de cinética de proliferação celular, viabilidade celular e avaliação da indução de apoptose foram analisados estatisticamente através de ANOVA/Dunnet, e para a análise da expressão gênica utilizou-se o método de Pfaffl et al. (2002), através do cálculo estimado pelo método ΔΔCt. Os estudos experimentais indicaram que a α-tomatina foi citotóxica apenas na concentração de 10 μg/mL... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Nutrigenomics is defined as the effect of diet on gene expression, and the extent to which genetic differences between individuals influence the response to a specific pattern of diet, intake of functional foods and micronutrient supplementation, in terms of a result for human health. The α- tomatine is highlighted as a glycoalkaloid found in tomato (Lycopersicon esculentum) that has important biological functions such as reducing levels of LDL cholesterol, inhibit cancer cell growth, stimulation of the immune system and antimetastátic effect. In view of these considerations, the objective of this study was to evaluate the cytotoxicity of α-tomatine, their effects on cell proliferation, induction of apoptosis and morphological expression of mRNA of APC gene, Cyclin A2, β-Catenin, CASP9, BAK, BAX and BCL-XL in HT29 cells. The cells were grown in DMEM culture medium supplemented with 10% fetal bovine serum, and treated at concentrations of 0.1, 1 and 10μg/mL for the MTT assay and cell proliferation. In the morphological analysis of apoptosis, we used concentrations of 0.1, 1 and 2μg/mL. As for the evaluation of gene expression we used a concentration of 1 mg/mL. After 12 hours of treatment, the RNA from cells was extracted and gene expression was evaluated by the method of real-time PCR. The gene GPDH was used as normalizer. Statistical analysis was performed by ANOVA / Tukey test for MTT. The test results of kinetics of cell proliferation, cell viability and assessment of apoptosis were analyzed with ANOVA / Dunnet, and for analysis of gene expression we used the method of Pfaffl et al. (2002), by calculating estimated by ΔΔCt. Experimental studies suggested that α-tomatine was cytotoxic only at concentration of 10μg/mL. In the evaluation of cell proliferation were no significant differences in the treatments with α-tomatine, except that for the concentration... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Resumo: Nesta pesquisa foi avaliado o metabolismo de dois genótipos de milho (Zea mays L.) ao estresse hídrico e a correlação entre o teor de compostos responsáveis pela a aclimatação à limitação hídrica desses genótipos na germinação e no estádio vegetativo. Foram instalados dois experimentos. Inicialmente, um ensaio de germinação foi montado com o objetivo de verificar a tolerância de dois genótipos de milho, DKB 390 e DAS 2B710 ao déficit hídrico e de quantificar a prolina e a trealose nos tecidos endospermático e embrionário com intuito de descrever as suas funções fisiológicas na germinação. O segundo avaliou o ajustamento osmótico através das respostas bioquímicas e fisiológicas e moleculares de dois híbridos de milho sob duas disponibilidades hídricas no solo, em um latossolo vermelho. A partir desses resultados, verificou-se a tolerância destes híbridos a seca nesse estádio e o reflexo da expressão relativa de genes relacionados à síntese de solutos compatíveis em reposta à limitação hídrica no solo / Abstract: The metabolism of maize genotypes (Zea mays L.) to soil water avaibility and the correlation between the content of compounds responsible for this acclimation to water limitation of these genotypes at the germination and the silking stage. Two experiments were carried out. First, the germination test was evaluated the tolerance of two genotypes of maize, DKB 390 and DAS 2B710 to water available and also to quantify the proline and trehalose in the endosperm and embryonary axis tissues with the aim of describe their physiological functions in germination. The second assay it was examined the osmotic adjustment through biochemical and physiological responses of two hybrids growing in two soil water availability. The results of that experiment, checking the degree of tolerance of these hybrids and the reflection of the gene expression related to synthesis of these compatible solutes in response to soil water availability / Orientador: Jairo Osvaldo Cazetta / Coorientador: José Frederico Centurion / Banca: Manuel Pedro Salema Fevereiro / Banca: Carlos Alberto Martinez Y. Huaman / Banca: Janete Aparecida Desidério / Banca: David Ariovaldo Banzatto / Doutor

Orientador: Hélio José Montassier / Banca: José Moacir Marin / Banca: Camillo Del Cistia Andrade / Resumo: A glicoproteína S1 do vírus da broquite infecciosa (VBI) além de ser altamente variável é responsável pela adsorção com os receptores das células hospedeiras e pela indução de anticorpos vírus-neutralizantes e inibidores da hemaglutinação em galinhas. A disponibilidade desse tipo de proteína pode contribuir com o imunodiagnóstico e com a imunoprofilaxia da bronquite infecciosa aviária. O presente estudo foi conduzido com a finalidade de fazer a clonagem e a expressão do gene da glicoproteína S1 derivada da estirpe M41 do VBI no sistema constituído pelo vetor pFLDa - Picchia pastoris. O cDNA completo do gene S1 foi preparado a partir do RNA extraído do líquido alantóide infectado com a estirpe M41 do VBI e o amplicon obtido pela PCR foi clonado no vetor de expressão pFLDa. O plasmídeo foi linearizado e usado na transformação da linhagem GS115 de Picchia pastoris por eletroporação. Foi avaliada a influência da composição do meio de cultura sobre a produção de biomassa e a expressão da proteína recombinante S1 durante a fase de indução. A produção da proteína S1 recombinante foi detectada somente no compartimento intracelular, embora o vetor pFLDa seja capaz de direcionar a síntese de uma proteína heteróloga para a via secretora. A proteína recombinante foi caracterizada imunoquimicamente como uma banda de aproximadamente 90 kDa e com reatividade específica para os anticorpos monoclonais anti-polihistidina. Concluindo, o sistema hospedeiro de células da levedura P. pastoris com o vetor pFLDa usado nesse estudo comprovou ser um método eficaz para a produção no compartimento intracelular da proteína recombinante S1 da estirpe M41 do VBI, com potencial para futura utilização em técnicas de imuno-diagnóstico da bronquite infecciosa aviária. / Abstract: The glycoprotein (S1) of infectious bronchitis virus (IBV) has been shown to be highly variable and responsible for attachment to the receptor in host cellular membrane, induction of neutralizing and haemagglutination-inhibiting antibodies in chickens. Thus, the availability of such protein can contribute to the immuno-diagnosis and immunoprofilaxis of avian infectious bronchitis. The present study was carried out aiming to clone and to express the gene of S1 glycoprotein from M41 strain fo IBV in the system constituted by pFLDa vector - Picchia pastoris. Full length cDNA of IBV S1 glycoprotein was prepared from RNA extracted from infected allantoic fluid and the amplicon generated by PCR was cloned into yeast expression vector pFLDa to construct the plasmid of pFLDa - S1 - IBV. This plasmid was linearized and then transformed in Picchia pastoris GS115 by electroporation. The recombinant yeast clones were cultivated and selected. The influence of media composition on biomass and in the production of recombinant S1 during induction phase was studied. The production of recombinant S1 protein was detected only in the intra-cellular compartment, though the pFLDa vector would direct the synthesis for the secretor pathway. The recombinant protein was characterized by SDS-PAGE and Western-Blotting as a band of a molecular weight of approximately 90 kDa with specific reactivity against anti-Histidina monoclonal antibodies. The use of complex media promotes an increase in biomass, but no soluble S1 recombinant protein was produced. Concluding, the yeast system composed by pFLDa - P. pastoris was efficient to express intra-cellularly the recombinant S1 protein of M41 strain of IBV which has a potential to be used in the immuno-diagnosis of avian infectious bronchitis. / Mestre