Made available in DSpace on 2016-05-02T13:54:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PedroBavusoNeto-Dissertacao.pdf: 177979 bytes, checksum: 24a47b891925286484beb0e96a13da9e (MD5) Previous issue date: 2010-01-26 / The experiment was carried out at the University José do Rosário Vellano in areas of the Department of Olericulture and Experimentation, in Alfenas, MG, Brazil, from March, 2, 2009 to June, 11, 2009. The purpose was to study the viability of potato fertirrigation techniques. The design was in randomized blocks in a 2 x 3 x 3 factorial scheme, with a total of 18 treatments and three replications. The factors studied were: fertirrigation (two types: surface and subsurface); nitrogen (three doses: 75, 150, and 225 kg ha-1); potassium (theree doses: 210, 310, and 410 kg ha-1). The characteristics studied were: Full Commercial Production in tha-1 and Average Weight per Tuber in grams. For average weight of tubers two significant interactions were observed only between the nitrogen and potassium factors. Significant effects were observed only for the treatments nitrogen plus potassium, without any interaction with fertirrigtation (surface and subsurface). For Commercial Production no significant interactions were observed between the factors nitrogen and potassium treatments. It was concluded that it is possible to produce potato fertirrigated with the of a localized system, reagardless of being surface or subsurface. / O experimento foi implantado e conduzido no período de 02/03/2009 a 11/06/2009, nas dependências da Universidade José do Rosário Vellano em áreas do Setor de Olericultura e Experimentação, localizado no município de Alfenas (MG). O objetivo foi estudar a viabilidade de técnicas de fertirrigação na cultura da batata. O delineamento experimental foi em blocos ao acaso em esquema fatorial 2 x 3 x 3, totalizando 18 tratamentos com três repetições. Os fatores estudados foram: Fertirrigação (duas formas: superficial e subsuperficial); Nitrogênio (três doses: 75, 150 e 225 kgha-1); Potássio (três doses: 210, 310 e 410 kgha-1). As características estudadas foram: Produção Total Comercial em tha-1 e Peso Médio do Tubérculo em gramas. Para peso médio dos tubérculos, foram observadas interações significativas apenas entre os fatores nitrogênio e potássio. Os efeitos significativos foram observados apenas para os tratamentos doses de nitrogênio mais doses de potássio sem interação com as formas de irrigação. Não houve diferenças significativas para os tipos de fertirrigação (superficial e subsuperficial). Para a Produção Comercial não foram observadas interações significativas entre os fatores irrigação, nitrogênio e potássio. Os efeitos significativos foram observados apenas para os tratamentos doses de nitrogênio e doses de potássio. Concluiu-se que é possível produzir batata fertirrigada com uso de sistema de irrigação localizada independente de ser superficial ou subsuperficial.

Made available in DSpace on 2016-01-26T18:56:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Donizete Antonio Marcelino.pdf: 233450 bytes, checksum: a2c8ab823de5e6f2850fbd6b3f330b13 (MD5) Previous issue date: 2012-12-06 / O fósforo é um importante macronutriente, componente estrutural de macromoléculas, como ácidos nucléicos e fosfolipídeos, e, também, da adenosina trifosfato. É considerado elemento essencial para as plantas, sendo encontrado em baixa quantidade nos solos brasileiros. O trabalho teve por objetivo avaliar os atributos químicos de um solo areno-argilosoo e um argiloso em razão de diferentes concentrações de P2O5 em fertilizantes organominerais, produzidos a partir de misturas dos fosfatos Arad e Superfosfato triplo com torta de filtro, subproduto da indústria sucroalcooleira. O experimento foi delineado em blocos completos ao acaso, com quatro repetições, no esquema fatorial 5 x 2 x 2, com os seguintes tratamentos: 2,5, 5, 10, 20 e 30% de P2O5 nos fertilizantes organominerais produzidos com adição de Arad e Superfosfato triplo, aplicados em solo arenoso e argiloso. Os fosfatos Arad e Super Triplo aplicados ao solo na forma de fertilizante organomineral apresentaram maior disponibilização de fósforo. A mistura organomineral apresentou expressiva redução nos teores de alumínio trocável do solo, porém, o efeito sobre a acidez potencial do solo foi minimizado à medida que se reduziu o componente orgânico do fertilizante. Os teores de cálcio e o pH do solo também foram melhorados em razão do uso dos fosfatos na forma organomineral, com forte dependência do componente orgânico.

Made available in DSpace on 2016-07-18T17:51:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Donizete Antonio Marcelino.pdf: 233450 bytes, checksum: a2c8ab823de5e6f2850fbd6b3f330b13 (MD5) Previous issue date: 2012-12-06 / O fósforo é um importante macronutriente, componente estrutural de macromoléculas, como ácidos nucléicos e fosfolipídeos, e, também, da adenosina trifosfato. É considerado elemento essencial para as plantas, sendo encontrado em baixa quantidade nos solos brasileiros. O trabalho teve por objetivo avaliar os atributos químicos de um solo areno-argilosoo e um argiloso em razão de diferentes concentrações de P2O5 em fertilizantes organominerais, produzidos a partir de misturas dos fosfatos Arad e Superfosfato triplo com torta de filtro, subproduto da indústria sucroalcooleira. O experimento foi delineado em blocos completos ao acaso, com quatro repetições, no esquema fatorial 5 x 2 x 2, com os seguintes tratamentos: 2,5, 5, 10, 20 e 30% de P2O5 nos fertilizantes organominerais produzidos com adição de Arad e Superfosfato triplo, aplicados em solo arenoso e argiloso. Os fosfatos Arad e Super Triplo aplicados ao solo na forma de fertilizante organomineral apresentaram maior disponibilização de fósforo. A mistura organomineral apresentou expressiva redução nos teores de alumínio trocável do solo, porém, o efeito sobre a acidez potencial do solo foi minimizado à medida que se reduziu o componente orgânico do fertilizante. Os teores de cálcio e o pH do solo também foram melhorados em razão do uso dos fosfatos na forma organomineral, com forte dependência do componente orgânico.

Orientador: Salatiér Buzetti / Co-orientador:. Mário Luiz Teixeira de Moraes / Co-orientador: Marcelo Carvalho Minhoto Teixeira Filho / Banca: Marcelo Andreotti / Banca: Paulo Henrique Muller da Silva / Resumo: No Brasil, grande parte do plantio da cultura do eucalipto encontra-se em área de solo de baixa fertilidade, com pouca disponibilidade de fósforo (P) e potássio (K), e baixo teor de matéria orgânica (M.O.), o que implica em carência do fornecimento de nutrientes à planta, refletindo na redução da produtividade. Neste sentido, objetivou-se avaliar a fertilização nitrogenada, fosfatada e potássica no crescimento das plantas de eucalipto visando qualidade nutricional e alta produtividade. O experimento foi conduzido na Fazenda Renascença, fundo agrícola administrado pela Cargill Agrícola S/A, localizado no município de Três Lagoas/MS. O delineamento experimental foi o de blocos casualizados com dez tratamentos e cinco repetições. Os tratamentos foram constituídos de doses de nitrogênio (N) (0, 70, 105 e 140 kg ha-1), doses de P (0, 40, 70 e 100 kg ha-1 de P2O5) e doses de K (0, 90, 135 e 180 kg ha-1 de K2O). As doses de N e K foram aplicadas no plantio e em cobertura, com três parcelamentos (aos 2, 9 e 14 meses após o plantio), e as de P somente no plantio. Foram avaliados: o diâmetro à altura do peito (DAP), altura de plantas, volume de madeira com casca, análise foliar dos nutrientes, a fertilidade do solo e as relações dos nutrientes nas folhas e no solo. O DAP e o volume foram influenciados positivamente pela fertilização nitrogenada, já a fosfatada e a potássica aumentaram o crescimento do eucalipto em DAP, altura e volume. As concentrações dos nutrientes estiveram adequadas mesmo com a ausência da aplicação de N, P e K. Com o aumento das doses de K houve incremento das concentrações foliares de K e diminuição das de cálcio (Ca) e magnésio (Mg) / Abstract: In Brazil, much of the Eucalyptus planting is in soils area of low fertility, phosphorus (P) and potassium (K) availability and organic matter (O.M.), which implies in low nutrients supply to the plant, reflecting the reduced productivity. In this context, it was aimed to evaluate nitrogen (N), P and K fertilizations on plant growth Eucalyptus aiming nutritional quality and high productivity. Experiment was conducted at Renascença Farm, agricultural fund managed by Cargill Agricola S/A located in Três Lagoas/MS. Experimental design was a randomized block with ten treatments and five replications. Treatments consisted of N rates (0, 70, 105 and 140 kg ha- 1), P rates (0, 40, 70 and 100 kg ha-1 P2O5) and K rates (0, 90, 135 and 180 kg ha-1 K2O). Nitrogen and K were applied at planting and top-dressing and P rates only at planting. It was evaluated: diameter at breast height (DBH), plant height, volume of wood with bark and leaf analysis of macronutrients concentrations. The DBH and volume were influenced positively by N fertilization, P and K, since the eucalyptus growth in DAP, height and volume increased with P and K fertilization. The macronutrients concentrations were appropriate even in the absence of N, P and K application. Increasing rates of K was increased foliar concentrations of K and decreased calcium (Ca) and magnesium (Mg) / Mestre

Orientador: Joao Batista Alcantara Oliveira / Coorientador: Claudia Guilhermino Petersen / Banca: Mario Cavagna / Banca: Anice Maria Vieira de Camargo Martins / Resumo: Na reprodução assistida, a seleção de gametas com o objetivo de alcançar melhores resultados clínicos é uma tarefa crucial dos embriologistas. A qualidade do oócito é um fator chave na fertilidade feminina, refletindo o potencial intrínseco de desenvolvimento do gameta, além de ter um papel crucial não só na fecundação, mas também no desenvolvimento embrionário subsequente. Após a desnudação, consegue-se definir a maturidade oocitária, com a identificação do primeiro corpúsculo polar, além de permitir a avaliação da morfologia oocitária, analisando as características da zona pelúcida, do espaço perivitelino e do citoplasma. Os dismorfismos oocitários são classificados em 2 tipos: citoplasmáticos, que incluem a presença de granulações e/ou de inclusões citoplasmáticas (vacúolos, corpos refrativos, agregados do retículo endoplasmático) e extracitoplasmáticos (alterações na forma do oócito, alterações na zona pelúcida, no espaço perivitelino e alterações do corpúsculo polar). Essas variações na morfologia oocitária podem ocorrer devido a fatores como idade da mulher, problemas genéticos e alterações no ambiente hormonal a que o oócito é exposto com a hiperestimulação ovariana. A classificação da morfologia oocitária, bem como sua correlação com o desenvolvimento embrionário e taxa de gravidez são bastante controversas na literatura. Vários estudos não demonstram nenhuma associação entre os dismorfismos oocitários e os resultados da fertilização in vitro, enquanto outros relatam uma associação entre a morfologia oocitária e desenvolvimento embrionário. Essas diferenças nos resultados podem ser explicadas devido a utilização de diferentes critérios morfológicos e devido... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The selection of developmentally competent human gametes may increase the efficiency of assisted reproduction. Spermatozoa and oocytes are usually assessed according to morphologic criteria. Oocyte morphology can be affected by the age of the female, genetic aspects, and factors related to controlled ovarian stimulation. However, there is a lack of evidence in the literature concerning the effect of gonadotropin-releasing hormone (GnRH) analogues, either agonists or antagonists, on oocyte morphology. The aim of this randomized study was to investigate if the prevalence of oocyte dysmorphism is influenced by the type of pituitary suppression used in ovarian stimulation. A total of 64 patients at the first intracytoplasmic sperm injection (ICSI) cycle, were prospectively randomized to receive treatment with either a GnRH agonist with a long-term protocol (n: 32) or a GnRH antagonist with a multi-dose protocol (n: 32). Before being subjected to ICSI, the oocytes at metaphase II from both groups were morphologically analyzed under an inverted light microscope at a 400x magnification. The oocytes were classified as follows: normal or with cytoplasmic dysmorphism, extracytoplasmic dysmorphism, or both. The resulting measure was the detection of dysmorphic oocytes among the total number of oocytes analyzed. Out of a total of 681 oocytes, 189 (27.8%) were morphologically normal, 220 (32.3%) showed cytoplasmic dysmorphism, 124 (18.2%) showed extracytoplasmic alterations, and 148 (21.7%) exhibited both types of dysmorphisms. No significant difference was observed in oocyte dysmorphisms between the agonist- and antagonisttreated groups (P>0.05). Analysis for each dysmorphism revealed that the most common conditions were alterations in polar body shape (31.3%) and presence of diffuse cytoplasmic granulations (22.8%), refractile bodies (18.5%) and central cytoplasmic... (Complete abstract click access electronic below) / Mestre

No Brasil, o eucalipto é uma das principais fontes de matéria-prima para a produção de celulose e papel. A crescente demanda por sua madeira tem levado à expansão dos plantios florestais para regiões com déficit hídrico e baixa fertilidade do solo, resultando no interesse pela obtenção de plantas tolerantes à condições ambientais estressantes. Nas plantas, o déficit hídrico acarreta diversas respostas fisiológicas, bioquímicas e moleculares. Estudos fisiológicos observaram que plantas com um adequado suprimento de potássio (K+) são mais tolerantes à seca. Contudo, na nutrição de algumas plantas, o sódio (Na+) pode substituir parcialmente o K+. Como muitas áreas agricultáveis do mundo são deficientes em potássio, essa pode ser uma solução mais econômica para a fertilização dos plantios florestais. Assim, é de sumo interesse compreender à nível molecular os mecanismos de interação entre esses minerais com a água e suas consequências para o metabolismo da planta, visando a sustentabilidade dos plantios florestais e o desenvolvimento de programas de melhoramento genético florestal. Neste contexto, o presente trabalho objetivou realizar o estudo do transcriptoma foliar de Eucalyptus grandis visando identificar e categorizar funcionalmente transcritos diferencialmente expressos para os quais o efeito de interação entre os fatores fertilização e água foi significativo, considerando três regimes de fertilização (controle (C) ou fertilização com potássio (+K) ou sódio (+Na)) associados a dois regimes hídricos (sem exclusão da precipitação interna (+H2O) ou 37% de exclusão da precipitação interna (-H2O)). Transcritos relacionados às funções osmótica, fotossíntese e metabolismo do carbono foram selecionados para estudos mais detalhados. Para a análise do transcriptoma foi utilizada a técnica de RNA-Seq através da plataforma Illumina e diversos programas de bioinformática como o Bowtie 2, TopHat, pacote DEseq2 (programa R) para as análises estatísticas e Blast2GO para anotação e a categorização funcional. Seis comparações estatísticas foram realizadas: (I) +K+H2O vs C+H2O, (II) +Na+H2O vs C+H2O, (III) +K+H2O vs +Na+H2O, (IV) +K-H2O vs C-H2O, (V) +Na-H2O vs C-H2O e (VI) +K-H2O vs +Na-H2O. Nas comparações entre os tratamentos +H2O, transcritos relacionados ao metabolismo energético e ao processo biológico \"Crescimento\" foram mais abundantes em árvores fertilizadas com potássio e sódio. Nas comparações entre os tratamentos -H2O, transcritos que podem estar relacionados ao ajuste osmótico e transcritos associados ao processo biológico \"Resposta ao estresse\" foram mais abundantes em árvores fertilizadas com potássio. Ainda, foram associados ao tratamento +K-H2O transcritos que podem afetar a biossíntese da parede celular. Em ambos os regimes hídricos, transcritos associados ao fechamento estomático foram menos abundantes nas árvores fertilizadas com potássio. Verificou-se também que vias bioquímicas relacionadas ao metabolismo de açúcares e do carbono foram impactadas. Tais dados observados abrem novos caminhos para pesquisas futuras relacionadas à substituição parcial do potássio pelo sódio na fertilização de plantas, à melhor compreensão molecular do controle estomático e do metabolismo energético e à formação da parede celular influenciados por diferentes condições ambientais visando o melhoramento de tal espécie florestal. / In Brazil, eucalypts is one of the main sources of raw material to produce pulp and paper. The increasing demand for this wood has induced the expansion of forest plantations to lands presenting water deficit and low fertility soils, becoming interesting the obtainment of tolerant plants to stressful environmental conditions. In plants, water deficit causes several physiological, biochemical and molecular responses. Some physiological studies showed that plants with an adequate potassium (K+) supply are more drought tolerant. Nevertheless, for the nutrition of some plants, sodium (Na+) can partially replace the K+. As many agricultural fields in the world are potassium deficient, this can be a cheaper solution for forest plantations fertilization. Understanding at the molecular level the mechanisms of interaction between these minerals and water as well as its consequences for the plant metabolism is very important for the sustainability of forest plantations and the development of forest breeding programs. Thus, the present work aimed the study of Eucalyptus grandis leaf transcriptome to identify and functionally categorize differentially expressed transcripts for which the interaction effect between fertilization and water was significant, given three fertilization regimes (control (C), potassium fertilization (+K) or sodium fertilization (+Na)) associated to two water regimes (regime without throughfall exclusion (+H2O) or regime with 37% of throughfall exclusion (-H2O)). Transcripts related to osmotic functions, photosynthesis and carbon metabolism were selected for more detailed studies. RNA-seq via Illumina platform and many bioinformatic softwares, like Bowtie 2, TopHat, DEseq2 package for R (for statistical analyzes) and Blast2GO tool (for annotation and functional categorization) were used in the transcriptome analysis. Six statistical comparisons were performed: (I) +K+H2O vs C+H2O, (II) +Na+H2O vs C+H2O, (III) +K+H2O vs +Na+H2O, (IV) +K-H2O vs C-H2O, (V) +Na-H2O vs C-H2O and (VI) +KH2O vs +Na-H2O. In the comparisons between +H2O treatments, transcripts related to energetic metabolism and \"Growth\" biological process were more abundant in potassium or sodium fertilized trees. In the comparisons between -H2O treatments, transcripts possibly associated to osmotic adjustment and transcripts related to \"Response to stress\" biological process were more abundant in potassium-fertilized trees. Besides, transcripts that could affect cell wall biosynthesis were associated to +K-H2O treatment. In both water regimes, transcripts associated to stomatal closure were less abundant in potassium-fertilized trees. In addition, biochemical pathways related to carbohydrates and carbon metabolism were impacted. These data provide new perspectives for future researches related to partial replacement of potassium by sodium in plant fertilization, to a better molecular understanding of stomatal control and energetic metabolism and to the cell wall synthesis under different environmental conditions, aiming the breeding of this forest specie.

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2017-05-04T12:12:28Z No. of bitstreams: 1 Pabola Santos Nascimento.pdf: 865543 bytes, checksum: 47ce2118a4d55e4ada483756d00b9ae6 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-04T12:12:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pabola Santos Nascimento.pdf: 865543 bytes, checksum: 47ce2118a4d55e4ada483756d00b9ae6 (MD5) Previous issue date: 2014-08-28 / The use of sexed semen for in vitro embryo production (IVP) is a potentially effective means for obtaining the progeny with predetermined sex. For years, animal owners wanted a methodology that pre determine the sex of offspring for their herds. Rates of cleavage, morula and blastocyst seem to be affected not only by the damages caused by sexing, but it is believed that the bull factor, and other aspects that have not been fully elucidated, directly influencing its successful use. The aim of this study was to evaluate the influence of type of semen (sexed /conventional) and a bull factor over blastocyst rates when submitting bovine oocytes obtained from slaughterhouse to IVP, and also compare these results with analyzes of sperm kinetics. Oocytes (n = 959) were matured, fertilized with sexed and non-sexed semen from three 5/8 Girolando bulls. A straw of each type of semen was assessed with use of "computer-assisted semen analysis" (CASA) and fluorescence microscopy. Three replicates were performed during the experiment. Data were analyzed by SPSS 16.0 statistical program employing analysis of variance (ANOVA). The Student t test was used to detect differences between groups. The Chi-square test was used to analyze the results of embryo production. For all analyzes, values were considered significant (P <0.05). The results differed between sexed (21.10%) and non-sexed semen (31.06%) to blastocysts production. We conclude that in the present work sexed semen was less efficient in producing blastocyst when comparing non-sexed semen of the same bulls and when comparing semen types (sexed and non-sexed) from the same bull. Analyses of sperm kinetics and fluorescent probes were compatible with the fertilizing potential of samples of sexed and non-sexed semen of 5/8 Girolando bulls. / O uso de sêmen sexado em conjunto com a produção in vitro (PIV) de embriões é um meio potencialmente eficiente na obtenção da descendência com sexo predeterminado. Há anos, os proprietários dos animais desejaram uma metodologia que pré determinasse o sexo da prole para seus rebanhos. As taxas de clivagem, mórula e blastocisto parecem ser afetadas não só pela debilitação provocada na sexagem, mas acredita-se que pelo reprodutor em questão, e por outros fatores que não foram ainda totalmente elucidados, influenciando diretamente na sua utilização com sucesso. O objetivo desse trabalho foi avaliar a influencia do tipo de sêmen (sexado/convencional) e do touro, nas taxas de blastocisto na PIV de oócitos bovinos obtidos em matadouro, e ainda comparar esses resultados com as análises da cinética espermática. Oócitos (N= 959) foram maturados, fertilizados com sêmen sexado e convencional de três touros da raça 5/8 Girolando. Uma palheta de cada tipo de sêmen foi avaliada com uso da “computer-assisted sêmen analysis” (CASA) e da microscopia de fluorescência. Foram realizadas três repetições durante o experimento. Os dados foram analisados pelo programa estatístico SPSS 16.0 empregando-se a análise de variância (ANOVA). O teste t-Student foi usado para detectar diferenças entre os grupos. O Qui-quadrado foi utilizado para análise dos resultados da produção de embriões. Para todas as análises, os valores foram considerados significativos (P< 0,05). Os resultados diferiram entre o sêmen convencional (31,06) e sexado (21,10%) para produção de blastocisto. Quando comparamos a produção de blastocisto individualmente nas amostras de sêmen sexado (27,69%; 17,93% e 25,56%, touros 1, 2 e 3 respectivamente) percebemos que T2 < T1 e T1=T3 e T2=T3. Concluimos que no presente trabalho o sêmen sexado foi menos eficiente na produção de blastocisto quando comparado ao sêmen convencional de forma geral e do mesmo touro. As análises da cinética espermática bem como as sondas fluorescentes foram compatíveis com o potencial fertilizante das amostras de sêmen sexado e convencional em touros da raça 5/8 Girolando.

Orientador: Vera Fernanda Martins Hossepian de Lima / Coorientador: Aline Costa de Lucio Prado / Banca: Lúcia Galvão de Albuquerque / Banca: Beatriz da Costa Aguiar Alves Reis / Resumo: Doses de sêmen enriquecidas com espermatozoides portadores do cromossomo X são utilizadas na inseminação artificial (IA) e na produção in vitro de embriões (PIVE). Todavia ensaios de campo, utilizando este tipo de sêmen, demonstraram redução na taxa de prenhez, que pode ser justificada pelas injúrias espermáticas durante o processo de sexagem, além de alterações no DNA, interferindo na expressão de genes paternos, afetando o desenvolvimento embrionário e acarretando perda gestacional após 90 dias. Assim, os objetivos desse trabalho foram: comparar a taxa de clivagem e de blastocistos produzidos in vitro utilizando sêmen convencional e sêmen com espermatozoides sexados por citometria de fluxo e verificar a existência de diferenças na expressão de genes relacionados ao reconhecimento da gestação (AKR1B1, PTGS1, PTGS2, mPGES-1, mPGES-2, TNF-α) em embriões produzidos in vitro utilizando os dois tipos de sêmen. Os embriões bovinos foram produzidos por fecundação in vitro, quarenta e oito horas após a fecundação foi avaliada a taxa de clivagem, e no sétimo dia após a fecundação foi avaliada a taxa de blastocisto. Posteriormente esses blastocistos foram submetidos à extração de RNA para a avaliação da expressão gênica. Não foi observada diferença significativa (P>0,05) para as taxas de clivagem e blastocisto entre os grupos experimentais. Em relação ao padrão de expressão, a citometria de fluxo não alterou os níveis de transcritos dos genes AKR1B1, PTGS1, PTGS2, mPGES-2 e TNF-α sugerindo que embriões produzidos com espermatozoides sexados por citometria de fluxo não possuem alterações prejudiciais em genes envolvidos no reconhecimento da gestação. Porém o gene mPGES-1 foi 4,54 vezes menos expresso nos embriões produzidos com espermatozoides sexados por citometria de fluxo, sugerindo a possibilidade de ocorrência de perda gestacional, pois estudos ... / Abstract: Doses of semen enriched with carriers of X chromosome sperm are used in artificial insemination (AI) and in embryos produced in vitro (PIVE). However, field studies using this type of semen demonstrated a reduction in pregnancy rate, which can be justified by injuries during sperm sexing and alterations in DNA, interfering with the expression of paternal genes affecting embryonic development and resulting in pregnancy loss after 90 days. The aims of this study were to compare the cleavage and blastocyst rates produced in vitro using conventional semen and sexed semen by flow cytometry, and check differences in the expression of genes related to pregnancy recognition (AKR1B1, PTGS1, PTGS2, mPGES-1, mPGES-2, TNF-α ) in embryos produced in vitro using the two types of semen. Bovine embryos were produced by in vitro fertilization, forty eight hours after fertilization the cleavage rate was evaluated, and on the seventh day after fertilization the blastocyst rate was performed. Subsequently, these blastocysts were subjected to RNA extraction for evaluation of gene expression. No significant differences (P>0.05) for cleavage and blastocyst rates between the experimental groups were observed. Related to the expression pattern, the flow cytometry did not alter the transcript levels of AKR1B1, PTGS1, PTGS2, mPGES-2 e TNF-α genes, suggesting that embryos produced with sexed semen by flow cytometry do not have detrimental changes in genes involved in pregnancy recognition. However the mPGES-1 gene was expressed 4,54 times less in embryo produced with sexed semen by flow cytometry, suggesting the possibility of pregnancy loss, since studies suggest that are required levels of expression of mPGES for maintenance and recognition of pregnancy / Mestre

A maturação in vitro do oócito é um dos fatores limitantes na produção in vitro de embriões. In vivo, esta maturação é um processo altamente orquestrado no qual a meiose é retomada pela onda de gonadotrofina que antecede a ovulação e que induz à queda dos níveis de AMPc no oócito. No entanto, os oócitos aspirados ao serem retirados dos folículos ovarianos retomam espontaneamente a maturação comprometendo a competência de seu desenvolvimento. O AMPc é sintetizado pela adenilato ciclase (AC) e degradado pelas fosfodiesterases (PDE), existindo algumas relacionadas à degradação do AMPc e outras do GMPc. Sendo assim, a proposição deste trabalho foi averiguar a contribuição de diferentes isoformas de fosfodiesterases na retomada da meiose e nos níveis de GMPc, AMPc e ainda, determinar quando há manutenção de AMPc em níveis elevados observando sua influência na competência oocitária e ativação da MAPK. Para isso, os complexos cumulus-oócito (CCOs) foram maturados in vitro na ausência, presença ou associação de inibidores de PDEs-AMPc e GMPc específicas e FSHr. As amostras foram avaliadas em relação a: 1) taxa de maturação; 2) níveis intracelulares de AMPc e GMPc nos CCOs; 3) taxa de desenvolvimento de blastocistos ; 4) ativação da MAPK em oócitos e células do cumulus. Os resultados obtidos no primeiro experimento indiaram que o inibidor da PDE3 foi o mais eficaz (p&lt;0,05) em atrasar a retomada da meiose, às nove horas de maturação, porém, isolado ou em associação com o inibidor da PDE8, não foi capaz de alterar (p&gt;0,05) os níveis de AMPc. No experimento dois, o inibidor da PDE5 isolado não influenciou a retomada da meiose (p&gt;0,05), porém, quando associado aos inibidores da PDE3 e 8 houve atraso na retomada (p&lt;0,05) e ainda alteraram os níveis de GMPc e AMPc (p&lt;0,05) nas primeiras horas de maturação. O experimento três mostrou a influencia do FSHr durante a MIV, o qual estimulou a retomada da meiose, mas em associação com inibidores da PDE5 e 8 atrasa a retomada (p&lt;0,05). Além disso, o FSHr provoca aumento do nível de AMPc e sua associação com inibidores de PDE5 e PDE8 ocasionou elevação adicional (p&lt;0,05). As condições de cultivo estudadas no experimento quatro mostraram que a maturação induzida (pré-MIV de duas horas com agentes para elevar AMPc seguindo de 22 horas de MIV com FSH associado a inibidores de PDEs) atrasaram a retomada da meiose às nove horas de maturação, mas não afetaram progressão da meiose às 24, 28 e 30 horas. Os tratamentos, porém, não melhoraram a competência oocitária após a fertilização in vitro e ocasionaram pequenas variações na ativação da MAPK em oócitos e células do cumulus. / In vitro maturation of oocytes is a limiting factor in the in vitro production of bovine embryos. In vivo, this maturation is a highly orchestrated process in which meiosis resumption by the gonadotropin surge that precedes ovulation induces the decrease in cAMP levels in the oocyte. However, when oocytes are removed from follicles, they spontaneously resume maturation compromising the competence for its development. cAMP is synthesized by adenylyl cyclase (AC) and degraded by phosphodiesterases (PDE), and there are some PDEs related to degradation of cAMP and/or cGMP. Thus, the purpose of this work was to investigate the contribution of different isoforms of phosphodiesterases in the resumption of meiosis and levels of cAMP and, also, to determine differences in signaling pathways when maintaining high levels of cAMP and its influence on oocyte competence. For this purpose, cumulus-oocyte complexes (COC) were matured in vitro in the presence, absence or combination of inhibitors of cAMP- and cGMP-specific PDEs and FSH. Samples be were evaluated in relation to: 1) maturation rate, 2) intracellular levels of cAMP and cGMP in COCs, 3) rate of blastocyst development and 4) activation of MAPK in oocytes and cumulus cells. The results of the first experiment showed that the PDE3 inhibitor is more effective (p &lt;0.05) in delaying meiosis resumption, at nine hours of maturation, but was not capable of altering cAMP levels (p&gt; 0.05) either alone or in combination with the PDE8 inhibitor. In experiment two, the PDE5 inhibitor alone did not affect the meiosis resumption (p&gt; 0.05), however, when associated with PDE3 and PDE8 inhibitors it delayed their resumption (p &lt;0.05) and also altered cGMP and cAMP levels of (p &lt;0.05) in the early hours of maturation. The third experiments showed the influence of FSHr during IVM, which stimulated the resumption of meiosis, but in combination with PDE5 and PDE8 inhibitors meiosis was delayed (p &lt;0.05). Furthermore, FSHr causes increased levels of cAMP and its association with PDE5 and PDE8 inhibitors caused an additional increase (p &lt;0.05). Culture conditions studied in experiment four showed that induced maturation (pre-IVM for two hours with agents to elevate cAMP followed by 22 hours IVM with FSH associated with PDE inhibitors) delayed the resumption of meiotic maturation at nine hours, but has no effect on meiosis progression at 24, 28 and 30 hours. The treatments, however, did not improve oocyte competence after in vitro fertilization and caused minor variations in the activation of MAPK in oocytes and cumulus cells.

O objetivo geral dessa tese foi compreender melhor o funcionamento das raízes finas (diâmetro <2 mm) de Eucalyptus. Mais especificamente, nosso trabalho teve como objetivo obter informações sobre as mudanças no padrão de absorção de nutriente pelas raízes finas em função da fertilização e profundidade do solo. Foi também, avaliar a dinâmica de crescimento das raízes finas em plantações mistas com uma espécie fixadora de nitrôgenio para testar a hípotese do gradiente de estresse. O capítulo 1 teve como objetivo estudar o efeito da fertilização mineral na especialização funcional das raízes finas de Eucalyptus grandis jovens em camadas profundas do solo (Itatinga-SP). Foram injetados macadores de NO3-15N, Rb+ (K+) e Sr2+ (Ca2+) simultaneamente em uma solução a 10, 50, 150 e 300 cm de profundidade. A determinação das concentrações foliares de Rb+, Sr2+ e a porcentagem de átomos de 15N permitiu estimar o potencial de absorção relativo (PAR) e o PAR específico, definido como PARE, obtido pela razão entre o PAR e a unidade de densidade do comprimento de raízes finas por camada de solo correspondente. O PAR de NO3-15N diminuiu rapidamente com a profundidade e os valores mais altos do PARE de NO3-15N foram encontrados a uma profundidade de 50 cm. O PARE de Rb+ e Sr2+ foi maior a 300 cm de profundidade em relação à camada superficial do solo, com um aumento do diâmetro da raiz e uma diminuição da densidade do tecido radicular com a profundidade. O PARE de Rb+ e Sr2+ a 300 cm de profundidade foi, em média, 88% maior para árvores fertilizadas quando comparado com as árvores não fertilizadas. Os resultados sugerem que a especialização funcional das raízes finas para a absorção de nutrientes é uma característica estável do eucalipto e que pode ser reforçada pela aplicação de fertilizantes. O capítulo 2 focou nos processos ecológicos entre Acacia mangium e Eucalyptus em um gradiente de estresse nutricional. Raízes finas foram amostradas aos 16 e 34 meses após o plantio em blocos casualisados com dois tratamentos: uma mistura com 50% de cada espécie (50A:50E) com e sem fertilização. Durante este período, dois tubos de minirhizotron, perto de eucalipto e acacia, em cada tratamento e bloco, foram utilizados para monitorar o crescimento e o tempo de vida das raízes finas. Aos 16 e 34 meses após o plantio, a DRF de Eucalyptus foi maior em relação à Acacia e maior em F+ do que em F- na camada superior do solo. Este resultado mostrou que, provavelmente, há uma maior competição das raízes de eucalipto nas raízes de acacia em F+ do que em F-. Na camada superficial, a DRF de Eucalyptus em F- foi maior aos 34 meses e perto de árvores de Acacia comparado aos eucaliptos, o que seria consistente com uma maior facilitação de N da Acacia para os Eucalyptus em ambiente com maior deficiência de N (hipótese de gradiente de estresse). A mesma concentração de N nas folhas de Eucalyptus em F + e F- também está de acordo com essa hipótese. A produção de raízes finas de eucalipto entre as duas datas de amostragem foi maior em F- que em F+ em paralelo ao aumento de DRF de eucaliptos perto das acacias. Não foi possível estimar o tempo de vida da raiz, pois não houve mortalidade radicular durante o período de estudo para ambas as espécies. Futuros estudos poderiam ser realizados para uma melhor compreensão dos mecanismos de captação de nutrientes pelas árvores visando um manejo mais sustentável das plantações florestais. / The main objective of this thesis was to better understand the functioning of Eucalyptus fine roots (diameter < 2 mm). More specifically, our work aimed at getting insights into the changes in fines roots nutrient uptake changes depending on soil depth and fertilization. Root growth dynamics was also evaluated in mixed plantations with a nitrogen fixing species to test the stress gradient hypothesis. The first chapter aimed at studying the effect of fertilization on the functional specialization of young Eucalyptus fine roots in deep soil layers (Itatinga-SP). We injected NO3-15N, Rb+ (K+) and Sr2+ (Ca2+) tracers simultaneously in a solution at 10, 50, 150 and 300 cm in depth. Determination of foliar Rb+, Sr2+ concentrations and 15N atom % made it possible to estimate the relative uptake potential (RUP), and the Specific RUP, defined as SRUP, per unit of fine root length density in the corresponding soil layer. The RUPs of NO3-15N decreased sharply with depth and the highest values of the SRUPs of NO3-15N were found at a depth of 50 cm. The SRUP of Rb+ and Sr2+ were higher at 300 cm in depth than in the topsoil with an increase in root diameter and a decrease in root tissue density with depth. The SRUP of Rb+ and Sr2+ at a depth of 300 cm was on average 88% higher for fertilized trees than for unfertilized trees. The results suggest that functional specialization of fine roots for nutrient uptake is a stable characteristic of Eucalyptus that can be enhanced by fertilization application. Chapter 2 focused on the ecological processes between Acacia mangium and Eucalyptus under a gradient of nutrient stress. Fine roots were sampled at 16 and 34 months after planting in a randomized block design with two treatments: a mixture with 50% of each species (50A:50E), with and without fertilization. For each treatment, soil samples were collected in 3 blocks at 0-15; 15-30; 30-50 and 50-100 cm at various distances of Eucalyptus and Acacia trees. During this period, two tubes of minirhizotron near eucalypt and Acacia trees in each treatment and block were used to monitoring fine roots growth and turnover. At 16 and 34 months after planting, fine root mass density (RMD) of Eucalyptus was 30% higher than of Acacia and higher in F+ than in F- in the top soil layer (0-15 cm). This result likely showed higher competition of eucalypt roots on Acacia roots in F+ than in F-. In the superficial layer, RMD of Eucalyptus in F- were higher at 34 months near Acacia trees than Eucalyptus trees, that would be consistent with greater N facilitation of Acacia on Eucalyptus in higher N-deficient environment (stress gradient hypothesis). The same N concentration in Eucalyptus leaves in both F+ and F- was also consistent with this hypothesis. Production of Eucalyptus fine roots between the two sampling dates was higher in F- than in F+ in parallel to the increase of RMD of Eucalyptus near Acacia trees. It was not possible to estimate root life span as no root mortality occurred during the study period for both species. Furthers studies should be conducted to better understand the mechanisms of tree nutrient uptake promoting a better sustainable management of forest plantations.