Orientador: José Gonçalves Franco Júnior / Banca: Anice Maria Vieira Camargo Martins / Banca: Edson Borges / Banca: Jorge Nahas Filho / Banca: Ana Lúcia Kalinin / Resumo: Nas últimas décadas, alguns parâmetros laboratoriais têm sido propostos para identificar o potencial de saúde oocitária em Reprodução Assistida: 1. Maturidade nuclear e citoplasmática (pesquisa); 2. Dismorfismo (anomalias intracitoplasmáticas); 3. Fertilizaçao. Habitualmente, esses parâmetros (exceto a maturação citoplasmática) são avaliados pelo simples emprego de sistemas de microscopia de luz convencional. Nos últimos oito anos, foram relatados diversos estudos em oócitos humanos sobre a birrefringência da zona pelúcida (BF-ZP), a espessura da ZP, e a visualização do fuso meiótico (FM). Entretanto, ainda é discutível o poder desses novos parâmetros na seleção de óvulos com o pontecial de originar embriões com taxas de implantação elevadas, além disso, seu sistema de visualização e quantificação é complexo e dispendioso. O objetivo deste estudo foi investigar uma possível correlação entre esses parâmetros tradicionais com a BF-ZP, espessura da ZP e o FM. Dessa forma, um total de 73 pacientes que participaram do programa de injeção intracitoplasmática de espermatozóide (ICSI) no Centro de Reprodução Humana "Prof Franco Júnior" tiveram seus óvulos avaliados quanto a maturação nuclear (n=83), maturação citoplasmática (n=29), dismorfismo (n=280) e fertilização (n=216) sendo os resultados correlacionados com a imagem do FM (presença ou ausência), a intensidade da BF-ZP (positiva ou negativa) e a espessura da ZP. Os dados finais revelaram uma fraca correlação entre a maturação, o dismorfismo e a fertilização oocitária com a imagem do FM, a intensidade da BF-ZP, e a espessura da ZP. Entretanto, esses parâmetros poderiam ser responsáveis por identificar pontos biológicos diferentes do potencial de qualidade oocitária. Assim sendo, seria uma medida coerente, a utilização desses parâmetros, em forma conjunta, através de um escore de qualidade oocitária. / Abstract: During the last decades, three laboratorial parameters have been proposed to identify the potential of the oocyte quality in ART: 1- Nuclear and cytoplasmic maturation; 2-Dysmorphims (intracytoplasmic abnormalities); 3 - Fertilization. These parameters (except the cytoplasmic maturation) are assessed by a simple system of conventional light microscopy. In the last eight years, numerous studies about zona pellucida birefringence (BF-ZP), zona pellucida thickness and meiotic spindle visualization have been reported. However, it is still controversial the power of these parameters in selecting oocyte with potential to develop into implantation-competent embryos. Furthermore, the microscopy system is complex and expensive. The present study aims to evaluate whether there is any correlation between the classical parameters with BF-ZP, ZP thickness and spindle image. A total of 73 patients who participated in an ICSI program had their oocytes evaluated such nuclear maturation (n=83), cytoplasmic maturation (n=29), dysmorphism (n=280) and fertilization (n=216) being its results correlated to the spindle image (presence or absence), BF-ZP intensity (positive or negative) and ZP thickness. The final results showed a low correlation between maturation, dysmorphism and fertilization compared to spindle image and ZP characteristics (BF-ZP, ZP thickness). However, these factors can be responsible to identify specific biological differ from the oocyte potential. Concluding, the use of these factors in association, as a score (oocyte quality score), could be the correct evaluation. / Doutor

Orientador: Salatiér Buzetti / Co-orientador: Marcelo Carvalho Minhoto Teixeira Filho / Banca: Mario Luis Teixeira de Moraes / Banca: Paulo Henrique Muller / Resumo: A área plantada com eucalipto no estado do Mato Grosso do Sul continua em expansão, no entanto, os custos de produção tem aumentado, especialmente dos fertilizantes, reduzindo significativamente a rentabilidade dos produtores. Neste sentido, objetivou-se avaliar o crescimento do clone de eucalipto I-144 e seu estado nutricional em função da aplicação de doses de nitrogênio, fosforo e potássio e, parcelamento do N e K 2 O, em solo de textura arenosa no Cerrado, com baixos teores de P, K e matéria orgânica. O experimento foi conduzido na Fazenda Renascença, fundo agrícola administrado pela Cargill Agrícola S/A, localizado no município de Três Lagoas/MS. O delineamento experimental foi o de blocos casualizados com seis tratamentos e cinco repetições. Os tratamentos foram os seguintes: T1 (controle - sem adubação NPK); T2 (Dose padrão e parcelamento de N e K 2 O em 3 aplicações); T3 (Dose reduzida com parcelamento de N e K 2 O em 2 aplicações); T4 (Dose padrão com parcelamento de N e K 2 O em 2 aplicações); T5 (Dose reduzida com parcelamento de N e K 2 O em 1 aplicação) e T6 (Dose padrão com parcelamento de N e K 2 O em 1 aplicação). Foram avaliados o diâmetro à altura do peito (DAP), a altura de plantas, o volume de madeira com casca e determinadas às concentrações de macronutrientes nas folhas e no solo. A não fertilização do eucalipto resulta na redução do crescimento das plantas. O desenvolvimento do eucalipto clone I-144 aos 36 meses de idade não difere para doses e parcelamento de N e K 2 O / Abstract: The planted area of eucalyptus in Mato Grosso do Sul continues to expand; however, production costs have increased, especially fertilizer, thus, reducing the profitability of producers. In this context, it was aimed to evaluate the growth of eucalyptus clone I-144 and its nutritional status according to the application of nitrogen, phosphorus and potassium and split-application of N and K 2 O, in sandy soil in Cerrado, with low rates of P and K. The experiment was performed at the Renascença Farm, agricultural fund managed by Cargill Agricola S/A, located in Três Lagoas/MS. It was arranged in a randomized complete blocks experimental design with six treatments and five replications. The treatments were the following: T1 (control - without NPK); T2 (standard rate, the split-application of N and K 2 O, in 3 applications); T3 (reduced rate, the split-application of N and K 2 O, in 2 applications); T4 (standard rate, the split-application of N and K 2 O, in 2 applications); T5 (reduced rate of N and K 2 O, in 1 application) and T6 (standard rate of N and K 2 O, in 1 application). It was evaluated the diameter at breast height (DBH), the plant height, the volume of wood with bark and certain macronutrient concentration in the leaves and soil. The eucalyptus without fertilization results in reduced growth of the plants. The development of the eucalyptus clone I-144 after 36 months old does not differ for rates and split-application of N and K 2 O / Mestre

Orientador: Maria Denise Lopes / Banca: Fernanda da Cruz Landim e Alvarenga / Banca: Jussara Maria Tebet / Banca: Maria Isabel Mello Martins / Banca: Camila de Paula Freitas Dell'Aqua / Resumo: A produção de embrião in vitro (PIV) tem sido uma grande alternativa para os programas de preservação de felídeos selvagens ameaçados de extinção. No entanto, a PIV necessariamente depende de outras técnicas de reprodução assistida como a maturação in vitro (MIV), fertilização in vitro (FIV), transferência de embrião (TE), e criopreservação de gametas. Essas técnicas de reprodução assistida já foram transferidas com sucesso do gato doméstico para seus parentes selvagens. Já o uso de sêmen liofilizado também resultou em filhotes vivos de diversas espécies de produção, mas em gatos domésticos isso ainda não ocorreu. O objetivo do presente estudo foi verificar a fragmentação do DNA do sêmen liofilizado e a viabilidade de seu uso através da utilização da ICSI para a PIV de embriões de gatos domésticos. Foram colhidas amostras de 3 gatos normospérmicos que foram utilizadas a fresco, congeladas/descongeladas e liofilizadas. Foram realizados testes para avaliação de integridade de DNA (Laranja de Acridina Convencional, Ensaio do Cometa Alcalino, Laranja de Acridina na citometria de fluxo, e TUNEL). O método de TUNEL mostrou ter maior sonsibilidade para detecção de fragmentação de DNA e detectou grau elevado de lesão de DNA do sêmen liofilizado em comparação com o sêmen fresco e congelado/descongelado dos mesmos doadores. Não foi possível produzir embrião de gato através da técnica de ICSI utilizando sêmen que foi liofilizado em meio SOF / Abstract: The in vitro production of embryos (IVP) has been a good alternative for conservational programmes of wild felids threatened by extinction. However, IVP depends upon several other assisted reproduction techniques such as in vitro maturation (IVM), in vitro fertilization (IVF), embryo transfer (ET), gamete cryopreservation. These techniques were already successfully employed in wild felines. Freeze-dried sperm has also been used to produce live offspring of several species, but in domestic cat this has not been reported yet. Hence, the objective of the present study was to verify the sperm DNA fragmentation after the freeze-drying process as well as the feasibility of using freeze-dried sperm together with ICSI to produce cat IVP embryos. Fresh, frozen/thawed, freeze-dried sperm samples of 3 normospermic cats were used in this experiment. Sperm DNA integrity assessments were performed (Conventional Acridine Orange, Alkaline Comet Assay, Acridine Orange using flow cytometry, and TUNEL). TUNEL assessment showed higher sensitivity to detect DNA fragmentation and it detected higher DNA fragmentation in freeze-dried sperm when compared to frozen/thawes and fresh semen from the same donors. It was not possible to produce IVP embryos making use of freezedried sperm that used SOF as medium and ICSI / Doutor

Orientador: Gisele Zoccal Mingoti / Banca: Joaquim Mansano Garcia / Banca: Ériklis Nogueira / Resumo: O objetivo desse estudo foi avaliar os efeitos da suplementação lipídica sobre o desenvolvimento embrionário e criotolerância de embriões bovinos produzidos in vitro (PIV). Para tanto, em uma primeira etapa foi avaliado o efeito da suplementação alimentar de novilhas Nelore com uma fonte de gordura protegida ruminal, rica em ácidos graxos poliinsaturados (PUFAs) Omega 6 (n-6) e 3 (n-3) sobre a população folicular, número de oócitos recuperados, desenvolvimento in vitro e sobrevivência embrionária após 3 e 24h de CIV pós-desvitrificação. Não houve diferença significativa (P>0,05) quanto à população folicular (17,9±1,0 vs 15,8±1,0), número de oócitos recuperados (14,4±1,4 vs 14,5±1,3) e número de oócitos viáveis (12,1±1,2 vs 12,5±1,1) para a PIV de embriões, respectivamente para os grupos CONTR e GORD. Da mesma forma, a taxa de clivagem (68,7±3,2 vs 61,3±3,0), desenvolvimento embrionário (47,0±3,7 vs 39,4±3,6) e re-expansão embrionária pós-aquecimento não diferiram (P>0,05) entre os tratamentos CONTR e GORD (3h: 77,5 vs 78,4%; 24h: 77,5 vs 81,1%), muito embora tenha sido observado um incremento numérico na taxa de sobrevivência embrionária após 24h de CIV pós-desvitrificação no grupo GORD. Já em uma segunda etapa, foi avaliado o efeito da adição de Ácido Linoléico Conjugado (CLA), Ácido Docosaexaenóico (DHA) ou CLA+DHA durante os cultivos de maturação, desenvolvimento ou ambos, sobre o desenvolvimento in vitro e sobrevivência embrionária após 3 e 24h de CIV pós-desvitrificação. Não houve efeito entre o tipo de PUFA utilizado, assim como o momento da suplementação sobre as taxas de clivagem, de desenvolvimento embrionário até a fase de blastocistos e de sobrevivência embrionária em relação ao grupo controle (P>0,05). As maiores taxas... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of this study was to evaluate the effects of lipid supplementation on embryo development and cryotolerance of in vitro produced (IVP) bovine embryos. In a first step, was evaluated the effect of heifers dietary supplementation with a source of rumen protected fat, rich in polyunsaturated fatty acids (PUFAs) Omega 6 (n-6) and 3 (n-3) on follicular population, number of recovered oocytes, in vitro development and embryo survival after 3 and 24h of post-devitrification IVC. There was no significant difference (P>0.05) on follicular population (17.9±1.0 vs 15.8±1.0), number of recovered oocytes (14.4±1.4 vs 14.5±1.3) and number of viable oocytes (12.1±1.2 vs 12.5±1.1) for IVP embryos, respectively for CONTR and GORD groups. Similarly, the cleavage rate (68.7±3.2 vs 61.3±3.0), embryonic development (47.0±3.7 vs 39.4±3.6) and embryo re-expansion post-heating didn't differ (P>0.05) between CONTR and GORD treatments (3h: 77.5 vs 78.4%; 24: 77.5 vs 81.1%), although it has been observed a number increment on embryo survival rate after 24h of post-devitrification IVC on GORD group. In a second step, was evaluated the effect of addition of Conjugated Linoleic Acid (CLA), Docosahexaenoic acid (DHA) or CLA + DHA during maturation, development or both cultures on in vitro development and embryo survival after 3 and 24h of post-devitrification IVC. There was no effect between the type of PUFA used, and the time of supplementation on cleavage, embryo development until the blastocyst stage and embryo survival rates compared to the control group (P>0.05). The highest embryo survival rates after 3h of post-warming IVC were observed in groups supplemented with DHA during IVM (76.2%) or IVM+IVC (78.8%), differing significantly (P<0.05) of supplemented groups with CLA (52.7%) or CLA+DHA (55.3%), during IVM. There was no significant difference... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Vera Fernanda Martins Hossepian de Lima / Banca: Simone Cristina Méo Niciura / Banca: Juliana Corrêa Borges Silva / Banca: Wilter Ricardo Russiano Vicente / Banca: Paulo Henrique Franceschini / Resumo: Foram estudadas modificações feitas no tempo de maturação in vitro de oócitos bovinos, incubação dos espermatozóides e separação dos mesmos por gradiente de densidade de PercollTM, bem como a associação dessas técnicas antes da fecundação para que se consiga desviar a proporção sexual dos embriões para fêmeas. O controle de qualidade foi feito em cada etapa dos procedimentos avaliando-se os parâmetros de motilidade, vigor e concentração dos espermatozóides, bem como taxa de clivagem e produção in vitro dos embriões. A proporção sexual foi avaliada pela técnica da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) e por transferências de embriões em receptoras. Pela técnica da PCR concluiu-se que a incubação dos espermatozóides em meio FIV sem heparina por 12 horas, desviou 59% o sexo dos embriões para fêmeas, a diminuição do tempo de maturação não desviou e essas duas técnicas associadas a centrifugação em gradiente não aumentaram o desvio da proporção sexual, porém o gradiente de sexagem foi eficaz em sexar 64% dos espermatozóides para fêmeas. Obteve-se uma taxa média de prenhez de 36,73% e uma proporção de fêmeas de 88,88% com embriões produzidos a partir da associação da redução no tempo de maturação dos oócitos ao gradiente de sexagem / Abstract: Were studied modifications made at the time of in vitro maturation of oocytes, sperm incubation and separation thereof by density gradient PercollTM as well as the combination of these techniques prior to fertilization to be able to divert the sex ratio of embryos females. Quality control was done at each stage of the procedures by evaluating the parameters of motility, vigor and concentration of spermatozoa and rate of cleavage and in vitro production of embryos. The sex ratio was assessed by means of Polymerase Chain Reaction (PCR) and embryo transfer into recipients. By the technique of PCR it was found that incubation of spermatozoa in IVF medium without heparin for 12 hours, 59% deviated sex of embryos for females, the reduction time of maturation is not shifted and associated with these two techniques do not increase the deviation of the sex ratio by gradient centrifugation, but the gradient was effective in sexing 64% of sperm to females. We obtained a mean pregnancy rate of 36.73% and a ratio of 88.88% of females with embryos produced from the combination of the reduction in the time of oocyte maturation to the gradient of sexing / Doutor

Orientador: José Buratini Júnior / Banca: Ciro Morais Barros / Banca: Marcelo Fábio Gouveia Nogueira / Resumo: O desenvolvimento da competência oocitária ocorre de forma gradual durante a foliculogênese e é dependente da interação do oócito com as células do cumulus via fatores parácrinos. O KL é expresso pelas células do cumulus e estimula a maturação nuclear do oócito em roedores, mas suas funções no complexo cumulus-oócito (CCO) bovino não são conhecidas. Neste trabalho, avaliou-se o padrão de expressão do KL, os efeitos do KL sobre a progressão da meiose e a expansão do cumulus, bem como a regulação da expressão do KL por fatores secretados pelo oócito (FSOs; BMP15, FGF8, FGF10, FGF16 e FGF17) durante a maturação in vitro (MIV) de CCOs bovinos. Adicionalmente, os efeitos do KL sobre a expressão de BMP15, GDF9, FGF16 e c-KIT foi avaliada. As isoformas do KL (KL1 e KL2) apresentaram padrões de expressão semelhantes nas células do cumulus ao longo da MIV, com pico de expressão às 12 horas do cultivo. A adição de KL ao cultivo aumentou a porcentagem de oócitos em meiose II e diminuiu a de oócitos em meiose I ao final da MIV, mas não afetou a expansão do cumulus. O FGF8 aumentou a expressão dos RNAm do KL1 e do KL2, enquanto a BMP15 estimulou apenas a expressão do RNAm do KL1. Distintamente, a dose máxima do FGF10 diminuiu a expressão do KL2 às 22 horas do cultivo em estudo dose-resposta, embora o mesmo não tenha sido observado quando uma dose menor, porém efetiva em estimular a expansão do cumulus, foi testada ao longo da MIV (4, 12 e 22 horas). O tratamento com FGF10 e BMP15 associados aumentou a expressão do KL1 às 12 horas do cultivo em relação ao controle e aos fatores de crescimento sozinhos, sugerindo cooperação entre eles na regulação da expressão do KL. A adição de KL ao meio de cultivo não alterou a expressão dos FSOs. Em conjunto, os resultados deste estudo sugerem o... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The development of oocyte competence occurs gradually during folliculogenesis and is dependent on the interaction of the oocyte with cumulus cells via paracrine factors. The KL is expressed by cumulus cells and stimulates oocyte nuclear maturation in rodents, but its functions in cumulus-oocyte complex (COC) cattle are unknown. In this study, we evaluated the expression pattern of KL, the effects of KL on the progression of meiosis and cumulus expansion and regulation of KL expression by factors secreted by the oocyte (OSF; BMP15, FGF8, FGF10, FGF16 and FGF17) during in vitro maturation (IVM) of bovine COCs. Additionally, the effect of KL on the expression of BMP15, GDF9, FGF16 and c-KIT was evaluated. Isoforms of KL (KL1 and KL2) showed similar expression patterns in cumulus cells along the MIV, with higher expression at 12 hours of cultivation. The addition of KL increased the percentage of oocytes in meiosis II and decreased oocyte meiosis I in the end of IVM, but did not affect cumulus expansion. The FGF8 increased expression of KL1 and KL2 mRNA, while only BMP15 stimulated mRNA expression KL1. Distinctly, the maximum dose of FGF10 decreased expression of KL2 at 22 hours of cultivation in dose-response study, although the same was not observed when a lower dose, but effective to stimulate cumulus expansion was tested along MIV (4, 12 and 22 hours). Treatment with FGF10 and BMP15 associated with increased expression of KL1 at 12 hours of culture in relation to the control and growth factors alone, suggesting cooperation between them in the regulation of expression of the KL. The addition of KL to the culture medium did not alter the expression of the FSOs. Taken together, our results suggest the involvement of KL in controlling bovine oocyte nuclear maturation and expression of KL in bovine cumulus cells is... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Elizabeth Romagosa / Banca: Laura Helena Orfão / Banca: Luis David Solis Murgas / Banca: Marcos Weingartner / Banca: Adilson Reidel / Resumo: O objetivo do trabalho foi de adaptar metodologias de análises espermáticas e aprimorar o processo de fertilização artificial e condições de estocagem de gametas de surubim-do-paraiba, Steindachneridion parahybae: espécie de peixe criticamente ameaçada de extinção. Para tanto, foram realizados quatro ensaios experimentais: (1) validação de método e avaliação dos parâmetros espermáticos por meio de software livre. (2) determinação da dose inseminante e volume de água empregados na fertilização artificial; (3) estocagem de ovócitos in natura em quatro temperaturas ao longo de 355 minutos; (4) estocagem do sêmen in natura em quatro temperaturas ao longo 112h. Observou-se que o método de análise espermática utilizando o software de código aberto ImageJ/plugin CASA é uma ferramenta eficiente, exata, objetiva e barata, além de possibilitar uma nova perspectiva de análises em peixes nativos. As configurações estabelecidas no presente trabalho poderão servir de base para novos trabalhos relacionados às análises espermáticas do surubim-do-paraíba, bem como de outras espécies. Verificou-se que a quantidade de espermatozóides e o volume de água interferem diretamente no procedimento de fertilização artificial, com melhores resultados na utilização de 5,5×106 espermatozóides ovócito-1 e 1,0mL de água g-1 de ovócitos. Foi observado que a estocagem de ovócitos e sêmen de forma in natura não é recomendada em ambientes com temperaturas superiores a 25ºC e inferiores a 15ºC. Temperaturas intermediárias (15-25ºC) possibilitam melhores condições e prolongam a qualidade dos gametas, entretanto, recomenda-se em procedimentos de fertilização artificial da espécie, a coleta do sêmen antes que os ovócitos. Os resultados obtidos no presente trabalho além de proporcionarem aumento das... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim was to adapt methodologies of sperm analysis and to improve the artificial fertilization process and gamete storage conditions of surubim-of-paraiba, Steindachneridion parahybae: critically endangered fish species. So that, four experimental tests were performed: (1) validation of method and evaluation of sperm parameters using free software. (2) determination of the inseminating dose and water volume used in artificial fertilization, (3) storage of fresh oocytes into four temperatures over 355 minutes, (4) storage of fresh semen into four temperatures over 112h. It was observed that the sperm analysis method using open source software ImageJ/plugin CASA is an effective tool, accurate, objective and inexpensive, besides enables a new perspective of the analysis on the native fish. The settings established in this study could serve as a basis for further work related at sperm analysis of surubim-do-paraiba and other species. It was found that sperm quantity and water volume interfere directly in the procedure of artificial fertilization, with improved results on usage of 5.5×106 spermatozoa oocyte-1 and 1.0 ml of water g-1 of oocyte. It was observed that the fresh oocytes and sperm storage is not recommended in environments with temperatures above 25ºC and below 15ºC. Intermediate temperatures (15-25ºC) enable better results and prolong the gametes quality, however, it is recommended in the artificial fertilization procedures the semen collection before the oocytes. The results obtained in this study providing increased rates of fertilization and hatching, besides to allow gametes optimization through of the utilization of controlled manner, and with satisfactory quality for more time after collection. Besides, these results provide a basis for future research, contributing to the... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Joaquim Mansano Garcia / Banca: Cesar Roberto Esper / Banca: Marcos Brandão Dias Ferreira / Resumo: Animais da raça Holandesa, criados nas regiões de clima temperado a quente apresentam baixa eficiência quanto ao número, qualidade e competência oocitária para a produção in vitro de embriões, em comparação às raças Zebuínas. Por outro lado o controle da onda folicular e a estimulação com FSH exógeno pode incrementar o número e melhorar a qualidade e competência oocitária para a produção embrionária. Com o objetivo comparativo sete novilhas, sete vacas não lactantes e sete vacas em lactação foram utilizadas em um delineamento em "crossover" foram submetidas a quatro tratamentos: T1 - Aspiração folicular ao acaso em dia aleatório do ciclo estral; T2 - Aspiração folicular dois dias após a remoção do folículo dominante; T3 - Aspiração folicular 24 horas após remoção do folículo dominante e estimulação com dose única de FSH (100 UI para novilhas e 200 UI para vacas não lactantes ou em lactação) vinte quatro horas antes da aspiração folicular; T4 - Aspiração folicular após estimulação e indução do pico de LH (inserção de implante de progestágeno, aspiração do folículo dominante e estimulação com FSH na dose de 250 UI para novilhas, 500 UI para vacas não lactantes e lactantes, subdividas em 8 doses decrescentes, indução de luteólise e retirada do implante 36 horas antes do GnRH e aspiração folicular 24 horas após a administração de GnRH). Não foi observada diferença estatística entre os tratamentos (P>0,05) quando foi avaliada a recuperação de oócitos, no entanto a categoria de novilhas obteve melhores resultados e apresentou diferença estatística (P<0,05) quando comparada com vacas lactantes e não lactantes, porém não foi observada diferença estatística entre as categorias vacas não lactantes ou vacas lactantes. Quando os oócitos viáveis foram avaliados, a categoria de novilhas apresentou melhor resultado e diferença significativa ... / Abstract: Holstein cows, bred in temperate to hot climate have low efficiency on the number, quality and oocyte competence for in vitro production of embryos, compared to Zebu breeds. On the other hand the control of follicular wave and stimulation with exogenous FSH can increase the number and improve the quality and oocyte competence for embryo production. With the comparative goal seven heifers, seven non-lactating cows and seven lactating cows were used in a complete "crossover" were subjected to four treatments: T1 - Follicular Aspiration randomly at any time of the estrous cycle; T2 - Follicular Aspiration two days after removal of the dominant follicle; T3 - Follicular Aspiration 24 hours after removal of the dominant follicle and stimulation with single dose of FSH (100 IU to 200 IU for heifers and non-lactating cows or lactating) twenty four hours before follicular aspiration; T4 - Follicular Aspiration after stimulation and induction of the LH surge (progestagen implant insertion, aspiration of the dominant follicle and FSH stimulation at a dose of 250 IU to 500 IU for heifers and non-lactating and lactating cows, subdivided in 8 decreasing doses, induce luteolysis and removal of the implant 36 hours before of the GnRH and follicular aspiration 24 hours after GnRH administration). No statistical difference between treatments (P>0.05) was evaluated oocyte retrieval was observed, however category heifers achieved better results and statistical differences (P<0.05) compared with lactating cows and non-lactating, although no statistical difference between the categories of non-lactating cows and lactating cows was observed. When the viable oocytes were evaluated, the grade of heifers showed better results and significant difference (P <0.05) compared with lactating and non-lactating cows, and no significant difference was observed between non-lactating cows and lactating cows (P>0.05). In relation to treatments, treatment 1 (T1) differed ... / Mestre

Orientador: Gisele Zoccal Mingoti / Banca: Vera Fernanda Martins Hossepian de Lima / Banca: Marcus Antônio Rossi Feliciano / Banca: Marcelo Fábio Gouveia Nogueira / Banca: Felipe Perecin / Resumo: O objetivo desse estudo foi avaliar diferentes estratégias para minimizar os efeitos do estresse oxidativo induzido pela menadiona durante o cultivo in vitro sobre o potencial de desenvolvimento embrionário in vitro. Para tanto, no Experimento I, os oócitos foram MIV em meio suplementado com 0,6 mM de cisteína e 100 µM de cisteamina (C+C), 100 UI de catalase (CAT), 0,6 mM de cisteína associado à 100 µM de cisteamina e 100 UI de catalase (C+C+CAT), ou sem a suplementação com antioxidantes (Controle). Posteriormente, foram fecundados e os prováveis zigotos cultivados in vitro durante 7 dias. Oócitos imaturos (0h) e após 22 h de MIV foram avaliados quanto ao conteúdo intracelular de ROS e de GSH, potencial de membrana mitocondrial, maturação nuclear e ocorrência de apoptose. No Experimento II, oócitos foram MIV em meio suplementado com C+C+CAT (ATX) e os prováveis zigotos foram CIV em meio SOF. Do Dia 6 até o final do CIV os embriões foram cultivados na presença ou ausência de 5 µM de menadiona (MD). No dia 7 foi avaliada a taxa de blastocistos e os mesmos destinados às avaliações quanto ao conteúdo intracelular de ROS e GSH, atividade de caspases 3 e 7 e ocorrência de apoptose. Por fim, no Experimento III, oócitos foram MIV e os prováveis zigotos foram CIV em meio SOF suplementado com 100 ng/mL de IGF-I (IGF). Do Dia 6 até o final do CIV os embriões foram cultivados na presença ou ausência de 5 µM de menadiona (MD). No dia 7 foi avaliada a taxa de blastocistos e os mesmos foram destinados às avaliações previamente descritas no Experimento II além da avaliação da taxa de re-expansão após vitrificação/aquecimento e expressão dos genes CASP3, GPX-1 e SOD-1. No experimento I, a taxa de maturação nuclear não foi afetada pelos tratamentos (P> 0,05). A porcentagem de apoptose do grupo C+C+CAT foi superior (P<0,05) ao grupo CAT, porém os grupos Controle e... / Abstract: The study aimed to evaluate different strategies to minimize the effects of oxidative stress induced by menadione during in vitro culture on the potential for in vitro embryonic development. Therefore, in Experiment I, the oocytes were IVM in medium supplemented with 0.6 mM cysteine and 100 mM cysteamine (C+C), 100 IU catalase (CAT), 0.6 mM cysteine associated with 100 uM cysteamine and 100 IU catalase (C+C+CAT) or without antioxidants supplementation (Control). Then, were fertilized and the presumptive zygotes were in vitro cultured for 7 days. Immature oocytes (0h) and oocytes after 22 h of IVM were evaluated for intracellular levels of GSH and ROS, mitochondrial membrane potential, nuclear maturation and apoptosis. In Experiment II, oocytes were IVM in medium supplemented with C+C+ CAT (ATX) and the presumptive zygotes were IVC in SOF medium. From Day 6 to the end of the IVC, embryos were cultured in the presence or absence of 5 uM menadione (MD). On day 7, embryo development to the blastocyst rate was evaluated. Blastocysts were subjected to evaluations for intracellular GSH and ROS content, caspases 3 and 7 activity and apoptosis. Finally, Experiment III, oocytes were IVM and the presumptive zygotes were IVC in SOF medium supplemented with 100 ng/mL IGF-I (IGF). From Day 6 to the end of the IVC, embryos were cultured in the presence or absence of 5 uM menadione (MD). On day 7, embryo development to the blastocyst rate was evaluated. Blastocysts were subjected to evaluations for intracellular GSH and ROS content, caspases 3 and 7 activity, apoptosis, re-expansion rates after vitrification/thawing and expression of CASP3, GPX-1 and SOD-1 genes. In the first experiment, nuclear maturation rate was not affected by treatments (P>0.05). The percentage of apoptosis in C+C+CAT group was higher (P<0.05) compared to CAT group, but the Control and C+C groups did not differ from other groups ... / Doutor

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:44:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000411704-Texto+Completo-0.pdf: 964035 bytes, checksum: 92357bdb8a7ac94cae30b27490304915 (MD5) Previous issue date: 2009 / The present report is linked to concentration area of “Criminal System and Violence”, and to the line of research “Legal-Criminal Systems Contemporaries”. In this way, it aims to analyze the legal-criminal aspects of the exceeding embryos of the fertilization in vitro, initiating for the constitutional law, expounding about the involved basic principles, as the right to the life, to the scientific development and the reproduction, as well as their civil aspects and legal nature. Front to the identification of the well-criminal legal involved in the behaviors as the production, the commercialization and the destruction of the exceeding embryos, analyzes the existing legislation on the subject and looks for to identify the existence of well legal guardianship. By means of the study of the principles of criminal politics as the dignity and criminal necessity and, still, the principle of ultima ratio, it acts for the unjustify of the criminal law in the guardianship of the related behaviors, in view of the possibility of that, with equal, or greater effectiveness other branches of social control make it. As well as, it argues that the existing legislation, as the Law of Biosecurity, protects the embryo in vitro according to the constitutional dictates and in compliance with the interpretation of the Supreme Federal Court about the constitutionality of the use of the related embryos for purposes of research, by means of the observation of certain requirements. / O presente trabalho encontra-se vinculado à área de concentração “Sistema Penal e Violência”, e à linha de pesquisa “Sistemas Jurídico-Penais Contemporâneos”. Nesse sentido, visa analisar os aspectos jurídico-penais dos embriões excedentes da fertilização in vitro, iniciando pelo direito constitucional, dissertando sobre os princípios fundamentais envolvidos, como o direito à vida, ao desenvolvimento científico e à reprodução, bem como os aspectos civis dos mesmos e sua natureza jurídica. Frente à identificação do bem jurídico-penal envolvido nas condutas como a produção, a comercialização e a destruição dos embriões excedentes, analisa a legislação existente sobre o tema e procura identificar a existência de bem (s) jurídico (s) tuteláveis. Mediante o estudo dos princípios de política criminal, como a dignidade e necessidade penal e, ainda, o princípio da ultima ratio, advoga pela deslegitimação do direito penal na tutela das referidas condutas, haja vista, a possibilidade de que, com igual, ou maior eficácia outros ramos de controle social o façam. Bem como, argumenta que a legislação existente, como a Lei de Biossegurança, protege o embrião in vitro de acordo com os ditames constitucionais e em conformidade com a interpretação do Supremo Tribunal Federal referente à constitucionalidade do uso dos referidos embriões para fins de pesquisa, mediante a observação de certos requisitos.