A doença renal crônica é uma doença mediada pelo sistema imune e caracterizada por fibrose. Camundongos deficientes em TLR2, TLR4, MyD88 e NLRP3 se mostraram protegidos frente ao dano renal e à deposição de colágeno após serem submetidos à obstrução unilateral do ureter (UUO). Além disso, os camundongos protegidos exibiram menor produção de citocinas relacionadas com um perfil imune Th2 e apresentaram menor acúmulo de macrófagos do subtipo M2. Inicialmente, creditamos aos macrófagos M2 o papel de macrófagos formadores de fibrose uma vez que tal subpopulação é encontrada em maior número aos sete dias após a UUO em animais WT, porém, vimos que os personagens centrais no desenvolvimento da fibrose são macrófagos M1, encontrados no início da lesão renal. Também vimos que o ácido úrico é a molécula capaz de induzir a troca de fenótipo de M1 para M2 ao longo da UUO, além de ser capaz de ativar a via do inflamassoma. O ácido úrico solúvel é liberado em um contexto de hipóxia e ativa o complexo do inflamassoma NLRP3 por mecanismos diferentes, mas complementares. / Chronic kidney disease is an immune mediated disease characterized by fibrosis development. The damaged tissue releases molecules such as soluble uric acid resulting from the degradation of extracellular matrix or dead cells, which activate TLR and NLR, leading to the translocation of MyD88 in many cell types. This modulation of the immune system interferes with the activation of different subtypes of macrophages and activity of CD4+ T cells, with the Th1/Th2 paradigm as a possible effector mechanism of fibrosis. TLR2, TLR4, MyD88, and NLRP3 deficient mice are protected against renal damage and collagen deposition after being submitted to unilateral ureteral obstruction (UUO), when compared to wild type animals. Moreover, protected mice exhibited less production of Th2 related cytokines and reduced accumulation of M2 macrophages. Initially, we hypothesized M2 macrophages are responsible for fibrosis formation since this subset is found in greater numbers seven days after UUO in WT mice, however, we observed the central characters on the development of fibrosis are M1 macrophages found in the onset of renal injury. These data were confirmed by the injection of Stat6 KO M1 macrophages into Rag deficient mice previously depleted of macrophages and subjected to UUO, in which we observed higher proteinuria and increased collagen deposition. We also observed that uric acid is able to induce the exchange of phenotype from M1 to M2 along the UUO, besides being able to activate the inflammasome pathway. The soluble uric acid is released in the context of hypoxia and activates the NLRP3 inflammasome complex by different, but complementary mechanisms. Therefore, the renal damage releases soluble uric acid, which signals via innate immune receptors, and the damage brings as a consequence the deposition of proteins in the renal interstitium, culminating in fibrosis.

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:29Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-05-27 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo – FAPESP / Desde a década de 70 até o presente momento, o conhecimento sobre células-tronco (CTs) vêm crescendo exponencialmente. Dentre as CTs, interesse crescimento se dá no campo das células-tronco adultas, com especial atenção para as CTs da medula óssea, as células-tronco mesenquimais (CTMs). Muito têm se descoberto sobre o potencial terapêutico das CTMs para diversas patologias, devido a seu grande potencial em reparar tecidos e diminuir a inflamação local. Na área da nefrologia, muitos avanços foram feitos em doenças renais agudas e crônicas, entretanto as taxas de morbi-mortalidade mantêm-se elevadas. Devido ao caráter devastador das doenças renais, estudar uma forma alternativa de tratá-la está na terapia por CTMs. Nesse estudo, buscamos compreender o papel das CTMs em modelos renais agudo e crônico. Para tanto, em um modelo agudo de lesão de isquemia e reperfusão, CTMs foram administradas após 6h de reperfusão e analisadas em 24h e 48h. Os níveis de creatinina e uréia séricos apresentaram-se bem menores em 24h e 48h após reperfusão nos animais tratados com CTMs. Histologicamente, esses dados refletem em menor NTA e maior regeneração. Sabendo do potencial imunomodulador das CTMs, analisamos o perfil de citocinas no tecido renal. Observamos uma diminuição de citocinas inflamatórias (Th1) e aumento de citocinas anti-inflamatórias (Th2). Uma vez que realizamos o modelo experimental em ratos Wistar fêmeas e injetamos CTMs de machos, procuramos a CTM no tecido renal por PCR através da expressão do gene SRY (sex determing region Y). Em 24h, não encontramos as CTMs no tecido renal. Sistemicamente, a administração de CTMs exógenas não altera o perfil de citocinas Th1, porém leva ao aumento de citocinas Th2. Como os resultados foram animadores no modelo agudo, partimos para analisar o papel das CTMs no modelo renal crônico de nefrectomia 5/6. Com um tratamento contínuo de CTMs (a cada 2 semanas), após 8 semanas, observamos melhora nos níveis de creatinina e uréia sérica, bem como diminuição nos níveis de proteinúria. Apesar de uma tendência a melhorar o clearance de inulina nos animais tratados com CTMs, não houve diferença estatística com o grupo não tratado. Ao analisar a fibrose característica do modelo de 5/6, observamos menores índices de áreas fibróticas e glomerulosclerose no tecido dos animais tratados com CTMs, bem como redução em diversas moléculas fibróticas tais como Vimentina, Colágeno 1, TGF -β, FSP-1, Smad 3, MCP-1 e razão TIMP-1/MMP9. Já nesse modelo, as CTMs encontravam-se no tecido renal, e podemos correlacionar sua presença com o aumento de moléculas anti-fibróticas, tais como HO-1 e HGF. Em relação as citocinas expressas no tecido renal, novamente observamos uma polarização para citocinas Th2, o que por sua vez pode levar a inibição do processo de transição epitélio-mesenquimal (TEM). Surpreendentemente, a administração de CTMs levou a uma menor expressão de diversas citocinas séricas. Nos dois modelos utilizados, percebemos que administração de CTMs leva a melhora funcional renal, sendo o provável mecanismo envolvido nessa melhora a imunomodulação decorrente do tratamento, tanto no tecido renal quanto sistêmica, além da secreção de outras moléculas tais como HO-1 e HGF que medeiam processos anti-fibróticos, remodelando o tecido renal. / FAPESP: 06/0620-5 / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

A doença renal crônica é uma doença mediada pelo sistema imune e caracterizada por fibrose. Camundongos deficientes em TLR2, TLR4, MyD88 e NLRP3 se mostraram protegidos frente ao dano renal e à deposição de colágeno após serem submetidos à obstrução unilateral do ureter (UUO). Além disso, os camundongos protegidos exibiram menor produção de citocinas relacionadas com um perfil imune Th2 e apresentaram menor acúmulo de macrófagos do subtipo M2. Inicialmente, creditamos aos macrófagos M2 o papel de macrófagos formadores de fibrose uma vez que tal subpopulação é encontrada em maior número aos sete dias após a UUO em animais WT, porém, vimos que os personagens centrais no desenvolvimento da fibrose são macrófagos M1, encontrados no início da lesão renal. Também vimos que o ácido úrico é a molécula capaz de induzir a troca de fenótipo de M1 para M2 ao longo da UUO, além de ser capaz de ativar a via do inflamassoma. O ácido úrico solúvel é liberado em um contexto de hipóxia e ativa o complexo do inflamassoma NLRP3 por mecanismos diferentes, mas complementares. / Chronic kidney disease is an immune mediated disease characterized by fibrosis development. The damaged tissue releases molecules such as soluble uric acid resulting from the degradation of extracellular matrix or dead cells, which activate TLR and NLR, leading to the translocation of MyD88 in many cell types. This modulation of the immune system interferes with the activation of different subtypes of macrophages and activity of CD4+ T cells, with the Th1/Th2 paradigm as a possible effector mechanism of fibrosis. TLR2, TLR4, MyD88, and NLRP3 deficient mice are protected against renal damage and collagen deposition after being submitted to unilateral ureteral obstruction (UUO), when compared to wild type animals. Moreover, protected mice exhibited less production of Th2 related cytokines and reduced accumulation of M2 macrophages. Initially, we hypothesized M2 macrophages are responsible for fibrosis formation since this subset is found in greater numbers seven days after UUO in WT mice, however, we observed the central characters on the development of fibrosis are M1 macrophages found in the onset of renal injury. These data were confirmed by the injection of Stat6 KO M1 macrophages into Rag deficient mice previously depleted of macrophages and subjected to UUO, in which we observed higher proteinuria and increased collagen deposition. We also observed that uric acid is able to induce the exchange of phenotype from M1 to M2 along the UUO, besides being able to activate the inflammasome pathway. The soluble uric acid is released in the context of hypoxia and activates the NLRP3 inflammasome complex by different, but complementary mechanisms. Therefore, the renal damage releases soluble uric acid, which signals via innate immune receptors, and the damage brings as a consequence the deposition of proteins in the renal interstitium, culminating in fibrosis.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-07-18T17:29:53Z No. of bitstreams: 1 fabianaaparecidamayrinkdeoliveira.pdf: 602450 bytes, checksum: 44abccc7edd994e7c93876d1aac063dd (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2016-07-22T15:11:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 fabianaaparecidamayrinkdeoliveira.pdf: 602450 bytes, checksum: 44abccc7edd994e7c93876d1aac063dd (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-22T15:11:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 fabianaaparecidamayrinkdeoliveira.pdf: 602450 bytes, checksum: 44abccc7edd994e7c93876d1aac063dd (MD5) Previous issue date: 2011-02-24 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Justificativa e Objetivo: Independente da etiologia, a doença renal crônica (DRC) envolve fibrose generalizada e progressiva do tecido, atrofia tubular e a perda da função renal. Atualmente, as terapias eficazes para esta condição são escassas. Neste estudo, foram investigados os efeitos da terapia laser de baixa intensidade (LLLT) sobre a fibrose intersticial, que ocorre após obstrução ureteral unilateral (OUU) em ratos, um modelo experimental de doença renal crônica. Materiais e Métodos: Foram utilizados 32 ratos Wistar, 8 em cada grupo, machos, com 250 a 300g de peso aproximadamente e 8 semanas de idade. O rim obstruído de metade dos ratos, submetidos à OUU receberam dose única intra-operatória do LLLT (AlGaAs laser, 780 nm, 22,5 J / cm ², 30 mW, 30 segundos em cada um dos nove pontos). Após 14 dias, a fibrose renal foi avaliada pela coloração por picrosírius e medição da área transversal sob luz polarizada. Análise imunohistoquímica quantificou células do tecido renal que expressam marcadores de fibroblastos (FSP-1) e miofibroblastos (α-SMA). RT-PCR foi realizado para determinar a expressão de mRNA de genes chaves relacionados com a fibrose: TGF-β1, Smad3 e colágeno I (Col I). Resultados: No grupo OUU e tratado pelo LLLT os animais apresentaram menos fibrose renal do que os animais obstruídos (OUU). α-SMA, TGF-β1 e Smad3 foram aumentados no interstício renal de ratos OUU. LLLT reduziu a expressão de todas essas moléculas. LLLT não parece ter um efeito significativo no Col I ou FSP-1, que também foram induzidos por OUU. Conclusão: Pela primeira vez, nós mostramos que LLLT tem um efeito protetor em relação à fibrose intersticial renal. Entende-se que, atenuando a inflamação, a laserterapia pode impedir a ativação tubular e transdiferenciação, que são os dois processos principais que formam a fibrose renal no modelo OUU. / Background and Objective: Regardless of the etiology, chronic kidney disease (CKD) involves progressive widespread tissue fibrosis, tubular atrophy and loss of kidney function. At present, effective therapies to this condition are lacking. We investigated the effects of low level laser therapy (LLLT) on the interstitial fibrosis that occurs after unilateral ureteral obstruction (UUO) in rats, an experimental model of CKD. Study Design/Materials and Methods: We used 32 Wistar rats, 8 in each group, males, 250 to 300g weight and 8 weeks old. The occluded kidney of half of the Wistar rats that underwent UUO received a single intraoperative dose of LLLT (AlGaAs laser, 780 nm, 22.5 J/cm², 30 mW, 30 seconds on each of nine points). After 14 days, renal fibrosis was assessed by Sirius red staining and measurement of the cross-sectional area under polarized light. Immunohistochemical analyses quantitated the renal tissue cells that expressed fibroblast (FSP-1) and myofibroblast (α-SMA) markers. RT-PCR was performed to determine the mRNA expression of key fibrosis-related genes, namely TGF-β1, Smad3 and collagen I (Col I). Results: The UUO-LLLT animals had less severe renal fibrosis than OUU animals. α- SMA, TGF-β1 and Smad3 were increased in the renal interstitium of UUO rats. LLLT reduced the expression of all of these molecules. LLLT did not appear to have a significant effect on Col I or FSP-1, which were also induced by UUO. Conclusion: For the first time, we showed LLLT had a protective effect regarding renal interstitial fibrosis. It is conceivable that by attenuating inflammation, LLLT can prevent tubular activation and transdifferentiation, which are the two processes that mainly drive the renal fibrosis of the UUO model.