Glioblastoma é um tumor cerebral que apresenta uma alta taxa de invasão, sendo que os pacientes portadores do mesmo possuem uma baixa sobrevida. Um dos maiores desafios encontrados é a resistência do tumor ao principal agente quimioterápico utilizado, a temozolomida, além de apresentar um fenótipo de resistência cruzada a outros quimioterápicos tradicionais como a doxorrubicina. Diversos estudos tem mostrado uma ativação contínua do fator de transcrição Transdutor de sinais e ativador de transcrição 3 (STAT3) em glioblastomas resistentes a quimioterapia. Neste trabalho nós examinamos se células de glioma de rato da linhagem C6 que se tornaram resistentes aos quimioterápicos doxorrubicina e/ou temozolamida, apresentam um conteúdo elevado de STAT3 fosforilada (p-STAT3) e se a inibição deste fenômeno pelo inibidor específico de JAK2/STAT3 AG490, poderia sensibilizar novamente estas células a quimioterápicos. Nós observamos que nossas linhagens resistentes apresentaram um IC50 para temozolamida 11 vezes maior do que a linhagem paterna e 33 vezes maior para doxorrubicina em comparação com a linhagem paterna. Além disto, ambas as linhagens resistentes apresentaram um imunoconteúdo elevado de STAT3. A inibição de STAT3 pelo inibidor de JAK2, AG490, apresentou um decréscimo no imunoconteúdo de p-STAT3, uma parada no ciclo celular na fase G2/M e uma consequente ressensibilização das linhagens resistentes aos seus quimioterápicos. Em suma, os dados aqui apresentados nos levam a acreditar que a inibição de STAT3 poderia ser uma interessante terapia adjuvante a ser estudada para a ressensibilização de pacientes com glioblastoma à quimioterapia. / Glioblastoma is a brain tumor whit high invasiveness and low survival. One of the main characteristics of the tumor is the resistance to the standard chemotherapy to the alkylating agent temozolomide, and the multidrug resistance to other traditional chemotherapeutics like doxorubicin. Signal Transducer and Activator of Transcription 3 (STAT3) has been shown to be constitutive active in glioblastomas resistant to chemotherapy. In this work we examined if C6 cells that became resistant to temozolomide and/or doxorubicin have increased STAT3 phosphorylation (p-STAT3) and if the inhibition of this phosphorylation could re-sensitize these cells. We observed that our two resistant lineages showed higher IC50 for TMZ and DOX in order of 11 and 33 fold higher respectively, and elevated p-STAT3 immunocontent when compared to their parental C6 lineage. The inhibition of p-STAT3 by AG490 50 μM decreased the p-STAT3 immunocontent, induced a G2/M arrest in cell cycle and re-sensitizes the resistant C6-TR and C6-DR to their chemotherapeutics showing a synergetic effect with both chemotherapeutics used in this work. In summary, data present here suggest that the inhibition of STAT3 could be an interesting adjuvant therapy for glioblastoma cells that became resistant to the traditional chemotherapy.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2018-04-19T13:52:32Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1721815 bytes, checksum: 43f6125a682c349b31f8f0fb972ad1c3 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-19T13:52:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1721815 bytes, checksum: 43f6125a682c349b31f8f0fb972ad1c3 (MD5) Previous issue date: 2018-02-20 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Em resposta a infecções por patógenos, as plantas modulam vias de sinalização mediada por hormônios, tais como SA, MeJA e auxina. Essas vias podem resultar em alteração da expressão gênica, processo importante para a mitigação dos efeitos da infecção. Essa reprogramação transcricional é regulada através de fatores de transcrição. Os fatores de transcrição da família gênica bZIPs são reguladores importantes em plantas e alguns de seus membros estão envolvidos em respostas de defesa contra patógenos. Neste estudo, descreveu-se a caracterização funcional do fator de transcrição GmbZIP105 e da proteína GmARP15g em resposta a infecção pelo fungo causador da ferrugem asiática da soja. Além disso, potencias grupos da família DRM1/ARP foram identificados por meio de metodologias de agrupamento in silico de sequências. Os perfis de expressão de genes presente nestes grupos foram avaliados em resposta ao tratamento com os hormônios auxina e MeJA e à infecção por patógenos em plantas de soja. As proteínas GmbZIP105 e GmARP15g interagem em ensaios de duplo híbrido de leveduras. Além disso, apresentam o mesmo perfil transcricional em resposta ao tratamento com os hormônios MeJA e auxina. GmbZIP105 induz a expressão de genes relacionados a fotossíntese, enquanto GmARP15g interage com PSBS, uma proteína que compõe o PSII. Esses resultados sugerem uma relação funcional entre estas proteínas e que, provavelmente, GmARP15g modula a localização ou a atividade do fator de transcrição GmbZIP105. / In response to pathogen infections, plants modulate a series of signaling pathways that are mediated by hormones, such as SA, MeJA and auxin. These pathways may result in gene expression alteration that is important for mitigating the effects of infection. This transcriptional reprogramming is regulated by transcription factors. bZIP’s transcriptional factors are important regulators in plants. Some of their members are involved in defense responses against pathogens. This study describes the functional characterization for GMbZIP105 transcriptional factor and GmARP15g protein during response against fungal infection. For that, it was used the fungus that causes ASR – Asian soybean rust. In addition, in silico analysis using clustering methodologies were applied to identify potential DRM1 / ARP family groups. The expression profiles of these groups were evaluated in response to treatment with hormones auxin and MeJA and during pathogen infection in soybean. The proteins GmbZIP105 and GmARP15g interact in two-hybrid yeast assays; in addition, they present the same transcriptional profile in response to treatment with hormones MeJA and auxin and are responsive to pathogen. GmbZIP105 induces the expression of genes related to photosynthesis, while GmARP15g interacts with one of the PSII proteins. These results suggest a functional relationship between both proteins in which GmARP15g probably modulates the localization or activity of the transcription factor GmbZIP105.

Glioblastoma é um tumor cerebral que apresenta uma alta taxa de invasão, sendo que os pacientes portadores do mesmo possuem uma baixa sobrevida. Um dos maiores desafios encontrados é a resistência do tumor ao principal agente quimioterápico utilizado, a temozolomida, além de apresentar um fenótipo de resistência cruzada a outros quimioterápicos tradicionais como a doxorrubicina. Diversos estudos tem mostrado uma ativação contínua do fator de transcrição Transdutor de sinais e ativador de transcrição 3 (STAT3) em glioblastomas resistentes a quimioterapia. Neste trabalho nós examinamos se células de glioma de rato da linhagem C6 que se tornaram resistentes aos quimioterápicos doxorrubicina e/ou temozolamida, apresentam um conteúdo elevado de STAT3 fosforilada (p-STAT3) e se a inibição deste fenômeno pelo inibidor específico de JAK2/STAT3 AG490, poderia sensibilizar novamente estas células a quimioterápicos. Nós observamos que nossas linhagens resistentes apresentaram um IC50 para temozolamida 11 vezes maior do que a linhagem paterna e 33 vezes maior para doxorrubicina em comparação com a linhagem paterna. Além disto, ambas as linhagens resistentes apresentaram um imunoconteúdo elevado de STAT3. A inibição de STAT3 pelo inibidor de JAK2, AG490, apresentou um decréscimo no imunoconteúdo de p-STAT3, uma parada no ciclo celular na fase G2/M e uma consequente ressensibilização das linhagens resistentes aos seus quimioterápicos. Em suma, os dados aqui apresentados nos levam a acreditar que a inibição de STAT3 poderia ser uma interessante terapia adjuvante a ser estudada para a ressensibilização de pacientes com glioblastoma à quimioterapia. / Glioblastoma is a brain tumor whit high invasiveness and low survival. One of the main characteristics of the tumor is the resistance to the standard chemotherapy to the alkylating agent temozolomide, and the multidrug resistance to other traditional chemotherapeutics like doxorubicin. Signal Transducer and Activator of Transcription 3 (STAT3) has been shown to be constitutive active in glioblastomas resistant to chemotherapy. In this work we examined if C6 cells that became resistant to temozolomide and/or doxorubicin have increased STAT3 phosphorylation (p-STAT3) and if the inhibition of this phosphorylation could re-sensitize these cells. We observed that our two resistant lineages showed higher IC50 for TMZ and DOX in order of 11 and 33 fold higher respectively, and elevated p-STAT3 immunocontent when compared to their parental C6 lineage. The inhibition of p-STAT3 by AG490 50 μM decreased the p-STAT3 immunocontent, induced a G2/M arrest in cell cycle and re-sensitizes the resistant C6-TR and C6-DR to their chemotherapeutics showing a synergetic effect with both chemotherapeutics used in this work. In summary, data present here suggest that the inhibition of STAT3 could be an interesting adjuvant therapy for glioblastoma cells that became resistant to the traditional chemotherapy.

Glioblastoma é um tumor cerebral que apresenta uma alta taxa de invasão, sendo que os pacientes portadores do mesmo possuem uma baixa sobrevida. Um dos maiores desafios encontrados é a resistência do tumor ao principal agente quimioterápico utilizado, a temozolomida, além de apresentar um fenótipo de resistência cruzada a outros quimioterápicos tradicionais como a doxorrubicina. Diversos estudos tem mostrado uma ativação contínua do fator de transcrição Transdutor de sinais e ativador de transcrição 3 (STAT3) em glioblastomas resistentes a quimioterapia. Neste trabalho nós examinamos se células de glioma de rato da linhagem C6 que se tornaram resistentes aos quimioterápicos doxorrubicina e/ou temozolamida, apresentam um conteúdo elevado de STAT3 fosforilada (p-STAT3) e se a inibição deste fenômeno pelo inibidor específico de JAK2/STAT3 AG490, poderia sensibilizar novamente estas células a quimioterápicos. Nós observamos que nossas linhagens resistentes apresentaram um IC50 para temozolamida 11 vezes maior do que a linhagem paterna e 33 vezes maior para doxorrubicina em comparação com a linhagem paterna. Além disto, ambas as linhagens resistentes apresentaram um imunoconteúdo elevado de STAT3. A inibição de STAT3 pelo inibidor de JAK2, AG490, apresentou um decréscimo no imunoconteúdo de p-STAT3, uma parada no ciclo celular na fase G2/M e uma consequente ressensibilização das linhagens resistentes aos seus quimioterápicos. Em suma, os dados aqui apresentados nos levam a acreditar que a inibição de STAT3 poderia ser uma interessante terapia adjuvante a ser estudada para a ressensibilização de pacientes com glioblastoma à quimioterapia. / Glioblastoma is a brain tumor whit high invasiveness and low survival. One of the main characteristics of the tumor is the resistance to the standard chemotherapy to the alkylating agent temozolomide, and the multidrug resistance to other traditional chemotherapeutics like doxorubicin. Signal Transducer and Activator of Transcription 3 (STAT3) has been shown to be constitutive active in glioblastomas resistant to chemotherapy. In this work we examined if C6 cells that became resistant to temozolomide and/or doxorubicin have increased STAT3 phosphorylation (p-STAT3) and if the inhibition of this phosphorylation could re-sensitize these cells. We observed that our two resistant lineages showed higher IC50 for TMZ and DOX in order of 11 and 33 fold higher respectively, and elevated p-STAT3 immunocontent when compared to their parental C6 lineage. The inhibition of p-STAT3 by AG490 50 μM decreased the p-STAT3 immunocontent, induced a G2/M arrest in cell cycle and re-sensitizes the resistant C6-TR and C6-DR to their chemotherapeutics showing a synergetic effect with both chemotherapeutics used in this work. In summary, data present here suggest that the inhibition of STAT3 could be an interesting adjuvant therapy for glioblastoma cells that became resistant to the traditional chemotherapy.

Orientador: Débora Cristina Damasceno / Resumo: Introdução: O período de vida neonatal é considerado um período crítico para o desenvolvimento pancreático. Portanto, a administração de streptozotocin (STZ) após o nascimento causa necrose em células beta pancreáticas. Neste estudo utilizando modelo experimental de diabete induzido por STZ no período neonatal, os animais apresentaram recuperação parcial das células da ilhota pancreática, e diabete de intensidade moderada na vida adulta. Para melhor compreensão de como este mecanismo acontece nós investigamos a relação entre PDX-1, Ngn-3, BMP-2 e -7 em diferentes momentos ao longo do primeiro mês de vida. Materiais e método: Ratas fêmeas recém-nascidas receberam STZ no dia do nascimento para indução do diabetes, e as ratas controle receberam veículo. Os animais foram eutanaziados em diferentes momentos da vida: D5, D10, D15 e D30. O sangue foi coletado para dosagem de insulina e sérica e o pâncreas foi coletado e processado para analises imunoistoquimicas de PDX-1, Ki-67, Ngn-3, BMP-2 e -7 e co-localização de células imunomarcadas para insulina e glucagon. Resultados: Os animais diabéticos apresentaram umaporcentagem diminuída de PDX-1 nuclear (nos dias D5, D15 e D30), com aumento de células se proliferando aos 5 e 10 dias de vida e maior imunomarcação de Ngn-3 nuclear em todos os momentos nas células das ilhotas pancreáticas. Além disso, a proporção de imunomarcação para BMP-2 e BMP-7 foi aumentada nas células das ilhotas pancreáticas nos grupos diabéticos quando comparado a... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Background: The neonatal period of life is a critical window for the pancreatic development. Then, as streptozotocin (STZ) administration after birth causes necrosis in beta (β)-pancreatic cell. In this STZ-induced diabetic model, the rats present a partial recovery of pancreatic islet cell, and mild diabetes status at adulthood. To better understand how this occur we investigate the relationship between PDX-1, Ngn-3, BMP-2 and -7 in different moments in first month of their life. Materials and method: Female newborn rats received STZ at birth for diabetes induction, and control received the vehicle. The animals were euthanized at different life days: D5, D10, D15, and D30. Blood was collected for insulin measurement and pancreas was collected and processed for immunohistochemical analysis of PDX-1, Ki-67, Ngn-3, BMP-2 and –7 and co-localization for labeling of insulin and glucagon. Results: The diabetic animals presented a lower immunostaining of PDX-1 (on D5, D15 and D30), a higher labeling of cell proliferation on D5 and D10 and higher immunostaining of nuclear Ngn-3 in all moments in pancreatic islet cell. Besides, the ratio for BMP-2 and –7 immunostaining was increased in pancreatic islet cell in diabetic groups compared to respective control. Conclusion: During neonatal period, PDX-1, Ngn-3, BMP-2 and –7 participate in intricate approach for physiological pancreatic remodeling in control and diabetic rats. However, diabetic animals present a reduced capability for β-cel... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

A transição endotélio-mesenquimal (EndMT) é uma forma especializada da transição epitéliomesenquimal (EMT) e é caracterizada pela alteração da morfologia celular para um formato fibroblastoide, perda da expressão dos marcadores endoteliais e ganho da expressão dos marcadores mesenquimais, bem como a aquisição de propriedades invasivas e migratórias. Entretanto, o mecanismo molecular envolvido nesse processo ainda não está totalmente elucidado. O objetivo desse trabalho foi avaliar os fatores indutores da EMT em células endoteliais (CEs) de fontes distintas por meio da superexpressão do fator de transcrição SNAIL e do tratamento com TGF-?2, bem como identificar os mecanismos moleculares envolvidos nesse processo. Para tal, as linhagens de CE da artéria pulmonar (HPAEC), pool de CE primária de veia de cordão umbilical (PHUVEC), CE da aorta (PAEC) e CE da artéria coronária (CAEC) foram induzidas em três condições distintas: I) TGF-?2; II) superexpressão do fator de transcrição SNAIL; III) superexpressão do fator de transcrição SNAIL associado ao tratamento com TGF-?2 (SNAIL+TGF-?2). Após a indução, a expressão dos genes relacionados com a EndMT foi analisada por PCR em tempo real (qPCR) e as CAECs foram as células que apresentaram maior mudança no perfil de expressão gênica, no qual o grupo SNAIL+TGF-?2 apresentou um aumento dos marcadores mesenquimal FN1, SM22, CNN1 e CD90. O grupo SNAIL+TGF-?2 também mostrou uma diminuição dos marcadores endoteliais CD31 e CDH5 por Western blot. Em seguida, a técnica de microarray foi realizada nas CAECs induzidas à EndMT e as análises revelaram um dendrograma cujo perfil mostrou que SNAIL e SNAIL+TGF-?2 se agrupam separadamente das outras condições. Os dados de microarray resultaram em uma rede na qual os genes mesenquimais COL1A1, COL1A2, FN1 e CNN1 estavam aumentados no grupo SNAIL+TGF-?2 comparado com o grupo controle. Os genes diferencialmente expressos entre a análise CT vs. SNAIL+TGF-?2 foram analisados quanto a participação em vias canônicas e a via de regulação da EMT foi uma das mais representadas, a qual inclui a via de sinalização Notch e Wnt. Nos dados de microarray, NOTCH3 e WNT5B estavam superexpressos no grupo SNAIL+TGF-?2 comparado com o controle. Sabendo que Wnt5b pode inibir a via ?-catenina, a expressão de NOTCH3, WNT5B e ?-CATENINA foi avaliada por qPCR e a expressão de NOTCH3 e WNT5B confirmou os dados do microarray e nenhuma diferença estatística foi observada na expressão de ?- CATENINA. Ainda, as CAECs induzidas foram submetidas ao ensaio de migração e de capacidade de formação de estruturas semelhantes a capilares. Foi observado que as CAECSNAIL+ TGF-?2 migraram significativamente comparadas com as outras condições e nenhuma das células induzidas (TGF-?2, SNAIL e SNAIL+TGF-?2) foram capazes de formar estruturas semelhantes a capilares. Alguns microRNAs foram selecionados e avaliados por qPCR. O miR-let7a foi significativamente expresso no grupo SNAIL e SNAIL+TGF-?2. O ensaio de perda e ganho de função do miR-let7a foi realizado, entretanto, a repressão ou a indução do miR-let7a não alterou a EndMT. Esses resultados sugerem que as CEs de fontes anatômicas distintas apresentam respostas diferentes quando estimuladas a sofrerem EndMT. Ademais, a associação entre SNAIL+TGF-?2 é um potente indutor para EndMT e essa indução pode ser mediada pelas vias de sinalização Notch e Wnt não canônica. / Endothelial-mesenchymal transition (EndMT) is a specialized form of epithelialmesenchymal transition (EMT) which is characterized by changes in cell morphology as a fibroblastoid conversion, expression of endothelial markers decreased, expression of mesenchymal markers increased and acquirement of invasive and migratory properties. However, the molecular mechanism associated with this process is not completely elucidated. The aim of this study was to evaluate the EMT-inducing factors in the endothelial cells (ECs) from different sources through the overexpression of the transcription factor SNAIL and through the treatment with TGF-?2, as well as to identify the molecular mechanisms involved in EndMT. For this purpose, primary pulmonary artery EC (HPAEC), primary pooled umbilical vein EC (PHUVEC), primary aortic EC (PAEC), primary coronary artery EC (CAEC) lineages were induced under three distinct conditions: I) TGF-?2; II) ectopic expression of SNAIL; III) ectopic expression of SNAIL associated with TGF-?2 (SNAIL+TGF- ?2). After the EndMT induction, the expression of the genes associated with EndMT was analyzed by Real time PCR (qPCR) and CAECs showed the most prominent alterations on their gene expression profile which showed that SNAIL+TGF-?2 group presented an increase of mesenchymal markers FN1, SM22, CNN1, and CD90 expression. CAEC-SNAIL+TGF-?2 group also showed a decrease of endothelial markers CD31 and CDH5 by western blot. Then, microarray was performed in CAECs after EndMT induction and hierarchical clustering analysis showed that the ectopic expression of SNAIL and SNAIL+TGF-?2 clustered separately from the other conditions. Microarray data resulted in a network which presented an upregulation of the mesenchymal genes such as COL1A1, COL1A2, FN1, and CNN1 in the CAEC-SNAIL+TGF-?2 compared to control cells. We analyzed the canonical pathways related to the differentially regulated genes between CAEC- SNAIL+TGF-?2 and control cells and the regulation of EMT pathways was the most represented, which includes Notch and Wnt signaling pathway. In the microarray data, NOTCH3 and WNT5B were overexpressed in CAEC-SNAIL+TGF-?2 compared to control. It is known that Wnt5b might inhibit the ?- catenin pathway. Therefore, NOTCH3, WNT5B and ?-CATENIN gene expression were analyzed by qPCR. NOTCH3 and WNT5B gene expression confirmed the microarray data and no statistical difference were observed in ?-CATENIN expression. Moreover, all the CAECs conditions were subjected to scratch migration assay and the formation of capillary-like structures assay. CAEC-SNAIL+TGF-?2 had a significant migration compared to other conditions and the three EndMT inductions (TGF-?2, SNAIL, and SNAIL+TGF-?2) were not able to form capillary-like structures. Some microRNAs were selected and evaluated by qPCR. The miR-let7a was significantly expressed in the SNAIL and SNAIL+TGF-?2 groups. The assay of gain or loss of function of miR-let7a was realized; however, the repression or induction of miR-let7a did not change the EndMT. These results suggest that endothelial cells from distinct anatomical sources have different responses when stimulated to undergo the EndMT. Moreover, the association between SNAIL+TGF-?2 is a potent inductor for EndMT and this induction can be mediated by Notch and non-canonical Wnt signaling pathway activation.

A carcinogênese oral é um processo multifásico, onde componentes genéticos levam a desregulação de vias de sinalização celular que controlam funções celulares básicas, como divisão, diferenciação e morte celular. Uma das maneiras de compreender a natureza biológica dos cânceres, além do curso clínico, é através do entendimento do processo de progressão e metástase destas neoplasias. Este estudo teve como objetivo avaliar a participação da proteína Twist no desenvolvimento e progressão dos carcinomas epidermóides orais. Com tal proposta, também foi avaliada a participação das proteínas caderina-E e p-Akt, e sua possível interação com Twist no processo de carcinogênese oral. O trabalho em questão analisou a expressão imuno-histoquímica destas proteínas em 30 espécimes de displasia oral, 20 de carcinoma epidermóide oral e 10 de mucosa oral normal, e avaliou também a possível inter-relação dessas proteínas em linhagens derivadas de carcinoma epidermóide de cabeça e pescoço por meio dos ensaios de Western Blotting e imunofluorescência. Os resultados deste estudo demonstraram uma relação inversamente proporcional entre Twist e caderina-E desde os estágios mais precoces da carcinogênese oral. Tal afirmação baseou-se na presença de diferenças significantes entre a expressão imuno-histoquímica de Twist e Caderina-E na amostras de epitélio oral, epitélio displásico e nos espécimes de carcinoma epidermóide oral. Adicionalmente, foi observada a relação inversa entre Twist e a Caderina-E nas linhagens de carcinoma epidermóide de cabeça e pescoço, sendo este evento constatado pelo decréscimo nos níveis protéicos da Caderina-E frente a uma elevação de Twist. Estes resultados sugerem um importante papel de Twist na progressão do carcinoma epidermóide oral, e juntamente com a Caderina-E, pode representar um relevante marcador biológico do câncer oral. / The oral carcinogenesis is a multi-stage process, where genetic components leads to deregulation of cell signaling pathways that control basic cellular functions such as division, differentiation and cell death. One way to understand the biological nature of cancers, besides the clinical course, is through understanding the process of progression and metastasis of these neoplasms. This study aimed to evaluate the role of Twist protein in the development and progression of oral squamous cell carcinomas. With this proposal, was also evaluated the involvement of E-cadherin and p-Akt proteins, and its possible interaction with Twist in the process of oral carcinogenesis. The work in question examined the immunohistochemical expression of these proteins in 30 specimens of oral dysplasia, 20 oral squamous cell carcinoma and 10 normal oral mucosa, and also evaluated the possible interrelationship of these proteins in lines derived from squamous cell carcinoma of head and neck by means of Western blotting assays and immunofluorescence. The results of this study showed an inverse relationship between Twist and E-cadherin since the earliest stages of oral carcinogenesis. These results were based on the presence of significant differences between the immunohistochemical expression of Twist and ECadherin in samples of oral epithelium, dysplastic epithelium and in specimens of oral squamous cell carcinoma. In addition, we observed the inverse relationship between Twist and E-Cadherin in the lines of squamous cell carcinoma of head and neck; this event was evidenced by the decrease in protein levels of E-Cadherin forward to a high of Twist. These results suggest an important role of Twist in the progression of oral squamous cell carcinoma, and along with E-cadherin may represent a relevant biomarker of oral cancer.

A carcinogênese oral é um processo multifásico, onde componentes genéticos levam a desregulação de vias de sinalização celular que controlam funções celulares básicas, como divisão, diferenciação e morte celular. Uma das maneiras de compreender a natureza biológica dos cânceres, além do curso clínico, é através do entendimento do processo de progressão e metástase destas neoplasias. Este estudo teve como objetivo avaliar a participação da proteína Twist no desenvolvimento e progressão dos carcinomas epidermóides orais. Com tal proposta, também foi avaliada a participação das proteínas caderina-E e p-Akt, e sua possível interação com Twist no processo de carcinogênese oral. O trabalho em questão analisou a expressão imuno-histoquímica destas proteínas em 30 espécimes de displasia oral, 20 de carcinoma epidermóide oral e 10 de mucosa oral normal, e avaliou também a possível inter-relação dessas proteínas em linhagens derivadas de carcinoma epidermóide de cabeça e pescoço por meio dos ensaios de Western Blotting e imunofluorescência. Os resultados deste estudo demonstraram uma relação inversamente proporcional entre Twist e caderina-E desde os estágios mais precoces da carcinogênese oral. Tal afirmação baseou-se na presença de diferenças significantes entre a expressão imuno-histoquímica de Twist e Caderina-E na amostras de epitélio oral, epitélio displásico e nos espécimes de carcinoma epidermóide oral. Adicionalmente, foi observada a relação inversa entre Twist e a Caderina-E nas linhagens de carcinoma epidermóide de cabeça e pescoço, sendo este evento constatado pelo decréscimo nos níveis protéicos da Caderina-E frente a uma elevação de Twist. Estes resultados sugerem um importante papel de Twist na progressão do carcinoma epidermóide oral, e juntamente com a Caderina-E, pode representar um relevante marcador biológico do câncer oral. / The oral carcinogenesis is a multi-stage process, where genetic components leads to deregulation of cell signaling pathways that control basic cellular functions such as division, differentiation and cell death. One way to understand the biological nature of cancers, besides the clinical course, is through understanding the process of progression and metastasis of these neoplasms. This study aimed to evaluate the role of Twist protein in the development and progression of oral squamous cell carcinomas. With this proposal, was also evaluated the involvement of E-cadherin and p-Akt proteins, and its possible interaction with Twist in the process of oral carcinogenesis. The work in question examined the immunohistochemical expression of these proteins in 30 specimens of oral dysplasia, 20 oral squamous cell carcinoma and 10 normal oral mucosa, and also evaluated the possible interrelationship of these proteins in lines derived from squamous cell carcinoma of head and neck by means of Western blotting assays and immunofluorescence. The results of this study showed an inverse relationship between Twist and E-cadherin since the earliest stages of oral carcinogenesis. These results were based on the presence of significant differences between the immunohistochemical expression of Twist and ECadherin in samples of oral epithelium, dysplastic epithelium and in specimens of oral squamous cell carcinoma. In addition, we observed the inverse relationship between Twist and E-Cadherin in the lines of squamous cell carcinoma of head and neck; this event was evidenced by the decrease in protein levels of E-Cadherin forward to a high of Twist. These results suggest an important role of Twist in the progression of oral squamous cell carcinoma, and along with E-cadherin may represent a relevant biomarker of oral cancer.

TEÓFILO, C. R. Investigação da associação entre os mirnas 10a, 17, 29c e 31 e a expressão de il-6 e stat3 em lesões orais potencialmente malignas, no câncer bucal e campo de cancerização. 2017. 105 f. Tese (Doutorado em Odontologia) - Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2017. / Submitted by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-05-02T12:28:15Z No. of bitstreams: 1 2017_tese_crteofilo.pdf: 2960055 bytes, checksum: 9b053dd115c86e0f4667ca5b49068d3c (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-05-02T12:28:22Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_tese_crteofilo.pdf: 2960055 bytes, checksum: 9b053dd115c86e0f4667ca5b49068d3c (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-02T12:28:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_tese_crteofilo.pdf: 2960055 bytes, checksum: 9b053dd115c86e0f4667ca5b49068d3c (MD5) Previous issue date: 2017-02-24 / Oral cavity malignant neoplasms are a serious public health problem in Brazil and in the world. The most common histologic subtype in the mouth are squamous cell carcinoma (SCC). Often, before the onset of SCC, there are clinical and histological changes with a greater potential for malignant transformation, called potentially malignant disorders (PMD). Multiple molecular factors may contribute to the development of this neoplasms. Signal Transducers and Activators of Transcription-3 (STAT3) is a cytokine-activated signal transducer, which may be directly active in neoplastic. High levels of IL-6, a possible STAT3 activator, have been associated with poor prognosis in SCC. MicroRNAs (miRNAs) are a group of RNAs that act as gene-regulator in the post-transcriptional phase through the degradation or silencing of messenger RNAs. The present study aimed to quantify microRNAs miR-10a, miR-17, miR-29c and miR-31 in the field effect area of oral dysplasia and SCC. Additionally, it is intended to evaluate the expression of IL-6 and STAT3 in these lesions. For this, samples of 47 SCC, 21 PMD and 21 controls were collected. In the patients with SCC or PMD, in addition to the lesion area, a normal mucosa sample was collected, 1 cm away from the lesion. miRNAs were analyzed by real-time PCR and STAT3 and IL-6 by immunohistochemistry. The SCC sample was, most of them, moderately differentiated (91.5%), with growth in nets (73%) and non-keratinizing (52.6%). Dysplasia presented, more frequently, mild (52%), and 42.8% of them showed intense subepithelial inflammation. The mean age of the patients in the three groups was 52 ± 21 years. Males were predominant in the SCC group (67.3%) and female in DPM (57.1%). The most frequent localization site for both groups was tongue. Hyperexpression of all studied miRNAs were observed in SCC and PMD, as well as in the perilesional regions. Evaluating SCC, all the miRNAs studied were correlated with each other, while in SCC perilesion increase of miR-31 was accompanied by elevation of miR-17 levels, as well as hyperexpression of miR-29c was accompanied by miR-10a increase. There was an increase of miR-17 and miR-29c in SCC compared to PMD. In PMD, the increase of miR-10a was accompanied by an increase of miR-17 and miR-29c; a similar situation occurred between miR-31 and miR-17. In PMD perilesion, miR-10a and miR-29c presented positive correlation. High expression of IL-6 was obtained in 100% of the SCC and PMD samples. STAT3 presented positivity for 84.6% of SCC samples and 88.2% of DPM samples. Positive correlation between miR-29c and miR-10a was found in SCC, in dysplasias and perilesional areas, indicating that hyperexpression of these microRNAs is an early event in the oral carcinogenesis. / As neoplasias malignas de cavidade oral constituem um sério problema de saúde pública no Brasil e no mundo, sendo o tumor maligno mais comum em boca o Carcinoma de Células Escamosas (CCE). Frequentemente, antes do surgimento do CCE, ocorrem alterações clínicas e histológicas com maior potencial de transformação maligna, chamadas desordens potencialmente malignas (DPM). Fatores moleculares podem contribuir para o desenvolvimento dessa neoplasia. O Signal Transducers and Activators of Transcription-3 (STAT3) é um transdutor de sinais frequentemente ativado por citocinas, como IL-6, que pode atuar nesse processo. Já os microRNAs (miRNAs) regulam a expressão gênica pós-transcricional degradando ou silenciando RNAs mensageiros. O presente trabalho objetivou quantificar os níveis de microRNAs miR-10a, miR-17, miR-29c e miR-31 em campo de cancerização de displasias e CCE. Adicionalmente, avaliou-se o padrão de expressão de IL-6 e STAT3 nessas lesões. Para tanto, foram coletadas amostras de 47 CCEs, 21 displasias e 21 de mucosa normal. Nos grupos CCE e DPM, foi coletada amostra adicional de mucosa perilesional, distando 1 cm da lesão. Os miRNAs foram analisados por PCR em tempo real e STAT3 e IL-6 por imunoistoquímica (IQ). Os casos de CCE eram, predominantemente, moderadamente diferenciados (91,5%), com crescimento em lençóis ou ninhos (73%) e não-ceratinizantes (52,6%). As displasias leves apresentaram-se mais frequentemente (52%), sendo que 42,8% mostravam inflamação subepitelial intensa. A idade média dos pacientes dos três grupos foi de 52±21 anos. Houve predomínio do sexo masculino no grupo CCE (67,3%) e do feminino nas displasias (57,1%). Detectou-se hiperexpressão dos miRNAs estudados em CCE e displasias, assim como nas regiões perilesionais. Identificou-se correlação positiva entre todos os miRNAs estudados no grupo CCE, enquanto na área adjacente ao tumor o aumento de miR-31 foi acompanhado de elevação nos níveis de miR-17, assim como o aumento de miR-29c foi seguido por incremento de miR-10a. Houve aumento significativo da expressão de miR-17 e miR-29c em CCE em relação a displasias. Nestas, houve correlação positiva do miR-10a com miR-29c e miR-17, ocorrendo situação semelhante entre miR-31 e miR-17. Em região perilesional de DPM, os microRNAs miR-10a e miR-29c apresentaram correlação positiva. O aumento da expressão de miR-31 foi relacionado a displasias com classificação histológica mais severa. Obteve-se alta expressão de IL-6 em 100% das amostras de CCE e DPM. STAT3 apresentou positividade para 84,6% das amostras de CCE e 88,2% de DPM. Correlação positiva entre miR-29c e miR-10a foi encontrada no CCE, nas displasias e áreas perilesionais, indicando que a hiperexpressão desses microRNAs é um evento precoce no processo de carcinogênese oral.

Made available in DSpace on 2016-07-01T13:10:35Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-11-12. Added 1 bitstream(s) on 2016-07-01T13:14:17Z : No. of bitstreams: 1 000866541.pdf: 1198385 bytes, checksum: 265d4dc3d78da2996e89f94af5e66b2d (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Fundação Paulista Contra a Hanseníase / hanseníase é uma doença de caráter complexa causada pelo Mycobacterium leprae, que é um patógeno intracelular obrigatório com predileção por macrófagos na pele e células de Schwann nos nervos periféricos. O genoma altamente conservado do bacilo sugere que o patógeno não seja o responsável pela variedade de fenótipos clínicos e biológicos observada na doença, atribuindo grande importância aos fatores genéticos do hospedeiro. Estudos de ligação do tipo genome-wide apontaram um locus de susceptibilidade para a doença na região cromossômica 10p13 e o gene GATA3, localizado na região 10p15, é um forte candidato a fazer parte dessa associação devido à sua localização no genoma e ao seu papel na resposta imune. O GATA-3 é um fator de transcrição clássico na diferenciação de células Th2, no entanto, sabe-se hoje que essa proteína possui outras funções importantes para o sistema imune. Nós empregamos a estratégia de estudo de associação do tipo caso-controle em série, utilizando duas amostras populacionais do Brasil com 1.633 indivíduos, para testar sete variantes genéticas do GATA3. Um estudo funcional também foi conduzido para avaliar o efeito dos polimorfismos associados sobre a expressão de GATA-3 e produção de citocinas. O alelo A do polimorfismo rs10905284 foi associado com resistência para a hanseníase em ambas as amostras. Na análise combinando as duas amostras este efeito do alelo A foi confirmado (OR 0,67; IC95%: 0,54-0,84; p=0,0004). A análise funcional mostrou que os indivíduos portadores do genótipo AA expressam altos níveis da proteína GATA-3 nos linfócitos. Portanto, nós confirmamos que o marcador rs10905284 está associado à hanseníase na população brasileira e influencia os níveis de expressão do fator de transcrição GATA-3 / Leprosy outcome is a complex trait and the host-pathogen-environment interaction defines the emergence of the disease. The causative agent of the disease, Mycobacterium leprae, exhibits a conserved genome and could not be accountable for the variety of outcomes observed from exposition, infection and disease. Thus, host genetic risk factors have been successfully associated to leprosy. The 10p13 chromosomal region was linked to leprosy in familial studies and the GATA3 gene is a strong candidate to be part of this association due to its locus and the role that exerts in the immune response. The GATA-3 is a transcription factor involved in the Th2 cell differentiation, however, today it is recognized the ample role of this protein in the immune response. Here, we applied a stepwise strategy to test genetic variants at GATA3 in two case-control samples from Brazil comprising a total of 1,633 individuals. A functional investigation was also conducted to evaluate the effect of the polymorphisms on the GATA-3 protein and the cytokines production. The A allele of rs10905284 marker was associated to leprosy resistance in both samples. In the analysis combining the two samples this effect was reinforced (OR 0,67; CI95%: 0,54-0,84; p=0,0004). The functional analysis showed that individuals carrying AA genotype express higher levels of GATA-3 protein in lymphocytes. So, we confirmed that the rs10905284 is a locus associated to leprosy in the Brazilian population and influences the levels of this transcription factor.