The diversity of functional roles played by heme proteins in all kingdoms of life is to a large extent regulated by the thermodynamic and kinetic properties of their interaction with small gaseous molecules. The aim of this PhD thesis is to examine the structural and dynamical properties of two hemeproteins, the truncated hemoglobin N from M. Tuberculosis and nitrophorin 7 from R. Proxilus, and to examine their relationships with the biological role of these proteins. Particular attention has been paid to the diffusion of small ligands between the internal cavities in the two hemeproteins, and the entry/release pathways from the protein matrix to the solvent. Qualitative and semi-quantitative agreements between experiment and simulations are obtained for the identities of the cavities that physically trap the ligand and for the connections between them. The truncated hemoglobin N (trHbN) is believed to constitute a defense mechanism of M. Tuberculosis against NO produced by the macrophages during the initial growth infection stage, which is converted to the harmless nitrate anion, through the chemical reaction NO+ FE(II)-O2 ->FE(III)+ [NO3]-. The dual path ligand-dependent mechanism proposed in previous studies of the group ensures the access of NO to the heme cavity in the oxygenated form of the protein, which should warrant survival of the microorganism under stress conditions and allowing the bacillus to stay in latency. As a consequence, the processes mediated by trHbN are worth for searching a therapeutical intervention, since the inactivation of the NO scavenging should reduce significantly the bacteria resistance. In this work we have validated the importance of the PheE15 residue in the previous proposed dual path mechanism, as PheE15 was proposed to act as a gate that regulates the access of NO to the heme cavity in the oxygenated form of the protein. Thus, we have studied the impact of three residue mutations of the gate residue, PheE15Ala, PheE15Ile and PheE15Tyr, in the ligand migration mechanism and in the NO detoxification activity. The results support the gating role played by PheE15, because all the mutations are predicted to either block the long branch of the tunnel (PheE15Ile, PheE15Tyr) or to induce structural alterations that affect the passage of NO at the entrance of the tunnel (PheE15Ala). After release of the NO3- anion, the protein, which rests in its ferric form, is assumed to be recycled by a putative reductase, rendering trHbN in the ferrous form suitable to bind a new O2 molecule, thus ensuring an efficient detoxification mechanism. In order to gain insight into the reduction process, we have examined the interaction between trHbN and a flavodocin reductase (FdR) from E. Coli, which has shown to be very efficient in restoring the ferrous form of the protein. Thus, our studies have yielded a 3D model of the complex between trHbN and FdR, which allows to identify the residues implicated in the binding of the two proteins. Moreover, the model predicts that the heme and flavin cofactors are close (between 6 and 9 Å) in the complex, which facilitates an efficient electron transfer, as reinforced by the calculated electron couplings. Nitrophorin 7 is a hemeprotein implicated in the NO transport, which can be found in the saliva of blood feeding insects. One of the bugs, Rhodnius prolixus, is the causative agent of Chagas disease, and is responsible for a high number of deaths (approximately 15000 each year). Among the nitrophorin family, we have examined nitrophorin 7, which presents three extra residues in N-terminal sequence and the unique ability to bind membranes negatively charged. The results point out the existence of up to three inner cavities, which may define an internal pathway for migration of a gaseous ligand (NO) from the heme to the back of the protein. This topological feature is not present in other nitrphorins, such as NP4, and justifies a more complex kinetic rebinding scheme in NP7. In conjunction with the ability to interact with membranes, these findings might support a specific role in NO-controlled release. Both projects are carried out in closed collaboration with experimental groups, and we believe that in the future such collaborations will allow the development of new strategies with therapeutically implications in these diseases. / El proyecto a desarrollar se centrará en los aspectos dinámicos del transporte de ligandos en hemoproteínas, centrándose en dos tipos principales. Por un lado la hemoglobina truncada N de Mycobacterium tuberculosis, y por otro nitroforina. La hemoglobina truncada N desempeña un papel muy importante como mecanismo de defensa del microorganismo, pues transforma el óxido nítrico (NO) generado por los macrófagos durante las etapas iniciales de respuesta a la infección en anión nitrato. Ello, pues, permite la subsistencia del microorganismo, que permanece en estado de latencia, dificultando la recuperación del paciente de tuberculosis. En consecuencia, dicha proteína aparece como una diana de potencial valor terapéutico, puesto que su inactivación debería reducir significativamente la resistencia del microorganismo. Los estudios del Prof. Luque han perseguido dilucidar los aspectos moleculares que subyacen en la capacidad de la proteína de captar O2 y NO, y de llevar a cabo la reacción química de conversión a nitrato. En particular, se ha propuesto un mecanismo de transporte de ligandos, y el objetivo que se plantea es su validación mediante el examen de diversos mutantes obtenidos al modificar el residuo que controla la migración a través del canal. En cuanto a nitroforina, es una hemoproteína transportadora de NO que se halla en la saliva de insectos cuya alimentación se basa en sangre. Uno de ellos, Rhodnius prolixus, está implicado en la enfermedad de Chagas, que causa un número elevado de muertes (aproximadamente 15000 por año). De entre los diversos tipos de nitroforinas, nuestro interés se centra en nitroforina 7 (NP7), que difiere en el extremo N-terminal respecto a otras nitroforinas. El objetivo del trabajo se centra en determinar el efecto de dichas diferencias sobre la capacidad de captación y transporte de NO. En ambos casos, los proyectos se llevan a cabo en colaboración con grupos experimentales, y confiamos que dicha colaboración permita abrir estrategias de intervención terapéutica.

L’estabilometria és una de les tècniques utilitzades per la valoració del control postural. Els registres obtinguts, actualment, només són comparables amb els dels intervals de normalitat establerts per l’Associació francesa de posturologia (AFP), l’any 1985. Pel que fa als intervals establerts, la població no es diferenciava en franges d’edat ni per sexe. Per altra banda, tampoc es van establir les normes per altres variables com ara les d’estabilometria màximes, mínimes i en amplituds, tant en el pla frontal com en el sagitat. Pel que fa a aquests intervals, es varen determinar amb estimacions puntuals i no pel propi comportament de les diferents variables estabilomètriques segons el temps finit de registre. Per aquest motiu juntament amb l’avanç tecnològic experimentat, tant pel que fa a les plataformes com a les diferents tècniques d’anàlisi funcional de les dades (FDA), es va proposar aquest estudi en el que s’establissin les corbes patró de comportament, que indiquessin la normalitat en els registres estabilomètrics estàtics, per als individus sans, amb una edat de 18 a 65 anys, i per a les diferents variables estabilomètriques. Es van seleccionar 177 individus voluntaris. Per a cada un d’ells es van realitzar 3 repeticions dels registres, amb una plataforma estabilomètrica en situació estàtica, amb ulls oberts i ulls tancats. Es van analitzar els resultats segons les diferents tècniques de FDA (tècniques de suavitzat, B-splines, bootstrap i anàlisi de components principals en aquest cas), establint tres tipus de corbes patró de comportament segons el tipus de variable estabilomètrica. Per una banda trobem les variables posicionals amb una corba patró aplanada, una altra corba patró per a les variables de longitud en les que aquesta augmenta de forma quasi-lineal i una tercera per a les variables estabilomètriques d’amplitud així com els seus respectius màxims i mínims, en què observem una corba entre els 10 i els 20 primers segons amb molta pendent i a partir d’aquí una tendència a aplanar-se. Destaquem que no trobem diferencies estadísticament significatives (p-valor=0.000) entre les corbes patró de comportament entre homes i dones, a excepció de la variable d’estabilometria en amplitud, pel que fa al pla sagital en el cas de les dones. El coeficient de determinació R2, va anar de 29.65% a 46.59%, la qual cosa ens està informant que l’edat no va ser una variable que expliqui en gran mesura el comportament de les corbes, és a dir, la bondat d’ajust de la corba de regressió considerant com a variable explicativa l’edat va ser baixa, en tots els casos, però sobretot per l’amplitud en X ulls oberts, amplitud en Y en ulls oberts, i la Y mínima. Per altra banda en relació a la variable Xm en el grup d’edat de 18 a 35 anys destacar que la mitjana, tant en ulls oberts (OA) com en ulls tancats (OC), amb un valor de 3.64±5.53 i 3.47±6.20 respectivament, es va allunyar bastant dels valors obtinguts per als altres grups d’edat, així com de la mitjana global d’aquesta variable en la condició amb OA i OC, amb uns valor de 1.51±6.35 i de 1.38±6.58 respectivament. Finalment destacar que si existeixen les corbes patró de comportament estabilomètric per a cada una de les variables estabilomètriques pels individus sans amb una edat 18 a 65 anys, agrupant-les en tres tipus diferenciades segons la tipologia de variable.

La presente tesis doctoral es un estudio de casos en el marco de investigación de procesos y resultado en psicoterapia. El objetivo fue determinar indicadores de procesos asociados a éxito o fracaso terapéutico usando datos textuales obtenidos en la práctica clínica naturalística. Los resultados se obtuvieron a través de técnicas de análisis mixtas: cualitativas y cuantitativas. La forma de selección de los casos correspondió a un muestreo por accesibilidad. Muestra de tres pacientes adultos con diagnósticos del espectro ansioso y no psicótico. Los procesos fueron video-grabados y transcritos en su totalidad. Dos casos fueron exitosos y uno no exitoso, considerando diversos criterios. En primer lugar, se realizó una codificación cualitativa en base a la Pauta de Reconstrucción de Malestar Psicológico (RMPS). Para ello se efectuó una codificación multiaxial que fue aplicada a los turnos del paciente en las sesiones seleccionadas. Se generaron un total de 16 variables, y de ellas, se seleccionaron con criterio clínico 5 variables, denominadas: Información Novedosa (I.N), Afrontamiento (AF), Sentido de Sí Mismo y Tiempo Fluido (S-TF), Procesos de Mentalización (P.M) y Narrativa Reflexiva (N.R). En segundo lugar, se aplicaron dos análisis estadísticos de tipo cuantitativo: análisis de contenido y un análisis multivariado de tipo Biplot. El análisis de contenido en los casos exitosos muestra que las cinco variables de criterio clínico presentan indicadores positivos; en cambio, en el caso no exitoso hay tres variables que únicamente presentan indicadores negativos. Estas variables son: IN, N.R, S-TF, con frecuencia igual a 0. Finalmente, aparece una evidente diferencia en el comportamiento de las variables para los casos exitosos y no exitosos. En los dos casos exitosos las variables analizadas muestran una misma tendencia hacia el bienestar psicológico. En cambio, en el caso no exitoso las variables muestran no remisión de síntomas y signos. El análisis de Biplot permitió identificar un patrón diferencial de asociaciones de variables entre los casos. Se plantearon dos distinciones llamadas eje horizontal y vertical. En primer lugar, el eje horizontal (dimensión de efectividad) muestra atributos asociados a resultado exitoso y no exitoso. Indica para los casos exitosos mayores frecuencias de atributos positivos ligados a bienestar psicológico. En cambio, para el caso no exitoso muestra mayores frecuencias de atributos negativos asociados a malestar psicológico. En segundo lugar, nos permite distinguir las diferencias individuales en los casos exitosos que logran el bienestar psicológico pero con matices particulares. El eje vertical (perfil de diferencias individuales de éxito terapéutico) se interpretó para los dos casos exitosos desde dos distinciones: específica y general. 1º) Desde un punto de vista específico se observó que en el primer caso (1+) destaca la variable Narrativa Reflexiva Positiva. En el segundo caso (2+) aparecen las siguientes variables asociadas: Información Novedosa Positiva, Sentido de Sí Mismo y Tiempo Fluido Positivo, Afrontamiento Positivo. 2º) Desde un punto de vista general, la variable Procesos de Mentalización Positivo aparece como un factor común asociado a ambos casos exitosos. En cambio, para el caso no exitoso, no se hizo necesario aplicar la distinción: específica y general, ya que se observan asociadas las cinco variables con atributos negativos. Igualmente, se observa ausencia de variables con atributos positivos asociadas, lo que indica ausencia de bienestar psicológico. Por último, se propone para la práctica clínica un modelo de formulación de caso fundada en datos textuales. / This doctoral thesis analyzes case studies within the research framework of processes and results in psychotherapy. The main objective was to determine indicators of processes associated with therapeutic success or failure using textual data obtained from naturalistic clinical practice. The results were obtained via mixed analysis techniques, both qualitative and quantitative. Selection of cases was done via accessibility sampling. A sample of three adult patients diagnosed with non-psychotic anxiety was used. These processes were video-recorded and fully transcribed. Two cases were successful and one unsuccessful, based on various criteria. Firstly, qualitative codification based on the Psychological Distress Reconstruction Pattern (RMPS) was carried out. For this, multiaxial codification was applied to selected sessions of the patient. 16 variables were generated, and of them 5 variables were selected with clinical criteria, denominated: New Information (IN), Coping (AF), Sense of Self and Fluid Time (S-TF), Mentalization Processes (PM) and Reflexive Narrative (NR). Secondly, two types of quantitative statistical analyses were applied: content analysis and multivariate Biplot analysis. Content analysis in the successful cases showed that the five clinical criteria gave positive indicators; on the contrary, in the unsuccessful case, there were three variables that produced only negative indicators. These variables were: IN, N.R, S-TF, with a frequency equal to 0. Finally, there was a clear difference in the behaviour of variables in the successful and unsuccessful cases. In both successful cases, analysed variables displayed the same trend towards psychological well-being. In contrast, in the unsuccessful case the variables showed no remission of signs and symptoms. The Biplot analysis identified a differential pattern of variable associations between cases. Two distinctions were made, known as horizontal and vertical axes. Firstly, the horizontal axis (efficiency dimension) showed attributes associated with successful and unsuccessful results. This revealed greater frequency of positive attributes linked to psychological well-being for the successful cases. In contrast, in the unsuccessful case, there was greater frequency of the negative attributes associated with psychological distress. Secondly, we were able to distinguish individual differences in the successful cases that achieved psychological well-being, but with particularities. The vertical axis (profile of individual differences in therapeutic success) was interpreted for both successful cases from two standpoints: specific and general. 1º) From the specific standpoint, in the first case (1+) a Positive Reflexive Narrative was marked. In the second case (2+), the following variables were noteworthy: Positive New Information, Positive Sense of Self and Fluid Time, Positive Coping. 2º) From the general point of view, the variable of Positive Mentalizaiton Processes was a common factor in both successful cases. In contrast, for the unsuccessful case, there was no need to make the specific/general distinction, given that all five variables were negative. Moreover, there was an absence of the positive variables that indicate psychological well-being. Lastly, a case formulation model based on textual data is proposed for clinical practice.

El análisis del aceite esencial de las raíces y rizoma de Ferula hermonis Boiss. (Apiaceae) por GC-FID, GC-MS y 13C-RMN ha permitido la identificación de 79 constituyentes, que representan más del 90% del total de la muestra. El componente mayoritario es el α-pineno (43,3%), seguido de α-bisabolol (11,1%) y un compuesto acetilénico inusual, 3,5-nonadiino (4,4%). La actividad antifúngica del aceite esencial, antes y después de su fraccionamiento por cromatografía en columna, se ha ensayado frente a diversas levaduras y hongos filamentosos y dermatofitos. La purificación de las fracciones activas ha proporcionado 3,5-nonadiino, α-bisabolol, angelato de jaeschkeanadiol, óxido de α-bisabolol B y trans- verbenol, así como dos fracciones purificadas: una de ellas (JB73) con 73% de benzoato de jaeschkeanadiol y la otra con 50% de espatulenol. La determinación de los valores de CMI y CMF de todos estos productos ha evidenciado una potente actividad antifúngica para JB73 y 3,5-nonadiino. En particular, frente al dermatofito Tricophyton mentagrophytes, los valores CMI y CMF han sido de 0,25 μg/mL para JB73 y de 8 μg/mL para el 3,5-nonadiino, siendo el primero más activo que los fármacos de referencia, anfotericina B y nistatina. Por otro lado, la actividad antifúngica de los extractos hexánico, diclorometánico, metanólico y acuoso de las raíces y rizoma de Ferula hermonis Boiss. se ha ensayado in vitro mediante el método del antifungigrama frente a un panel de hongos oportunistas patógenos humanos. Entre ellos, los extractos hexánico y diclorometánico han mostrado la mayor actividad, en particular, frente a los dermatofitos Microsporum gypseum y Tricophyton mentagrophytes, así como frente a la levadura Candida lactis-condensi. El fraccionamiento biodirigido de ambos extractos, utilizando el método de la bioautografía, ha conducido al aislamiento de dos compuestos con actividad antifúngica que han sido identificados como p-hidroxibenzoato de jaeschkeanadiol (ferutinina) y benzoato de jaeschkeanadiol (teferidina), dos ésteres sesquiterpénicos derivados del daucano. La determinación de los valores de CMI y CMF de ambos compuestos ha evidenciado una actividad antifúngica más potente para la ferutinina que para la teferidina. Particularmente, T. mentagrophytes ha resultado ser la cepa más sensible con valores de CMI y CMF comprendidos entre 8 y 256 μg/mL. / The analysis of the essential oil from rhizome and roots of Ferula hermonis Boiss. (Apiaceae) by GC–FID, GC–MS and 13C NMR allowed the identification of 79 constituents, more than 90% of the oil, the major one being a-pinene (43.3%), followed by α-bisabolol (11.1%) and the unusual acetylenic compound 3,5-nonadiyne (4.4%). The antifungal activity of the essential oil before and after fractionation was assayed against several yeasts and filamentous fungi. Purification of the active fractions afforded 3,5-nonadiyne, a-bisabolol, jaeschkeanadiol angelate, α-bisabolol oxide B and trans-verbenol, as well as two purified fractions, one of them (JB73) with 73% of jaeschkeanadiol benzoate and the other with 50% of spathulenol. Determination of MIC and MFC values of all these products evidenced strong antifungal activities for JB73 and 3,5-nonadiyne. Particularly, against the dermatophyte Tricophyton mentagrophytes, MIC and MFC values were 0.25 μg/ml for JB73, and 8 μlg/ml for 3,5-nonadiyne, the former being more active than amphotericin B and nystatin. On the other hand, the antifungal activity of hexane, dichloromethane, methanol and aqueous extracts from the rhizome and root of Ferula hermonis was assayed in vitro by the agar disk diffusion method against a panel of human opportunistic and pathogenic fungi. Among them, the hexane and dichloromethane extracts showed the highest activity particularly against the dermatophytes Microsporum gypseum and Tricophyton mentagrophytes as well as the yeast Candida lactis-condensi. Activity-guided fractionation of both extracts using an agar overlay bioautographic method led to the isolation of two antifungal compounds which were identified as the daucane aryl esters jaeschkeanadiol p-hydroxybenzoate (ferutinin) and jaeschkeanadiol benzoate (teferidin). Determination of minimal inhibitory concentration (MIC) and minimal fungicidal concentration (MFC) values of both compounds evidenced a stronger antifungal activity for ferutinin than for teferidin. Particularly, T. mentagrophytes was the most sensitive strain with MIC and MFC values ranging from 8 to 256 μg/mL.

Tesi realitzada a l'Institut de Química Avançada de Catalunya (IQAC-CSIC) / The O6-alkylguanine DNA alkyltransferase (hAGT or MGMT) is a DNA repair protein in charge of removing alkyl adducts from the O6 position of guanines, blocking their cytotoxic effects and playing an important role as a resistance mechanism to chemotherapy in cancer patients. For these reasons, it is considered relevant as a prognosis marker of cancer and represents a potential therapeutic target. Intense research efforts have been devoted to the identification of small molecules capable of inhibiting hAGT activity and enhancing the cytotoxic effect of the alkylating agents in tumour cells. In this doctoral thesis, we have explored 10 compounds with potential inhibitory activity against hAGT. The analysis by mass spectrometry (ESI-MS) confirmed the complex formation of hAGT with 5 of them (compounds 5, 6, 7, 8 and 9). MTT cytotoxicity studies in cell culture showed that 2 compounds (5 and 8) were non-toxic and showed enhancement of carmustine toxicity. This compounds were further analysed by colony formation assays, which confirmed that compound 8 was non-toxic at long-term experiments and exhibited a stimulation effect of carmustine. Compound 8 seem to be the best candidates for hAGT inhibition, as it forms a complex with hAGT and it enhances BCNU without being toxic in MTT and colony formation assays. Due to the lack of a consistent in vitro assay for the activity of hAGT, we have devoted part of this doctoral thesis to the search of bio and nanotechnologies to detect hAGT activity which enable the evaluation of potential inhibitors of the protein. Chapter 2 describes the development of a new fluorescence method using the conformational change of a DNA Gquadruplex, the thrombin binding aptamer (TBA), as a molecular beacon for the detection of hAGT activity and the development of new inhibitor compounds. The conformational change of TBA is further explored to develop a detection platform on DNA origami which allows de quantification of the repair activity of hAGT on a single molecules basis, through the direct visualization by AFM of the interaction of TBA-thrombin when its G-quadruplex structure is restored. In addition, this work reports the synthesis of guanine derivatives modified at position 6 and properly functionalized for their incorporation into double stranded oligonucleotides that are used for the development of another novel fluorescence methodology to evaluate hAGT activity and to assess potential inhibitors as enhancers of chemotherapy. Finally, during a short stay in the University of Milan, we have developed a new sensor to detect a methylation in TBA using three types of nanoparticles: AuNPs, SPIONs and AuSPIONs. AuSPIONs combine the features of the gold coating and the magnetic core, and exhibit similar performance as AuNPs and SPIONs in UV, DLS and MRI assays to detect thrombin and a single methylation in TBA. Ths results provide the basis for the development of a new straightforward method to study hAGT activity and to evaluate potential inhibitors. / La proteïna de reparació de l’ADN alquilguanina-ADN-O6-alquiltransferasa (hAGT) elimina productes d'alquilació en la posició O6 de les guanines, bloquejant la citotoxicitat dels agents alquilants i produint resistència a la quimioteràpia. Es considera rellevant com a marcador de pronòstic en càncer i representa una potencial diana terapèutica. L’objectiu a llarg termini d’aquesta tesi doctoral és trobar inhibidors de l’activitat d’hAGT per millorar l'efecte de la quimioteràpia en pacients amb càncer. En primer lloc, es va avaluar la capacitat de 10 compostos, potencials inhibidors d’h!GT, de formar un complexe amb hAGT utilitzant espectrometria de masses, i es va estudiar la seva toxicitat en cultius cel·lulars a través d'assajos de MTT i de formació de colònies. A continuació, es desenvolupen diferents mètodes per a la detecció de l’activitat d’hAGT, per a avaluar els potencials inhibidors d’aquesta proteïna in vitro. Dos d’aquests mètodes utilitzen el canvi conformacional que es produeix en l’aptàmer d’unió a la trombina (TBA) en introduir una O6-metilguanina, substracte d’hAGT, en una de les seves tètrades centrals. En el primer mètode es va emprar el TBA per generar un sensor de fluorescència incorporant un fluoròfor i un inhibidor de fluorescència a cadascun dels seus extrems. Aquest sensor permet la detecció de la disminució en la fluorescència deguda al canvi conformacional del TBA produït per l’activitat d’hAGT. Posteriorment, el canvi conformacional del TBA va permetre dissenyar un biosensor de l'activitat d'hAGT a nivell unimolecular sobre la superficie d’un origami d'ADN. La interacció del TBA amb la seva proteïna diana, l’alfa-trombina, es va seguir per AFM per detectar que l’estructura de G-quàdruplex metilada es restableix per la reparació d’hAGT. El tercer mètode es basa en la transferència de fluorescència al centre actiu d’h!GT degut a la reparació d’un oligonucleòtid que conté una guanina modificada amb un grup alquil marcat amb un fluoròfor. Amb aquest objectiu, es va portar a terme la síntesi química d’aquesta guanina modificada. En el marc d’una estada en la Universitat de Milà, es descriu l’estudi de nanopartícules funcionalitzades amb TBAs per a detectar una metilació en una guanina utilitzant espectroscòpia d’UV, DLS o MRI, amb l’objectiu de desenvolupar un nou assaig de l’activitat reparadora d’ADN d’h!GT.

Els estudis d'utilització de medicaments permeten identificar els patrons d'ús dels medicaments en diferents poblacions, ja siguin adults o nens. Un aspecte és l’anàlisi de l’ús de medicaments en condicions diferents a les autoritzades a la fitxa tècnica. Aquesta tesi és una anàlisi de diferents aspectes de l’ús de medicaments en condicions no aprovades després que es publiqués el Reial Decret 1015/2009 del 19 de juny pel qual es regula la disponibilitat de medicaments en diferents situacions especials (entre les quals hi ha l’ús en condicions no aprovades), i s’establís una normativa de l'Institut Català de la Salut (ICS), amb uns procediments estandarditzats de treball per revisar, avaluar i registrar l'ús de medicaments en les situacions especials. En la publicació Medicina Clínica 2014;143:327-9, es descriuen els medicaments utilitzats en condicions no aprovades i les indicacions en les que s'utilitzen a dos hospitals de tercer nivell durant els tres anys posteriors a la publicació del Reial Decret. Es van rebre 671 sol·licituds de 117 medicaments o combinacions per a ser emprats en aquestes condicions. Els subgrups més sol·licitats van ser antineoplàstics, immunosupressors i relaxants musculars, i els fàrmacs més freqüents van ser rituximab (170 sol·licituds), toxina botulínica (81), omalizumab (39) i anakinra (21). Les principals malalties van ser neoplàstiques, del sistema nerviós i òrgans dels sentits i de l’aparell digestiu. En la publicació European Journal of Clinical Pharmacology 2014;70:1385-93 s’analitzen les indicacions d'ús, els resultats clínics (resposta clínica i tolerabilitat de la medicació) i els resultats econòmics (cost total i per pacient) de l'ús dels medicaments en condicions no aprovades en cinc hospitals de l'ICS durant un any. S’hi van incloure de manera prospectiva 226 pacients, amb una edat mediana (RIQ) de 46 (33-62) anys; el 59% eren dones. Els pacients havien rebut una mediana de tres tractaments previs, i la principal raó per demanar l’ús no aprovat era la manca de resposta o resposta subòptima (72,1%). Es van donar 232 fàrmacs per a 102 indicacions diferents. Els fàrmacs més freqüents van ser rituximab (49; 21,1%), toxina botulínica (25; 10,7%) i omalizumab (14; 6,0%). En 117 casos (51,8%) el nivell d’evidència disponible per al seu ús era baix. Es va observar resposta parcial en 82 pacients (36,3%), completa en 71 (31,4%) i estabilització en 11 (4,9%). Va presentar efectes indesitjats 58 pacients (26,5%). El cost medià (RIQ) per pacient va ser de 2.943,07 € (541,9 – 5.872,54). En la publicació European Journal of Clinical Pharmacology 2013;69:1689-99 s’analitzen i es descriuen les indicacions d'ús, les evidències científiques disponibles i els resultats clínics a curt i llarg termini i econòmics, del fàrmac més utilitzat en condicions no aprovades que ha estat el rituximab. Es van analitzar 101 casos d’ús de rituximab en condicions no aprovades, amb una mediana d’edat (RIQ) dels pacients de 53 anys (37,5-68,0]; el 55,4% eren dones. Les indicacions principals eren malalties hematològiques (46%), malalties sistèmiques del teixit connectiu (27%) i malalties renals (20%). Les evidències eren principalment estudis de cohort individuals (53,5% dels casos) i sèries de casos (25,7%). La resposta observada a curt termini (mediana de 3 mesos [IQR 2-4]) va ser completa en el 38% dels casos i parcial en el 32,6%. Les més altes es van observar en el lupus eritematós sistèmic i la glomerulonefritis membranoproliferativa, i les respostes més baixes, en la neuromielitis òptica, i la púrpura trombocitopènica idiopàtica. En el 69,2% dels casos amb resposta a curt termini es va mantenir una certa resposta a llarg termini (mediana de 23 mesos [RIQ 12-30]). El cos per pacient (mediana va ser de 5.187,5€ (RIQ 5.187,5-7.781,3). / Drug utilization studies can be useful to identify patterns of drug use in different populations, whether adult or children. One aspect is the analysis of drug use in conditions other than those authorized in the technical specifications or labelling. This thesis is an analysis of various aspects of off-label drug use after the publication of a Royal Decree 1015/2009 of 19 June regulating the availability of medicines in various special situations (including off-label drug use) and after the establishment of a rule of the Catalan Institute of Health (ICS) with standardized work procedures to review, evaluate and register the use of drugs in special situations. The publication Medicina Clínica 2014;143:327-9 describes the drugs used in conditions not approved in two tertiary hospitals during the three years following the publication of Royal Decree. There were 671 applications for 117 single drugs or combinations to use in these conditions. The main groups were antineoplastic, immunosuppressive and muscle relaxants, and the most involved drugs were rituximab (170 applications), botulinum toxin (81), omalizumab (39) and anakinra (21). The main diseases were neoplastic diseases, those affecting nervous system and sense organs and digestive disorders. The publication European Journal of Clinical Pharmacology 2014;70:1385-93 describes the analysis of indications for use, clinical outcomes (clinical response and tolerability of the medication) and cost of off-label drug use in five hospitals of the ICS during one year. A total of 226 patients were included. The median [IQR] age of patients was 46 (33-62) years; 59% were women. Patients had received a median of three previous treatments, and a lack of response (or suboptimal) was the main reason for off-label use (72.1%). A total of 232 off-label medicines were administered for 102 different indications. The most frequent medicines were rituximab (49; 21.1%), botulinum toxin (25; 10.7%) and omalizumab (14; 6.0%). In 117 (51.8%) cases the level of clinical evidence for their use was low. A partial clinical response was observed in 82 patients (36.3%), complete response in 71 (31.4%) and stabilization in 11 (4.9%). A total of 58 (26.5%) patients had adverse effects, which in 11 (4.9%) were severe. The median (IQR) cost per patient was € 2,943.07 (541.9 – 5,872.54). The publication European Journal of Clinical Pharmacology 2013;69:1689-99 describes the indications for use, the available scientific evidence and clinical results in the short and long term, and the cost of off-label use of rituximab. A total of 101 cases of off-label rituximab use were analyzed (median [IQR] age 53 years [37.5-68.0]; 55.4% women). The requested indications were mainly haematological diseases (46%), systemic connective tissue disorders (27%) and kidney diseases (20%). Available evidence in these indications were mainly individual cohort studies (53.5% of cases), and case series (25.7%). Short-term outcome (median 3 months [IQR 2-4]) was a complete response in 38% of cases and partial response in 32.6%. The highest short-term responses were observed for systemic lupus erythematosus and membranous glomerulonephritis, and the lowest for neuromyelitis optica and idiopathic thrombocytopenic purpura. Some response was maintained in long-term follow-up (median 23 months [IQR 12-30]) in 69.2% of patients with short-term response. Median cost per patient was € 5,187.5 (IQR 5,187.5-7,781.3).

Aquesta tesi, realitzada com a compendi de publicacions, vol demostrar quina es la utilitat del ferro intravenós en el tractament de l’anèmia preoperatòria i postoperatòria en el context d’un pla personalitzat per tal d’evitar la transfusió i millorar l’evolució del pacient de cirurgia ortopèdica major. També valora quines implicacions econòmiques te aquest tractament dins d’un programa integral d’estalvi de sang (Patient blood management). Aquest treball s’inicia al 2009 amb un estudi multicèntric comparant dos ferros endovenosos (ferro sacarosa i carboximaltosa) pel tractament de l’anèmia ferropènica preoperatòria en cirurgia major electiva i que es publica al 2011 al British Journal of anaesthesia. En ell es demostra l’eficàcia i seguretat del tractament en corregir l’anèmia ferropènica en menys d’un mes, en pacients de cirurgia ortopèdica major (artroplàsties de maluc i genoll). L’estudi també demostra que la formulació de ferro carboximaltosa que permet administrar tota la dosi necessària en una o dues visites, millora la confortabilitat del tractament i la relació de cost/eficàcia. Posteriorment es valora en un assaig clínic l’eficàcia del ferro endovenós carboximaltosa (FCM) front el ferro oral, per al tractament de l’anèmia postoperatòria en pròtesis de genoll i el seu paper en la qualitat de vida, que es publica l’abril de 2014, també al British Journal of anaesthesia. En aquest estudi s’observa que els pacients tractats amb FCM corregeixen millor que el ferro oral l’anèmia i la ferropènia als 30 dies de la cirurgia però amb poca repercussió en la qualitat de vida i la capacitat d’esforç. El subgrup de pacients amb dipòsits baixos de ferro o amb anèmia postoperatòria mes greu, incrementen l’hemoglobina als 30 dies de manera més significativa i amb repercussió sobre la qualitat de vida sobretot puntuant millor en les activitats habituals. Finalment es publica en la Revista Española de Anestesiología y Reanimación, un anàlisis del tractament de l’anèmia en el context de l’estalvi de sang, des de una perspectiva econòmica, on es veu que aquest tractament pot estalviar costos tan en sang com escorçant la estada hospitalària i els reingressos. Cada cop hi ha mes evidència de que la transfusió es una terapèutica sobre utilitzada que implica un elevat cost, sobre tot incrementant la morbimortalitat, i el tractament de l’anèmia es el primer pilar per a la prevenció de la transfusió. Aquest treball permet demostrar que en mes del 50% dels casos el ferro intravenós pot tenir un paper fonamental tan en la milloria de l’anèmia periquirúrgica i qualitat de vida, com reduint la transfusió i augmentant la seguretat clínica i els costos. / This thesis, conducted as a compendium of publications, wants to prove the utility of intravenous iron for treating pre and postoperative anaemia in the context of a personalized plan to avoid transfusion and improve the outcomes in major orthopaedic surgery patients. It also wants to assess the economic implications of this treatment within a comprehensive Patient Blood Management program (PBM). This work begins in 2009 with a prospective, multicentre study comparing two intravenous irons (iron sucrose and carboximaltose) for the treatment of iron deficiency anaemia in preoperative elective major surgery and in 2011 the results were published in the British Journal of Anaesthesia. We demonstrate the efficacy and safety of this treatment to correct iron deficiency anaemia in less than one month, in major orthopaedic surgery patients (hip and knee arthroplasty). The study also shows that the formulation of iron carboximaltose, that allows you to manage the entire necessary dose in one or two visits, improves the comfort of the treatment and the cost / effectiveness relationship. The second study is a randomized clinical trial to evaluate the efficacy of intravenous iron carboximaltose (FCM) versus oral iron for the treatment of postoperative anaemia in knee replacement surgery and their role in the quality of life, published in April 2014, in the British Journal of Anaesthesia. We found that a postoperative dose of FCM resulted in more frequent correction of postoperative anaemia and iron deficiency, than oral iron. Patients with low preoperative iron stores and/ or with severe anaemia the day after surgery, showed a particular benefit of intravenous over oral iron, due a significantly increase of haemoglobin at day 30 and improving the quality of life test, especially in "usual activities" subcategories. Finally we published in “Revista Española de Anestesiología y Reanimación” an assessment of the perioperative anaemia treatment within a comprehensive Patient Blood Management program from an economic perspective. We showed that anaemia treatment in surgery context can offer substantial savings to health departments by reducing the cost of units transfused, and the morbidity related to transfusion. There is increase evidence that transfusion is an overused treatment that leads to high costs, particularly increasing morbidity and mortality. The anaemia treatment is the first pillar in PBM for preventing transfusion in surgery context. This work would demonstrate that in more than 50% of cases, the intravenous iron may play a key role for the improvement of perioperative anaemia and this could reduce transfusion, improve safety and save costs.

INTRODUCCIÓN El impacto en morbi-mortalidad de los problemas relacionados con la medicación (PRM) hace necesario su estudio con el objetivo de diseñar estrategias de prevención y/o monitorización de los mismos. OBJETIVOS: La evaluación de PRM detectados en pacientes hospitalizados a través de una herramienta informática integrada en la orden médica informatizada Objetivo 1 (primer artículo): diseñar una puntuación de riesgo de sufrir algún PRM en pacientes hospitalizados. Objetivo 2 (segundo artículo): identificar aquellos pacientes ingresados en una Unidad de Cardiología con un riesgo superior de presentar algún PRM. MATERIAL Y MÉTODOS Estudios realizados en el Hospital Universitari del Mar, que cuenta con 431 camas (413 camas convencionales y 18 camas de críticos) durante el año 2009. La Unidad de Cardiología dispone de 30 camas. Los PRM fueron detectados a través de un sistema de alertas farmacológicas diseñado por el Servicio de Farmacia e integrado en la historia médica informatizada y clasificados según el sistema de clasificación de la Pharmaceutical Care Network Europe (PCNE). En ambos estudios se identificaron las variables asociadas a desarrollar un PRM mediante un análisis multivariado de regresión logística binaria. Para el objetivo 1 (primer artículo), se incluyeron en una primera etapa aquellos pacientes que ingresaron entre enero y agosto de 2009 con el objetivo de desarrollar una puntuación de riesgo de presentar algún PRM (periodo de diseño). Las variables asociadas a desarrollar un PRM fueron utilizadas para diseñar la puntuación de riesgo que fue posteriormente validada en los pacientes ingresados entre septiembre y diciembre de 2009 (periodo de validación). Para el objetivo 2 (segundo artículo), se recogió adicionalmente la patología cardiaca principal que presentó el paciente en el que se detectó un potencial PRM. RESULTADOS Para el objetivo 1 (primer artículo): De los 8.713 ingresos incluidos en el periodo de diseño se detectó algún PRM en 2.425 (27,8 % de los pacientes). Las variables asociadas con un mayor riesgo de sufrir algún PRM fueron la prescripción de un mayor número de fármacos, una mayor comorbilidad, edades más avanzadas , ciertos grupos de la categoría ATC y algunas categorías mayores diagnósticas. Estas variable fueron utilizadas para diseñar la puntuación de riesgo. El AUC fue de 0,778 (IC 95% 0,768-0,789). El periodo de validación incluyó 4.058 ingresos y se detectó algún PRM en 876 (21,6%). El AUC fue de 0,776 (IC 95%: 0,759-0,792). Para el objetivo 2 (segundo artículo): 259 de los 842 pacientes (30,8%) ingresados en la Unidad de Cardiología presentaron algún PRM. Las variables asociadas a un mayor riesgo de padecer algún PRM fueron la polifarmacia (OR: 1.228; 95% CI: 1.153-1.308), el género femenino (OR: 1.496; 95% CI: 1.026-2.180) y el tratarse de un primer ingreso (OR: 1.494; 95% CI:1.005-2.221). CONCLUSIONES Para el objetivo 1 (primer artículo): En el presente estudio se ha diseñado y validado un una puntuación que permite cuantificar el riesgo de presentar un PRM durante un ingreso hospitalario. Su aplicación en la práctica clínica diaria permite identificar aquellos pacientes más susceptibles de presentar un PRM. Para el objetivo 2 (segundo artículo): En este estudio se han identificado el sexo femenino, el número de fármacos y la ausencia de un ingreso previo como factores de riesgo de presentar algún PRM en pacientes hospitalizados con patología cardiovascular. El conocimiento de estos factores permite la identificación del perfil de paciente de mayor riesgo y que, por tanto, precisa de una monitorización más estrecha del tratamiento farmacológico Una herramienta eficiente para detectar a los pacientes más susceptibles de padecer algún PRM puede permitir la optimización de los recursos necesarios para la monitorización del tratamiento farmacológico. / Background The potential impact of drug-related problems (DRP) on morbidity and mortality is a serious concern and leads to the need to study them in order to design monitoring and prevention strategies. Purpose: The assesment of DRPs detected by a computerized electronic system in hospitalized patients integated in the electronic medical record. Purpose 1 (first article): to design a risk score to identify patients most at-risk of a DRP in hospitalized patients Purpose 2 (second article): to identify the profile of patients at higher risk of developing at least one DRP during hospitalization in a cardiology ward. Methods: These studies were conducted in Hospital Universitari del Mar with 431 beds (413 conventional beds plus 18 beds for critically-ill patients) during 2009. The cardiology ward has approximally 30 hospital beds. DRPs were detected by a Pharmacy warning system designed by the Pharmacy Service integrated in the electronic medical record and classificated using the classification of the Pharmaceutical Care Network Europe (PCNE). In both studies the variables associated with developing a DRP were identified through a binary multivariate logistic regression analysis. For purpose 1 (first article) Data from patients admitted to the hospital between January and August 2009 were used to design the risk score (training set). The variables associated with developing a DRP were used to compute the DRP risk score, which was subsequently validated in patients admitted between September and December 2009 (validation set). For purpose 2 (second article) The DRP according to the cardiac disease present in admitted patients were recorded. Results: For purpose 1 (first article): Of the 8,713 patients included in the training set, at least one DRP was detected in 2,425 (27.8%). Prescription of a higher number of drugs, higher comorbidity, advanced age, certain groups of the Anatomical Therapeutic Chemical classification system, and some major diagnostic categories were associated with risk of DRP. These variables were used to compute the DRP risk score. The area under the receiver operator characteristic curve was 0.778 (95% CI: 0.768-0.789). Of the 4,058 admissions included in the validation set, at least one DRP was detected in 876 (21.6%). The area under the receiver operator characteristic curve was 0.776 (95% CI: 0.759-0.792). For purpose 2 (second article): A total of 964 admissions were included and at least one drug-related problem was detected in 29.8%. The variables associated with a higher risk of these events were polypharmacy (OR: 1.228; 95% CI: 1.153-1.308), female gender (OR: 1.496; 95% CI: 1.026-2.180), and first admission (OR: 1.494; 95% CI:1.005-2.221). Conclusions: For purpose 1 (first article): The present study designed and validated a score that quantifies the risk of a DRP during hospital admission. The application of this score in daily clinical practice can identify those patients most at risk of a DRP For purpose 2 (second article): This study has found that the variables associated with a higher risk of DRP were polypharmacy, female gender, and first admission during admission in a cardiology ward. Knowledge of the variables associated with DRP could aid their early detection in at-risk patients and for better monitoring of their prescriptions.

Existen varios medicamentos disponibles para el tratamiento de la patología cardiovascular, así como para otras enfermedades consideradas factores de riesgo cardiovasculares, como son; diabetes, hipertensión y dislipidemia. Cuando un medicamento es comercializado por primera vez, su perfil de seguridad debe considerarse provisional debido a limitaciones propias de los ensayos clínicos pre-comercialización. Para los nuevos medicamentos, la información relevante sobre su seguridad en la población se genera durante los primeros años post-comercialización. El objetivo de esta tesis es contribuir al conocimiento del perfil de seguridad de nuevos medicamentos cardiovasculares mediante el uso de las notificaciones espontáneas recolectadas por el sistema Español de Farmacovigilancia. Se incluyeron en el análisis de esta tesis todos los medicamentos cardiovasculares comercializados en España entre 2007 y 2011. Se seleccionaron y analizaron todas las notificaciones espontáneas que incluyeron alguno de los medicamentos cardiovasculares objetos de estudio hasta final de 2014. Además, en aquellas reacciones adversas relevantes se realizaron revisiones bibliográficas de casos publicados, análisis de información científica relevante, y también, análisis estadísticos de desproporcionalidad. Los principales resultados fueron publicados en dos estudios. El estudio I analizó la asociación entre uso de gliptinas y reacciones musculoesqueléticas. Las gliptinas son una nueva clase de antidiabéticos orales que inhiben la acción de la enzima dipeptidil peptidasa-4 para controlar el nivel de sérico de glucosa en pacientes con diabetes tipo 2. En mayo del 2012 en el sistema Español se encontraron treinta y cuatro notificaciones espontáneas que describían molestias musculoesqueléticas con gliptinas; veintisiete con sitagliptina, seis con vildagliptina y una con saxagliptina. Estos casos representaron el 10% de todas las notificaciones con gliptinas. Además, en dos casos se reportó re-exposición positiva. En la literatura médica poco esta descrito en relación a estas reacciones adversas y el uso de las gliptinas. A pesar de ser leves, estas molestias musculoesqueléticas podrían afectar la adherencia al tratamiento antidiabético. El estudio II analizó la posible asociación entre el uso de dronedarona y falla renal. Dronedarona, es un nuevo antiarrítmico derivado de la amiodarona indicado para el tratamiento de la fibrilación auricular. A pesar de sus ventajas, existe limitada información respecto al potencial daño renal asociado a su uso. En Mayo 2014, se identificaron 18 casos, diez casos en el sistema Español y ocho en la literatura médica. Estos dieciocho pacientes desarrollaron falla renal durante el tratamiento con dronedarona. En todos los casos se observó una secuencia temporal plausible, aunque las enfermedades concomitantes podrían ser factores de confusión. Sin embargo, la falla renal asociada con dronedarona podría complicar la clínica de los pacientes con fibrilación auricular, en especial de aquellos que también presentan insuficiencia cardíaca. Para analizar y estudiar las reacciones musculoesqueléticas con gliptinas y la falla renal asociada a dronedarona, otros estudios observacionales son necesarios, mientras tanto los médicos deben estar atentos ante estas potenciales reacciones adversas en su práctica clínica diaria. El conocimiento sobre la seguridad de los medicamentos es un proceso que se construye constantemente. La notificación espontánea fue el primer método de vigilancia post-comercialización y a pesar de sus inherentes limitaciones (falta de información, infranotificación), todavía contribuye con los principales objetivos de la vigilancia de medicamentos: aumentar la información para la seguridad de los pacientes y disminuir la euforia de los prescriptores ante los nuevos medicamentos en el mercado. / Several medicines for treatment of cardiovascular disease and other risk factors such as diabetes, dyslipidemia, and hypertension are available in the market. However, at the moment of drug approval, the safety profile should be considered provisional due to the limitations of the pre-marketing clinical trials. Also, relevant safety information about newly launched medicines usually arises in the first post-marketing years. The aim of this thesis is to contribute to the knowledge regarding safety profile of new marketed cardiovascular drugs using reports collected in the Spanish spontaneous reporting system. A group of cardiovascular drugs launched in Spain between 2007 and 2011 was selected. All the spontaneous reports involving the study drugs until the end of 2014 were retrieved and carefully analysed. Also, a review of case reports published and other scientific information was done. Statistical methods were applied to strengthen the potential ADR-drug associations. The main results were described in two original studies. In study I, an association between gliptins use and musculoskeletal reactions was found in the Spanish database. Gliptins are a new antidiabetic class that inhibits the action of dypeptidil peptidase-4 enzyme for controlling the glucose blood level in type 2 diabetic patients. In May 2012, thirty-four reports describing musculoskeletal complaints with gliptins were found in the database; twenty-seven for sitagliptin, six for vildagliptin and one for saxagliptin. These cases represented the 10% of all gliptins reports. Moreover, in two of them positive re-exposure was described. These adverse reactions were hardly described with gliptins use. Despite not being serious, these symptoms may impair the treatment adherence in patients with type 2 diabetes. In study II, the potential association between the use of dronedarone and renal impairment was analysed. The effect of dronedarone on renal function was supported by limited information. Dronedarone, a new antiarrhythmic drug, is a noniodinated amiodarone derivative indicated for the treatment of atrial fibrillation. In the Spanish database ten cases were found and, in addition, eight cases were identified in medical literature. These eighteen cases described renal impairment during dronedarone treatment. All cases showed a plausible temporal association, although the baseline conditions could be considered as potential confounder. Renal impairment associated with this drug could seriously aggravate the clinical condition of patients with atrial fibrillation, especially in those who also suffer from heart failure. Despite the fact that, either in musculoskeletal reactions associated with gliptins or renal impairment with dronedarone, further observational studies are needed in order to verify these potential safety signals, in the meantime clinicians should be aware of these potential reactions in clinical practice. The knowledge of safety information of marketed medicines is a constant process that is built-up over time. Pharmacovigilance was the first method for post-marketing surveillance and despite its inherent limitations such as lack of information or underreporting, it still contribute to the main objectives of post-marketing surveillance: to increase patients’ safety and to decrease the prescribers’ euphoria in front of new medicines.

Madrid, Imprenta y Librería de Eduardo Martlnez, Sucesor de Escribano, Calle del Príncipe, número 25. 1876 / (De la Arsenicoterapia) Tema que teniendo su orígen en el más positivo y fructífero campo especulativo, y su resultado en innumerable pléyade de indicaciones inmediatas y mediatas, es el que hoy tengo el honor de presentar á la aprobación del alto criterio de V. S. Sus fuentes son la observación y la doble experimentación clínica y fisiológica, y sus secuelas se confunden en el terreno terapéutico. Poco elemento dogmático le constituye, y es por lo tanto tésis de aplicacion. Los químicos, los geólogos, los naturalistas, yen especial los médicos,• colocan á tal altura de descripcion los arsenicales, que sólo es comparable á la de los metales nobles. Por este solo hecho, queda de un modo gráfico expresado el alto papel que en todas esas ciencias, y muy particularmente en la medicina, juegan estos preparados metalóideos. Síntesis, pues, que abarcase todos los conocimientos que la química, geología, mineralogía y ciencias médicas atesoran de estos cuerpos, seria, á no dudarlo, un estudio de arsenicognoscia tipo, mas por otra parte en extremo complejo y extrínseco al campo médico. El árbol de las instituciones médicas es la Terapéutica, y á su sombra, minerales, cuerpos brutos, inorgánicos, vémosles trocados en agentes curativos, en medios y términos finales de la indicacion, manifestacion de un regulado funcional del órgano encefálico. Bajo la Terapéutica, pues, conocemos estática y dinámicamente el arsénico, y de este estudio sacaremos prácticos corolarios ó principios de aplicacion. Los arsenicales pueden, como medios curativos, entrar en un método terapéutico, tambien en un plan de curacion, y por sí solos constituir, siempre que se empleen con el objeto de restablecer el “restitutio ad integrum” funcional y estático, la medicacion arsenical. Ella será el estroma de mi tésis, sobre el que le dará forma terminal la parte farmacognoscia, indispensable por otra parte en toda monografía experimental de esta índole. En la que tengo la honra de ofrecer, trato de sintetizar los conocimientos que atesora la medicina actual relacionados á la farmacognoscia, farmacodinamia, y á su secuela lógica la aplicación terapéutica, del arsénico y sus compuestos. Mas, sin embargo, estos agentes estudiados serán con preferencia, siempre que sean empleados con el objeto de modificar el órgano y su funcion, tomando entóncos el nombre de medicacion arsenical. Con la vénia de V. S. pasaré á dividir mi trabajo; tres partes le constituyen: se ocupa la primera de la farmacognoscia de todos los arsenicales, ocupándose Ja segunda de la accion de todos estos agentes en la economía con funcionalismo normal, y por último, la tercera, que es la más vasta y de más aplicacion, se ocupa del “restitutio ad inteqrum” en el terreno anatómico y fisiológico, es decir, trueca lo anátomo-patológico en normal y de órden estático, y el vicioso funcionalismo en natural funcionar.