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Thesis (Ph. D.)--University of Washington, 2000. / Vita. Includes bibliographical references (leaves 144-172).

Corneal transplantation carries a high rate of success in the domestic cat and is an indicated treatment for specific corneal diseases in this species. The potential for iatrogenic transmission of viral diseases is a well-recognized problem in human corneal transplantation programs and screening donors for certain diseases is routine. Feline leukemia virus (FeLV) is a common agent of disease in domestic cats and available blood tests are highly effective in identification of infected individuals. This study investigates the presence of FeLV within corneal tissues of FeLV infected cats. Seventeen cats were identified to be positive for serum p27 antigen by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Twelve of these individuals were found to be positive on peripheral blood by immunofluorescent antibody (IFA) testing. Seventeen ELISA negative cats were identified to serve as negative controls. Full thickness corneal specimens were collected from all subjects and analyzed for the presence of FeLV proviral DNA and gp70 antigen by polymerase chain reaction (PCR) and immunohistochemical (IHC) testing, respectively. Eleven (64.7%) positive corneal PCR results were obtained from 17 ELISA positive cats. Of 12 cats which were both ELISA and IFA positive on peripheral blood, 10 (83.3%) had positive corneal PCR results. All corneal tissues from ELISA negative subjects were PCR negative. IHC staining of corneal sections revealed the presence of FeLV gp70 in corneal tissues of nine (52.9%) ELISA positive cats. Of the 12 cats which were both ELISA and IFA positive on peripheral blood, 8 (66.7%) had positive corneal IHC results. Positive IHC staining was localized to the corneal epithelium. Corneal tissues of all ELISA negative cats and all IFA negative cats were negative on IHC testing. This study reveals FeLV to be present within the corneal epithelium of some FeLV infected cats. Screening potential corneal donors for this virus is warranted. This work was funded by grants from the American College of Veterinary Ophthalmologists, the Virginia Veterinary Medical Association Pet Memorial Fund, and the DSACS Quick Response Fund. / Master of Science

Latent feline leukemia virus (FeLV) infections, in which proviral DNA is integrated into host DNA, but not actively transcribed, are suspected to be associated with many diseases. Bone marrow is the suspected site of the majority of latent infections. The purpose of this study was to determine if polymerase chain reaction (PCR) could detect FeLV proviral DNA in bone marrow and provide a method of detecting latent infections. Blood and bone marrow samples from fifty cats and bone marrow from one fetus were collected; sixteen had FeLV-associated diseases. Serum ELISA, blood and bone marrow immunofluorescent antibody test (IFA), and blood and bone marrow PCR were performed on each cat, and IFA and PCR on bone marrow of the fetus. Forty-one cats were FeLV negative. Five cats and one fetus were persistently infected with FeLV. Four cats were discordant; two ELISA positive with other tests negative, one bone marrow IFA negative with other tests positive, and one bone marrow IFA positive with other tests negative. No cats were positive on bone marrow PCR only. These results indicate that PCR can detect FeLV in bone marrow, but no cats in this study harbored FeLV only in the bone marrow. Not all cats with FeLV-associated diseases are persistently or latently infected with FeLV. / Master of Science

Este estudo visou identificar os fatores de risco da leucemia felina, em uma amostragem de 812 gatos provenientes do município de São Paulo. O teste usado para o diagnóstico da infecção foi a imunofluorescência indireta (IFI). Amostras de esfregaços sangüíneos de 812 gatos foram enviadas por clínicos veterinários de diferentes regiões da cidade. Cada animal teve uma ficha de identificação na qual pesquisou-se os seguintes fatores: sexo, idade, acesso à rua, vida reprodutiva, origem e número de contactantes. Os dados foram tabelados e armazenados para posterior análise estatística. O teste utilizado para identificar os felinos infectados pelo VLF foi a imunofluorescência indireta, utilizando-se anticorpos anti-VLF (Primary Reagent for FeLV IFA, VRMD, Inc.) e o conjugado anti-IgG FITC (Secondary Reagent for IFA, VRMD, Inc.). Foram obtidas 50 reações positivas, correspondendo a 6,16% da amostra estudada. O teste de &chi;2 foi usado para triagem das variáveis a serem analisadas pela regressão logística. Os resultados obtidos pelo modelo múltiplo final demonstraram que na população estudada os fatores de risco para a leucemia felina foram: ter acesso à rua (RC=47,221; p<0,001), ter sido adotado na rua (RC=3,221; p=0,008) e ter idade entre 3 e 6 anos (RC=3,046; p=0,009), sendo o acesso à rua o fator de risco mais importante. Outros fatores associados à infecção na análise univariada, como sexo e vida reprodutiva, deixaram de ser significativos, tendo sido sobrepujados pela variável acesso a rua. / This study aimed to identify the risk factors of feline leukemia in a sample of 812 cats from the city of São Paulo. Blood samples of 812 cats were sent by veterinary clinicians from different regions of the city. Each sample had an identification form with the following factors: sex, age, access to the street, reproductive status, origin, number of contactants and breed. These factors were assessed in the risk factors analysis. The test used to identify the infected animals was the indirect immunofluorescence, with antibodies anti-FeLV (Primary Reagent for FeLV IFA, VRMD, Inc.) and the conjugate anti-IgG FITC (Secondary Reagent for IFA, VRMD, Inc.). Fifty positive reactions were found, corresponding to 6,16% of the total sample. The &chi;2 was used to select the variables to be analyzed by logistic regression. The results obtained through the final multiple model demonstrated that, in the studied population, the risk factors to feline Leukemia were: access to the street (OR=47,221; p<0,001), adoption from the street (OR=3,221; p=0,008) and age range between 3 and 6 years old (OR=3,046; p=0,009), with the first one considered the most important. Other factors associated with the infection in the univariate analysis, such as sex and reproductive status, became non-significant, having been overcome by the variable access to the street.

Orientador: João Pessoa Araújo Júnior / Banca: Camilo Bulla / Banca: Paulo Eduardo Martins Ribolla / Banca: Julio Lopes Sequeira / Banca: Alexandre Secorum Borges / Resumo: O vírus da leucemia felina (FeLV) é um retrovírus que infecta principalmente gatos jovens. Em aglomerados de animais, a infecção pelo FeLV é a que mais contribui para a mortalidade. O emprego de técnicas moleculares de detecção viral permitiu avanços no que diz respeito à caracterização da patogenia e resposta à vacinação. Baseando-se nesses novos resultados, o diagnóstico da infecção deve ser realizado, primeiramente, com um teste de triagem de detecção da proteína de capsídeo p27, e, posteriormente, a confirmação com teste de detecção de DNA proviral. O diagnóstico e separação de animais positivos constituem o mecanismo primordial para conter a disseminação do FeLV. Diante disso, é de grande importância facilitar o acesso e baratear o diagnóstico. A construção de um teste de detecção da p27 baseia-se na produção de anticorpos monoclonais. A técnica de hibridomas é menos prática e demanda mais tempo para a obtenção de resultados satisfatórios quando comparada à técnica de Phage Display. Esta está em franco desenvolvimento e tem ganhado grande aplicabilidade na medicina veterinária. Empregamos o sistema de Phage Display desenvolvido por Krebber e colaboradores (1997). Primeiramente, foi construída uma biblioteca imune em camundongos, em seguida, foram amplificadas as regiões gênicas variáveis das cadeias leve (VL) e pesada (VH) e ligadas com um Linker de (Gli4Ser)4. Esses fragmentos geneticamente construídos derivados de anticorpos são denominados de single chain variable fragment ou scFv. Os scFvs foram fusionados à pIII e apresentados na superfície de fagos filamentos. Após três ciclos de seleção e enriquecimento contra a p27 recombinante produzida no laboratório, onze scFvs foram selecionados e caracterizados com relação à constituição nucleotídica e de aminoácidos. Dentre eles, o scFv 9 e scFv 70 foram escolhidos... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The feline leukemia virus (FeLV) is a retrovirus that infects primarily young cats. In animal clusters, FeLV infection is the largest contributor to mortality. The use of molecular techniques for viral detection has allowed advances with regard to the pathogenicity and response to vaccination. Based on these new findings, the diagnosis of infection should be performed first, with a screening test for detection of p27 capsid protein, and subsequently confirmed with testing for proviral DNA. The diagnosis and segregation of positive animals is the primary mechanism to contain the FeLV spread. Therefore, it is of great importance to facilitate access and lower the diagnosis. The construction of a test for p27 detection relies on monoclonal antibody development. The hybridoma technique is less practical and more time consuming to obtain satisfactory results when compared to Phage Display technology. The latter has been improved rapidly and has gained wide application in veterinary medicine. We employed the Phage Display system developed by Krebber et al. (1997). First, an immune library was built in mice and the variable region of the light and the heavy genes were amplified and connected by a linker of (Gly4Ser)4. This genetically engineered antibody fragments are called single chain variable fragments or scFv. The scFvs were fused to the pIII protein and displayed on the surface of filamentous phages. After three rounds of selection and enrichment against recombinant p27 (produced in the laboratory), eleven scFvs were selected and characterized with respect to nucleotide and aminoacid composition. Among them, scFv 9 and scFv 70 were chosen for subcloning and expression in prokaryotic system for production of heterologous proteins. The scFvs in soluble forms were evaluated for their binding capacity to p27. The scFvs will be employed to the development of an immunoassay for FeLV detect... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:13Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-12-13Bitstream added on 2014-06-13T20:06:48Z : No. of bitstreams: 1 figueiredo_as_dr_botfmvz.pdf: 1094123 bytes, checksum: 04a46005f550990f7c07cdcb751f14b5 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O vírus da leucemia felina (FeLV) é um retrovírus que infecta principalmente gatos jovens. Em aglomerados de animais, a infecção pelo FeLV é a que mais contribui para a mortalidade. O emprego de técnicas moleculares de detecção viral permitiu avanços no que diz respeito à caracterização da patogenia e resposta à vacinação. Baseando-se nesses novos resultados, o diagnóstico da infecção deve ser realizado, primeiramente, com um teste de triagem de detecção da proteína de capsídeo p27, e, posteriormente, a confirmação com teste de detecção de DNA proviral. O diagnóstico e separação de animais positivos constituem o mecanismo primordial para conter a disseminação do FeLV. Diante disso, é de grande importância facilitar o acesso e baratear o diagnóstico. A construção de um teste de detecção da p27 baseia-se na produção de anticorpos monoclonais. A técnica de hibridomas é menos prática e demanda mais tempo para a obtenção de resultados satisfatórios quando comparada à técnica de Phage Display. Esta está em franco desenvolvimento e tem ganhado grande aplicabilidade na medicina veterinária. Empregamos o sistema de Phage Display desenvolvido por Krebber e colaboradores (1997). Primeiramente, foi construída uma biblioteca imune em camundongos, em seguida, foram amplificadas as regiões gênicas variáveis das cadeias leve (VL) e pesada (VH) e ligadas com um Linker de (Gli4Ser)4. Esses fragmentos geneticamente construídos derivados de anticorpos são denominados de single chain variable fragment ou scFv. Os scFvs foram fusionados à pIII e apresentados na superfície de fagos filamentos. Após três ciclos de seleção e enriquecimento contra a p27 recombinante produzida no laboratório, onze scFvs foram selecionados e caracterizados com relação à constituição nucleotídica e de aminoácidos. Dentre eles, o scFv 9 e scFv 70 foram escolhidos... / The feline leukemia virus (FeLV) is a retrovirus that infects primarily young cats. In animal clusters, FeLV infection is the largest contributor to mortality. The use of molecular techniques for viral detection has allowed advances with regard to the pathogenicity and response to vaccination. Based on these new findings, the diagnosis of infection should be performed first, with a screening test for detection of p27 capsid protein, and subsequently confirmed with testing for proviral DNA. The diagnosis and segregation of positive animals is the primary mechanism to contain the FeLV spread. Therefore, it is of great importance to facilitate access and lower the diagnosis. The construction of a test for p27 detection relies on monoclonal antibody development. The hybridoma technique is less practical and more time consuming to obtain satisfactory results when compared to Phage Display technology. The latter has been improved rapidly and has gained wide application in veterinary medicine. We employed the Phage Display system developed by Krebber et al. (1997). First, an immune library was built in mice and the variable region of the light and the heavy genes were amplified and connected by a linker of (Gly4Ser)4. This genetically engineered antibody fragments are called single chain variable fragments or scFv. The scFvs were fused to the pIII protein and displayed on the surface of filamentous phages. After three rounds of selection and enrichment against recombinant p27 (produced in the laboratory), eleven scFvs were selected and characterized with respect to nucleotide and aminoacid composition. Among them, scFv 9 and scFv 70 were chosen for subcloning and expression in prokaryotic system for production of heterologous proteins. The scFvs in soluble forms were evaluated for their binding capacity to p27. The scFvs will be employed to the development of an immunoassay for FeLV detect... (Complete abstract click electronic access below)

Este estudo visou identificar os fatores de risco da leucemia felina, em uma amostragem de 812 gatos provenientes do município de São Paulo. O teste usado para o diagnóstico da infecção foi a imunofluorescência indireta (IFI). Amostras de esfregaços sangüíneos de 812 gatos foram enviadas por clínicos veterinários de diferentes regiões da cidade. Cada animal teve uma ficha de identificação na qual pesquisou-se os seguintes fatores: sexo, idade, acesso à rua, vida reprodutiva, origem e número de contactantes. Os dados foram tabelados e armazenados para posterior análise estatística. O teste utilizado para identificar os felinos infectados pelo VLF foi a imunofluorescência indireta, utilizando-se anticorpos anti-VLF (Primary Reagent for FeLV IFA, VRMD, Inc.) e o conjugado anti-IgG FITC (Secondary Reagent for IFA, VRMD, Inc.). Foram obtidas 50 reações positivas, correspondendo a 6,16% da amostra estudada. O teste de &chi;2 foi usado para triagem das variáveis a serem analisadas pela regressão logística. Os resultados obtidos pelo modelo múltiplo final demonstraram que na população estudada os fatores de risco para a leucemia felina foram: ter acesso à rua (RC=47,221; p<0,001), ter sido adotado na rua (RC=3,221; p=0,008) e ter idade entre 3 e 6 anos (RC=3,046; p=0,009), sendo o acesso à rua o fator de risco mais importante. Outros fatores associados à infecção na análise univariada, como sexo e vida reprodutiva, deixaram de ser significativos, tendo sido sobrepujados pela variável acesso a rua. / This study aimed to identify the risk factors of feline leukemia in a sample of 812 cats from the city of São Paulo. Blood samples of 812 cats were sent by veterinary clinicians from different regions of the city. Each sample had an identification form with the following factors: sex, age, access to the street, reproductive status, origin, number of contactants and breed. These factors were assessed in the risk factors analysis. The test used to identify the infected animals was the indirect immunofluorescence, with antibodies anti-FeLV (Primary Reagent for FeLV IFA, VRMD, Inc.) and the conjugate anti-IgG FITC (Secondary Reagent for IFA, VRMD, Inc.). Fifty positive reactions were found, corresponding to 6,16% of the total sample. The &chi;2 was used to select the variables to be analyzed by logistic regression. The results obtained through the final multiple model demonstrated that, in the studied population, the risk factors to feline Leukemia were: access to the street (OR=47,221; p<0,001), adoption from the street (OR=3,221; p=0,008) and age range between 3 and 6 years old (OR=3,046; p=0,009), with the first one considered the most important. Other factors associated with the infection in the univariate analysis, such as sex and reproductive status, became non-significant, having been overcome by the variable access to the street.

Made available in DSpace on 2016-04-28T20:17:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009 - Nadia Rossi de Almeida.pdf: 1219567 bytes, checksum: 83793b5f3d79ab19c2fe40b41ba26f70 (MD5) Previous issue date: 2009-02-05 / The present study had the aim to make a survey of the Feline Leukemia Virus infection in domestic cats of Rio de Janeiro city and Baixada Fluminense region and to analyze risk factors involved in this infection. For this purpose, peripheral blood smears of 1094 cats had been submitted to indirect immunofluorescence for viral antigen detection and data relative to the animals surveyed, such as sex, age, race, access to the street, sexual life, housing, number of contactants and symptoms and/or clinical signals had been registered in individual files. Among the analyzed samples, 11,52% were positive for the test, corresponding to 11,49% of the animals collected at the Rio de Janeiro city and 11,62% of the collected samples at Baixada Fluminense region. The qui-square test was used for the descriptive analysis of all the selected variables, where only the significant variable had been included in multivariate analysis, by logistic regression. In accordance to these analysis, the access to the street, the age range between 1 and 5 years old and the cohabitation with too much cats in groups among 6 to15 cats and above of 15 cats had been considered risk factors for FeLV infection. / O presente estudo teve como objetivo pesquisar a ocorr?ncia da infec??o pelo V?rus da Leucemia Felina (FeLV) em gatos dom?sticos do munic?pio do Rio de Janeiro e Baixada Fluminense e tamb?m analisar fatores de risco envolvidos na infec??o por este retrov?rus. Para esta finalidade, esfrega?os de sangue perif?rico de 1.094 gatos foram submetidos ao teste de imunofluoresc?ncia indireta para pesquisa de ant?geno viral e os dados relativos aos animais, tais como o sexo, idade, ra?a, acesso ? rua, vida sexual, moradia, n?mero de contactantes e sintomas e/ou sinais cl?nicos foram registrados em fichas individuais. Do total de amostras analisadas, 11,52% apresentaram positividade para o teste, correspondendo a 11,49% de ocorr?ncia da infec??o em animais do munic?pio do Rio de Janeiro e 11,62% da Baixada Fluminense. O teste de qui-quadrado foi utilizado para a an?lise descritiva de todas as vari?veis levantadas, onde apenas as vari?veis que apresentaram signific?ncia foram inclu?das na an?lise multivariada, atrav?s da regress?o log?stica. De acordo com estas an?lises, o acesso ? rua, a faixa et?ria entre 1 e 5 anos de idade e a conviv?ncia com demais gatos na faixa entre 6 e 15 gatos e acima de 15 gatos foram fatores de risco para a infec??o pelo FeLV.

Com o objetivo de avaliar a freqüência de infecção por micoplasmas hemotrópicos em gatos com linfoma e seu impacto na ocorrência de anemias nesses animais, foram analisadas amostras sangüíneas de 14 animais com diagnóstico de linfoma, sem qualquer tratamento prévio e 14 amostras de sangue de gatos hígidos, por meio da técnica de PCR-Nested. Utilizaram-se primers que amplificam fragmentos do gene 16S rRNA dos micoplasmas. Eritrograma e bioquímica sérica foram realizados, assim como testes sorológicos imunoenzimáticos (ELISA) para ambos os retrovírus. Anemia foi observada em 28,6% (4/14) dos gatos com linfoma. Em dois a anemia foi classificada como normocítica normocrômica não regenerativa, e em outros dois como macrocitica normocrômica não regenerativa. A freqüência de infecção pelos micoplasmas hemotrópicos felinos nos gatos com linfoma foi de 7,14% (1/14). Após seqüenciamento e posterior prova de identidade no GenBank, o agente foi identificado como M. haemofelis, número de acesso FJ544859. A freqüência de infecção pelos retrovírus foi de 21,42% para o FeLV e 7,14% (3/14) para o FIV. O animal infectado pelo M. haemofelis não apresentou anemia, ainda que apresentasse infecção concomitante pelo FeLV. O grupo controle não apresentou infecção por micoplasmas ou retrovírus. Nas condições em que este estudo foi realizado, concluiu-se que a anemia observada nos gatos com linfoma não foi ocasionada pela infecção por micoplasmas hemotrópicos, mas provavelmente em decorrência das alterações hematológicas promovidas pelo processo neoplásico, associadas ou não à infecção pelo FeLV. Portanto, a infecção pelos micoplasmas não apresentou um impacto direto na ocorrência de anemias em gatos com linfoma. / To evaluate the frequency of infection by hemotropic mycoplasmas in cats with lymphoma and its impact in the development of anaemia in those animals, blood samples from 14 animals diagnosed with Lymphoma and without any previous treatment and 14 blood samples from healthy cats were analyzed by means of the PCR-Nested technique. Primers were utilized and selectively amplified fragments of 16SrRNA gene of mycoplasma. Haematology, serum biochemical profile and FeLV/FIV ELISA were performed in all 28 cats. Anaemia was observed in 28.6% (4/14) of the cats with lymphoma. In two of them, anaemia was classified as normocytic-normochromic nonregenerative and in the other two as macrocytic-normochromic nonregenerative. The frequency of feline haemotropic mycoplasmas infection in cats with lymphoma was 7.14% (1/14). After sequencing and identity proof by the GenBank, the agent was identified as M. haemofelis, access number FJ544859. The frequency of retrovirus infection among all the cats with lymphoma was 21.42% (3/14) for FeLV and 7.14% (1/14) for FIV. The cat infected by M. haemofelis was also infected with FeLV, but was not anaemic. The 14 cats used as control did not exhibited infection by mycoplasmas or retrovirus infections. Under the conditions in which this study was developed, one can conclude that the anaemia observed in cats with lymphoma may not be related to hemotropic microplasmas infection, but to haematologyc alterations promoted by the associated neoplasic process and/or the occurrence or of FeLV infection. Therefore, the infection by the mycoplasmas did not present a direct impact in the occurrence of anaemies in cats with limphoma.