Orientador : Alvaro Santos Costa / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-15T12:31:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Figueira_AntoniadosReis_M.pdf: 3215706 bytes, checksum: 8b04f047dfb693174aff7a5d5a5a1b0e (MD5) Previous issue date: 1980 / Resumo: O problema da transmissão mecânica do vírus do mosaico dourado do feijoeiro (VMDF) no Brasil foi abordado sob vários aspectos, tanto em relação às plantas-testes doadoras e receptoras do inoculo, como em relação ao vírus. O inóculo empregado na realização dos testes, sofreu variações quanto a: a) origem ? inóculo coletado em Campinas, SP e região, bem como de outras regiões de São Paulo e Paraná; b) idade ? as folhas infectadas que serviram como fonte de inoculo foram empregadas em vários estágios, desde aqueles na fase inicial de crescimento, até as que já haviam atingido aproximadamente seu tamanho máximo de expansão; c) época de coleta após infecção da planta ? o inoculo foi coletado tanto na época em que apareceram os primeiros sintomas da doença (cerca de 20 dias após inoculação com mosca branca virulífera), como em fases mais adiantadas, quando a planta já estava em início de florescimento; d) concentração ? a quantidade de folha (em gramas) por volume de solução extratora (em ml) foi variável, para se conseguir diversas concentrações do vírus em solução. Na extração e preparação do inoculo foram empregadas muitas das substâncias químicas normalmente usadas na transmissão mecânica dos fitovírus, e muitas outras com propriedades de inibir a ação de nucleases e proteases, visando preservar a integridade e conseqüentemente a infetividade da partícula varial... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Bean golden mosaic virus in Brazil has not been transmitted mechanically by investigators that have tried it. Other related viruses associated with similar diseases present in Central America, Porto Rico, and Colombia have been transmitted by routine methods of mechanical inoculation without great difficulty. This apparent discrepancy led the writer to start a series of tests aiming at developing a teshnique that wold permit mechanical transmission of the Brazilian virus. Several approaches were tried ? (1) variations in the source of inoculun: (a) simple collected from several regions in the State of São Paulo and from other parts of Brazil; (b) inocula collected from different donor plant species; (c) inocula prepared at different concentrations. (2) Different methods of extraction and use of various extracting solutions: (a) use of virus activators; (b) use of inhibitors of nucleases and proteases or of other substances employed to preserve the integrity of the viral particles; (c) extraction of the inoculum in different solutions and combination at inoculation time or through two successive inoculation; (d) extration after freezing the samples. (3) different methods of inoculations: (a) rubbing on both sides of the leaves; (b) pin pricks on leaves and stems; (c) repeated inoculation of same leaves wit same or different preparations... Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Ciências Biológicas

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2006. / Submitted by Érika Rayanne Carvalho (carvalho.erika@ymail.com) on 2009-12-01T01:14:58Z No. of bitstreams: 1 Janaina%20do%20Nascimento%20Lima%20Matias%20de%20Paula%20Dissertacao.pdf: 938650 bytes, checksum: ceb07c334e0caf8cec361835356eb0c4 (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2009-12-04T21:19:45Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Janaina%20do%20Nascimento%20Lima%20Matias%20de%20Paula%20Dissertacao.pdf: 938650 bytes, checksum: ceb07c334e0caf8cec361835356eb0c4 (MD5) / Made available in DSpace on 2009-12-04T21:19:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Janaina%20do%20Nascimento%20Lima%20Matias%20de%20Paula%20Dissertacao.pdf: 938650 bytes, checksum: ceb07c334e0caf8cec361835356eb0c4 (MD5) Previous issue date: 2006-10-25 / Inibidores de α-amilase de plantas apresentam um grande potencial para uso biotecnológico, através de tranformação de plantas visando resistência a insetos- praga. Neste contexto, estudou-se o potencial inseticida do inibidor de α-amilase 0.53 sobre os insetos-praga de grãos armazenados de feijão, visando sua utilização em programas de melhoramento genético. Plantas de trigo foram escolhidas como fonte vegetal devido a presença de inúmeras isoformas de inibidores de α-amilases em suas sementes. Os inibidores de α-amilases, presentes em sementes de trigo (Triticum aestivum), foram purificados e caracterizados e o gene para o inibidor 0.53 foi isolado utilizando técnicas de RT-PCR, utilizando cDNAs como molde. A sequência para o inibidor 0.53 foi então subclonada no vetor de expressão pPICZαA (pFSP-pPICZαA-0.53) e a expressão da proteína recombinante foi realizada em células de levedura metilotrófica Pichia pastoris. Após estabelecimento das condições de expressão, a proteína recombinante, expressa e secretada no meio de cultura, foi purificada por HPLC (Cromatografia Líquida de Alta Performance). Ensaios in vitro utilizando as α-amilases dos insetos-praga: Acanthocelides obtectus, Zabrotes subfasciatus, Callosobruchus maculatus e a α-amilase pancreática de Porco (PPA), mostraram que a atividade desse inibidor é altamente dependente das condições de pH. Em pH 4,5, o inibidor 0.53 foi capaz de inibir unicamente as α-amilases dos diferentes insetos, não apresentando nenhuma atividade para a amilase de mamífero PPA. Porém, em pH 7,2, o inibidor recombinante 0.53 atuou unicamente sobre a PPA, inibindo cerca de 90% de sua atividade, não sendo ativo para α-amilases dos diferentes insetos alvo testados. Desta forma, o inibidor recombinante 0,53 poderá ser utilizado em diversos estudos de toxicidade em mamíferos, estudos complementares de interação molecular, a fim de verificar sua segurança alimentar e potencial uso biotecnológico. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / α-Amylase plant inhibitors exhibit a great potential for biotechnological use, using plants of transformation aiming resistance against insects-pest. This work studies the potential insecticidal effects of α-amylases inhibitor 0.53 against insects-pest in stored bean grains, and also the possibility of its use for the plant genetic improvement. Seeds from wheat plants were chosen as a vegetable source due to their presence of several α-amylases inhibitors isoforms. Firstly, the α-amylases inhibitors synthesized in wheat seeds (Triticum aestivum), were isolated, characterized and the gene encoding the 0.53 inhibitor isolated by RT-PCR techniques, using cDNAS as template. The 0.53 inhibitor coding sequence was then subcloned into the expression vector pPICZαA (pFSP-pPICZαA-0.53) and the recombinant protein expression was carried by metilotrofic yeast Pichia pastorisI cell. After the establishment expression conditions, the recombinant protein, secreted in the culture, medium was purified by HPLC (High Performance Liquid Chromatography). In vitro assays using α-amylases from the insect-pest: Acanthocelides obtectus, Zabrotes subfasciatus, Callosobruchus maculatus and α-amylase from pancreatic porcine (PPA), had shown that the activity of this inhibitor is highly dependent of the pH conditions. In pH 4,5, the 0.53 inhibitor was able capable to inhibit solely insects α-amylases, but showed no activity for PPA. Otherwise, in pH 7,2, 0.53 recombinant inhibitor act only against PPA, inhibiting about 90%, not being active for insects α-amylases tested. Due to the characteristics described above the 0.53 recombinant inhibitor could be used in several studies in mammals toxicity tests, complementary studies of molecular interaction, in order to verify its alimentary security and potential biotechnological use.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2007. / Submitted by Danyelle Mayara Silva (danielemaiara@gmail.com) on 2009-09-08T11:38:14Z No. of bitstreams: 1 Tese_KennyBonfim.pdf: 2688589 bytes, checksum: 124b1b3f0d729f713ef58718c23aa640 (MD5) / Approved for entry into archive by Tania Milca Carvalho Malheiros(tania@bce.unb.br) on 2009-09-10T16:01:42Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_KennyBonfim.pdf: 2688589 bytes, checksum: 124b1b3f0d729f713ef58718c23aa640 (MD5) / Made available in DSpace on 2009-09-10T16:01:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_KennyBonfim.pdf: 2688589 bytes, checksum: 124b1b3f0d729f713ef58718c23aa640 (MD5) Previous issue date: 2007 / A produção mundial de feijão, compreendendo os gêneros Phaseolus e Vigna, é superior a 18 milhões de toneladas e o Brasil ocupa o segundo lugar na produção mundial e o primeiro quando se trata apenas do gênero Phaseolus. Entretanto, sua produção ainda está aquém do necessário para suprir a demanda interna. Dentre os principais problemas relacionados com a baixa produção de feijão no Brasil estão a competição com plantas daninhas, estresse hídrico e o ataque de pragas e doenças como mosaico dourado do feijoeiro causado por um geminivírus. O Bean golden mosaic virus (BGMV), é transmitido por mosca-branca (Bemicia tabaci) de uma forma persistente, circulativa, causando mosaico dourado em feijão comum (Phaseolus vulgaris). Os sintomas característicos são: mosaico verde amarelado nas folhas, nanismo e vagens distorcidas. A doença é largamente disseminada nas regiões de produção de feijão no Brasil e América Latina causando perdas severas (40 -100%). Neste trabalho, a tecnologia de RNA interferente foi explorada usando uma seqüência do gene viral AC1 para gerar plantas transgênicas de feijão comum altamente resistentes a geminivírus. Desta maneira o gene viral (AC1) foi escolhido para a construção do vetor de transformação uma vez que a proteína Rep exerce uma função essencial no ciclo de infecção viral. Rep não é uma replicase porém é a única proteína requerida para a replicação do genoma viral. O vetor pBGMVRNAiAHAS foi construído a partir de um fragmento de DNA de 411 pb do gene AC1 do BGMV (_1836-2247, acesso no GeneBank No. M88686). Dezoito linhagens de feijão foram obtidas com a construção de interferência, as quais poderão induzir o silenciamento pós-transcricional do gene AC1. Uma linhagem (denominada 5.1) apresentou alta resistência (aproximadamente 93% das plantas não apresentaram sintomas) após alta pressão de inoculação (mais de 300 moscas-brancas virulíferas por planta). Os siRNAs específicos foram detectados nas plantas transgênicas, ambas inoculadas e não inoculadas. Uma análise de PCR semiquantitativo revelou a presença do DNA viral nas plantas transgênicas expostas a moscas-brancas virulíferas por um período de 6 dias. Entretanto, após a retirada dos insetos, não foi detectado DNA viral após um período adicional de seis dias. Devido à importância social e econômica do feijão na América Latina e à falta de genes para resistência a doenças nos bancos de germoplasma, faz-se necessário o desenvolvimento de um programa de melhoramento associado à engenharia genética para o lançamento de novas variedades, que possibilitará a diminuição dos principais problemas relacionados a esta cultura. ____________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Production of beans, including the genus Phaseolus and Vigna, is superior to 18 million tons. Brazil is the secondlargest producer of both species genus and the major world producer of Phaseolus. However, its production is still below the necessary to supply the internal demand. Competition with weeds, abiotic stress and the occurrence of diseases as bean golden mosaic are some of the main problems related to its low production. Bean golden mosaic virus (BGMV), is transmitted by the whitefly Bemisia tabaci in a persistent, circulative manner, and causes the golden mosaic of common bean (Phaseolus vulgaris) which characteristic symptoms are yellow-green mosaic of leaves, stunting, and fruit distortion. The disease is the largest constraint on bean production in Brazil and Latin America and causes severe yield losses (40 to 100%). Here we explored the RNAi concept to silence the AC1 viral gene and generate high resistant transgenic common bean plants. Since the Rep protein performs an essential function in the viral infecting cycle, the AC1 gene was chosen to construct the transformation vector. Rep is not the replicase, but the only protein required for the replication of the viral genome. The vector pBGMVRNAiAHAS was constructed using the 411 bp fragment from the AC1 gene (_1836-2247, GeneBank accession No. M88686). Eighteen transgenic common bean lines were obtained with the construction to induce post-transcriptional gene silencing against AC1 gene. One line (named 5.1) presented high resistance (approximately 93% of plants free of symptoms) upon inoculation at high pressure (more than 300 viruliferous whiteflies per plant). Transgene-specific siRNA were detected in both inoculated and noninoculated transgenic plants. A semi-quantitative PCR analysis revealed the presence of virus DNA in transgenic plants exposed to viruliferous whiteflies for a period of six days. However, when insects were removed, no virus DNA could be detected after an additional period of six days. Due to its social and economical importance in Latin America and to the lack of genes for resistence, it is necessary to develop an improving program associated to genetic engineering in order to generate new varieties. It Shall allow the decreasing to the production of beans

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, Programa de Pós-Graduação em Fitopatologia, 2015. / Submitted by Guimaraes Jacqueline (jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2015-06-11T15:08:55Z No. of bitstreams: 1 2015_JoaoGilbertoAlvesVillela.pdf: 1346201 bytes, checksum: 67224c4a62d1c57b75781b5b2d771431 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2015-06-11T15:11:32Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_JoaoGilbertoAlvesVillela.pdf: 1346201 bytes, checksum: 67224c4a62d1c57b75781b5b2d771431 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-06-11T15:11:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_JoaoGilbertoAlvesVillela.pdf: 1346201 bytes, checksum: 67224c4a62d1c57b75781b5b2d771431 (MD5) / A Murcha de Curtobacterium, causada pela bactéria Curtobacterium flaccumfaciens pv. flaccumfaciens (Cff), é um importante problema para o cultivo do feijoeiro (Phaseolus vulgaris L.) no Brasil. A principal forma de disseminação da bactéria é por sementes contaminadas. No presente trabalho avaliou-se a eficiência de diferentes tratamentos de sementes no controle da Murcha de Curtobacterium em feijoeiro. Inicialmente se avaliou “in vitro” a sensibilidade de Cff a fungicidas e bactericidas cúpricos, casugamicina, cloretos de benzalcônio e ácido peracético. Os tratamentos de sementes realizados foram: imersão em solução de cobre, casugamicina, cloretos de benzalcônio e ácido peracético, exposição a vapor de etanol e metanol, e ozonização. Na avaliação da eficiência dos tratamentos na erradicação de Cff, sementes inoculadas foram tratadas e submetidas ao processo de extração, verificando posteriormente a incidência de sementes contaminadas e número de células bacterianas. Foram realizados experimentos em condições de campo e casa de vegetação. No ensaio em campo foi avaliado o efeito dos tratamentos sobre a qualidade fisiológica das sementes, e em casa de vegetação avaliou-se o efeito dos tratamentos na qualidade fisiológica das sementes, no desenvolvimento vegetativo da planta, na incidência e severidade da Murcha de Curtobacterium, produção de grãos, além da transmissão de Cff via planta – semente. Hidróxido de cobre (30 µg/mL), oxicloreto de cobre (50 µg/mL), óxido cuproso (20 µg/mL), sulfato de cobre (20 µg/mL), casugamicina (100 µg/mL), cloretos de benzalcônio (20 µg/mL) e ácido paracético (200 µg/mL) inibiram o crescimento da Cff “in vitro”. Os tratamentos com cloretos de benzalcônio e vapor de metanol foram os mais eficientes na redução da incidência de sementes contaminadas e do número de células bacterianas em sementes de feijão. Em campo os tratamentos com ácido peracético e ozônio reduziram significativamente a emergência e velocidade de emergência das plântulas. Os resultados obtidos em casa de vegetação mostraram que os tratamentos não interfiram na qualidade fisiológica das sementes, e plantas oriundas de sementes inoculadas tratadas ou não, apresentaram menor desenvolvimento vegetativo e produção de grãos. Nenhum tratamento de sementes foi eficiente na redução da incidência e severidade da Murcha de Curtobacterium. A taxa de transmissão de Cff das plantas para as sementes foi de aproximadamente 24%. / Bacterial Wilt, caused by Curtobacterium flaccumfaciens pv. flaccumfaciens, is an important disease for bean (Phaseolus vulgaris L.) production in Brazil. Seeds are the major way of spread this bacterium. The objective of this study was to evaluate the efficiency of different seed treatments to control bacterial wilt in bean. First an “in vitro” test was conductive to evaluate the sensitivity of Cff to copper formulations, kasugamycin, benzalkonium chlorides and peracetic acid. The seed treatments performed were: immersion in solution of copper, kasugamycin, benzalkonium chlorides and peracetic acid, exposure to vapor ethanol and methanol, and ozonation. In the evaluation of treatments efficiency in eradicating of Cff, inoculated seeds were treated and subjected to extraction process, then checking the incidence of contaminated seeds and number of bacterial cells. Experiments were carried in field conditions and greenhouse conditions. In field experiment was evaluated the effects of treatments on seed physiological quality, and greenhouse was measured the effect of treatments on seed physiological quality, in vegetative plant development, in incidence and severity of bacterial wilt, in production, beyond the transmission of Cff via plant - seed. The products copper hydroxide (30 µg/mL), copper oxychloride (50 µg/mL), cuprous oxide (20 µg/mL), copper sulfate (20 µg/mL), kasugamycin (100 µg/mL), chlorides benzalkonium (20 µg/mL) and peracetic acid (200 µg/mL) inhibited the growth of Cff “in vitro”. Treatments with benzalkonium chloride and vapor methanol were the most effective in reducing the incidence of contaminated seeds and the number of bacterial cells in bean seeds. Under field conditions the treatments with peracetic acid and ozone significantly reduced emergence and seedling emergence speed. The results obtained in the greenhouse showed that the treatments do not interfere in seed physiological quality, and plants grown from seeds inoculated, treated or not, showed lower vegetation development and grain production. The Cff transmission rate of the plants for seeds was approximately 24%.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Departamento de Biologia Molecular, Programa de Pós-graduação em Biologia Celular e Molecular, 2012. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2014-10-14T12:22:10Z No. of bitstreams: 1 2012_JackelineLeitePereira.pdf: 3652289 bytes, checksum: 11e3d00bc97f96db1c6ae48254de4373 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2014-10-15T14:19:10Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_JackelineLeitePereira.pdf: 3652289 bytes, checksum: 11e3d00bc97f96db1c6ae48254de4373 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-10-15T14:19:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_JackelineLeitePereira.pdf: 3652289 bytes, checksum: 11e3d00bc97f96db1c6ae48254de4373 (MD5) / Este estudo teve como objetivo analisar a interação entre o fungo Trichoderma harzianum ALL-42 isolado de solo do Cerrado e Phaseolus vulgaris, na presença ou ausência dos fungos fitopatogênicos Rhizoctonia solani e Fusarium solani. Foram avaliadas as capacidades de T. harzianum de promover o crescimento, bem como de modular a resposta de defesa e alterar o padrão de expressão de proteínas na planta hospedeira, P. vulgaris. Os feijoeiros cultivados na presença deste isolado mostraram um aumento significativo de 14,29% no tamanho, 17,72% na área foliar e 36,31% no volume radicular, quando comparados às plantas controle. Análises da produção de enzimas relacionadas à resposta de defesa vegetal em folhas em raízes das plantas mostraram que os valores mais significativos de atividade de quitinases em folhas e raizes de feijoeiro, foram detectadas para as plantas cuja interação envolvia o fungo micoparasita T. harzianum e um dos fungos fitopatogênicos, R. solani ou F. solani. Para β 1,3 glucanases, os valores de atividade mais significativos foram detectados em folhas, após 7 dias de cultivo na presença do fungo fitopatogênico R. solani e em raízes, após 14 dias, nesta mesma condição. Valores aumentados da atividade de peroxidases foram detectados nas folhas de plantas cultivadas por 14 dias na presença do isolado de Trichoderma e do fungo fitopatogênico R. solani. Em raízes o aumento nesta atividade foi detectado nas plantas cultivadas apenas na presença do isolado de Trichoderma. A presença do isolado de Trichoderma e dos fungos fitopatogênicos alterou o padrão de expressão dos genes CHT1, GLU, POD6 e LOX1 codificadores de proteínas de defesa, principalmente após 14 e 21 dias de crescimento. Além disto, a presença destes fungos alterou o padrão de expressão de proteínas em folhas e raízes de feijoeiro. Dos ―spots‖ diferencialmente expressos, 80 foram selecionados para identificação por espectrometria de massas utilizando ―Peptide Mass Fingerprint‖, sendo que 29 dos identificados foram retirados de mapas proteômicos de raízes, e 19 de mapas proteômicos de folhas. As proteínas identificadas em suas maioria tem papel na resposta de defesa de plantas, a exemplo da glutationa S – transferase, Cinamoil CoA redutase, serina-treonina quinase, chalcona isomerase, peroxirredoxina, proteínas da família PR-1, e no metabolismo de carboidratos, como, subunidades da Rubisco, anidrase carbônica e gliceraldeído 3- fosfato desidrogenase. Estes resultados sugerem que o isolado de T. harzianum ALL-42 é capaz de promover mudanças no metabolismo da planta, e desencadear ou potencializar a resposta de defesa em feijoeiro comum, quando R. solani e F. solani estão presentes. __________________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The aim of this study was to analyze the interaction between the fungus Trichoderma harzianum ALL-42, which was isolated from the soil of the ―Cerrado‖ biome, and Phaseolus vulgaris in the presence or absence of the phytopathogenic fungi Rhizoctonia solani and Fusarium solani. The growth-promoting capacities of T. harzianum were evaluated, as well as its ability to modulate the defense response and alter the protein expression pattern in the host plant P. vulgaris. Bean plants cultivated in the presence of this isolate showed a significant increase of 14.29% in size, 17.72% in leaf area, and 36.31% in root volume when compared with control plants. Analysis of enzyme production related to the plant defense response in the leaves and roots of the plants showed that the most significant values for kinase activity in the leaves and roots of bean plants were detected for those in which there was an interaction between the microparasitic fungus T. harzianum and one of the phytopathogenic fungi R. solani or F. solani. The most significant values for β-1,3-glucanase activity were detected in the leaves after 7 days of cultivation in the presence of the phytopathogenic fungus R. solani and in the roots after 14 days under the same conditions. Increased values were detected for peroxidase activity in the leaves of plants cultivated for 14 days in the presence of the isolate of Trichoderma and the phytopathogenic fungus R. solani. In the roots, an increase in this activity was detected in plants cultivated only in the presence of the isolate of Trichoderma. The presence of the isolate of Trichoderma and the phytopathogenic fungi altered the expression pattern of the genes CHT1, GLU, POD6, and LOX1 that code for defense proteins, particularly after 14 and 21 days of growth. Furthermore, the presence of these fungi altered the protein expression pattern in the roots and leaves of bean plants. Of the differentially expressed spots, 80 were selected for identification by mass spectrometry using peptide mass fingerprinting. Of those identified, 29 were taken from proteomic maps of the roots and 19 from proteomic maps of the leaves. The majority of the identified proteins play a role in the defense response of the plants, e.g., glutathione S-transferase, cinnamoyl-CoA-reductase, serine-threonine kinase, chalcone isomerase, peroxiredoxin, and proteins of the PR-1 family, and in the metabolism of carbohydrates, such as subunits of Rubisco, carbonic anhydrase, and glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase. These results suggest that the ALL-42 isolate of T. harzianum is capable of promoting changes in the metabolism of the plant and triggering or potentiating the defense response in the common bean plant when R. solani and F. solani are present.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:36Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-09-05Bitstream added on 2014-06-13T20:37:44Z : No. of bitstreams: 1 demant_lar_me_botfca.pdf: 166946 bytes, checksum: 10c7009f4c2c3e911fc3562005ee56a7 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A mancha angular, causada por Phaeoisairopsis griseola, é uma doença de grande importância para a cultura do feijoeiro, visto pelos danos que causa em cultivares suscetíveis, sob condições climáticas propícias para o desenvolvimento da doença. O presente trabalho teve por objetivos: a) avaliar a eficácia de alguns fungicidas registrados para a cultura no controle da mancha angular e sobre alguns parâmetros agronômicos (massa de 100 grãos, número de grãos por vagem e número de vagens por plantas) do feijoeiro cultivar Pérola, b) verificar a ação dos fungicidas sobre alterações fisiológicas das plantas de feijoeiro (índices de fotossíntese líquida e condutividade estomática). Para tanto, dois ensaios foram conduzidos em condições de telado e dois ensaios sob condições de campo. As aplicações dos fungicidas nos ensaios iniciaram-se aos 30 dias após a semeadura, sendo realizadas três pulverizações com intervalo de 15 dias. Os fungicidas testados foram: procimidone - 200 g.i.a.ha-1, hidróxido de cobre - 1076 g.i.a.ha-1, azoxystrobina - 60 g.i.a.ha-1, metiran + piraclostrobina - 825 +75 g.i.a.ha-1, piraclostrobina - 75 g.i.a.ha-1, trifloxistrobina - 150 g.i.a.ha-1, tebuconazole - 40 g.i.a.ha-1, hidróxido de fentina - 330 g.i.a.ha-1, tebuconazole + trifloxistrobina - 150 +75 g.i.a.ha-1 e testemunha (água). Nos experimentos conduzidos em campo, foram realizadas as avaliações da da severidade de doença nas folhas e calculada a área abaixo da curva de progresso da doença e realizada a colheita para a avaliação do número de vagens por planta e a massa de 100 grãos. Os experimentos em casa de vegetação foram avaliados quanto aos índices de fotossíntese líquida, condutividade estomática, número de vagens por planta, massa de 100 grãos... / The angular leaf spot caused by Phaeoisairopsis griseola is an important disease for drybeans crop because it promotes many losses in susceptible cultivars under specific weather conditions for progress of this disease. This present work has as objectives: a) evaluate efficacy of some fungicides registered for control of angular leaf spot in drybeans and effect of these products in agronomic parameters (weight of 100 grains, Number of grains per pod, number of pods per plant) of cultivar Perola. b) Verify the action to fungicides about physiology of drybeans plants (liquid Photosynthesis and stomatic conductivity). For these two trials in greenhouse and two trials in the field were development. The fungicides application began 30 days after planting, and three applications were done with 15 days interval. The fungicide tested was: procimidone - 200 g.a.i.ha-1, hidróxido de cobre - 1076 g.a.i.ha-1, azoxystrobina - 60 g.a.i.ha-1, metiran+ piraclostrobina - 825 +75 g.a.i.ha-1, piraclostrobina - 75 g.a.i.ha-1, trifloxistrobina - 150 g.a.i.ha-1, tebuconazole - 40 ga.i.ha-1, hidróxido de fentina - 330 g.a.i.ha-1, tebuconazole + trifloxistrobina - 150 +75 g.a.i.ha-1 and Untreated check (water). In trials in the field was done evaluation of the severity of the disease was done on the leaves and area under curve disease progress (AUDCPD) and in the harvest evaluation was done on the number of pods per plants and weight of 100 grains. The trial in greenhouse was evaluated liquid photosynthesis, stomatic conductivity, number of pods per plant and weight of 100 grains. After these results were obtained, it was constated that photosynthesis is more significantly when drybeans plants were in the stage of grain filling and beginning of maturation; Piraclostrobina, Tebuconazole and Tebuconazole+Trifloxistrobina... (Complete abstract click electronic access below)

Tese (Doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2012. / Submitted by Jaqueline Ferreira de Souza (jaquefs.braz@gmail.com) on 2012-09-06T13:53:56Z No. of bitstreams: 1 2012_EmanuelFelipeMedeirosAbreu.pdf: 2453482 bytes, checksum: 74193cbd52cf84b634766a3d957e9018 (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Ferreira de Souza(jaquefs.braz@gmail.com) on 2012-09-06T13:54:23Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_EmanuelFelipeMedeirosAbreu.pdf: 2453482 bytes, checksum: 74193cbd52cf84b634766a3d957e9018 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-09-06T13:54:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_EmanuelFelipeMedeirosAbreu.pdf: 2453482 bytes, checksum: 74193cbd52cf84b634766a3d957e9018 (MD5) / O feijão-caupi (Vigna unguiculata (L.) Walp.) é uma importante leguminosa para o Nordeste brasileiro e tem sido tradicionalmente cultivada por pequenos agricultores. Doenças virais são consideradas um dos principais fatores limitantes da produtividade do caupi nesta região. A doença do mosaico severo do caupi é causada pelo Cowpea severe mosaic virus (CPSMV), subfamília Comovirinae, gênero Comovirus, juntamente com o Cowpea aphid-borne mosaic virus (CABMV), família Potyviridae, gênero Potyvirus, são consideradas as viroses mais prevalentes da cultura e responsáveis por grandes perdas na produção. O objetivo do presente trabalho foi estudar a variabilidade genética do CPSMV e CABMV obtidos em diferentes municípios do Nordeste brasileiro. Essa informação é crucial para o desenvolvimento de plantas resistentes a essas viroses tanto por métodos convencionais quanto moleculares de melhoramento. Isso é ainda mais crítico para o desenvolvimento de estratégias baseadas em RNA inteferente (RNAi). Plantas com sintomas de infecção pelo CPSMV e CABMV nos estados do Piauí, Ceará, Rio Grande do Norte, Paraíba, Pernambuco, Distrito Federal, Sergipe e Bahia foram coletadas, e os isolados foram identificados por Dot-blot e RT- PCR. Foram amplificados fragmentos de 2200 pb, (correspondendo a região da Helicase (Hel), Proteína ligada ao genoma viral (VPg), Picornain 3C- protease (Pro) e RNA polimerase) e 997 pb (correspondendo a região da proteína Inclusão Cilíndrica (CI) e da proteína 6K2) dos vírus CPSMV e CABMV por RT-PCR, respectivamente. Alguns fragmentos foram clonados e outros sequenciados diretamente do produto de PCR em ambas as orientações. As sequências obtidas a partir de diferentes isolados foram comparadas com sequências disponíveis no GenBank. Os alinhamentos das sequências foram obtidos usando o programa Clustal W, e uma árvore filogenética foi criado usando o software MEGA 5.1. A análise revelou baixa variabilidade entre isolados de CPSMV, variando entre 98 e 100% para sequências de nucleótidos e 96-100% para a sequência de aminoácidos deduzida. Entre os CABMV isolado, a variabilidade foi maior, variando 84-99% entre as sequências de nucleótidos 91 a 99% das sequências de aminoácidos. Este estudo fornece informações que serão a base para o desenvolvimento de estratégias para a produção de linhagens de caupi resistentes a estes vírus por RNA interferente. Os dados indicam a possibilidade de obtenção de resistência durável e aplicável ao caupi nas principais áreas produtoras no Brasil. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Cowpea (Vigna unguiculata) is an important plant crop in Northeast Brazil being traditionally cultivated by small farmers. Virus diseases are considered to be the main factor limiting cowpea yield in the region. The severe mosaic disease caused by the Cowpea severe mosaic virus (CPSMV), subfamily Comovirinae, genus Comovirus, seems to be one of the most prevalent diseases leading to high yield losses in this crop. The Cowpea aphid borne mosaic virus (CABMV) belongs to the genus Potyvirus in the Potyviridae family, and infects cowpea worldwide. In the northeastern region of Brazil, both viruses can be found in cowpea planted areas. The aim of the present study was to access the degree of homology among regions amplified of different isolates of CPSMV and CABMV, respectively; obtained in different northeastern regions in Brazil, and to compare it to isolates throughout the world. Plants with CPSMV and CABMV symptoms from the states of Piauí, Ceará, Rio Grande do Norte, Paraiba, Pernambuco, Alagoas, Sergipe, Bahia and Distrito Federal were collected, and the isolates were identified by RT-PCR analysis. Total RNA was extracted from infected tissue and afterwards used for synthesis of cDNA fragments by RT-PCR. The synthetized primers were able to amplify fragments of 2200 and 997 bp of the CPSMV and CABMV virus, respectively. Amplification products were directly cloned into the pGEMT-Easy plasmid vector (Promega), according to the manufacturer’s instructions. Cloned fragments were sequenced in both orientations. Deduced amino acid sequences of the virus were compared to sequences available from GenBank. Multiple sequence alignments were obtained with Clustal W. Phylogenetic trees using the MEGA version 5.1 software package and the neighbour-joining method with Poisson correction. Tree branches were bootstrapped with 1000 permutations. CPSMV and CABMV diseases remain as limiting factors in this crop in Brazil, and breeding programs, either by conventional or engineered approaches, should be targeted at establishing resistance of cowpeas to CPSMV and CABMV.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, 2012. / Submitted by Elna Araújo (elna@bce.unb.br) on 2012-09-17T23:31:29Z No. of bitstreams: 1 2012_CarolinePedroso.pdf: 6332188 bytes, checksum: 7c213002e6f6f4f2c80bf71fc5c4ae35 (MD5) / Approved for entry into archive by Luanna Maia(luanna@bce.unb.br) on 2012-09-20T12:08:00Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_CarolinePedroso.pdf: 6332188 bytes, checksum: 7c213002e6f6f4f2c80bf71fc5c4ae35 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-09-20T12:08:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_CarolinePedroso.pdf: 6332188 bytes, checksum: 7c213002e6f6f4f2c80bf71fc5c4ae35 (MD5) / A cultura do feijão-vagem é constituída principalmente por variedades da espécie botânica Phaseolus vulgaris, mas também inclui cultivos de P. lunatus e de Vigna unguiculata. Diferencia-se do feijão comum pelas características das vagens, que são consumidas verdes, normalmente maiores e apresentam reduzidos teores de fibras. No Brasil, o feijão-vagem é cultivado principalmente por pequenos produtores, em cultura tutorada, com alta demanda de mão-de-obra e baseado em métodos tradicionais de plantio e uso intensivo de insumos químicos. Apesar do amplo consumo, são poucas as cultivares de feijão-vagem disponíveis no mercado brasileiro, assim como estudos de incidência de doenças e avaliação de resistência de variedades. Estudos de métodos alternativos de controle de doenças nesta cultura são raros. Entretanto, alguns trabalhos revelaram que o nim (Azadiractha indica) tem ação fungicida, inclusive sobre o oídio (Erysiphe polygoni) em feijoeiro, mas em casa-de-vegetação. Dada a relativa carência de informações sobre as doenças incidentes no feijão vagem e seu controle, este trabalho objetivou: avaliar, durante os plantios de inverno e das águas, a incidência de doenças em acessos das espécies P. vulgaris, P. lunatus e V. unguiculata (Capítulo 1); analisar os efeitos de aplicações do óleo de nim sobre o progresso de oídio em feijãovagem (P. vulgaris e V. unguiculata), em duas estações de plantio (Capítulo 2); e esclarecer se determinados componentes anatômicos e histoquímicos foliares de P. vulgaris e V. unguiculata estão relacionados com resistência à oídio (Capítulo 3). Os ensaios de campo foram conduzidos na Estação Experimental de Biologia da UnB, em duas épocas de plantio (de março a junho e de setembro a dezembro) no ano de 2009 e no de 2010. O delineamento experimental foi de blocos ao acaso, com 28 tratamentos (Capítulo 1). No Capítulo 2, o delineamento experimental foi de parcelas subdivididas, fatorial 8 X 2, objetivando o controle de oídio com óleo puro de nim em 5 genótipos de P. vulgaris, (G01, G12, G19, HT e TSMB) e 3 de V. unguiculata (G14, G17, e G20), selecionados dentre os 28 disponíveis por apresentarem reações contrastantes à oídio. Em ambos os casos, foram avaliadas as incidências de todas as doenças. O Capítulo 3, desenvolvido no laboratório de Botânica da UnB, consistiu de coleta de amostras foliares de materiais suscetíveis (G14 e G17) e resistente (TSMB) a oídio, que foram submetidas a cortes com micrótomo de mesa para posteriores análises anatômicas e histoquímicas. Verificou-se, nos quatro plantios, as seguintes doenças foliares: mosaico dourado do feijoeiro (Bean golden mosaic virus - BGMV), mosaico comum (Bean common mosaic vírus - BCMV), mosaico rugoso (Bean rugose mosaic vírus - BRMV), ferrugem (Uromyces appendiculatus), mancha angular (Pseudocercospora griseola) e oídio (Erysiphe polygoni). Além dessas, nos plantios das águas, registrou-se incidência de crestamento bacteriano (Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli). Os genótipos exibiram comportamento diferenciado quanto à resistência às doenças, demonstrando diversidade genética entre os materiais. Oídio foi a doença mais prevalente, atingindo principalmente acessos de V. unguiculata, alcançando até 100% em alguns casos. O pulgão-preto do feijoeiro (Aphis craccivora) teve preferência pelas variedades de V. unguiculata (Capítulo 1). O óleo de nim reduziu significativamente a incidência de oídio e de pulgões-pretos, além de apresentar um pequeno efeito sobre a mancha angular, mas não foi detectado nenhum efeito nas demais doenças (Capítulo 2). Os estudos de anatomia e histoquímica revelaram correlação entre a estrutura e a bioquímica foliar e a incidência de E. polygoni, de Aphis craccivora e de Bemisia tabaci (Capítulo 3). _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The green bean crop is mainly planted with varieties of Phaseolus vulgaris, but also includes crops of P. lunatus and Vigna unguiculata. The crop is distinguished from common bean by the characteristics of the pod, which are larger, consumed in the green stage, and present reduced fiber levels. Green beans in Brazil are usually grown by small farmers in conventional agriculture, intensive manpower and heavy use of chemicals. Despite the high demand, there are few cultivars available in the domestic market, and studies on the occurrence of diseases and evaluation of disease resistance are scarce. Alternative methods for disease control in the green bean crop are rare. Nevertheless, preliminary studies with greenhouse-grown beans have demonstrated that the neem plant (Azadiractha indica) showed a fungistatic effect against powdery mildew (Erysiphe polygoni). Considering the lack of information on the diseases of green bean and their control, this work aimed: to evaluate the incidence of diseases in the winter and rain seasons of 2009, in genotypes of P. vulgaris, P. lunatus and V. unguiculata (Chapter 1); to analyse the effects of neem oil sprays on the development of powdery mildew of P. vulgaris and V. unguiculata) (Chapter 2); and to examine if leaf anatomy and histochemical foliar components of P. vulgaris and V. unguiculata are related to resistance to powdery mildew (Chapter 3). Field assays were conducted in two planting seasons, at the University of Brasilia Experimental Biology Station, (March-June and September-December) in the years of 2009 and 2010, always with three replicates. Experimental design was a randomized complete block with 28 treatments (plant genotypes) for Chapter 1. For Chapter 2, experimental design was a 8 X 2 split factorial with main plots as genotypes (P. vulgaris genotypes G01, G12, G19, HT and TSMB and V. unguiculata genotypes G14, G17, e G2) and subplots as application of purified neem oil sprays or water. Genotypes were selected because they have presented contrasting reactions to powdery mildew in Chapter 1. Incidence of all diseases were recorded in both studies. Studies for Chapter 3 were conducted in the Botany Lab of University of Brasilia. Foliar samples of powdery mildew susceptible (G14 e G17) and resistant (TSMB) genotypes were sectioned in a table microtome for anatomic and histochemical studies. The following foliar diseases were found: Bean golden mosaic (BGMV), two initially unknown virus, later identified as Bean common mosaic (BCMV) and Bean rugose mosaic (BRMV), rust (Uromyces appendiculatus), angular leaf spot (Pseudocercospora griseola) and powdery mildew (Erysiphe polygoni). In addition, bacterial canker (Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli) was detected in the rain season. Genotypes differed as to their individual response to each disease, evidencing genetic diversity for disease reaction. Powdery mildew was the most prevalent disease, and was more severe in V. unguiculata genotypes, where it reached up to 100%. The cowpea aphid (Aphis craccivora) was most frequently detected on V. unguiculata (Chapter 1). Applications of purified neem oil significantly reduced powdery mildew and cowpea aphid incidences, and also revealed a small effect on angular spot, but not on the other diseases (Chapter 2). The anatomic and histochemical studies revealed correlation between the leaf structure and biochemistry and the incidence of powdery mildew, A. craccivora and Bemisia tabaci (Chapter 3).

Dissertação (mestrado)-Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, 2006. / Submitted by Mariana Fonseca Xavier Nunes (nanarteira@hotmail.com) on 2010-09-26T00:53:13Z No. of bitstreams: 1 2006-Reinaldo Jos+® de Miranda Filho.pdf: 1584391 bytes, checksum: 9b6a7c2c28be958f4c5d0329ca9425de (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2010-10-09T01:07:12Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2006-Reinaldo Jos+® de Miranda Filho.pdf: 1584391 bytes, checksum: 9b6a7c2c28be958f4c5d0329ca9425de (MD5) / Made available in DSpace on 2010-10-09T01:07:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2006-Reinaldo Jos+® de Miranda Filho.pdf: 1584391 bytes, checksum: 9b6a7c2c28be958f4c5d0329ca9425de (MD5) / Foram conduzidos dois experimentos em campo com o objetivo de avaliar a influência dos níveis de inóculo inicial de Curtobacterium flaccumfaciens pv. flaccumfaciens na produção de feijão da cultivar Pérola. Os níveis de inóculo utilizados foram de 0%; 5%; 10%; 15%; 20%; 25% e 30% de plantas infectadas com C. flaccumfaciens pv. flaccumfaciens. A partir da suspensão 2 x 107 ufc/ml foram feitas inoculações, proporcionais para atingir a percentagem desejada, em plantas com dez dias de emergência. O primeiro experimento foi semeado em 12/11/2004 e colhido em 21/02/2005 denominado A, o segundo experimento foi semeado em 16/12/2004 e colhido em 23/03/2005 denominado B. Foram utilizados blocos inteiramente casualizados com três repetições, cada bloco continha sete tratamentos com 3 três repetições. Cada tratamento foi composto por três linhas de cinco metros com espaçamento de 0,5 m entre si e uma densidade de plantio de 12 sementes por metro linear. Os resultados foram analisados ao final do ciclo da cultura comparando a produtividade apresentada em cada nível de inóculo com a produtividade do controle (0% C. flaccumfaciens pv. flaccumfaciens). De acordo com os resultados obtidos no experimento A, foram constatadas as produções médias para cada tratamento de 1170,0 g; 1118,9 g; 1054,0 g; 1053,3 g; 1032,2 g; 976,7 g e 892,2 g para 0%; 5%; 10%; 15%; 20%; 25% e 30% de plantas infectadas, correspondendo uma redução de 0%; 4,4%; 5%; 9,9%; 11,8%; 16,6% e 23,8% respectivamente. No experimento B foram constatadas as produções médias para cada tratamento de 658,9 g; 581,1 g; 515,5 g; 492,2 g; 462,2 g; 417,8 g; 351,1 g para as mesmas taxas de infecção anteriores e com redução de produção da ordem de 11,8%; 21,8%; 25,30%; 29,98%; 36,6% e 46,7% respectivamente. 7 Levantamentos realizados nos anos de 2004 e 2005 em cultivos comerciais no Distrito Federal (PAD DF), Goiás (Cabeceiras) e Minas Gerais (Buritis) em um raio de ação de aproximadamente 200 km de Brasília foi constatada a presença da bactéria em 100% das propriedades visitadas. Dois experimentos (B1 e B2) foram realizados em casa de vegetação utilizando sementes coletadas em lavoura de feijão contaminadas com C. flaccumfaciens pv. flaccumfaciens com o objetivo de se avaliar a sanidade das mesmas ao longo de 60 dias, observou-se nos dois experimentos, respectivamente, 80,7% e 76,6% das plantas com algum tipo de sintoma causado por C. flaccumfaciens pv. flaccumfaciens. Avaliação da persistência e viabilidade de C. flaccumfaciens pv. flaccumfaciens em solo coletado em uma área de cultivo de feijão sob pivô central com ocorrência da murcha do feijoeiro e altos níveis de infecção indicou que, pelo menos durante dez meses, a bactéria se manteve viável e capaz de infectar as plantas do feijoeiro. Com base nos resultados é possível afirmar que a murcha de Curtobacterium está largamente disseminada na região do Distrito Federal e Entorno e pode causar perdas significativas de produtividade na cultura de feijão e persistir no solo e em restos de cultura por pelo menos dez meses. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Two experiments in the field were carried out to evaluate the influence of the initial inoculums levels of Curtobacterium flaccumfaciens pv. flaccumfaciens in the production of bean of the cultivar Pérola. The levels of inocula utilized were of 0%; 5%; 10%; 15%; 20%; 25% and 30% of plants infected with C. flaccumfaciens pv. flaccumfaciens. From a suspension of 2 x 107 ufc/ml inoculations. Were made to reach the desired percentage of infection, in plants after ten days of emergency. The first experiment was sown on 12/11/2004 and harvested on 21/02/2005 named A; the second experiment was sown on 16/12/2004 and harvested on 23/03/2005 named B. It was utilized entirely randomized blocks with three repetitions, each block had seven treatments with three repetitions. Each treatment was composed of three lines of five meters with 0,5 m between them and a density of plantation of 12 seeds per linear meter. The results were analyzed at the end of the cycle of the culture, comparing the productivity presented in each level of inoculum with the productivity of the control (0% C. flaccumfaciens pv. flaccumfaciens). According to the results obtained in the experiment A, the average bean production for each treatment was 1170,0 g; 1118,9 g; 1054,0 g; 1053,3 g; 1032,2 g; 976,7 g; 892,2; for 0%; 5%; 10%; 15%; 20%; 25% and 30% of plants infected, corresponding a reduction of 0%; 4,4%; 5%; 9,9%; 11,8%; 16,6% and 23,8% respectively. In the experiment B the average bean production for each treatment was 658,9 g; 581,1 g; 515,5 g; 492,2 g; 462,2 g; 417,8 g; 351,1 g for the same rates of infection and with a reduction of 11,8%; 21,8%; 25,30%; 29,98%; 36,6% and 46,7% respectively. A survey was carried out in the years of 2004 and 2005 in commercial plantations in the Federal District (PAD DF), Goiás (Cabeceiras) and Minas Gerais 9 (Buritis) in a range of approximately 200 km from Brasilia, and the presence of the bacterium was detected in 100% of the visited farms. Two experiments (B1 and B2) were carried out in the greenhouse utilizing seeds from a bean field C. flaccumfaciens pv. Flaccumfaciens, with the objective of evaluate the sanity during 60 days. The experiments showed 80,7% and 76,6% respectively of the plants with some kind of symptom caused by Curtobacterium flaccumfaciens pv. flaccumfaciens. Persistence and viability of C. flaccumfaciens pv. flaccumfaciens was evaluated in soil collected in a bean field area under central pivot with occurrence of high levels of infection bacterial wilt in and the results indicated that, at least during ten months, period of duration of the experiment, the bacterium remained viable and able to infect beans plants. Based on the results it is possible to affirm that the Curtobacterium wilt is widely disseminated in the region of the Federal District and vicinity, can cause significant losses of productivity in the culture of bean and persists in the soil and crop debris for at least ten months.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, Programa de Pós-Graduação em Fitopatologia, 2013. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2013-09-25T14:21:10Z No. of bitstreams: 1 2013_MagnoRodriguesdeCarvalhoFilho.pdf: 3266869 bytes, checksum: af4ff8325e1cec5ab19c33e4b2982369 (MD5) / Approved for entry into archive by Marília Freitas(marilia@bce.unb.br) on 2013-10-03T13:11:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_MagnoRodriguesdeCarvalhoFilho.pdf: 3266869 bytes, checksum: af4ff8325e1cec5ab19c33e4b2982369 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-10-03T13:11:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_MagnoRodriguesdeCarvalhoFilho.pdf: 3266869 bytes, checksum: af4ff8325e1cec5ab19c33e4b2982369 (MD5) / Trichoderma constitui um gênero de microfungos mundialmente distribuído na natureza. Nos solos, estão presentes como microorganismos de vida livre ou colonizando raízes de plantas. Podem também colonizar endofiticamente os tecidos vegetais, como simbiontes. Por apresentarem ação antagonista contra fitopatógenos, linhagens de diversas espécies desse gênero vem sendo estudadas como agentes de biocontrole de doenças de plantas, dentre as quais, o mofo branco, causado por Sclerotinia sclerotiorum, em diversas espécies vegetais. A caracterização molecular desse grupo de antagonistas tem grande importância, tanto em estudos de biodiversidade e distribuição das espécies, como na identificação de potenciais agentes de biocontrole, e de possíveis patógenos oportunistas a humanos, a exemplo de Trichoderma longibrachiatum. O objetivo desse trabalho foi identificar 148 isolados em nível de espécie, por sequenciamento das regiões ITS do DNA ribossomal e avaliar a biodiversidade desses isolados com referência à origem geográfica. Foi realizada seleção in vitro de isolados com potencial de biocontrole, os quais foram avaliados, em casa de vegetação, quanto à capacidade de supressão do mofo branco e como promotores de crescimento do feijoeiro. Os 29 isolados selecionados foram também submetidos à técnica de MALDI-TOF MS (Matrix-assisted laser desorption/ionization-time of flight mass spectrometry), para confirmação das espécies, correlacionando esta técnica de identificação com a técnica molecular empregada. Filtrados de culturas do isolado CEN201, com potencial de inibição do crescimento micelial do patógeno supracitado, foram submetidos a técnicas de extração e purificação de metabólitos secundários. A capacidade de inibição do crescimento micelial de S. Sclerotiorum, por esses compostos, foi confirmada. No capítulo 1 são relatados resultados desses estudos, mostrando que 17,4% dos isolados apresentaram alto nível de antagonismos em pareamento de culturas e dois grupos apresentaram 83,3 a 88,9% de inibição micelial do patógeno por metabolitos não voláteis. Outro ponto ressaltado nesta pesquisa foi o índice de biodiversidade relativa aos 144 isolados de Trichoderma procedentes de sete estados brasileiros, que alcançou 0,076 com 11 espécies. Já o capítulo 2 relata a supressão do mofo branco com 19 dos 29 isolados selecionados in vitro no capítulo 1. Observou-se, também, promoção de crescimento de plantas de feijão com 7 isolados estudados. Foram ainda mostrados os resultados obtidos na identificação dos isolados por espectrometria de massa (MALDI-TOF MS). Esses resultados, confrontados com os dados obtidos na identificação molecular verificada no capítulo anterior, indicaram a convergência das duas técnicas, confirmando o potencial de MALDI-TOF MS como método rápido para identificação de espécies de Trichoderma. O capítulo 3 está focado nos estudos com metabólitos não voláteis produzidos pelo isolado CEN201 (T.asperellum). As técnicas utilizadas, Cromatografia líquida e MALDI-TOF MS possibilitaram, por homologia de massa/carga, inferir a presença de dois compostos com ação antibiótica, Asperelina B e Trichocompactina, no filtrado de culturas estudado. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Trichoderma composes a genus of microfungi distributed worldwide. In soil, these fungi may be present as free life or colonizing plant roots. Can also to colonize plant tissues endophytically like symbionts. Some species have been studied as biocontrol agents of plant diseases, among which, white mold caused by Sclerotinia sclerotiorum in several plant species. Their mechanisms of action include the production of secondary metabolites with antibiotic effect, mycoparasitism and competition for space and nutrients. The molecular characterization of this group of antagonists is very important, both in studies of biodiversity and species distribution and for identification of potential biocontrol agents, and possible opportunistic pathogens to humans like Trichoderma longibrachiatum. The aim of this study was to identify 148 the isolates of Trichoderma on species level by sequencing the ITS region of Ribossomal and to evaluate their biodiversity with reference to geographical originan. Was performed, in vitro, selection of isolates with potencial biocontrol, which were evaluated in greenhouse as the ability of white mold supression and as beans growth promoters. The 29 selected isolates were also subjected to the technique of MALDI-TOF MS (Matrix-assisted laser desorption / ionization-time of flight mass spectrometry) to confirm the species, correlating this technique in identification with molecular technique employed. Culture filtrates of isolate CEN 201, with potential to inhibit the mycelial growth of the pathogen above, were subjected to techniques of extraction and purification of secondary metabolites. The capacity of mycelial growth inhibition of S. Sclerotiorum by these compounds was confirmed. In chapter 1, are reported results of these studies showing that 17,4% of the isolates showed a high level of antagonism in pairing cultures and two groups showed 83,3 to 88,9% of inhibition of the pathogen by volatile metabolites. Another point emphasized in this study was the index of biodiversity on 144 Trichoderma isolates from seven Brazilian states, which reached 0,076 with 11 species. Already Chapter 2 reports the suppression of white mold with 19 of the 29 isolates selected in vitro in Chapter 1. It was observed, also, promote growth of bean plants with 7 isolates tested. Also shown are the results obtained by identification of the isolated mass spectrometry (MALDI-TOF MS). These results, compared with the data obtained in the molecular identification verified in the previous chapter showed the convergence of the two techniques, confirming the potential of MALDI-TOF MS as a rapid method for identification of Trichoderma species. The Chapter 3 is focused on studies of non-volatile metabolites produced by isolated CEN201 (T.asperellum). The techniques used, liquid chromatography and MALDI-TOF MS was enable, by homology mass/charge, to infer the presence of two compounds with antibiotic activity, Trichocompactin and Asperelin B in culture filtrates studied.