Centrinas são proteínas componentes essenciais nos centro organizadores de microtubulos em diversos organismos. Pertencem à família das proteínas EF-Hand ligantes de cálcio e podem ser divididas em duas subfamílias: uma definida pela centrina da alga Chlamydomonas reinhardtii CrCenp, associada a funções contráteis, e a outra pela centrina da levedura Saccharomices cerevisiae ScCdc31p, relacionada a duplicação de centros mitóticos. Curiosamente o fungo Blastocladiella emersonii possui duas formas de centrinas em seu genoma : BeCen1 mais parecida com a CrCenp, e BeCen3 com a ScCdc31p, enquanto todos os outros fungos já descritos possuem apenas uma forma, pertencente ao grupo ScCdc31p. Diante desse fato curioso, descrito em 2005, estudos estruturais e termodinâmicos comparativos entre as proteínas recombinantes BeCen1 e BeCen3, foram desenvolvidos para identificar e caracterizar diferenças relevantes, que pudessem justificar a presença dessas duas proteínas no fungo Blatocladiella emersonii. Ambas as centrinas foram expressas em E. coli e purificadas por cromatografia, resultando em um rendimento de aproximadamente 5mg/l. Analises estruturais foram realizadas utilizando técnicas de dicroísmo circular (CD) , fluorescência, espalhamento de luz (DLS e RALS), microscopias de força atômica (AFM) e eletrônica de transmissão (MET). Por calorimetria de titulação isotérmica (ITC) parâmetros termodinâmicos foram obtidos para BeCen1 e BeCen3 em relação a ligação de cálcio. Ambas apresentaram conteúdo predominante de hélices alfa e diferenças físico-químicas e estruturais marcantes. BeCen1, após desnaturação a 90ºC e deixada a temperatura de 4°C por 24 horas horas, mostrou um espectro de CD compatível com um processo de reenovelamento; a TM foi de 42°C e aumentou cerca de 4°C na forma holo; os espectros de CD são modificados na presença de cálcio, mostrando uma forma característica de movimentação de hélices das proteínas ligantes de cálcio; pelos dados obtidos por ITC liga cálcio em três sítios EF-Hand por uma reação endotérmica; na presença de magnésio apresentou mudanças conformacionais, compatíveis com a ligação deste nos sítios de cálcio; a partir de 40°C é observado um processo de agregação chegando a formação de filamentos, que foram visualizados por AFM e MET. BeCen3 após ser desnaturada e colocada nas mesmas condições de BeCen1, permanece desnaturada; A TM é de 49°C e aumentou em aproximadamente 5°C na forma holo; os espectros de CD, na presença de cálcio, apresentam aspectos característicos de movimentação de -hélices das proteínas ligantes de cálcio; liga cálcio em apenas dois sítios EF-Hand por uma reação exotérmica, sofre mudanças conformacionais na presença de magnésio e a partir de 30°C já sofre um processo de agregação, formando filamentos. Neste trabalho foi estabelecido o primeiro protocolo para a expressão e purificação das centrinas de B. emersonii, além dos estudos de caracterização estrutural e termodinâmica destas proteínas. O estudo também foi pioneiro quanto a obtenção de imagens no processo de formação de filamentos destas centrinas na ausência de cálcio. As centrinas de B. emersonii apresentam diferenças importantes nas respostas em função da presença de cálcio e também do magnésio. Os dados obtidos são fortes indicativos que estas centrinas têm mecanismos de ação diferentes dentro do fungo B. emersonii. / Centrin proteins are essential component of the microtubule organizing centers in a large range of organisms. They belong to the EF-Hand calcium binding proteins family e can be divided in two subfamilies: one defined by the green algae Chlamydomonas reinhardtii CrCenp, related to contractile functions and the other centrin of the yeast Saccharomices cerevisiae ScCdc31p, related to duplication of centrossome mitotic centers. Interesantly, Blastocladiella emersonii fungus posses two centrin forms in it genome: BeCen1 closely related to CrCenp and BeCen3 closely related to ScCdc31p. All other known fungus have only one form of centrin: ScCdc31p. With this curious finding, described in 2005, compared structural and thermodynamics studies between recombinant proteins BeCen1 and BeCen3 were performed, in attempt to identify relevant differences that could explain the presence of two forms of centrins in this fungus. Both centrins were expressed in E. coli and purified by chromatography resulting in 5mg/l protein yield. Structural analyses were performed with circular dichroism (CD), fluorescence, light scattering (DLS AND RALS), atomic force microscopy (AFM) and transmission electronic microscopy (TEM). Using isothermal titration calorimetry (ITC) thermodynamics parameters about the calcium binding were defined. Both showed alpha helix predominant content and structural physical-chemistry differences. After denaturation at 90°C and cooled overnight at 4°C, BeCen1 showed a CD spectrum consistent to a renaturation process; the calculated TM was 42°C and raised 4°C in the holo state; CD spectra were modified under calcium presence showing characteristics changes of calcium binding proteins; ITC data exhibited tree calcium binding motifs through an endothermic reaction and the presence of magnesium also showed conformational changes; From 40°C a aggregation process leading to filament formation was observed and visualized with AFM and TEM. After denaturation at 90°C and cooled overnight at 4°C, BeCen3 remained denaturated; Calculated TM was 49°C and raised 5°C in the holo state; CD spectra were modified under calcium presence showing characteristics changes of calcium binding proteins; ITC data exhibited only two calcium binding motifs through an exothermic reaction and the presence of magnesium also showed conformational changes; From 30°C BeCen3 already suffered a aggregation process forming filaments. In this study it was established the first expression and purification protocol for B. emersonii centrins, besides the structural and thermodynamic characterization of these proteins. This is the first study containing filaments images of the centrins of B. emersonii. These centrins showed important response differences in calcium and magnesium binding. All the obtained data are strong indications that the two centrins have distinct functions in the fungus.

Submitted by Irene Nascimento (irene.kessia@ufpe.br) on 2016-06-20T18:42:06Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação (G. Ferreira).pdf: 2368229 bytes, checksum: e7d27dd236d3848f67692455d0a94426 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-20T18:42:06Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação (G. Ferreira).pdf: 2368229 bytes, checksum: e7d27dd236d3848f67692455d0a94426 (MD5) Previous issue date: 2016-02-01 / Capes / Este estudo avalia a influência espaço-temporal nos padrões de distribuição, ecologia alimentar e ingestão de microplástico da espécie Cynoscion acoupa (Pescada Amarela) ao longo da sua ontogenia, no estuário do rio Goiana, localizado no nordeste do Brasil. A área de estudo se trata de um estuário tropical, com altas médias de temperatura anual e pequenas oscilações. O ambiente está submetido a um regime de mesomaré semi-diurna. As principais alterações encontradas no estuário são oriundas do ciclo sazonal, que está diretamente ligado à pluviometria, divida em quatro estações (início da chuva, fim da chuva, início da seca e fim da seeca), com o intuito de se ter uma maior precisão na avaliação dos processos abiológicos e na comunidade aquática. Os espécimes foram coletados em diferentes porções estuarinas (estuário superior, intermediário e inferior) e nos canais de maré. Simultaneamente a coleta dos dados biológicos foram obtidas informações a respeito dos parâmetros físico-químicos. Os padrões de distribuição e alimentação da espécie estudada ocorrem de forma distinta em relação à ontogenia, sazonalidade e áreas do estuário. A fase juvenil de C. acoupa ocupa a porção superior do estuário durante todas as estações do ano, em busca de baixos valores de salinidade, onde encontram condições ideais apara evitar predadores marinhos. As principais presas dos juvenins no estuário superior foram filamentos de microplástico (FO=63%), amphipoda (FO=28%) e mysidacea (FO=22%). Além disso, no início do período chuvoso, o estuário superior apresenta um papel crucial para o ciclo de vida da espécie, por se caracterizar como uma área berçário para C. acoupa (grande densidade 228,4 ind. ha-1 e baixa biomassa 46 g ha-1 de juvenis), pois a sua contribuição de indivíduos juvenis para a população adulta é muito maior que nos outros hábitats. No ambiente de berçário os juvenis se alimentaram principalmente de filamentos de microplástico (FO=48%), camarão (FO=28%), mysidacea (FO=22%) e amphipoda (FO=21%). Nas demais porções estuarinas, também são registrados indivíduos juvenis, sobretudo nos períodos chuvosos (início da chuva 115 ind ha-1 e fim da chuva 7,3 ind. ha-1), porém em menor escala. Os subadultos de C. acoupa utilizam principalmente o estuário superior durante o início da seca (1,7 ind. ha-1), fim da seca (1,6 ind. ha-1) e início da chuva (6,5 ind. ha-1) como área de alimentação. Predando no estuário superior, no início da seca, principalmente peixes não identificados (FO=50%), no fim da seca, filamentos de microplástico (FO=60%), mysidacea (FO=20%) e syllidae (FO=20%) e no início da chuva, filamentos de nylon FO=100% e peixes não identificados (FO=20%). Durante o fim do período chuvoso os indivíduos subadultos migram para o estuário intermediário (2,3 ind. ha-1) para evitar grandes estresses osmorregulatórios e predaram principalmente amphipoda (FO=75%), Cathorops spixii (FO=50%), Anchovia clupeoides (FO=25%) e peixes não identificados (FO=25%). A fase adulta de C. acoupa foi registrada somente nas porções mais externas do estuário inferior, por se tratar de uma espécie de hábitos costeiros quando completamente desenvolvida. Os indivíduos adultos de C. acoupa predaram principalmente filamentos de nylon (FO=100%), C. spixii (FO=18%), Achirus lineatus (FO=15%), Stellifer stellifer (FO=15%) e camarão (FO=15%). C. acoupa apresentou uma variação no padrão de distribuição em relação a sua ontogenia, sazonalidade e diferentes porções estuarinas. Ao longo do seu desenvolvimento ontogenético C. acoupa também apresentou uma alteração na sua guilda trófica, os juvenis e os subadultos foram classificados como oportunistas e os indivíduos adultos como piscívoros. A grande quantidade de fragmentos e microplástico encontrada na espécie estudada, demostra que ela é particularmente vulnerável a esse tipo de contaminante, sobre tudo os espécimes adultos, que registraram os maiores níveis de contaminação, provavelmente em razão do seu nível trófico, como predadores de topo. / This study assess the spatio-temporal distribution patterns, feeding ecology and microplastic ingestion of the Cynoscion acoupa (Acoupa weakfish) during its ontogeny in the Goianna Estuary, located in northeast Brazil. The study area is a tropical estuary, with high mean temperatures and narrow annual temperature variations. The environment is classified as a semi-diurnal mesotidal estuary. The major environmental dynamics are caused by the seasonal regime, which is related to the rainfall, according to the pluviometry, the area was divided in four different seasons (early dry, late dry, early rainy and late rainy). Biological samples were performed in different estuarine reaches (upper, middle and lower estuary) and in tidal creeks. During the fish sampling, environmental parameters were also recorded. The distribution and feeding patters of the studied species occur in a distinctive form according to the ontogeny, seasonality and estuarine area. The juveniles of C. acoupa occupy the upper estuary, during all seasons, seeking low salinity that provide ideal conditions to avoid marine predators. The main juveniles prey in the upper estuary were microplastic threads (FO=63%), amphipoda (FO=28%) and mysidacea (FO=22%). Moreover in the early rainy season, the upper estuary is crucial for the life ciclo of the species, because it is a nursery ground for C. acoupa (high density 228.4 ind. ha-1 and low biomass 46 g ha-1 of juveniles), as a result of the higher contribution of juveniles for to the adult population than in the other habitats. In the nursery ground, the juveniles of C. acoupa fed mainly on plastic threads (FO=48%), penaeid shrimps (FO=28%), mysidacea (FO=22%) and amphipoda (FO=21%). In other estuarine areas juveniles were also recorded, mainly on the rainy seasons (early rainy 115 ind. ha-1 and late rainy 7.3 ind. ha-1), however with lower densities. The subadults of C. acoupa inhabited mostly the upper estuary, during the early dry (1.7 ind. ha-1), late dry (1.6 ind. ha-1) and early rainy seasons (6.5 ind. ha-1) as a feeding ground. In the upper estuary, during the early season they fed mainly on unidentified fish (FO=50%), in the late dry, plastic threads (FO=60%), mysidacea (FO=20%) and syllidae (FO=20%) and in the early rainy, plastic threads (FO=100%) and unidentified fish (FO=20%). During the late rainy season the subadults of C. acoupa migrated to the middle estuary (2.3 ind. ha-1) to avoid osmoregulatory stress, the subadults and fed mainly on amphipoda (FO=75%), Cathorops spixii (FO=50%), Anchovia clupeoides (FO=25%) and non-identified fish (FO=25%). The adults of C. acoupa were recorded only in seaward areas of the lower estuary, as a result of C. acoupa being a coastal/marine species when fully developed. The adults preyed mostly plastic threads (FO=100%), C. spixii (FO=18%), Achirus lineatus (FO=15%), Stellifer stellifer (FO=15%) and penaeid shrimp (FO=15%). During the ontogenetic process, C. acoupa showed a trophic guild shift, the juveniles and subadults were assigned as opportunistic and the adults as psicivores. C. acoupa showed a variation in the distribution pattern in relation to the ontogeny, seasonality and different estuarine reaches. During the ontogenetic development, C. acoupa showed a trophic guild shift, the juveniles and subadults were assigned as opportunistic and the adults as psicivores. The high occurrence of microplastic threads in the species, evince that C. acoupa is particularly vulnerable to this contaminant, especially the adult phase that registered highest contamination levels, probably due its trophic level, as a top predator.

Orientador: Jose Francisco Figueiredo / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-13T02:40:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bertels_IvoneMedeirosVieira_D.pdf: 6733194 bytes, checksum: c8a7c3bcca8ad5732334627b49957dcc (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Introdução: A qualidade da conservação obtida em um órgão e a duração do armazenamento seguro são dependentes do tipo de solução e tempo de conservação, estando sujeitas a intercorrências imprevisíveis. Em virtude disso, o parênquima renal e, particularmente, o túbulo contornado proximal (TCP), local onde ocorre necrose tubular aguda (NTA), são susceptíveis às mudanças na homeostase funcional do órgão, durante a conservação e durante a reperfusão pós-implante. O TCP reabsorve cerca de 70% de Na+ e H2O filtrados; sua membrana apical tem células especializadas com microvilosidades para aumentar a área de transporte unidirecional de solutos do lúmen para o sangue. O principal componente estrutural da bordadura em escova, filamentos de F-actina, interage com uma variedade de proteínas transmembranas, inclusive moléculas transportadoras de íons. Esta função é regulada por parâmetros fisiológicos e hormonais, sendo a Angiotensina II (AII) uma das principais envolvidas com o citoesqueleto de actina e proteínas associadas, mediada principalmente por seus receptores AT1. Métodos: Neste trabalho, túbulos isolados de fragmentos frescos e de fragmentos conservados por períodos de 1 e 24h nas soluções de Euro - Collins (ECO) e de Belzer (UW) foram tratados com AII, losartan e AII+losartan, para medida do volume de absorção de fluido (Jv=nl. min_1. mm-1 (microperfusão in vitro), e medida da intensidade (média) de pixel da fluorescência dos receptores AT1 e do citoesqueleto de actina (imunoistoquímica). Resultados: a) Demonstrou-se que AII (10-12M) estimula absorção fluida (Jv), que é diminuída com losartan (10-6M) em TCP frescos e também em TCP conservados em soluções de ECO 1h e UW 1-24h. Em túbulos conservados 24h em ECO, não houve absorção de fluidos. b) A média da intensidade de pixel de fluorescência dos receptores AT1 em túbulos frescos (sem conservação) apresentou discreta variação entre os grupos não estatisticamente significante. Em túbulos conservados 1h com ECO e UW, a média da intensidade de pixel de receptores AT1 estava aumentada no grupo sem drogas, quando comparados aos tratados com AII, losartan e AII+losartan. Entretanto, em túbulos conservados 24h, ambas as soluções, houve aumento na média de intensidade do pixel de receptores AT1, no grupo tratado com AII, quando comparados aos demais grupos. c) O citoesqueleto de actina em túbulos frescos (sem conservação) não mostrou variação estatisticamente significante na média de intensidade de pixel entre os grupos (AII, losartan ou AII+losartan). No entanto, verificamos uma maior coesão entre os filamentos de actina de túbulos tratados com AII. A distribuição dos filamentos de actina em túbulos conservados em ECO 1h e UW 1 e 24h, mostrou-se uniforme, sem diferenças entre os grupos. Entretanto, em túbulos conservados em ECO 24h (tratamentos AII, losartan, AII+losartan) foi verificada alteração do citoesqueleto de actina. Conclusão: Baseados nestes dados, verificamos que, na conservação do TCP realizada por tempo reduzido, as diferenças na composição das soluções escolhidas não acarretaram alterações estatisticamente significantes na capacidade de absorção de fluidos, na distribuição dos receptores AT1 e no citoesqueleto de actina. Porém, quando o tempo de conservação é estendido, a composição da solução utilizada no processo, interfere na qualidade da conservação, acarretando alterações no citoesqueleto de actina, determinando alterações que poderiam implicar em mudanças na função absortiva, sendo que a solução de UW mostrou o melhor desempenho nestas condições experimentais / Abstract: Introduction: Depending on the preservation quality and duration, considering the solution composition and the preservation method, unexpected intercurrences may occur. In consequence, the renal parenchyma and particularly the proximal convoluted tubule (PCT), site where the acute tubular necrosis (NTA) occurs, are susceptible to changes in the organ functional homeostasis during preservation in the post implantation reperfusion period. The PCT reabsorbs approximately 70% of filtered Na+ and H2O, and its apical membrane has specialized cells with microvilli to increase the area of unidirectional solute transport from the lumen to the blood. The major structural component of brush border microvilli is the filamentous F-actin, which has been shown to interact with a variety of transmembrane proteins, including ion transport molecules. This function is regulated by physiological and hormonal parameters, such as angiotensin II (AII) interacting with actin cytoskeleton and associated proteins, mediated mainly through type I receptors (AT1R). After via different signaling pathways having been triggered, the varied functions are started, including fluid absorption (Jv), which is directly related to the actin cytoskeleton. Methods: Fresh (no preserved) and tubules preserved for 1h and 24hrs in Euro-Collins (EC) and Belzer (UW) solutions, treated with AII, losartan and AII+losartan, evaluated by "in vitro" microperfusion technique (fluid absorption (Jv=nl. min-1. mm-1), and by immunohistochemical technique (AT1 receptor measurement and actin cytoskeleton). Results: a) Our results showed that AII (10-12M) (physiological concentration) stimulates fluid absorption (Jv), which is reduced with losartan (10-6M) in fresh PCT, such as PCT preserved for 1h in EC and for 1-24hrs in UW solutions. There was no fluid absorption (Jv?0) in tubules preserved for 24hrs in EC solution. b) The mean fluorescence intensity of pixel of AT1 receptors in fresh tubules (no preserved) showed discreet changes while using drug treatments; however, these differences were not statistically significant. In tubules preserved for 1h in EC and UW, the mean fluorescence intensity of pixel of AT1 receptors increased in the group with no drug treatment, when compared with tubules treated with AII, losartan and AII+losartan. However, the mean pixel intensity of AT1 receptors in tubules preserved for 24hrs in both solutions increased in those treated with AII, when compared with other groups, control group, losartan and AII+losartan. c) When we examined actin cytoskeleton of fresh tubules (no preserved), comparing groups with no drug treatment and those treated with AII, losartan or AII+losartan, we verified that the variation in the mean pixel intensity of actin cytoskeleton, there was no difference statistically significant. However, we verified a greater cohesion in the actin filaments in tubules treated with AII. In tubules preserved in EC for 1h and UW for 1-24hrs there was a uniform distribution of actin filaments. However, it was verified disorganization in all groups (AII, losartan, AII+losartan) in tubules preserved for 24hrs in EC solution, showing that the organ preservation in this solution was not adjusted. Conclusion: Based on these data, we verified that when PCT preservation was carried out for a reduced time (1h), the differences in the composition of the chosen solutions were not significant; however, when the preservation time was extended, the composition of the solution used in the process affected the preservation quality and altered the actin cytoskeleton, determining alterations that could imply in changes in its absorptive functions. The UW solution showed better performance in these experimental conditions / Doutorado / Ciencias Basicas / Doutor em Clínica Médica

Um tipo de composto têxtil, comumente chamado de membrana têxtil, tem sido empregado, nas últimas décadas, como parte de um sistema arquitetônico usado para a cobertura, fechamento e/ou proteção de espaços públicos e privados em vários países do mundo. O termo membrana está relacionado com o fato de o material permanecer tensionado e separar dois ambientes que se interagem. Essa solução arquitetônica é comumente conhecida como arquitetura têxtil, especialmente quando se trata de estruturas tensionadas; o termo é usado por muitos profissionais em todo mundo, apesar de não existir uma unanimidade de opiniões sobre os conceitos envolvidos na definição do termo e o que ele abrange. Na maior parte dos casos, as obras geradas são muito atraentes, práticas e funcionais, com características, formas e tamanhos diversos, dependendo da necessidade a ser atendida. Quando bem projetadas, integram-se perfeitamente ao ambiente por terem formas orgânicas e passarem uma imagem de leveza, fluidez e modernidade. São dois os tipos de membranas têxteis mais usados: 1) um grupo de membranas cujo tecido estruturante é um tecido de poliéster recoberto em ambos os lados por uma camada de cloreto de polivinila (PVC), e 2) um grupo de membranas feitas com tecidos de vidro recobertos com politetraflúoretileno (PTFE). O foco principal deste trabalho são as membranas de poliéster/PVC usadas para estruturas tensionadas. Os tecidos usados nessa gama estão enquadrados na categoria denominada tecidos técnicos, e são formados por fios compostos por filamentos de poliéster de alta tenacidade de diferentes tipos, gerando vários artigos com características técnicas distintas e, consequentemente, membranas com diversas especificações e comportamentos diferentes na aplicação final.Este estudo traz uma visão geral sobre o assunto no mundo e um panorama mais detalhado para o Brasil, abordando definições, termos usados, materiais, fornecedores, especificações, tipos de produtos e acabamentos, normas, reciclagem e meio ambiente. A beleza e modernidade são apontadas como as principais qualidades desse tipo de cobertura. As expectativas são de crescimento dessa aplicação para os próximos anos. Porém a falta de conhecimento e a complexidade técnica desse tipo de solução é um problema a ser solucionado para que melhores resultados sejam atingidos e ela possa realmente ser considerada uma solução viável e adequada para o país. / The type of textile compound, commonly called textile membrane, has been employed in recent decades, as part of an architectural system used for covering, closing and/or protection of publics and private spaces in many countries around the world. The term membrane is related to the fact that the material remains tensioned and separating two interacting environments. This architectural solution is commonly known as \' textile architecture \', especially when tensile structures are involved; this term is used by many professionals worldwide, although it do not exist a unanimity of opinions regarding the concepts involved in the definition of the term and what it encompasses. In most cases, the structures generated are very attractive, practical and functional, with different characteristics, different shapes and sizes, depending on the requirements to be met. When well designed, they will be seamlessly integrated with the environment by having organic forms, giving a feeling of lightness, fluidity and modernity. The two types of textile membranes commonly used are: 1) a group whose structuring material of the membrane is a polyester fabric coated, on both sides, with a layer of polyvinyl chloride (PVC), and 2) a group of membranes made with glass filament fabrics coated with polytetrafluoretilene (PTFE). The focus of this work is the polyester/PVC membranes used for tensile structures. The fabric used in this range is framed within the category named \'technical fabrics\', and are composed by different kinds of high tenacity yarns of polyester filaments, generating several articles with different technical characteristics and consequently, membranes with different specifications and different behaviors in the final application. The study provides an overview of the subject in the world and a panorama slightly more detailed for Brazil, covering definitions, terms, used materials, suppliers, specifications, product types and finishes, recycling and environment issues. The \' beauty \' and \' modernity \' are cited as the main qualities of this type of covering. There are expectations of growing of this application for coming years. But the lack of knowledge and the technical complexity of this kind of solution is a problem to be solved, so that best results can are achieved and it can really be considered a viable and appropriate solution for the country.

Orientador: Antonio Condino Neto / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-13T22:05:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Talero_LuisAlbertoPedroza_D.pdf: 1538530 bytes, checksum: 6dc94ec71cdd6f03d096be015a2b1757 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: A Poliendocrinopatia autoimune associada a candidíase e distrofia ectodérmica (APECED) é um síndrome caracterizado pela presença de pelo menos dois sintomas clínicos, endocrinopatia autoimune, sendo que as mais comuns são hipoparatiroidismo, doença de Addison, além de candidíase mucocutânea crônica. É também comum nos pacientes o desenvolvimento de distrofia ectodérmica, como distrofia nas unhas ou alopécia. O APECED é produzido por mutações no gene AIRE, que codifica uma proteína com propriedades reguladoras na transcrição de proteínas ectópicas no timo, o que estaria envolvido na seleção negativa de células T auto-reativas, e conseqüentemente no desenvolvimento da doença autoimune. No entanto a associação da deficiência da proteína AIRE com a suscetibilidade a candidíase ou a distrofia ectodérmica permanecem obscuras. No presente trabalho, investigamos a possibilidade que esta associação esteja envolvida com a expressão e função da proteína AIRE no ambiente extra-tímico. Usando células de sangue periférico de pacientes com mutações no AIRE, e a técnica de SiRNA para silenciar este gene em células de linhagem mielomonocítica THP-1, demonstramos que a proteína AIRE é importante para a resposta via KF-kB dos TLRs e Dectina-1, sendo que AIRE está presente num complexo com Dectina-1, Syk e Card-9, formado após o estímulo com Curdlan. Além disso demonstramos que a formação deste complexo pode acontecer no citoplasma ou membrana citoplasmática, uma vez que após este estímulo, a proteína AIRE é exportada do núcleo permanecendo temporariamente na membrana. Finalmente usando a técnica de espectroscopia de massa e microscopia confocal, mostramos que AIRE interage com a proteína Queratina 17, tanto em células THP-1 como em células HaCaT (linhagem de queratinócitos), quando as células entram num estágio de espraiamento e migração. Assim, a presença da proteína AIRE na via de sinalização da Dectina-1, pode estar relacionada com a susceptibilidade a infecções crônicas por C. albicans observada nestes pacientes. A resposta imune via Dectina-1 é importante na resposta a este fungo e defeitos na molécula CARD9 e Dectina-1 podem estar associados a Candidíase mucocutânea crônica. Por outro lado, a descrição da associação de AIRE com K17 pode ser relevante, já que pacientes com mutações no gene que codifica para a proteína K17 desenvolvem uma doença chamada paquioníquia congênita, caracterizada por distrofia das unhas e alopécia, características clínicas observadas também nos pacientes com APECED. Deste modo, neste trabalho apresentamos evidências que apontam para um novo papel funcional da proteína AIRE no ambiente extratímico, que poderia explicar em parte algumas características clínicas dos pacientes com APECED, como a elevada suscetibilidade a infecções por C. albicans, e a distrofia ectodérmica / Abstract: The autoimmune polyendocrinopathy candidiasis and ectodermal dystrophy (APECED) is characterized by the presence of two from three major clinical symptoms: Addison's disease, and/or hypoparathyroidism, and/or chronic mucocutaneous candidiasis. These patients develop also ectodermal dystrophies like nail dystrophy and alopecia. APECED is caused by mutations in the autoimmune regulator gene (AIRE). This gene encodes a protein with DNA binding capacity that can transcriptionally modulate ectopic peripheral tissue antigen (PTA) expression in the thymus, facilitating T cell negative selection. Defects in AIRE may be related with the development of multipleendocrine failure of autoimmune origin in patients with APECED. In spite of this, the role of AIRE deficiency in the C. albicans susceptibility or ectodermal dystrophy, common features in APECED patients, remains to be elucidated. In the present work we explored the hypothesis that candidiasis and ectodermal dystrophy are associated with the extra-thymic role of AIRE. For this we used peripheral blood mononuclear cells from APECED patients, and also THP-1 cells treated with SiRNA for AIRE gene to obtain AIRE deficient cells. We demonstrated that AIRE is required for Dectin-1- and TLR-ligand-induced inflammatory response and complexes with Dectin-1, Syk, and CARD9 after Curdlan stimulation. In addition, we showed that this complex formation takes place outside the nucleus, once that after Curdlan stimulation AIRE seems to be exported to the cytoplasm and transiently locate at the cytoplasmic membrane. Finally using mass spectra and confocal microscopy, we showed an interaction between AIRE and the intermediate filament protein Keratin-17, in both THP-1 cells and the keratinocyte cell line HaCaT. Therefore, the presence of AIRE protein in Dectin-1 pathway seems to be important on the C. albicans response, and the absence of this protein could be a risk factor important for developing candidiasis, commonly observed in APECED patients. This observation is supported by the fact that Dectin-1 is important for C albicans response, and also the recently description of mutations in Dectin-1 and CARD9 and its association with chronic mucocutaneous candidiasis. On the other hand, the description of AIRE and K17 association is important, since patients with defects on K17 gene develop congenital pachyonychia, a disease characterized by nail dystrophy and alopecia, also observed in APECED patients. Thus we provided evidence for a new role of AIRE protein in the extrathymic environment, which in may explain, at least in part, some of the common clinical features other than autoimmunity, observed in APECED patients / Doutorado / Saude da Criança e do Adolescente / Doutor em Saude da Criança e do Adolescente

Um tipo de composto têxtil, comumente chamado de membrana têxtil, tem sido empregado, nas últimas décadas, como parte de um sistema arquitetônico usado para a cobertura, fechamento e/ou proteção de espaços públicos e privados em vários países do mundo. O termo membrana está relacionado com o fato de o material permanecer tensionado e separar dois ambientes que se interagem. Essa solução arquitetônica é comumente conhecida como arquitetura têxtil, especialmente quando se trata de estruturas tensionadas; o termo é usado por muitos profissionais em todo mundo, apesar de não existir uma unanimidade de opiniões sobre os conceitos envolvidos na definição do termo e o que ele abrange. Na maior parte dos casos, as obras geradas são muito atraentes, práticas e funcionais, com características, formas e tamanhos diversos, dependendo da necessidade a ser atendida. Quando bem projetadas, integram-se perfeitamente ao ambiente por terem formas orgânicas e passarem uma imagem de leveza, fluidez e modernidade. São dois os tipos de membranas têxteis mais usados: 1) um grupo de membranas cujo tecido estruturante é um tecido de poliéster recoberto em ambos os lados por uma camada de cloreto de polivinila (PVC), e 2) um grupo de membranas feitas com tecidos de vidro recobertos com politetraflúoretileno (PTFE). O foco principal deste trabalho são as membranas de poliéster/PVC usadas para estruturas tensionadas. Os tecidos usados nessa gama estão enquadrados na categoria denominada tecidos técnicos, e são formados por fios compostos por filamentos de poliéster de alta tenacidade de diferentes tipos, gerando vários artigos com características técnicas distintas e, consequentemente, membranas com diversas especificações e comportamentos diferentes na aplicação final.Este estudo traz uma visão geral sobre o assunto no mundo e um panorama mais detalhado para o Brasil, abordando definições, termos usados, materiais, fornecedores, especificações, tipos de produtos e acabamentos, normas, reciclagem e meio ambiente. A beleza e modernidade são apontadas como as principais qualidades desse tipo de cobertura. As expectativas são de crescimento dessa aplicação para os próximos anos. Porém a falta de conhecimento e a complexidade técnica desse tipo de solução é um problema a ser solucionado para que melhores resultados sejam atingidos e ela possa realmente ser considerada uma solução viável e adequada para o país. / The type of textile compound, commonly called textile membrane, has been employed in recent decades, as part of an architectural system used for covering, closing and/or protection of publics and private spaces in many countries around the world. The term membrane is related to the fact that the material remains tensioned and separating two interacting environments. This architectural solution is commonly known as \' textile architecture \', especially when tensile structures are involved; this term is used by many professionals worldwide, although it do not exist a unanimity of opinions regarding the concepts involved in the definition of the term and what it encompasses. In most cases, the structures generated are very attractive, practical and functional, with different characteristics, different shapes and sizes, depending on the requirements to be met. When well designed, they will be seamlessly integrated with the environment by having organic forms, giving a feeling of lightness, fluidity and modernity. The two types of textile membranes commonly used are: 1) a group whose structuring material of the membrane is a polyester fabric coated, on both sides, with a layer of polyvinyl chloride (PVC), and 2) a group of membranes made with glass filament fabrics coated with polytetrafluoretilene (PTFE). The focus of this work is the polyester/PVC membranes used for tensile structures. The fabric used in this range is framed within the category named \'technical fabrics\', and are composed by different kinds of high tenacity yarns of polyester filaments, generating several articles with different technical characteristics and consequently, membranes with different specifications and different behaviors in the final application. The study provides an overview of the subject in the world and a panorama slightly more detailed for Brazil, covering definitions, terms, used materials, suppliers, specifications, product types and finishes, recycling and environment issues. The \' beauty \' and \' modernity \' are cited as the main qualities of this type of covering. There are expectations of growing of this application for coming years. But the lack of knowledge and the technical complexity of this kind of solution is a problem to be solved, so that best results can are achieved and it can really be considered a viable and appropriate solution for the country.

[ES] Actualmente se usan varios materiales poliméricos para aplicaciones médicas. Debido a la facilidad de poder fabricar formas complejas, que con otros métodos es difícil realizarlas, se usa cada vez con más frecuencia la manufactura aditiva (MA) con materiales poliméricos. El proceso de fabricación aditiva por extrusión de material (MEX), es el proceso de MA más utilizado debido al bajo coste de los equipos, la facilidad de acceso a los materiales (filamento de impresión 3D) y la relativamente baja complejidad de la técnica con respecto a otras tecnologías de procesamiento de polímeros. Estos materiales deben ser compatibles con el cuerpo humano y se requiere que las partes impresas en 3D sean resistentes a los procesos de esterilización, para evitar cualquier tipo de infección o contaminación. Los procesos de esterilización por calor húmedo (MH) y calor seco (DH) son los más usados en el campo de la medicina y son asequibles incluso en instalaciones de baja complejidad. Sin embargo, varios de estos materiales poliméricos, disminuyen sus propiedades mecánicas, térmicas y reológicas y/o cambian dimensionalmente al ser sometidos a los procesos de esterilización. Algunos materiales poliméricos biocompatibles usados para aplicaciones médicas que se encuentran disponibles a nivel comercial en forma de filamento 3D para MA, como el poli(ácido láctico) (PLA), presentan alta resistencia mecánica y rigidez. Sin embargo, su fragilidad impide su uso extendido y esta fragilidad puede ser incluso mayor después de someter a los materiales a procesos de esterilización. Para investigar los efectos de estos dos métodos de esterilización, se imprimieron por MEX algunos especímenes de ensayo con filamentos comerciales de baja temperatura de fusión como el polietileno tereftalato glicol reforzado con fibra de carbono (PETG-CF), poli (ácido láctico) (PLA), CPE , PLA Smartfill®, y un material compuesto elaborado a partir de PLA y reforzado con hidroxiapatita (PLA-HA). Asimismo, se imprimieron por MEX materiales comerciales de alto punto de fusión como el policarbonato (PC), nylon (PA) y polipropileno (PP). Para caracterizar los materiales antes y después de los procesos de esterilización se realizaron pruebas mecánicas, térmicas, termo-mecánicas y ópticas para determinar el efecto de los procesos de impresión sobre cada tipo de material y verificar si las propiedades finales cumplen los requisitos para aplicaciones médicas. Se utilizó la espectroscopia infrarroja por transformada de Fourier (FTIR) para identificar los cambios químicos en los grupos funcionales de las muestras impresas y esterilizadas. Luego, se realizó un estudio morfológico por estereomicroscopio y microscopio electrónico de barrido (SEM) para estudiar los cambios de las muestras debido a los procesos de esterilización. Finalmente, en el caso del polipropileno se hizo la descripción del modelo reológico usando el modelo de Cross-WLF para inferir en las condiciones de procesamiento por MA. En general se encontró que los materiales como el nylon (PA), el polipropileno (PP) y el policarbonato (PC) pueden soportar los procesos de esterilización por calor, por lo que podrían emplearse para el desarrollo de materiales para prótesis y/u otras prestaciones médicas. Por su parte, el PETG reforzado con fibra de carbono, el CPE, el PLA, el PLA Smartfill® y el PLA reforzado con hidroxiapatita (PLA-HA) varían dimensionalmente después de los procesos de esterilización, afectando las propiedades mecánicas de las partes impresas. Por lo tanto, no se recomiendan para su aplicación en prótesis esterilizadas mediante los dos procesos de esterilización estudiados. Sin embargo, el PLA Smartfill® que es más fácil de procesar que los otros PLAs estudiados (PLA y PLA-HA) y que presenta menor contracción durante los procesos de esterilización, podría ser utilizado para aplicaciones que no permanecerán en el cuerpo humano y que requieren menores prestaciones mecánicas, como por ejemplo en guías de cirugía / [CA] Actualment s'usen diversos materials polimèrics per a aplicacions mèdiques,. A causa de la facilitat de poder fabricar formes complexes, que amb altres mètodes és difícil realitzar-les, s'usa cada vegada amb més freqüència la manufactura additiva (MA) amb materials polimèrics acceptats per a aplicacions mèdiques. El procés de fabricació additiva per extrusió de material (MEX), és el procés de MA més utilitzat a causa de el baix cost dels equips, la facilitat d'accés als materials (filament d'impressió 3D) i la relativament baixa complexitat de la tècnica respecte a altres tecnologies de processament de polímers com l'extrusió, emmotllament per injecció, etc. Aquests materials han de ser compatibles amb el cos humà i es requereix que les parts impreses en 3D siguin resistents als processos d'esterilització, per evitar qualsevol tipus d'infecció o contaminació, la qual cosa s'aconsegueix mitjançant el procés d'esterilització. Els processos d'esterilització per calor humida (MH) i calor seca (DH) són els més usats en el camp de la medicina i són assequibles fins i tot en instal·lacions de baixa complexitat (exemple: dispensaris, consultoris, etc.). No obstant això, diversos d'aquests materials polimèrics, disminueixen les seves propietats mecàniques, tèrmiques i reològiques i / o canvien dimensionalment a l'ésser sotmesos als processos d'esterilització. Alguns materials polimèrics biocompatibles usats per a aplicacions mèdiques que es troben disponible a nivell comercial en forma de filament 3D per MA, com el àcid polilàctic (PLA), presenten alta resistència mecànica i rigidesa. No obstant això, la seva fragilitat impedeix el seu ús estès i aquesta fragilitat pot ser fins i tot major després de sotmetre els materials a processos d'esterilització. Per a investigar els efectes d'estos dos mètodes d'esterilització, es van imprimir per MEX alguns espècimens d'assaig amb filaments comercials de baixa temperatura de fusió com el polietilé tereftalato glicol reforçat amb fibra de carboni (PETG-CF) , poli (àcid làctic) (PLA) , CPE , PLA Smartfill®, i un material compost elaborat a partir de PLA i reforçat amb hidroxiapatita (PLA-HA) . Així mateix, es van imprimir per MEX materials comercials d'alt punt de fusió com el policarbonat (PC) , niló (PA) i polipropileno (PP) . Per a caracteritzar els materials abans i després dels processos d'esterilització es van realitzar proves mecàniques, tèrmiques, termomecàniques i òptiques per a determinar l'efecte dels processos d'impressió sobre cada tipus de material i verificar si les propietats finals complixen els requisits per a aplicacions mèdiques. Es va utilitzar l'espectroscòpia infraroja per transformada de Fourier (FTIR) per a identificar els canvis químics en els grups funcionals de les mostres impreses i esterilitzades. Després, es va realitzar un estudi morfològic per estereomicroscopio i microscopi electrònic d'agranat (SEM) per a estudiar els canvis de les mostres degut als processos d'esterilització. Finalment, en el cas del polipropileno es va fer la descripció del model reológico usant el model de Cross-WLF per a inferir en les condicions de processament per MA. En general es va trobar que els materials com el niló (PA) , el polipropilens (PP) i el policarbonat (PC) poden suportar els processos d'esterilització per calor, per la qual cosa podrien emprar-se per al desenrotllament de materials per a pròtesi y/u altres prestacions mèdiques. Per la seua banda, el PETG reforçat amb fibra de carboni, el CPE, el PLA, el PLA Smartfill® i el PLA reforçat amb hidroxiapatita (PLA-HA) varien dimensionalment després dels processos d'esterilització, afectant les propietats mecàniques de les parts impreses. Per tant, no es recomanen per a la seua aplicació en pròtesi esterilitzades per mitjà dels dos processos d'esterilització estudiats. No obstant això, el PLA Smartfill® que és més fàcil de processar que els altres PLAs estudiats (PLA i PLA-HA) i que presenta menor contracció durant els process / [EN] Various polymeric materials are currently used for medical applications. Due to the ease of being able to manufacture complex shapes, which with other methods is difficult to perform, additive manufacturing (MA) with polymeric materials is increasingly used. The additive manufacturing process by material extrusion (MEX), is the most widely used MA process due to the low cost of the equipment, the ease of access to the materials (3D printing filament) and the relatively low complexity of the technique with respect to other polymer processing technologies. These materials must be compatible with the human body and require that the 3D printed parts be resistant to sterilization processes, to avoid any type of infection or contamination. Wet heat (MH) and dry heat (DH) sterilization processes are the most widely used in the medical field and are affordable even in low-complexity facilities. However, these polymeric materials decrease their mechanical, thermal and rheological properties and/or change dimensionally when subjected to sterilization processes. Some biocompatible polymeric materials used for medical applications that are commercially available in 3D filament form for MA, such as poly(lactic acid) (PLA), have high mechanical strength and rigidity. However, their fragility prevents their widespread use, and this fragility can be even greater after subjecting the materials to sterilization processes. To investigate the effects of these two sterilization methods, some test specimens with commercial low-temperature melting filaments such as carbon fiber reinforced polyethylene terephthalate glycol (PETG-CF), poly (lactic acid) (PLA), CPE, Smartfill PLA®, and a material were printed by MEX. compound made from PLA and reinforced with hydroxyapatite (PLA-HA). Commercial high melting point materials such as polycarbonate (PC), nylon (PA) and polypropylene (PP) were also printed by MEX. To characterize the materials before and after the sterilization processes, they performed mechanical, thermal, thermo-mechanical and optical tests to determine the effect of the printing processes on each type of material and verify if the final properties meet the requirements for medical applications. Fourier transform infrared spectroscopy (FTIR) was used to identify chemical changes in the functional groups of printed and sterilized samples. Then, a morphological study was performed by stereomicroscope and scanning electron microscope (SEM) to study the changes of the samples due to sterilization processes. Finally, in the case of polypropylene, the description of the rheological model was made using the Cross-WLF model to infer in the processing conditions by MA. In general, it was found that materials such as nylon (PA),polypropylene (PP) and polycarbonate (PC) can withstand heat sterilization processes, so they could be used for the development of materials for prostheses and / or other medical benefits. Carbon fiber reinforced PETG, CPE, PLA, Smartfill PLA® and hydroxyapatite-reinforced PLA (PLA-HA) varied dimensionally after sterilization processes, affecting the mechanical properties of the printed parts. Therefore, they are not recommended for application in sterilized prostheses by the two sterilization processes studied. However, Smartfill PLA® which is easier to process than the other PLAs studied (PLA and PLA-HA) and which has less contraction during sterilization processes, could be used for applications that will not remain in the human body and that require lower mechanical performance, such as in surgery guides. In this way, the MA by MEX represents a simple and economical technique that can be implemented for the development of materials for custom-designed surgery guides and sterilizable by simple processes such as wet heat and dry heat, available in low complexity medical facilities. / Fuentes Fuentes, JM. (2022). Estudio y diseño de materiales de impresión 3d que soporten los sistemas de esterilización médicos [Tesis doctoral]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/180857