Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2012-06-19T21:38:54Z No. of bitstreams: 1 CláudioFigueira Caracterização de mutantes de Leptospira spp.....pdf: 700655 bytes, checksum: 75bf81169cbe8bb9b8be3dc83344b26e (MD5) / Made available in DSpace on 2012-06-19T21:38:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CláudioFigueira Caracterização de mutantes de Leptospira spp.....pdf: 700655 bytes, checksum: 75bf81169cbe8bb9b8be3dc83344b26e (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, Bahia, Brasil / O gênero Leptospira inclui espécies não patogênicas, que vivem exclusivamente no ambiente, assim como espécies patogênicas capazes de infectar o homem e animais. Há poucos anos, os genomas de três espécies patogênicas e de uma não patogênica foram sequenciados. Leptospira interrogans é a principal espécie causadora da leptospirose humana, especialmente nas áreas urbanas do Brasil, e cerca de 1200 genes podem estar associados à virulência na L. interrogans. Ferramentas moleculares, capazes de modificar geneticamente espécies de leptospiras, são essenciais para a compreensão do papel funcional destes genes. Neste trabalho, foram caracterizados mutantes obtidos por diferentes abordagens moleculares para avaliação de potenciais fatores de virulência em L. interrogans. Utilizando-se a técnica de mutagênese randômica, por meio da inserção do transposon Himar1, foi obtido um mutante com o gene interrompido da lipoproteína Loa22, a qual possui um segmento idêntico ao domínio OmpA. Verificou-se que a ausência de Loa22 levou a perda de virulência desta bactéria em modelos animais, enquanto que o mutante com o gene loa22 reconstituído voltou a apresentar virulência semelhante à cepa selvagem original, sendo a primeira descrição de um fator de virulência em leptospiras. Para avaliar especificamente o papel da LigA e da LigB, proteínas com várias evidências de associação com virulência, duas estratégias foram utilizadas: a recombinação homóloga por mutação dirigida para obter a deleção do gene ligB em L. interrogans cepa L1130; e um plasmídeo replicativo para a inserção do gene ligA e ligB em L. biflexa. Como resultado, verificou-se que a ausência de LigB não é suficiente para provocar a perda de virulência da L. interrogans; e por fim, foi demonstrado que a expressão heteróloga de LigA e LigB em L. biflexa conferiu aumento na adesão em cultura de célula e em fibronectina. Este último estudo mostra que a expressão heteróloga em L. biflexa pode servir para caracterizar fatores de virulência do agente causador da leptospirose. O conjunto destes achados contribui para a compreensão da patogênese da leptospirose e poderá cooperar no desenvolvimento uma vacina eficaz para o controle da transmissão desta doença e para obtenção de novos métodos de diagnóstico para leptospirose. / The genus Leptospira includes non-pathogenic free-living and pathogenic species that can infect humans and animals. Recently the genome of four species, including a non-pathogenic one, was published. Leptospira interrogans is the main species that causes human leptospirosis, especially in the urban areas of Brazil, and about 1200 genes may be associated with virulence in this specie. For that reason, molecular tools used to genetically modify this agent are essential to understanding the biology of the agent and the role of these genes. In this work, mutants obtained by different molecular approaches were characterized to identify potential virulence factors in L. interrogans. The random mutagenesis with Himar1 transposon was used to obtain a mutant with interruption of the gene loa22, which product is a described protein with a predicted OmpA domain. The mutant showed loss of virulence in animal models, and the virulence was restored with the complementation with the homologous gene, becoming the first description of a virulence factor in leptospires. To evaluate the role of LigA and LigB, described putative virulence factors in leptospires, two different approaches were used: allelic exchange using targeted mutagenesis to disrupt the ligB gene in L. interrogans strain Fiocruz L1 130; and the use of replicative plasmid to insert the heterologous genes of ligA and ligB in the L. biflexa. As result, we showed that the absence of LigB is not sufficient to cause the loss in the virulence of L. interrogans; and it was also shown that heterologous expression of LigA and LigB in L. biflexa confers enhanced adhesion to cell culture and fibronectin. This study indicates that L. biflexa can serve as a surrogate host to characterize the role of virulence factors in Leptospira sp. .These results contribute to a better understanding of the pathogenesis of leptospirosis and may be important in studies for the development of an effective vaccine and new diagnostic methods.

As bactérias do gênero Enterococcus spp. estão amplamente distribuídas na natureza, atuando como patógenos oportunistas e freqüentemente causam infecções em pacientes imunocomprometidos. Uma característica destes microrganismos é a resistência intrínseca a muitos dos antimicrobianos utilizados habitualmente no tratamento de infecções por cocos Gram positivos. Por outro lado, os Enterococos têm adquirido diferentes determinantes genéticos que conferem resistência a vários antimicrobianos. Este trabalho tem como objetivo determinar a freqüência da resistência a níveis elevados de aminoglicosídeos (gentamicina), tetraciclina, bem como avaliar a diversidade genética das amostras, pesquisando os genes envolvidos na resistência, além de detectar o fator de virulência gelatinase em isolados clínicos e alimentares de Enterococcus spp. Os testes de suscetibilidade antimicrobiana dos 52 isolados de alimentos revelaram que 7,7% (n=4) apresentaram resistência somente à tetraciclina, 5,8% (n=3) foram resistentes somente a gentamicina e 28,9% (n=15) apresentaram resistência a ambos antimicrobianos. Nos 40 isolados clínicos, 42,5% (n=17) foram resistentes a tetraciclina, 20% (n=8) resistentes a gentamicina e 17,5% (n=7) foram resistentes a ambos antimicrobianos. A pesquisa de genes de resistência em isolados alimentares revelou que 90% (n=17) dos microrganismos resistentes a tetraciclina apresentaram o gen tet(M), e 100% das amostras resistentes a gentamicina apresentaram o gene aac(6’)-le-aph(2”)-Ia. Entretanto, 30% dos microrganismos sensíveis apresentaram algum dos genes de resistência. Nos isolados clínicos 95,8% (n=23) das amostras resistentes a tetraciclina apresentaram o gene tet(M) e 100% dos Enterococos resistentes a gentamicina apresentaram o gen aac(6’)-le-aph(2”)-Ia. No entanto, dos isolados que se mostraram sensíveis, 37,5% apresentaram algum dos genes de resistência analisados. Ainda, foi verificado que 78% (n=49) dos microrganismos isolados de alimentos hidrolisaram a gelatina, e somente 50% (n=20) dos isolados clínicos apresentaram a mesma atividade. / Bacteria of the Enterococcus spp. genus are widely distributed in the natural environment, Enterococci are opportunistic pathogens, and often are the causal agents of infections in immunosuppressed patients. One of the remarkable characteristics of these microorganisms is the intrinsic resistance they offer against several of the antimicrobial agents routinely prescribed in the treatment of Gram-positive cocci. On the other hand, enterococci have been proved to acquire different genetic markers that lend resistance to a variety of other antimicrobial ,searching the involved genes in the resistance, besides detecting the virulence factor gelatinase in isolated of Enterococcus spp. from foods and humans samples. This study aimed to determine the frequency of antimicrobial resistance against high concentrations of aminoglycosides (gentamicin), tetracycline, as well as assess the genetic diversity of microbial strains isolated from foods and humans. Antibiotic susceptibility tests of Enterococcus spp. isolated from food showed that of the 52 isolates, 7,7% (n=4) were tetracycline resistant, 5,8% (n=3) were resistant only the gentamicin and 28,9% (n=15) was resistant to both antibiotics. Already in 40 clinical samples 42,5% (n=17) of the samples were tetracycline resistant, 20% (n=8) were gentamicin resistant and 17,5% (n=7) were resistant to both antimicrobials. The research of genes of resistance in isolates from food disclosed that in 90% (n=17) of tetraciclyn resistant Enterococcus had the tet(M) gen, and 100% gentamicin resistant samples had aac(6')-le-aph(2")-Ia gene and 30% of the sensible microorganism had presented some of the resistance genes. Already in clinical isolates 95,8% (n=23) tetraciclyn resistant samples contained the tet(M) gene and 100% of the gentamicin resistant enterococcus had presented gen aac(6')-le-aph(2")-Ia; however 37,5% enterococcus sensible had presented some of the genes of resistance in research. In this work, also it was verified that 78% (n=49) of the foods isolates produced gelatinase, and 50% (n=20) of the clinical isolates demonstrated the capacity of degradation of the gelatin substrate.

PERDIGÃO NETO, Lauro Vieira. Aspectos clínicos, epidemiológicos e laboratoriais da criptococose no Estado do Ceará entre os anos de 1985 e 2010, bem como efeitos de antirretrovirais inibidores de protease sobre virulência e crescimento de Cryptococcus neoformans in vitro. 2011. 124 f. Dissertação (Mestrado em Microbiologia Médica) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2011. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-06-26T15:13:50Z No. of bitstreams: 1 2011_dis_lvperdigão neto.pdf: 1531970 bytes, checksum: 9be3744624b4fefb6cfc150fa1399c30 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes(erikaleitefernandes@gmail.com) on 2013-07-04T16:13:57Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_dis_lvperdigão neto.pdf: 1531970 bytes, checksum: 9be3744624b4fefb6cfc150fa1399c30 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-07-04T16:13:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_dis_lvperdigão neto.pdf: 1531970 bytes, checksum: 9be3744624b4fefb6cfc150fa1399c30 (MD5) Previous issue date: 2011 / A criptococose é a infecção causada a partir da inalação de leveduras do gênero Cryptococcus. A doença costuma acometer mais freqüentemente pacientes com alguma imunodepressão e evoluir de forma subaguda ou crônica. Tem predileção por sistema nervoso central, manifestando-se como meningite, mas também pode apresentar-se como doença pulmonar ou de forma disseminada, com envolvimento de outros órgãos. A atividade proteolítica em leveduras do gênero Cryptococcus tem sido associada a sua patogenicidade. A atividade da enzima fosfolipase também se faz importante para este gênero, uma vez que está relacionada à nutrição e à capacidade invasiva do microrganismo. Outro mecanismo de virulência de maior relevância para a patogenicidade de Cryptococcus spp. é a cápsula polissacarídica presente em sua superfície, responsável principal pelo escape aos mecanismos de defesa do hospedeiro. Esta pesquisa teve como objetivo traçar um perfil clínico, epidemiológico e laboratorial dos pacientes com criptococose entre os anos de 1985 e 2010, bem como investigar os efeitos dos inibidores de protease Saquinavir, Darunavir, Ritonavir e Indinavir sobre o crescimento, espessura da cápsula, atividade de protease e expressão de fosfolipase em cepas de Cryptococcus neoformans isoladas de humanos. A comparação entre grupo soropositivo para o HIV com grupo soronegativo mostrou que o primeiro apresenta maiores médias de idade e maior freqüência de sexo masculino acometido; por outro lado, o grupo soropositivo demonstra menores proteinorraquia e celularidade no líquor, bem como menores valores de leucometria e plaquetometria em sangue periférico. Após a realização do teste de sensibilidade por microdiluição em caldo, os fungos foram expostos a três concentrações distintas dos fármacos e avaliados com relação à expressão das duas enzimas e espessura da cápsula. Os resultados mostraram inibição significativa (p<0,05) da atividade de protease pelo menos na maior concentração testada para todas as drogas, bem como estreitamento da cápsula em algumas combinações de drogas e cepas. Por outro lado, quanto à atividade de fosfolipase, observou-se um aumento na expressão dessa enzima, especialmente nas concentrações mais elevadas das quatro drogas. Conclui-se, portanto, que apesar de estes antirretrovirais não inibirem o crescimento de Cryptococcus neoformans, são capazes de alterar mecanismos de virulência destas leveduras.

SILVA, Cícero Igor Simões Moura. Estudo de marcadores de virulência do Helicobacter pylori e sua associação com gastrite, úlcera péptica e câncer gástrico no nordeste do Brasil. 2013. 90 f. Tese (Doutorado em Cirurgia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2013. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2015-02-13T13:13:48Z No. of bitstreams: 1 2013_tese_cismsilva.pdf: 1742706 bytes, checksum: 2bba694b44e67567d03b3f06c3268abd (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2015-02-13T13:18:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_tese_cismsilva.pdf: 1742706 bytes, checksum: 2bba694b44e67567d03b3f06c3268abd (MD5) / Made available in DSpace on 2015-02-13T13:18:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_tese_cismsilva.pdf: 1742706 bytes, checksum: 2bba694b44e67567d03b3f06c3268abd (MD5) Previous issue date: 2013 / The main gastric diseases are associated with H. pylori infection, a bacterium that demonstrates a high level of genotypic diversity , the expression of various genes that confer greater virulence strains. The objective was to evaluate genetic markers of virulence of H. pylori strains of in patients with gastritis, ulcers and gastric cancer. Genotyping of the strains was performed by PCR. We evaluated 183 patients, attended at Walter Cantídio University Hospital, 88 men , 95 women , ranging in age from 18-88 + 52.8 years , diagnosed positive for infection by H. pylori, 48 with gastric cancer, 71 with peptic ulcer and 64 with gastritis. The prevalence of genotypes was: 75/183 (40.9 %) vacA i1, 29/183 (15.8 %) vacA i2, 146/183 (79.8 %) babA2, 81/183 (44.3 %) oipA, 107/183 (58.5%) iceA1 and 56/183 (30.6%) iceA2. In the group of patients with gastric cancer was observed that the most frequent genotype was babA2 35/48 (72.9 %), followed by the gene iceA1; 31/48 (64.6 % ) and oipA 18/48 (37 , 5%). In the group of patients with peptic ulcer the most frequent genotype was babA2 63/71 (88.7 %), followed by the gene iceA1; 40/71 (56.3 %) and oipA 31/71 (43.7 %). In the group of patients with gastritis the most frequent genotype was babA2 48/64 (75.0%), followed by the gene iceA1 vacA i1 and 36/64 (56.2%) and oipA 32/64 (50.0 %). The i2 vacA allele was associated with gastric cancer. In peptic ulcer the prevalence of all genotypes and was associated with babA2. Gastritis was associated with vacA i1 allele. There were no association between the diseases and the other genotypes. The genetic strains of H. pylori and its association with gastric disorder is important to clearly establish their pathogenic role for the various clinical outcomes related to this infection / As principais afecções gástricas são associadas á infecção crônica pelo H. pylori, uma bactéria que demonstra um alto nível de diversidade genotípica, pela expressão de vários genes, que conferem maior virulência às cepas bacterianas. O objetivo foi avaliar marcadores genéticos de virulência das cepas de H. pylori em pacientes portadores de gastrite, úlcera e câncer gástrico. A genotipagem das cepas foi realizada por meio da técnica de PCR. Foram avaliados 183 pacientes, atendidos no Hospital Universitário Walter Cantídio, sendo 88 homens, 95 mulheres, com idade variando de 18-88 + 52,8 anos, com diagnóstico positivo para a infecção por H. pylori, sendo 48 com câncer gástrico, 71 com úlcera péptica e 64 com gastrite. A prevalência dos genótipos estudados foi: 75/183 (40,9%) vacA i1, 29/183 (15,8%) vacA i2, 146/183 (79,8%) babA2, 81/183 (44,3%) oipA, 107/183 (58,5%) iceA1 e 56/183 (30,6%) iceA2. No grupo dos pacientes com câncer gástrico observou-se que o genótipo mais frequente foi o babA2 35/48 (72,9%), seguido do gene iceA1; 31/48 (64,6%) e oipA 18/48 (37,5%). No grupo dos pacientes com úlcera péptica o genótipo mais frequente foi o babA2 63/71 (88,7%), seguido do gene iceA1; 40/71 (56,3%) e oipA 31/71 (43,7%). No grupo dos pacientes com Gastrite o genótipo mais frequente foi o babA2 48/64 (75,0%), seguido do gene iceA1 e vacA i1 36/64 (56,2%) e oipA 32/64 (50,0%). O alelo vacA i2 foi associado com câncer gástrico. Na úlcera péptica houve grande prevalência de todos os genótipos e houve associação com babA2. A gastrite mostrou-se associada com o alelo vacA i1. Não houve associação entre as afecções e os demais genótipos estudados. O estudo genético das cepas de H. pylori e sua associação com as afecções gástricas é importante para se estabelecer com clareza o seu papel patogênico para os diversos desfechos clínicos relacionados à essa infecção.

NOGUEIRA, Márcia Viana Bessa. Detecção de porphyromonas gingivalis e dos genótipos fima II e IV em portadores de periodontite agressiva. 2011. 62 f. Dissertação (Mestrado em Odontologia) - Universidade Federal do Ceará. Programa de Pós-Graduação em Odontologia, Fortaleza, 2011. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2011-12-14T13:40:44Z No. of bitstreams: 1 2011_dis_mvbnogueira.pdf: 1085134 bytes, checksum: 7287e6f4bbad23966324cc64557047d3 (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-02-01T13:44:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_dis_mvbnogueira.pdf: 1085134 bytes, checksum: 7287e6f4bbad23966324cc64557047d3 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-02-01T13:44:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_dis_mvbnogueira.pdf: 1085134 bytes, checksum: 7287e6f4bbad23966324cc64557047d3 (MD5) Previous issue date: 2011 / Porphyromonas gingivalis is a pathogen strongly associated with the etiology of chronic and aggressive periodontitis. The purpose of this study was to evaluate by Real-Time polymerase chain reaction (Real Time-PCR) the presence of Porphyromonas gingivalis (Pg) and fimA genotypes type II and type IV in patients with generalized aggressive periodontitis (GAgP). Forty individuals with aggressive periodontitis (AgP) (29.7 ± 8.1 years) were clinical analyzed through plaque index (PI), gingival index (GI), probing depth (PD), clinical attachment level (CAL) and microbiologically, by Real Time-PCR for the presence of Pg and fimA genotypes type II and type IV. Subgingival biofilm samples were collected from the interproximal periodontal sites (> PD and > CAL). The PD and CAL average of this sites were respectively: 9,5 ± 2,2 mm e 10,2 ± 2,8 mm. P. gingivalis was observed in 26 (65%) of individuals. FimA genotypes type II was detected in 16 (61,53%) while fimA genotypes type IV in 7 (26,92%) of those with P. gingivalis. However, no differences were observed between the clinical parameters of patients who presented or not the organism or its genotypes. There was also no association between the presence of genotypes and age or gender of patients. The data suggest an association between P. gingivalis fimA genotypes upon the occurrence of this microorganism in patients with generalized aggressive periodontitis. / Porphyromonas gingivalis é um patógeno extremamente associado com a etiologia da periodontite crônica e agressiva. O objetivo deste estudo foi avaliar através de reação em cadeia da polimerase em tempo real (Real Time-PCR) a presença de Porphyromonas gingivalis (Pg) e dos genótipos fimA II e IV em indivíduos com periodontite agressiva generalizada (PAG). Quarenta indivíduos com PAG (29,7 ± 8,1 anos) foram analisados clinicamente - Índice de Placa (IP), Índice Gengival (IG), profundidade de sondagem (PS), nível de inserção clínico (NIC) - e microbiologicamente, através de Real Time PCR, quanto à presença de Pg e dos genótipos fimA II e IV. Amostras de biofilme subgengival foram colhidas do sítio proximal com maior PS e maior NIC. Médias de PS e NIC desses sítios foram respectivamente: 9,5 ± 2,2 mm e 10,2 ± 2,8 mm. P. gingivalis foi observado em 26 (65%) dos indivíduos. O genótipo fimA II foi verificado em 16 (61,53%) enquanto o genótipo fimA IV em 7 (26,92%) dos que apresentaram P. gingivalis. Entretanto, não foi observada diferença estatística entre os parâmetros clínicos dos indivíduos que apresentaram ou não o microrganismo ou seus respectivos genótipos. Também não foi verificada associação entre a presença dos genótipos e idade ou gênero dos pacientes. Os dados sugerem uma associação entre genótipos fimA II de Porphyromonas gingivalis quando da ocorrência deste microrganismo em indivíduos com periodontite agressiva generalizada.

As bactérias do gênero Enterococcus spp. estão amplamente distribuídas na natureza, atuando como patógenos oportunistas e freqüentemente causam infecções em pacientes imunocomprometidos. Uma característica destes microrganismos é a resistência intrínseca a muitos dos antimicrobianos utilizados habitualmente no tratamento de infecções por cocos Gram positivos. Por outro lado, os Enterococos têm adquirido diferentes determinantes genéticos que conferem resistência a vários antimicrobianos. Este trabalho tem como objetivo determinar a freqüência da resistência a níveis elevados de aminoglicosídeos (gentamicina), tetraciclina, bem como avaliar a diversidade genética das amostras, pesquisando os genes envolvidos na resistência, além de detectar o fator de virulência gelatinase em isolados clínicos e alimentares de Enterococcus spp. Os testes de suscetibilidade antimicrobiana dos 52 isolados de alimentos revelaram que 7,7% (n=4) apresentaram resistência somente à tetraciclina, 5,8% (n=3) foram resistentes somente a gentamicina e 28,9% (n=15) apresentaram resistência a ambos antimicrobianos. Nos 40 isolados clínicos, 42,5% (n=17) foram resistentes a tetraciclina, 20% (n=8) resistentes a gentamicina e 17,5% (n=7) foram resistentes a ambos antimicrobianos. A pesquisa de genes de resistência em isolados alimentares revelou que 90% (n=17) dos microrganismos resistentes a tetraciclina apresentaram o gen tet(M), e 100% das amostras resistentes a gentamicina apresentaram o gene aac(6’)-le-aph(2”)-Ia. Entretanto, 30% dos microrganismos sensíveis apresentaram algum dos genes de resistência. Nos isolados clínicos 95,8% (n=23) das amostras resistentes a tetraciclina apresentaram o gene tet(M) e 100% dos Enterococos resistentes a gentamicina apresentaram o gen aac(6’)-le-aph(2”)-Ia. No entanto, dos isolados que se mostraram sensíveis, 37,5% apresentaram algum dos genes de resistência analisados. Ainda, foi verificado que 78% (n=49) dos microrganismos isolados de alimentos hidrolisaram a gelatina, e somente 50% (n=20) dos isolados clínicos apresentaram a mesma atividade. / Bacteria of the Enterococcus spp. genus are widely distributed in the natural environment, Enterococci are opportunistic pathogens, and often are the causal agents of infections in immunosuppressed patients. One of the remarkable characteristics of these microorganisms is the intrinsic resistance they offer against several of the antimicrobial agents routinely prescribed in the treatment of Gram-positive cocci. On the other hand, enterococci have been proved to acquire different genetic markers that lend resistance to a variety of other antimicrobial ,searching the involved genes in the resistance, besides detecting the virulence factor gelatinase in isolated of Enterococcus spp. from foods and humans samples. This study aimed to determine the frequency of antimicrobial resistance against high concentrations of aminoglycosides (gentamicin), tetracycline, as well as assess the genetic diversity of microbial strains isolated from foods and humans. Antibiotic susceptibility tests of Enterococcus spp. isolated from food showed that of the 52 isolates, 7,7% (n=4) were tetracycline resistant, 5,8% (n=3) were resistant only the gentamicin and 28,9% (n=15) was resistant to both antibiotics. Already in 40 clinical samples 42,5% (n=17) of the samples were tetracycline resistant, 20% (n=8) were gentamicin resistant and 17,5% (n=7) were resistant to both antimicrobials. The research of genes of resistance in isolates from food disclosed that in 90% (n=17) of tetraciclyn resistant Enterococcus had the tet(M) gen, and 100% gentamicin resistant samples had aac(6')-le-aph(2")-Ia gene and 30% of the sensible microorganism had presented some of the resistance genes. Already in clinical isolates 95,8% (n=23) tetraciclyn resistant samples contained the tet(M) gene and 100% of the gentamicin resistant enterococcus had presented gen aac(6')-le-aph(2")-Ia; however 37,5% enterococcus sensible had presented some of the genes of resistance in research. In this work, also it was verified that 78% (n=49) of the foods isolates produced gelatinase, and 50% (n=20) of the clinical isolates demonstrated the capacity of degradation of the gelatin substrate.

As bactérias do gênero Enterococcus spp. estão amplamente distribuídas na natureza, atuando como patógenos oportunistas e freqüentemente causam infecções em pacientes imunocomprometidos. Uma característica destes microrganismos é a resistência intrínseca a muitos dos antimicrobianos utilizados habitualmente no tratamento de infecções por cocos Gram positivos. Por outro lado, os Enterococos têm adquirido diferentes determinantes genéticos que conferem resistência a vários antimicrobianos. Este trabalho tem como objetivo determinar a freqüência da resistência a níveis elevados de aminoglicosídeos (gentamicina), tetraciclina, bem como avaliar a diversidade genética das amostras, pesquisando os genes envolvidos na resistência, além de detectar o fator de virulência gelatinase em isolados clínicos e alimentares de Enterococcus spp. Os testes de suscetibilidade antimicrobiana dos 52 isolados de alimentos revelaram que 7,7% (n=4) apresentaram resistência somente à tetraciclina, 5,8% (n=3) foram resistentes somente a gentamicina e 28,9% (n=15) apresentaram resistência a ambos antimicrobianos. Nos 40 isolados clínicos, 42,5% (n=17) foram resistentes a tetraciclina, 20% (n=8) resistentes a gentamicina e 17,5% (n=7) foram resistentes a ambos antimicrobianos. A pesquisa de genes de resistência em isolados alimentares revelou que 90% (n=17) dos microrganismos resistentes a tetraciclina apresentaram o gen tet(M), e 100% das amostras resistentes a gentamicina apresentaram o gene aac(6’)-le-aph(2”)-Ia. Entretanto, 30% dos microrganismos sensíveis apresentaram algum dos genes de resistência. Nos isolados clínicos 95,8% (n=23) das amostras resistentes a tetraciclina apresentaram o gene tet(M) e 100% dos Enterococos resistentes a gentamicina apresentaram o gen aac(6’)-le-aph(2”)-Ia. No entanto, dos isolados que se mostraram sensíveis, 37,5% apresentaram algum dos genes de resistência analisados. Ainda, foi verificado que 78% (n=49) dos microrganismos isolados de alimentos hidrolisaram a gelatina, e somente 50% (n=20) dos isolados clínicos apresentaram a mesma atividade. / Bacteria of the Enterococcus spp. genus are widely distributed in the natural environment, Enterococci are opportunistic pathogens, and often are the causal agents of infections in immunosuppressed patients. One of the remarkable characteristics of these microorganisms is the intrinsic resistance they offer against several of the antimicrobial agents routinely prescribed in the treatment of Gram-positive cocci. On the other hand, enterococci have been proved to acquire different genetic markers that lend resistance to a variety of other antimicrobial ,searching the involved genes in the resistance, besides detecting the virulence factor gelatinase in isolated of Enterococcus spp. from foods and humans samples. This study aimed to determine the frequency of antimicrobial resistance against high concentrations of aminoglycosides (gentamicin), tetracycline, as well as assess the genetic diversity of microbial strains isolated from foods and humans. Antibiotic susceptibility tests of Enterococcus spp. isolated from food showed that of the 52 isolates, 7,7% (n=4) were tetracycline resistant, 5,8% (n=3) were resistant only the gentamicin and 28,9% (n=15) was resistant to both antibiotics. Already in 40 clinical samples 42,5% (n=17) of the samples were tetracycline resistant, 20% (n=8) were gentamicin resistant and 17,5% (n=7) were resistant to both antimicrobials. The research of genes of resistance in isolates from food disclosed that in 90% (n=17) of tetraciclyn resistant Enterococcus had the tet(M) gen, and 100% gentamicin resistant samples had aac(6')-le-aph(2")-Ia gene and 30% of the sensible microorganism had presented some of the resistance genes. Already in clinical isolates 95,8% (n=23) tetraciclyn resistant samples contained the tet(M) gene and 100% of the gentamicin resistant enterococcus had presented gen aac(6')-le-aph(2")-Ia; however 37,5% enterococcus sensible had presented some of the genes of resistance in research. In this work, also it was verified that 78% (n=49) of the foods isolates produced gelatinase, and 50% (n=20) of the clinical isolates demonstrated the capacity of degradation of the gelatin substrate.

Orientador: Fernando Antonio de Ávila / Resumo: Escherichia coli patogênica aviária (APEC) é o principal agente da colibacilose, responsável por perdas econômicas em todo o mundo. Na literatura não há um consenso sobre o que define exatamente um patótipo APEC e não se sabe o papel das galinhas de angola na transmissão de APEC para humanos e outros animais. O presente estudo teve como objetivo investigar a presença de APEC em amostras de fezes e orofaringe de galinhas de angola saudáveis e de vida livre, bem como pesquisar fatores de virulência e caracterizá-las filogeneticamente e de acordo com o sorotipo e perfil de resistência a antimicrobianos. Os isolados obtidos apresentaram alta frequência de genes associados à virulência (VAGs) sendo a maioria pertencente ao grupo filogenético B1 e os pertencentes aos grupos B2 e F estiveram associados a um maior número de VAGs. Além disso, grande parte dos isolados foram considerados de alta patogenicidade e apresentaram um perfil de multi resistência a antimicrobianos, incluindo a presença de genes β-lactamases de espectro estendido. Os sorogrupos O2, O51e H4 foram os mais encontrados, sendo o sorotipo O51: H14 o de maior prevalência. As análises PFGE e MLST revelaram uma elevada heterogeneidade entre os isolados associados a 16 Sequence types (ST). Os resultados demonstraram que as galinhas de angola saudáveis e de vida livre podem se constituir como fontes de infecção de ExPEC para outros animais que têm contato próximo com essas aves, incluindo seres humanos. / Abstract: Avian Pathogenic Escherichia coli (APEC) is the main agent of colibacillosis, responsible for economic losses worldwide. In the literature there is no consensus on what exactly defines this pathotype and the role of guinea fowls in transmitting APEC to humans and other animals is unknown. The present study aimed to investigate the presence of APEC in feces and oropharynx samples from healthy and free-living guinea fowls, as well as to investigate virulence factors and characterize phylogenetically them and according to the serotype and antimicrobial resistance profile . The obtained isolates showed high frequency virulence associated genes (VAGs) being the majority belonging to the phylogenetic group B1 and those belonging to groups B2 and F were associated to a greater number of VAGs. In addition, most of the isolates were considered to be highly pathogenic and had a multi-resistant antimicrobial profile, including the presence of extended-spectrum βlactamases. Serogroups O2, O51 and H4 were the most frequently found, with serotype O51:H14 being the most prevalent. The PFGE and MLST analyzes revealed a high heterogeneity among isolates associated with 16 Sequence types (ST). The results showed that healthy and free-living guinea fowls may be sources of ExPEC infection for other animals that have close contact with these birds, including humans. / Doutor

Orientador: Maria de Lourdes Ribeiro de Souza da Cunha / Resumo: As infecções do trato urinário (ITU) estão entre as doenças infecciosas mais comuns na prática clínica, e Staphylococcus saprophyticus se destaca como o segundo agente etiológico mais isolado nessas infecções. Esse estudo objetiva caracterizar o perfil clonal, os fatores de virulência e o perfil de resistência aos antimicrobianos em isolados planctônicos e em biofilme de S. saprophyticus isolado de amostras de urina de pacientes com infecção do trato urinário, além de comparar a identificação de espécies de ECN obtida no Vitek 2 e no Maldi-TOF MS com a identificação genotípica. Foram utilizadas no estudo amostras de S. saprophyticus isoladas da urina de diferentes pacientes. As amostras utilizadas no estudo foram obtidas em estudo prospectivo conforme isolamento no Laboratório de Microbiologia do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Botucatu (HC-FMB) nos anos de 2013 e 2014, e comparadas com um banco de amostras previamente coletadas em 2008. As amostras foram coletadas de paciente procedentes de enfermarias, ambulatórios, pronto-socorro e unidades básicas de saúde de Botucatu e região. Foram estudadas 217 amostras de ECN de pacientes com ITU. A concordância do sistema automatizado Vitek 2 com o ITSPCR foi de 84,8%, com sensibilidade e especificidade de 98% e 100%, respectivamente. Maldi-TOF MS identificou corretamente todas as amostras de ECN. Os resultados obtidos através da análise de PFGE permitiram identificar 41 perfis distintos, entre os quais foram encont... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Doutor

GONÇALVES, M. H. R. B. Análise da associação dos marcadores cagT, LEC e oipA funcional e não funcional do Helicobacter pylori em afecções gástricas. 2015. 65 f. Tese (Doutorado em Farmacologia) - Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2015. / Submitted by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-02-16T15:22:57Z No. of bitstreams: 1 2015_tese_mhrbgoncalves.pdf: 2117891 bytes, checksum: 5e06f32a5a690624261d19c255b29315 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-02-16T15:23:06Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_tese_mhrbgoncalves.pdf: 2117891 bytes, checksum: 5e06f32a5a690624261d19c255b29315 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-16T15:23:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_tese_mhrbgoncalves.pdf: 2117891 bytes, checksum: 5e06f32a5a690624261d19c255b29315 (MD5) Previous issue date: 2015-12-15 / The Helicobacter pylori is a bacterium that colonizes the gastric mucosa of human beings. The chronic infection caused by this pathogen is strongly associated with an increased risk for gastric illnesses different, ranging from chronic gastritis and peptic ulcer for two types of gastric cancer, adenocarcinoma and lymphoma of the lymphoid tissue associated to mucosa. The aim of this study was to evaluate the association of cagT markers, LEC, functional and nonfunctional oipA in patients with disorders of gastritis, ulcers and stomach cancer. Genotyping of the strains was performed by PCR. Were evaluated 181 patients attended at the University Hospital Walter Cantídio, 87 (48.1%) men, 94 (51.9%) women, with ages ranging from 18-90 years, mean age of 53 + 17.8 years, with a positive diagnosis for H. pylori infection, these 48 carriers of gastric cancer, 69 patients with peptic ulcer and 64 with gastritis. The prevalence of the genotypes studied was: 145/181 (80.1%) cagT, 83/181 (45.9%) LEC 81/181 (44.7%) oipA and oipA"on"34/81.In the group of patients with gastric cancer was observed that the most frequent genotype was the cagT 43/48 (89,5%), followed by the oipA gene "on" 10/18 (55.6%) and LEC 17/48 (35.4%). In the group of patients with peptic ulcer genotype was the most frequent cagT 62/69 (89.8%), followed by gene LEC, 34/69 (49.3%) and the oipA"on" 13/31 (41.9%). In the group of patients with the most frequent genotype gastritis was cagT 40/64 (62.5%), followed by gene LEC 32/64 (50.0%) and the oipA "on" 11/32 (34.4%). Furthermore, by the presented data there is no association of H. pylori and gender and or age of the patients.The genetic study of the markers of H. pylori infection and its relationship with the gastric disorders is essential to establish the profile of virulence of strains and thus elucidate the clinical outcomes variables involved with this infection. / O Helicobacter pylori é uma bactéria que coloniza a mucosa gástrica de seres humanos. A infecção crônica causada por este patógeno está fortemente associada a um risco aumentado de doenças gástricas diferentes, variando de gastrite crônica e úlcera péptica para dois tipos de câncer gástrico, adenocarcinoma e linfoma do tecido linfóide associado à mucosa. O objetivo do presente estudo foi avaliar a associação dos marcadores cagT, LEC e oipA funcional e não funcional em pacientes portadores das afecções gastrite, úlcera e câncer gástrico.Foi realizada a genotipagem das cepas por meio da técnica de PCR. Foram avaliados 181 pacientes, atendidos no Hospital Universitário Walter Cantídio, sendo 87(48,1%) homens, 94(51,9%) mulheres, com idade variando de 18-90 anos, com média de 53 + 17,8 anos, com diagnóstico positivo para a infecção por H. pylori. Destes, 48 portadores de câncer gástrico, 69 pacientes com ‘úlcera péptica e 64 com gastrite. A prevalência dos genótipos estudados foi: 145/181 (80,1%) cagT, 83/181 (45,9%) LEC, 81/181 (44,7%) oipA, e oipA“on”34/81 (41,9%).No grupo dos pacientes com câncer gástrico observou-se que o genótipo mais frequente foi o cagT 43/48 (89,6%), seguido do gene oipA “on” 10/18 (55,6%) e LEC 17/48 (35,4%). No grupo dos pacientes com úlcera péptica o genótipo mais frequente foi o cagT 62/69 (89,8%), seguido do gene LEC; 34/69 (49,3%) e oipA”on” 13/31 (41,9%). No grupo dos pacientes com gastrite o genótipo mais frequente foi cagT 40/64 (62,5%), seguido do gene LEC 32/64 (50,0%) e oipA “on” 11/32 (34,4%). Não houve associação significativa dos genótipos do H. pylori com gênero, nem com faixa etária dos pacientes. O estudo genético dos marcadores de H. pylori e sua relação com as afecções gástricas é fundamental para se estabelecer o perfil de virulência das cepas e assim elucidar os variáveis desfechos clínicos envolvidos com essa infecção.