Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:51Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-11-19Bitstream added on 2014-06-13T19:22:35Z : No. of bitstreams: 1 ribeiro_cm_dr_botfmvz.pdf: 745921 bytes, checksum: 8bab622c3bd4edd8f54a1277d1e0eb7b (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Tritrichomonas foetus é o agente etiológico da tricomoníase bovina, enfermidade infecto-contagiosa de transmissão venérea que causa abortamento e infertilidade nestes animais. No touro, a infecção se estabelece na superfície epitelial do pênis e do prepúcio. Entretanto, são escassas as informações da susceptibilidade dos espermatozoides bovinos a este parasita. A proposta deste trabalho foi estudar, in vitro, a interação entre T. foetus e espermatozoides bovinos, bem como avaliar o efeito dos produtos extracelulares secretados pelo parasita sobre espermatozoides bovinos. Com esse objetivo, foi utilizado sêmen comercial criopreservado de cinco touros férteis (Bos taurus taurus, raça holandesa). Os espermatozoides foram selecionados pela técnica do gradiente de percoll. Posteriormente, foram mantidos por três horas com T. foetus ou com o extrato da cultura de T. foetus, contendo produtos extracelulares secretados pelo parasita. Nos momentos 0, 1, 2 e 3 horas de manutenção, foram analisadas a motilidade espermática progressiva e a viabilidade espermática. Os resultados foram avaliados pela técnica da análise de variância não-paramétrica complementada com o teste de comparações múltiplas de Dunn. Observou-se que T. foetus adere a espermatozoides bovinos e expressa o seu gene para cisteína peptidase. Os produtos extracelulares secretados pelo T. foetus foram citotóxicos para os espermatozoides, causando a diminuição da motilidade espermática progressiva, embora não tenham ocasionado significante diminuição da viabilidade espermática. / Tritrichomonas foetus is the etiologic agent of bovine trichomoniasis, a contagious infectious disease of venereal transmission, which causes abortion and infertility in cattle. In bulls, the infection starts in the epithelial surface of the penis and prepuce. However, there is scarce information on bovine sperm susceptibility to such parasite. Thus, the aim of this work was to study, in vitro, the interaction between T. foetus and bovine sperm cells, as well as to evaluate the effect of extracellular products secreted by the parasite on these cells. Cryopreserved commercial semen was obtained from five fertile bulls (Bos taurus taurus, Holstein). Spermatozoa were selected through the Percoll gradient technique and kept for three hours with T. foetus or T. foetus culture extract containing extracellular products secreted by the parasite. At 0, 1, 2 and 3 h, the progressive motility and the viability of spermatozoa were assessed. Results were evaluated through non-parametric analysis of variance complemented with Dunn’s test for multiple comparison. T. foetus adhered to the bovine spermatozoa, expressing its gene for cysteine peptidase. The extracellular products secreted by T. foetus were cytotoxic to the spermatozoa, decreasing their progressive motility although viability was not significantly decreased.

Resumo: Tritrichomonas foetus é o agente etiológico da tricomoníase bovina, enfermidade infecto-contagiosa de transmissão venérea que causa abortamento e infertilidade nestes animais. No touro, a infecção se estabelece na superfície epitelial do pênis e do prepúcio. Entretanto, são escassas as informações da susceptibilidade dos espermatozoides bovinos a este parasita. A proposta deste trabalho foi estudar, in vitro, a interação entre T. foetus e espermatozoides bovinos, bem como avaliar o efeito dos produtos extracelulares secretados pelo parasita sobre espermatozoides bovinos. Com esse objetivo, foi utilizado sêmen comercial criopreservado de cinco touros férteis (Bos taurus taurus, raça holandesa). Os espermatozoides foram selecionados pela técnica do gradiente de percoll. Posteriormente, foram mantidos por três horas com T. foetus ou com o extrato da cultura de T. foetus, contendo produtos extracelulares secretados pelo parasita. Nos momentos 0, 1, 2 e 3 horas de manutenção, foram analisadas a motilidade espermática progressiva e a viabilidade espermática. Os resultados foram avaliados pela técnica da análise de variância não-paramétrica complementada com o teste de comparações múltiplas de Dunn. Observou-se que T. foetus adere a espermatozoides bovinos e expressa o seu gene para cisteína peptidase. Os produtos extracelulares secretados pelo T. foetus foram citotóxicos para os espermatozoides, causando a diminuição da motilidade espermática progressiva, embora não tenham ocasionado significante diminuição da viabilidade espermática. / Abstract: Tritrichomonas foetus is the etiologic agent of bovine trichomoniasis, a contagious infectious disease of venereal transmission, which causes abortion and infertility in cattle. In bulls, the infection starts in the epithelial surface of the penis and prepuce. However, there is scarce information on bovine sperm susceptibility to such parasite. Thus, the aim of this work was to study, in vitro, the interaction between T. foetus and bovine sperm cells, as well as to evaluate the effect of extracellular products secreted by the parasite on these cells. Cryopreserved commercial semen was obtained from five fertile bulls (Bos taurus taurus, Holstein). Spermatozoa were selected through the Percoll gradient technique and kept for three hours with T. foetus or T. foetus culture extract containing extracellular products secreted by the parasite. At 0, 1, 2 and 3 h, the progressive motility and the viability of spermatozoa were assessed. Results were evaluated through non-parametric analysis of variance complemented with Dunn's test for multiple comparison. T. foetus adhered to the bovine spermatozoa, expressing its gene for cysteine peptidase. The extracellular products secreted by T. foetus were cytotoxic to the spermatozoa, decreasing their progressive motility although viability was not significantly decreased. / Orientador: José Rafael Modolo / Coorientador: Sony Dimas Bicudo / Coorientador: Fernando Costa e Silva Filho / Banca: Eunice Oba / Banca: Alessandro Francisco Talamini Amarante / Banca: Semírames Guimarães Ferraz Viana / Doutor

Orientadora : Profa. Dra. Vanete Thomaz Soccol / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Tecnologia, Programa de Pós-Graduação em Engenharia de Bioprocessos e Biotecnologia. Defesa: Curitiba, 27/02/2015 / Inclui referências : f.98-108 / Resumo: A febre aftosa é uma doença altamente contagiosa que acomete animais biungulados. Tem distribuição cosmopolita, mas é endêmica na Ásia, África e em alguns países da América do Sul, sendo que o Brasil é considerado zona livre com vacinação. No Brasil o controle epidemiológico da doença é realizado mediante a vacinação e vigilância sanitária sendo necessário diagnóstico diferencial entre animais vacinados de portadores do vírus, para provar a ausência da doença. Desta forma é fundamental o desenvolvimento de testes para diferenciar animais vacinados de doentes e para o controle do processo de produção da vacina. A resposta a anticorpos, contra proteínas não estruturais do vírus, tem sido amplamente utilizada para este propósito, como é o caso do ensaio imuno-enzimático-ELISA/EITB. A proteína 3ABC é uma proteína não estrutural do vírus da febre aftosa e está presente em altos níveis no soro de animais infectados. Visando a diferenciação entre animais doentes e vacinados a proteína ABC deve ser removida durante o processo de produção da vacina, para que o animal imunizado não apresente anticorpos detectáveis contra ela. O objetivo deste estudo foi produzir e caracterizar anticorpos policlonal e monoclonal contra a proteína 3ABC do vírus da febre aftosa, para serem utilizados no desenvolvimento de um teste imunoenzimático que permita monitorar os processos de purificação da vacina, para remover as proteínas não estruturais e controle de qualidade das partidas produzidas visando sua aprovação pelos órgãos fiscalizadores como o Ministério da Agricultura Pecuária e Abastecimento (MAPA). Para a produção dos anticorpos policlonal e monoclonal primeiramente foi produzida a proteína 3ABC recombinante a partir do plasmídeo contendo gene que codifica a proteína 3ABC, já com a mutegênese do gene 3ABC no sítio ativo da protease 3Cpro para sua inativação, produzido por Gonzales, 2013. A produção da proteína foi realizada por fermentação da Escherichia coli recombinante em erlenmeyer de um litro e realizada as etapas de semi purificação (anticorpo policlonal) e ou purificação (anticorpo monoclonal). O anticorpo policlonal, produzido em coelhos, apresentou altos títulos a partir de 75 dias pós-imunização. A puriticação foi realizada por cromatografia de afinidade com proteína G, o que resultou em uma imunoglobulina altamente pura, tornando-a mais específica para a proteína de interesse. Para a produção do anticorpo monoclonal foram imunizados camundongos BALB/c por via intramuscular. A fusão realizada originou 217 colônias de hibridomas, sendo 10 deles positivos no tese ELISA indireto. Após clonagem e expansão dos clones positivos, foi realizado o teste de estabilidade permitindo a seleção de dois clones estáveis. Os anticorpos foram caracterizados pelas metodologias de ELISA e Western Blotting e mostraram alta reatividade contra a proteína 3ABC e podem ser utilizados no desenvolvimento do teste ELISA para o monitoramento dos processos de purificação da vacina contra a febre aftosa. Todos os experimentos foram realizados na empresa Ourofino Saúde Animal. Palavras chave: febre aftosa; proteína 3ABC; anticorpo policlonal anti-3ABC; anticorpo monoclonal anti-3ABC. / Abstract: FMD is a highly contagious disease that affects cloven-hoofed animals and is endemic in Asia, Africa and some countries in South America. In Brazil the epidemiological disease control is achieved by vaccination and health surveillance. For this control is necessary differential diagnosis between vaccinated animals and those carrying the virus, to prove the absence of the disease. Thus it is important to develop tests to differentiate vaccinated animals from sick animals. The antibody response against nonstructural proteins of the virus, have been widely used for this purpose, such as the enzyme-immunoassay ELISA / EITB. The 3ABC is a nonstructural protein of FMD virus and it is present in high levels in infected animals serum. It is necessary to be removed during vaccine production, so the immunized animal does not produce detectable antibodies against them. The aim of this study was to produce and characterize polyclonal and monoclonal antibodies against the 3ABC protein of FMD virus, for their use to develop an enzymatic immunoassay experiments. Such experiments will allows the monitoring of the vaccine purification processes, which removes non-structural proteins and also the quality control process of the produced batches for approval by regulatory agencies such as the Ministry of Agriculture Livestock and Supply (MAPA). In this study, the plasmid to heterologous protein 3ABC production was produced by GONZALEZ, 2013. The expression has been optimized for subsequent production of polyclonal and monoclonal antibodies. For animal's immunization, either rabbit or mouse, the protein used was the semi purified protein. And for the monoclonal antibody screening tests, the protein used was the purified protein. The purification in this stage was due to the need of a specific test to select the monoclonal antibody which is also highly specific. The polyclonal antibody produced in rabbits, showed high titers from 75 days post-immunization. The large amount of polyclonal antibody obtained enabled the using of affinity chromatography using protein G, as a purification method, which resulted in a highly pure immunoglobulin, making it more specific to the protein of interest. For the production of monoclonal antibody (Mabs) BALB/c Mice were immunized intramuscularly. The fusion carried out originated 217 hybridomas colonies, 10 of them were positives for antibody production by ELISA test. After cloning and expansion of positive clones, stability tests were performed wich allowed the selection of two stable clones. The antibodies were characterized by ELISA and Western Blotting approaches. The mabs obteined showed high reactivity against 3ABC protein and as a result they can be used in the development of an ELISA assay to monitor the purification processes of the vaccine against FMD. All experiments were performed in Ourofino Animal Health Company. Key-words: FMD; 3ABC protein; polyclonal anti-3ABC; monoclonal anti-3ABC.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-02-04Bitstream added on 2014-06-13T19:47:39Z : No. of bitstreams: 1 soares_tcs_me_botfmvz.pdf: 579753 bytes, checksum: 1f0f6b066a32691444f35ec4d95d17aa (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O presente estudo teve por objetivos determinar a ocorrência de suínos portadores sadios de Streptococcus suis e Salmonella spp em criações na região de Botucatu-S.P., descrever a distribuição dos diferentes sorotipos dos agentes e o perfil de susceptibilidade aos antimicrobianos das linhagens isoladas, bem como verificar a transmissão desses agentes zoonóticos para os funcionários das granjas. Suabes de tonsilas e cavidades nasais de 240 suínos clinicamente sadios e suabes de tonsilas de 28 funcionários foram coletados para a detecção de Streptococcus suis através de cultivo bacteriano e PCR. Para a detecção de Salmonella spp foram coletados suabes de tonsilas e reto de 400 animais e suabes das mãos de 23 funcionários. O gênero Salmonella foi identificado através de cultivo bacteriano e provas bioquímicas. Streptococcus suis e Salmonella spp foram isolados de 80,42% e 2,00% dos animais amostrados, respectivamente. Dentre os 17 sorotipos de Streptococcus suis isolados, os sorotipos 22 (18,60%), 30 (15,10%), 21 (11,60%) e 27 (10,40%) foram os mais frequentes. Os três sorotipos de Salmonella isolados foram S. Infantis, S. Typhimurium e S. Cerro. Alta ocorrência de Streptococcus suis foi observada em todas as faixas etárias amostradas e ampla variedade de sorotipos do agente foi isolada. Multirresistência foi observada na grande maioria das linhagens isoladas de ambos os agentes estudados. O presente estudo descreve, pela primeira vez no Brasil, o isolamento de Streptococcus suis a partir de amostra de tonsilas de um indivíduo sadio / The aim of the present study was to determine the occurrence of Streptococcus suis and Salmonella spp healthy carrier pigs in swine farms of the Botucatu region, São Paulo State, to describe the distribution of the different serotypes of both agents and the antimicrobial susceptibility profile of the isolated strains, and to verify the transmission of these zoonotic agents for the farm workers. Swab samples from tonsils and nasal cavities of 240 clinically healthy pigs and tonsil swabs of 28 farm workers were collected for the detection of Streptococcus suis by bacterial culture and PCR. Tonsils and rectal swabs were collected from 400 animals for the detection of Salmonella spp as well as swabs from the hands of 23 farm workers. The genus Salmonella was identified by bacterial culture and biochemical tests. Streptococcus suis and Salmonella spp were isolated from 80.42% and 2.00% of the sampled animals, respectively. Among the 17 isolated serotypes of Streptococcu suis, serotypes 22 (18.60%), 30 (15.10%), 21 (11.60%) and 27 (10.40%) were the most frequently. The three serotypes of Salmonella isolated were S. Infantis, S. Typhimurium and S. Cerro. High occurrence of Streptococcus suis was observed in all sampled age groups and a wide variety of serotypes of the agent was isolated. Multiresistance was observed in most isolates of both agents studied. The present study describes, for the first time in Brazil, the isolation of Streptococcus suis from the tonsils of a healthy human

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:32Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-11-23Bitstream added on 2014-06-13T20:38:49Z : No. of bitstreams: 1 bolsanello_rx_me_botfmvz.pdf: 833743 bytes, checksum: e70892a4804cec3754d44a7fb072d0df (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / A ovinocultura vem se expandindo no Brasil nos últimos anos, e com isso começa-se a observar também um maior interesse para a produção de leite dessa espécie. Mesmo em países cuja produção leiteira é uma tradição de muitos anos, há uma deficiência de novas tecnologias e de pesquisas ligadas à produção de leite ovino. O leite de ovelha é um produto caro, com nichos de mercados e com excelentes perspectivas de crescimento no Brasil. Este trabalho teve como finalidade estudar aspectos de etio-epidemiologia referentes às vias de transmissão de patógenos na mastite ovina, e os aspectos de produção leiteira em animais com ou sem mastite, durante toda lactação. O experimento foi realizado na área de Produção de Ovinos da Fazenda Edgárdia, da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia – UNESP – Campus de Botucatu. Foram utilizadas 37 ovelhas em lactação, da raça Bergamácia, submetidas a ordenha mecânica diariamente, com manejo idêntico. Os animais foram acompanhados durante toda a lactação (8 semanas). Avaliou-se o índice de mastite através do Califórnia Mastitis Test (CMT) e o leite dos animais positivos foi realizada cultura microbiológica e também se realizou a cultura microbiológica na água utilizada para higienização das tetas e equipamentos de ordenha; nos insufladores (teteiras); nas mãos dos ordenhadores; no óstio das tetas e na orofaringe dos respectivos cordeiros para correlacionar os achados microbiológicos encontrados nas diferentes situações, com os obtidos de amostras de leite dos animais, com mastites subclínicas e clínicas. Foi avaliada a produção de leite durante a lactação dos animais, correlacionando-se o índice da mastite e o estágio de lactação. O índice de CMT positivos (+, ++ e +++) durante as 8 semanas de lactação variou entre 1,35% e 8,1% das tetas. / Sheep farms have been expanding on the last years in Brazil, from this on a bigger interests on milk production of this species starts to grow. Even in countries which milk production is a tradition for years, there are deficits of new technologies and researches on the subject. Sheep milk is a expensive product that shows excellent perspectives onto the brazilian market. The aim of this work is to study the etio-epidemiology aspect which refers to the transmission pathways of sheep mastitis pathogenes, during the lactation period. The research was realized in the sheepraising center of Edgardia farm, of the Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia – UNESP – Campus de Botucatu. Thirty seven lactating sheeps were used, Bergamácia breed, under daily milking machines, all of them under similar management. The animals were followed during the lactation period (eight weeks). Evaluation of mastitis rates through the California Mastitis Test (CMT) and for positive milk samples microbiology culture were done on the milk samples and on the water used for hygiene of teat and milking equipments; insufflators; workers hands; teats ostium; and mouth of youngs to correlate to microbiologic findings during diferent situations, with the ones found from milk samples of animals, with clinical and subclinical mastitis. The milk production was evaluated during lactation period, correlating the mastitis rates and the lactation stage. The rate of positive CMT (+, ++ and +++) through eight weeks of lactation varied between 1,35% and 8,1% os the teats. Microbiology cultures realized could indicate that the most common mastite agent in this flock of sheep was Staphylococcus spp. not agreeing with many other cited works that affirmed that Manhemia haemolytica the most common sheep mastitis agent. There was not found a significative correlation between milk production... (Complete abstract click electronic access below)

Resumo: A ovinocultura vem se expandindo no Brasil nos últimos anos, e com isso começa-se a observar também um maior interesse para a produção de leite dessa espécie. Mesmo em países cuja produção leiteira é uma tradição de muitos anos, há uma deficiência de novas tecnologias e de pesquisas ligadas à produção de leite ovino. O leite de ovelha é um produto caro, com nichos de mercados e com excelentes perspectivas de crescimento no Brasil. Este trabalho teve como finalidade estudar aspectos de etio-epidemiologia referentes às vias de transmissão de patógenos na mastite ovina, e os aspectos de produção leiteira em animais com ou sem mastite, durante toda lactação. O experimento foi realizado na área de Produção de Ovinos da Fazenda Edgárdia, da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia - UNESP - Campus de Botucatu. Foram utilizadas 37 ovelhas em lactação, da raça Bergamácia, submetidas a ordenha mecânica diariamente, com manejo idêntico. Os animais foram acompanhados durante toda a lactação (8 semanas). Avaliou-se o índice de mastite através do Califórnia Mastitis Test (CMT) e o leite dos animais positivos foi realizada cultura microbiológica e também se realizou a cultura microbiológica na água utilizada para higienização das tetas e equipamentos de ordenha; nos insufladores (teteiras); nas mãos dos ordenhadores; no óstio das tetas e na orofaringe dos respectivos cordeiros para correlacionar os achados microbiológicos encontrados nas diferentes situações, com os obtidos de amostras de leite dos animais, com mastites subclínicas e clínicas. Foi avaliada a produção de leite durante a lactação dos animais, correlacionando-se o índice da mastite e o estágio de lactação. O índice de CMT positivos (+, ++ e +++) durante as 8 semanas de lactação variou entre 1,35% e 8,1% das tetas. / Abstract: Sheep farms have been expanding on the last years in Brazil, from this on a bigger interests on milk production of this species starts to grow. Even in countries which milk production is a tradition for years, there are deficits of new technologies and researches on the subject. Sheep milk is a expensive product that shows excellent perspectives onto the brazilian market. The aim of this work is to study the etio-epidemiology aspect which refers to the transmission pathways of sheep mastitis pathogenes, during the lactation period. The research was realized in the sheepraising center of Edgardia farm, of the Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia - UNESP - Campus de Botucatu. Thirty seven lactating sheeps were used, Bergamácia breed, under daily milking machines, all of them under similar management. The animals were followed during the lactation period (eight weeks). Evaluation of mastitis rates through the California Mastitis Test (CMT) and for positive milk samples microbiology culture were done on the milk samples and on the water used for hygiene of teat and milking equipments; insufflators; workers hands; teats ostium; and mouth of youngs to correlate to microbiologic findings during diferent situations, with the ones found from milk samples of animals, with clinical and subclinical mastitis. The milk production was evaluated during lactation period, correlating the mastitis rates and the lactation stage. The rate of positive CMT (+, ++ and +++) through eight weeks of lactation varied between 1,35% and 8,1% os the teats. Microbiology cultures realized could indicate that the most common mastite agent in this flock of sheep was Staphylococcus spp. not agreeing with many other cited works that affirmed that Manhemia haemolytica the most common sheep mastitis agent. There was not found a significative correlation between milk production... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Paulo Francisco Domingues / Coorientador: Hélio Langoni / Banca: Luis Carlos de Souza / Banca: Graziela Barioni / Mestre

Orientador: João Pessoa Araújo Júnior / Banca: Camilo Bulla / Banca: Paulo Eduardo Martins Ribolla / Banca: Julio Lopes Sequeira / Banca: Alexandre Secorum Borges / Resumo: O vírus da leucemia felina (FeLV) é um retrovírus que infecta principalmente gatos jovens. Em aglomerados de animais, a infecção pelo FeLV é a que mais contribui para a mortalidade. O emprego de técnicas moleculares de detecção viral permitiu avanços no que diz respeito à caracterização da patogenia e resposta à vacinação. Baseando-se nesses novos resultados, o diagnóstico da infecção deve ser realizado, primeiramente, com um teste de triagem de detecção da proteína de capsídeo p27, e, posteriormente, a confirmação com teste de detecção de DNA proviral. O diagnóstico e separação de animais positivos constituem o mecanismo primordial para conter a disseminação do FeLV. Diante disso, é de grande importância facilitar o acesso e baratear o diagnóstico. A construção de um teste de detecção da p27 baseia-se na produção de anticorpos monoclonais. A técnica de hibridomas é menos prática e demanda mais tempo para a obtenção de resultados satisfatórios quando comparada à técnica de Phage Display. Esta está em franco desenvolvimento e tem ganhado grande aplicabilidade na medicina veterinária. Empregamos o sistema de Phage Display desenvolvido por Krebber e colaboradores (1997). Primeiramente, foi construída uma biblioteca imune em camundongos, em seguida, foram amplificadas as regiões gênicas variáveis das cadeias leve (VL) e pesada (VH) e ligadas com um Linker de (Gli4Ser)4. Esses fragmentos geneticamente construídos derivados de anticorpos são denominados de single chain variable fragment ou scFv. Os scFvs foram fusionados à pIII e apresentados na superfície de fagos filamentos. Após três ciclos de seleção e enriquecimento contra a p27 recombinante produzida no laboratório, onze scFvs foram selecionados e caracterizados com relação à constituição nucleotídica e de aminoácidos. Dentre eles, o scFv 9 e scFv 70 foram escolhidos... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The feline leukemia virus (FeLV) is a retrovirus that infects primarily young cats. In animal clusters, FeLV infection is the largest contributor to mortality. The use of molecular techniques for viral detection has allowed advances with regard to the pathogenicity and response to vaccination. Based on these new findings, the diagnosis of infection should be performed first, with a screening test for detection of p27 capsid protein, and subsequently confirmed with testing for proviral DNA. The diagnosis and segregation of positive animals is the primary mechanism to contain the FeLV spread. Therefore, it is of great importance to facilitate access and lower the diagnosis. The construction of a test for p27 detection relies on monoclonal antibody development. The hybridoma technique is less practical and more time consuming to obtain satisfactory results when compared to Phage Display technology. The latter has been improved rapidly and has gained wide application in veterinary medicine. We employed the Phage Display system developed by Krebber et al. (1997). First, an immune library was built in mice and the variable region of the light and the heavy genes were amplified and connected by a linker of (Gly4Ser)4. This genetically engineered antibody fragments are called single chain variable fragments or scFv. The scFvs were fused to the pIII protein and displayed on the surface of filamentous phages. After three rounds of selection and enrichment against recombinant p27 (produced in the laboratory), eleven scFvs were selected and characterized with respect to nucleotide and aminoacid composition. Among them, scFv 9 and scFv 70 were chosen for subcloning and expression in prokaryotic system for production of heterologous proteins. The scFvs in soluble forms were evaluated for their binding capacity to p27. The scFvs will be employed to the development of an immunoassay for FeLV detect... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Hélio Langoni / Banca: Maria Luiza Carrieri / Banca: Jane Megid / Resumo: Os morcegos há algum tempo vem recebendo crescente importância em Saúde Pública, pois são considerados os principais reservatórios do vírus da raiva em grande parte do mundo inclusive no Brasil. Apesar dos morcegos manterem ciclos epidemiológicos da raiva há séculos, foi nas últimas décadas que a raiva em morcegos teve seu reconhecimento, por meio de pesquisas sobre o papel destes animais no ciclo epidemiológico da doença e também sobre suas variantes e suas implicações no desenvolvimento de novos reservatórios para o vírus da raiva, principalmente em regiões onde a doença em cães foi controlada. O estado de São Paulo, sob coordenação do Instituto Pasteur, realiza a vigilância epidemiológica para raiva por meio dos laboratórios credenciados para seu diagnóstico, no Laboratório do Serviço de Diagnóstico de Zoonoses da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia - UNESP - Botucatu - SP está credenciado recebendo material para diagnóstico de diversos municípios da região. Entre os anos de 2003 e 2010 foram diagnosticadas como positivas pelas provas de IFD e Prova Biológica, 19 amostras de quirópteros não hematófagos. Estes isolados foram caracterizados antigenicamente pelo painel de anticorpos monoclonais cedido pelo CDCOPAS (Centers of Disease Control and Prevention, Atlanta, GA, USAOrganização Pan-americana de Saúde), revelando que sete destes isolados pertenciam a variante 3, que tem os morcegos hematófagos da espécie Desmodus rotundus como reservatório, além de um morcego insetívoro do gênero Myotis que apresentou variante 4 característica do também morcego insetívoro Tadarida brasiliensis, além de outros três perfis não compatíveis, NC-1, NC-2 e NC-3. Todos os isolados foram submetidos a RT-PCR e seus produtos tiveram o gene da nucleoproteína (N) viral parcialmente... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: For some time ago, bats are receiving an increased importance in Public Health because they are considered the main reservoirs of rabies virus around the world, including Brazil. Although bats remain the rabies epidemiological cycles for centuries, only in the last decades the rabies in bats had its recognition, throughout researches focused on the role of these animals in the epidemiological cycle of the disease and also on their variants and their implications in the development of new reservoirs for rabies virus, mainly in regions where the disease in dogs was controlled. The state of São Paulo, coordinated by the Institute Pasteur, performs epidemiological surveillance for rabies through registered laboratories for its diagnosis. The labs of Zoonosis Diagnostic Service, School of Veterinary Medicine and Animal Science - UNESP - Botucatu - SP is registered for receiving material for diagnosis of some municipalities of the region. Between 2003 and 2010, 19 samples of nonhematophagous bats were diagnosed as positive by IFD and Biological Evidence. These isolates were antigenically characterized by the panel of monoclonal antibodies donated by PAHO-CDC (Centers for Disease Control and Prevention, Atlanta, GA, USA Pan-American Health), revealing seven of these isolates belonged to variant 3, which has the vampire bat Desmodus rotundus as reservoir, as well as an insectivorous bat of the genus Myotis presenting variant 4, characterisitc of the other insectivorous bat Tadarida brasiliensis, and other three profiles are not compatible, NC-1, NC-2 and NC-3. All isolates were assayed by RT-PCR and their products had the nucleoprotein gene (N) viral partially sequenced, generating a phylogenetic tree that grouped these isolates into four clusters, designated as lineages Nyctinomops, Myotis, Desmodus rotundus, and a new lineage of rabies virus not... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Antonio Carlos Paes / Banca: Marcio Garcia Ribeiro / Banca: Osimar de Carvalho Sanches / Resumo: A cinomose é uma doença infecto-contagiosa viral, sistêmica e letal causada pelo Morbilivírus que acomete cães de todas as idades e apresenta sinais clínicos respiratórios, gastrintestinais, dermatológicos, oftálmicos e neurológicos, que podem ocorrer sequencialmente ou isoladamente. Este estudo teve como objetivo comparar lesões encefálicas utilizando a histopatologia e avaliar a quantidade de vírus pela imunoistoquímica em cães tratados com Ribavirina na dose de 30mg/Kg por via oral uma vez ao dia por 15 dias e animais não tratados com esse fármaco, e que devido a evolução desfavorável da doença foram eutanasiados. Os animais foram atendidos e tratados durante a rotina do Setor de Enfermidades Infecciosas dos Animais Domésticos- FMVZ- UNESP/ Botucatu, SP. A análise histopatológica constituiu na avaliação de córtex cerebral, cerebelo, tálamo, tronco encefálico, hipocampo e visualização de manguitos perivasculares em meninges. A partir dessas regiões foi possível identificar e classificar lesões como: desmielinização; presença de manguitos perivasculares, edema, necrose neuronal, alterações vasculares (congestão, hemorragia e trombose) e alterações inflamatórias (meningite, meningoencefalite e meningoencefalomielite). Foi observado que a desmielinização se manteve altamente presente nos dois grupos, e que quando comparados estatisticamente não existe diferença significante entre os grupos, assim como na formação de manguitos perivasculares. Houve diminuição considerável do edema em todas as estruturas avaliadas, e a ribavirina® se mostrou eficaz na redução da inflamação encefálica, assim como a necrose neuronal foi menor em quase todas as estruturas avaliadas no grupo tratado, com exceção do tálamo. A análise estatística comparativa da marcação viral entre os grupos se mostrou significante somente para o cerebelo, tálamo e tronco encefálico / Abstract: Distemper is a viral infectious disease, caused by systemic and lethal morbillivirus that affects dogs of all ages and clinical signs respiratory, gastrointestinal, dermatological, ophthalmic and neurological disorders, which may occur sequentially or separately. This study aimed to compare brain lesions using histopathology and assess the amount of virus by immunohistochemistry in dogs treated with Ribavirin at a dose of 30mg/Kg orally once daily for 15 days and animals not treated with this drug, and that due to the unfavorable development of the disease were euthanized. The animals were treated and handled during routine Division of Infectious Diseases of Domestic Animals-FMVZ-UNESP / Botucatu, SP. Histopathologic analysis was to evaluate the cerebral cortex, cerebellum, thalamus, brainstem, hippocampus and viewing perivascular cuffs in the meninges. From these regions it was possible to identify and classify lesions such as demyelination, the presence of perivascular cuffing, edema, neuronal necrosis, vascular changes (congestion, hemorrhage and thrombosis) and inflammatory changes (meningitis, meningoencephalitis and meningo-encephalomyelitis). It was observed that the demyelination remained strongly present in both groups, and compared statistically no significant difference between groups, as well as the formation of perivascular cuffs. There was a considerable decrease of the edema measured in all structures, and ribavirin ® was effective in reducing brain inflammation, and neuronal necrosis was lower in almost all structures evaluated in the group treated with the exception of the thalamus. The comparative statistical analysis of the viral marking between groups was significant only for the cerebellum, thalamus and brainstem / Mestre

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:47Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-06-26Bitstream added on 2014-08-13T18:00:34Z : No. of bitstreams: 1 000758216_20150101.pdf: 141794 bytes, checksum: d8e36aef70fd4460b266e3a5ebd9bc48 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-01-05T11:00:44Z: 000758216_20150101.pdf,Bitstream added on 2015-01-05T11:01:45Z : No. of bitstreams: 1 000758216.pdf: 846120 bytes, checksum: d23712a096437d329d378bcdbdf158e4 (MD5) / A carne suína é a fonte de proteína de origem animal mais consumida no mundo, tendo o Brasil como o quarto maior produtor e exportador. A brucelose é uma das mais importantes e amplamente distribuidas zoonoses mundial. A prevenção da brucelose humana depende do controle da doença nos animais. O diagnóstico definitivo é o isolamento da bactéria, porém técnicas de biologia molecular permitem a detecção do agente e diferenciação em espécies e biótipos reduzindo o tempo necessário para o diagnóstico final. Os programas de controle e erradicação utilizam os testes sorológicos para o diagnóstico da doença existindo, no entanto, variação quanto ao tipo de teste utilizado de acordo com diferentes países e pesquisadores. No Brasil relatos de soropositividade para brucelose em suínos variam de zero a 100% de acordo com a região, amostragem e metodologia utilizada, porém estudos da enfermidade em suideos com lesões de linfadenite não são encontrados. Este trabalho pretende descrever a situação epidemiológica da brucelose em suínos no Brasil, avaliar os meios de cultura ágar Brucella, CITA e Farrell para isolamento desta bactéria e detectar a presença do agente em linfonodos de suínos e javalis, com linfadenite, abatidos em frigoríficos no estado de São Paulo, e destinados ao consumo humano / Pork is the most consumed source of animal protein in worldwide. Brucellosis is one of the most important and worldwide distributed zoonosis. The prevention of human brucellosis depends on controlling the disease in animals. The bacteria isolation is the standard technique but new molecular methods allow the detection and differentiation the agent in species and biotypes reducing the time required for the final diagnosis. The control and eradication programs are based in serological tests for the diagnosis, however, variation in these tests according to different countries and researchers are common. In Brazil reports for seropositivity in swine range from zero to 100% depending on region, sampling and methodology, but studies of the disease in suidae with lymphadenitis are not found. This study aims to describe the epidemiological situation of brucellosis in pigs in Brazil and evaluate Brucella agar, CITA and Farrell culture media for isolation of the bacteria and to detect the presence of the agent in lymph nodes of pigs and boars with lymphadenitis slaughtered in the state of São Paulo and sent for human consumption