Orientadores: André Leon Sampaio Gradvohl, Vitor Rafael Coluci / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Tecnologia / Made available in DSpace on 2018-08-21T23:26:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Andrijauskas_Fabio_M.pdf: 2796809 bytes, checksum: 9fd4e03f6038d482ed05a64517bb1780 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: A quantidade de imagens astronômicas geradas cresce diariamente, além da quantidade já obtida e armazenada. Uma grande fonte de dados são imagens solares, cujo estudo pode detectar eventos que têm a capacidade de afetar as telecomunicações, transmissão de energia elétrica e outros sistemas na Terra. Para que tais eventos sejam detectados, torna-se necessário analisar essas imagens de forma eficiente, levando em conta os aspectos de armazenamento, processamento e visualização. Agregar algoritmos de processamento de imagem e técnicas de computação de alto desempenho facilita o tratamento da informação de forma correta e em tempo reduzido. As técnicas de computação para alto desempenho utilizadas neste trabalho foram desenvolvidas para sistemas híbridos, isto é, aqueles que utilizam uma combinação de sistemas de memórias compartilhada e distribuída. Foram produzidas versões paralelas para sistemas híbridos de técnicas já estabelecidas. Além disso, novas técnicas foram propostas e testadas para esse sistema tais como o Filamento Diffusion Detection. Para avaliar a melhora no desempenho, foram feitas comparações entre as versões seriais e paralelas. Esse texto também apresenta um sistema com capacidade para armazenar, processar e visualizar as imagens solares. Em uma das técnicas de detecção de filamentos, o processo foi acelerado 120 vezes e um processo auxiliar para a detecção de áreas mais brilhantes foi 155 vezes mais rápido do que a versão serial / Abstract: The number of astronomical images produced grows daily, in addition to the amount already stored. Great sources of data are solar images, whose study can detect events which have the capacity to affect the telecommunications, electricity transmission and other systems on Earth. For such events being detected, it becomes necessary to treat these images in a coherent way, considering aspects of storage, processing and image visualization. Combining image processing algorithms and high performance computing techniques facilitates the handling of information accurately and in a reduced time. The techniques for high performance computing used in this work were developed for hybrid systems, which employ a combination of shared and distributed memory systems. Parallel version of some established techniques were produced for hybrid systems. Moreover, new techniques have been proposed and tested for this system. To evaluate the improvement in performance, comparisons were made between serial and parallel versions. In addition to the analysis, this text also presents a system with capacity to store, process and visualize solar images. In one of the techniques for detecting filaments, the process was accelerated 120 times. Also an auxiliary process for the detection of brighter areas was 155 times faster than the serial version / Mestrado / Tecnologia e Inovação / Mestre em Tecnologia

Orientadores: Antonio Carlos Boschiero, Everardo Magalhães Carneiro / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-18T17:06:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ferreira_SandraMara_M.pdf: 1558318 bytes, checksum: d69677a862aa6ba8e96725b7d5c76a87 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: Introdução e objetivos: A ARHGAP21 é uma Rho-GAP que promove a ativação de um fator intrínseco da Rho-GTPase Cdc42 responsável pela hidrólise de GTP à GDP e inativação da atividade da proteína. ARHGAP21 se associa à PKC? em cardiomiócitos e à porção C-terminal da FAK em glioblastomas, onde inibe a ativação de Rho-GTPases, e, com isso, o rearranjo do citoesqueleto de actina. A Cdc42, FAK e PKC? estão envolvidas na secreção de insulina estimula por glicose, diferenciação e proliferação de ilhotas pancreáticas. O objetivo deste trabalho foi investigar em células beta pancreáticas: 1) a expressão e localização da ARHGAP21; 2) o efeito da glicose na expressão das proteínas PKC?, FAK e Cdc42 e sua associação à ARHGAP21 e; 3) a função da ARHGAP21 no controle da secreção de insulina estimulada por glicose. Materiais e Métodos: A expressão e localização da ARHGAP21 em células MIN6 foram avaliadas por imunoflorescência. Células MIN6 foram tratadas na presença de 5,6 ou 22 mM de glicose ou, na ausência ou presença de insulina (0,2 U/ml) por 3 dias. Após a extração protéica a expressão das proteínas ARHGAP21, PKC, FAK e Cdc42 foi avaliada por Western blot. Células MIN6 foram incubadas em solução contendo 22 mM de glicose e coletadas em diferentes tempos (0, 5, 15, e 30 min) para avaliação da interação ARHGAP21/FAK e ARHGAP21/PKC? por imunoprecipitação e, para análise do grau de fosforilação tirosina 397 e 925 da FAK e em treonina 410 da PKC?. A expressão dessas proteínas também foi avaliada em ilhotas pancreáticas de camundongos Swiss neonatos previamente tratados por dois dias com 1 nM de anti-sense anti-ARHGAP21 ou mismatch. Essas ilhotas foram incubadas com 2,8 ou 16,7 mM de glicose e a secreção de insulina avaliada. Resultados: A ARHGAP21 localiza-se no citoplasma, mais acentuadamente na região da membrana plasmática. Glicose reduziu a expressão da ARHGAP21 e PKC? e não alterou a expressão da FAK e Cdc42, enquanto a insulina não alterou a expressão de nenhuma das proteínas estudadas. A glicose também promoveu a dissociação ARHGAP21/FAK, levando ao aumento na fosforilação da FAK seguido de aumento na associação ARHGAP21/PKC? e redução na fosforilação da PKC? em Thr 410. Animais Knockdown para ARHGAP21 apresentaram menor expressão de PKC? e maior expressão de Cdc42, além de um aumento na secreção de insulina por ilhotas pancreáticas tanto em condição sub- (2,8 mM) quanto supra-estimulatória (16,7 mM) de glicose. Conclusão: ARHGAP21 modula Cdc42 e FAK, proteínas responsáveis pelo rearranjo do citoesqueleto de actina e extrusão do grânulo de insulina, reduzindo sua expressão e atividade, o que inibe a secreção de insulina. Além disso, observamos que a glicose modula as interações ARHGAP21/FAK e ARHGAP21/PKC? / Abstract: Background/Aims: ARHGAP21 is a Rho-GAP that promotes activation of the Rho-GTPase Cdc42 intrinsic factor, which is responsible for the hydrolysis of GTP to GDP and those proteins inactivation. ARHGAP21 associates with PKC? in cardiomyocytes and to the C-terminal portion of FAK in glioblastoma, inhibiting Rho-GTPases and actin cytoskeleton rearrangement. Cdc42, FAK and PKC? promote glucose-stimulated insulin secretion, differentiation and proliferation in pancreatic islets. The aim this study was to assess in pancreatic beta cells: 1) ARHGAP21 expression and localization; 2) glucose effect in PKC?, FAK e Cdc42 expression and association to ARHGAP21; 3) The role of ARHGAP21 on glucose-stimulated insulin secretion. Materials and Methods: ARHGAP21 expression and localization in MIN6 cells were evaluated by immunofluorescence. MIN6 cells were treated with glucose (5.6 mM and 22 mM) or insulin (0.2 U/ml) for 3 days. After protein extraction, the ARHGAP21, PKC?, FAK e Cdc42 expressions were evaluated by Western blot. MIN6 cells were exposed for 0, 5, 15, e 30 min to 22 mM of glucose. ARHGAP21/FAK and ARHGAP21/PKC? interactions were evaluated for immunopreciption and phosphorylation of FAK in tyrosine 397 and 925 and phosphorylation of PKC? in threonine 410. The expression of these proteins also was evaluated in pancreatic islets of neonates Swiss mice previously treated for 2 days with 1 nM of ARHGAP21 antisense or mismatch oligonucleotides. These islets were incubated with 2.8 mM or 16.7 mM of glucose and insulin secretion was evaluated. Results: ARHGAP21 is localized in the cytoplasm, mainly the plasmatic membrane. Glucose reduced ARHGAP21 and PKC? expression but not altered FAK and Cdc42 expression, while insulin had no effect whatsoever on the expression of the studied proteins. Glucose also dissociated ARHGAP21/FAK, leading to increased FAK phosphorylation, which was followed by ARHGAP21/PKC? association and reduced Thr410 PKC? phosphorylation. ARHGAP21 Knockdown mice pancreatic islets had lower PKC? and higher Cdc42 expression, and also increased insulin secretion in both sub- (2.8 mM) and supra-stimulatory (16.7 mM) of glucose conditions. Conclusions: ARHGAP21 modulates Cdc42 and FAK, proteins responsible for rearrangement of actin cytoskeleton and extrusion of insulin vesicles, and reducing their expression leads to inhibited insulin secretion. Furthermore, we observed that glucose modulates ARHGAP21/FAK and ARHGAP21/ PKC? interactions / Mestrado / Fisiologia / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Estudos recentes em medicina regenerativa utilizam estruturas de crescimento celular conhecidas como scaffolds: um scaffolds é uma estrutura porosa feita de material biodegradável. Essas estruturas ajudam na formação e reconstituição de novos tecidos, servindo como suporte para o crescimento e proliferação celular. Esses podem ser fabricados utilizando processos de manufatura aditiva (MA). O processo utilizado na pesquisa foi o FFF (Fused Filament Fabrication), que se baseia em fundir polímero e extrudá-lo em forma de filamento para produção de peças tridimensionais para confecção dos scaffolds. O polímero utilizado na pesquisa foi o ácido poliláctico (PLA), por ser biocompatível. Uma possível forma de aumentar a rugosidade de superfície é gerar uma geometria diferente na seção transversal do filamento extrudado que forma o scaffold. Assim, o scaffold adquiriria a micro-rugosidade ou nanorrugosidade (rugosidade superficial do material utilizado e inerente do processo), e a macrorrugosidade (geometria gerada ao longo de seu comprimento): a micro-rugosidade, para fins deste trabalho, será considerada como a rugosidade (acabamento de uma superfície); a macrorrugosidade (ou macrogeometria) será considerada, para fins deste trabalho, como a textura que se apresenta na forma de uma seção transversal de um filamento extrudado. Para gerar essa macrotextura, é necessário gerar na ferramenta bico extrusor uma geometria diferente na saída do bico. Geralmente, na saída do bico extrusor é feito um furo de geometria circular. Foi proposto neste estudo utilizar uma geometria diferente de um círculo na saída do bico, geometria essa a ser transferida ao filamento durante o momento da extrusão. A alteração desta geometria requer a utilização de técnicas não convencionais de usinagem. Neste projeto foram produzidos filamentos modificados a fim de melhorar a citocompatibilidade no scaffold. A morfologia foi analisada in vitro e o novo bico gerou filamentos impressos com diferenças na citocompatibilidade e com mudanças nos aspectos morfológicos das células quando comparadas àquelas aderidas aos filamentos convencionais. / Recent studies in regenerative medicine use cell growth structures known as scaffolds: a scaffold is a porous structure made of biodegradable material. These structures aid in the formation and reconstitution of new tissues, serving as a support for cell growth and proliferation. They are manufactured using additive manufacturing (AM) processes. The technology executed in this research was the FFF (Fused Filament Fabrication), which is based on melting polymer in the form of a filament and extruding it for the production of three-dimensional parts for the manufacture of scaffolds. The polymer used in this research was the polylactic acid (PLA), which was used because it is biocompatible. One possible way to increase surface roughness is to generate a geometry in the cross section of the extruded filament forming the scaffold. Thus, the scaffold would acquire the micro-roughness or nano roughness (surface roughness of the material used and inherent in the process), and the macro-roughness (texture generated along its length): the micro-roughness, for purposes of this work, will be considered a roughness (surface finish); The macro-roughness (or macro-geometry) will be considered, for purposes of this work, as the texture which is in the form of a cross-section of an extruded filament. To generate this texture (macro-roughness) it is necessary to generate a macro-geometry in the nozzle extruder tool. Usually at the exit of the extruder nozzle is made a hole of circular geometry. It was proposed in this study to use a geometry different from a circle at the exit of the nozzle to be transferred to the filament during the moment of the extrusion. Altering this geometry requires the use of non-conventional machining techniques. In this project modified filaments were produced in order to improve cytocompatibility and for cell differentiation in the scaffold. The morphology was tested in vitro and the new nozzle was able to generate printed filaments with differences in cytocompatibility and with changes in the morphological aspects of the cells when compared to those adhered to the conventional filaments.

Centrinas são proteínas componentes essenciais nos centro organizadores de microtubulos em diversos organismos. Pertencem à família das proteínas EF-Hand ligantes de cálcio e podem ser divididas em duas subfamílias: uma definida pela centrina da alga Chlamydomonas reinhardtii CrCenp, associada a funções contráteis, e a outra pela centrina da levedura Saccharomices cerevisiae ScCdc31p, relacionada a duplicação de centros mitóticos. Curiosamente o fungo Blastocladiella emersonii possui duas formas de centrinas em seu genoma : BeCen1 mais parecida com a CrCenp, e BeCen3 com a ScCdc31p, enquanto todos os outros fungos já descritos possuem apenas uma forma, pertencente ao grupo ScCdc31p. Diante desse fato curioso, descrito em 2005, estudos estruturais e termodinâmicos comparativos entre as proteínas recombinantes BeCen1 e BeCen3, foram desenvolvidos para identificar e caracterizar diferenças relevantes, que pudessem justificar a presença dessas duas proteínas no fungo Blatocladiella emersonii. Ambas as centrinas foram expressas em E. coli e purificadas por cromatografia, resultando em um rendimento de aproximadamente 5mg/l. Analises estruturais foram realizadas utilizando técnicas de dicroísmo circular (CD) , fluorescência, espalhamento de luz (DLS e RALS), microscopias de força atômica (AFM) e eletrônica de transmissão (MET). Por calorimetria de titulação isotérmica (ITC) parâmetros termodinâmicos foram obtidos para BeCen1 e BeCen3 em relação a ligação de cálcio. Ambas apresentaram conteúdo predominante de hélices alfa e diferenças físico-químicas e estruturais marcantes. BeCen1, após desnaturação a 90ºC e deixada a temperatura de 4°C por 24 horas horas, mostrou um espectro de CD compatível com um processo de reenovelamento; a TM foi de 42°C e aumentou cerca de 4°C na forma holo; os espectros de CD são modificados na presença de cálcio, mostrando uma forma característica de movimentação de hélices das proteínas ligantes de cálcio; pelos dados obtidos por ITC liga cálcio em três sítios EF-Hand por uma reação endotérmica; na presença de magnésio apresentou mudanças conformacionais, compatíveis com a ligação deste nos sítios de cálcio; a partir de 40°C é observado um processo de agregação chegando a formação de filamentos, que foram visualizados por AFM e MET. BeCen3 após ser desnaturada e colocada nas mesmas condições de BeCen1, permanece desnaturada; A TM é de 49°C e aumentou em aproximadamente 5°C na forma holo; os espectros de CD, na presença de cálcio, apresentam aspectos característicos de movimentação de -hélices das proteínas ligantes de cálcio; liga cálcio em apenas dois sítios EF-Hand por uma reação exotérmica, sofre mudanças conformacionais na presença de magnésio e a partir de 30°C já sofre um processo de agregação, formando filamentos. Neste trabalho foi estabelecido o primeiro protocolo para a expressão e purificação das centrinas de B. emersonii, além dos estudos de caracterização estrutural e termodinâmica destas proteínas. O estudo também foi pioneiro quanto a obtenção de imagens no processo de formação de filamentos destas centrinas na ausência de cálcio. As centrinas de B. emersonii apresentam diferenças importantes nas respostas em função da presença de cálcio e também do magnésio. Os dados obtidos são fortes indicativos que estas centrinas têm mecanismos de ação diferentes dentro do fungo B. emersonii. / Centrin proteins are essential component of the microtubule organizing centers in a large range of organisms. They belong to the EF-Hand calcium binding proteins family e can be divided in two subfamilies: one defined by the green algae Chlamydomonas reinhardtii CrCenp, related to contractile functions and the other centrin of the yeast Saccharomices cerevisiae ScCdc31p, related to duplication of centrossome mitotic centers. Interesantly, Blastocladiella emersonii fungus posses two centrin forms in it genome: BeCen1 closely related to CrCenp and BeCen3 closely related to ScCdc31p. All other known fungus have only one form of centrin: ScCdc31p. With this curious finding, described in 2005, compared structural and thermodynamics studies between recombinant proteins BeCen1 and BeCen3 were performed, in attempt to identify relevant differences that could explain the presence of two forms of centrins in this fungus. Both centrins were expressed in E. coli and purified by chromatography resulting in 5mg/l protein yield. Structural analyses were performed with circular dichroism (CD), fluorescence, light scattering (DLS AND RALS), atomic force microscopy (AFM) and transmission electronic microscopy (TEM). Using isothermal titration calorimetry (ITC) thermodynamics parameters about the calcium binding were defined. Both showed alpha helix predominant content and structural physical-chemistry differences. After denaturation at 90°C and cooled overnight at 4°C, BeCen1 showed a CD spectrum consistent to a renaturation process; the calculated TM was 42°C and raised 4°C in the holo state; CD spectra were modified under calcium presence showing characteristics changes of calcium binding proteins; ITC data exhibited tree calcium binding motifs through an endothermic reaction and the presence of magnesium also showed conformational changes; From 40°C a aggregation process leading to filament formation was observed and visualized with AFM and TEM. After denaturation at 90°C and cooled overnight at 4°C, BeCen3 remained denaturated; Calculated TM was 49°C and raised 5°C in the holo state; CD spectra were modified under calcium presence showing characteristics changes of calcium binding proteins; ITC data exhibited only two calcium binding motifs through an exothermic reaction and the presence of magnesium also showed conformational changes; From 30°C BeCen3 already suffered a aggregation process forming filaments. In this study it was established the first expression and purification protocol for B. emersonii centrins, besides the structural and thermodynamic characterization of these proteins. This is the first study containing filaments images of the centrins of B. emersonii. These centrins showed important response differences in calcium and magnesium binding. All the obtained data are strong indications that the two centrins have distinct functions in the fungus.

Septinas constituem uma família de proteínas de ligação a GTP que foram inicialmente identificadas em levedura Saccharomyces cerevisiae, mas também estão presentes em outros eucariotos com exceção de plantas. Septinas são purificadas de leveduras, Drosophila e cérebros de mamíferos na forma de filamentos, porém o mecanismo através do qual acorre a formação destes filamentos ainda não é muito bem compreendido. Septinas são constituídas de três regiões principais: um N-terminal variável, um domínio central GTPase altamente conservado e um domínio coiled-coil C-terminal. O gene SEPT4 foi identificado por M. Tanaka e colaboradores a partir do cDNA de cérebro humano e apresentou duas distintas transcrições: Bradeiona ? e ?. Interessantemente, além de cérebro e coração, as proteínas Bradeiona Α e Β. são detectadas somente em câncer do cólon, reto, próstata e melanoma maligno. Neste trabalho, o gene da proteína Bradeiona Β foi subclonado em um vetor de expressão bacteriano, produzido em E. coli e purificado com sucesso. O espectro de dicroísmo circular (CD) mostrou o perfil característico de proteínas com hélices a na estrutura secundária. Resultados de cromatografia de exclusão molecular (SEC) e espalhamento dinâmico de luz (DLS) indicam que a septina Bradeina foi produzida na forma de um estável oligômero com características monodispersivas, que foi subseqüentemente cristalizado em PEG6000. A atividade GTPase da Bradeiona Β foi comprovada através da técnica de eletroforese capilar (CE), mostrando-se absolutamente dependente de íons Mg2+. Inibição da atividade GTPase foi verificada em altas concentrações de Mg2+ (maiores que 5 mM). Com a finalidade de caracterizar os domínios preditos da Bradeiona Β (Fragmento Conservado e domínio GTPase), essas regiões foram previamente definidas, expressas em E. cozi e purificadas com sucesso. Resultados de CD, SEC, espectroscopia de fluorescência e NMR-600MHz indicam que o FC foi produzido na forma de um estável monômero com pouca estrutura secundária regular. Resultados de DLS e CD indicam que a fusão 6xHis-DGTPase foi produzida na forma de um oligômero com a presença de hélices a na estrutura secundária. A fusão 6xHis-DGTPase mostrou-se instável a altas concentrações na ausência de imidazol. A atividade GTPase da fusão GST+DGTPase foi comprovada, similarmente a Bradeiona , através da técnica de CE. Novamente, verificou-se dependência de íons Mg2+ (para a atividade catalítica) e inibição em altas concentrações de Mg2+. A fusão GST+DGTPase também foi capaz de hidrolisar ATP. Espera-se que as informações relatadas neste estudo proporcionem um alicerce para estudos estruturais/funcionais futuros das proteínas Bradeiona Α e Βoutras septinas. / Septins form a class of eukaryoyic guanine nucleotide-binding proteins that were first identified in budding yeast. Septins purified from yeast, Drosophila and mammalian brain form filaments, however the mechanism by which the filaments assemble is unclear. Septins have a highly conserved structure, which includes a central GTP-binding domain, a variable N-terminal region, and most septins also contain a coiled coil domain at the Cterminus. Bradeion p is one of the splice variants of the human septin gene, SEPT4, recently isolated by expression screening of an adult human brain cDNA library. The Bradeion gene resides at 17q23, and has been shown to present specific expression in both human colorectal cancer, urologic cancers and malignant melanoma. In order to characterize the GTPase activity of Bradeion Β , the protein was successfully expressed in E. coli and purified. The recombinant protein was characterized by circular dichroism (CD), dynamic light scattering (DLS) and a novel non-radioactive enzyme assay, which utilizes capillary electrophoresis (EC) to monitor GTP hydrolysis. The CD spectrum exhibited the typical shape characteristic of the presence of helical elements of secondary structure and the DLS pattern was indicative of a monodisperse solution, which was readily crystallized in the presence of PEG6000. GTP hydrolysis was shown to be Mg2+ dependent within the low millimolar range but at 5 mM was inhibitory. In order to characterize the predicted domains of Bradeion Β, these defined regions were successfully expressed in E. cozi and purified. The CD spectrum of CF exhibited the shape typically found for non-regular structure. The results of fluorescence spectroscopy, gel filtration (SEC) and NMR-600MHz also corroborate with the CD results indicating an irregular structure. The fusion protein 6xHis-DGTPase exhibited a CD spectrum with the typical shape characteristic of the presence of helical elements but was show to be instable at high concentrations in the absence of imidazole. To characterize the GTPase activity of the fusion protein GST+DGTPase, the CE technique was used to monitor GTP hydrolysis. Analysis by CE showed that GST+DGTPase was functional, since both GTP and ATP hydrolysis was observed in a Mg2+ dependent manner. This work provides novel approaches, which should aid in the fbture study of the structure and fùnction of Bradeion Α e Β, others septins and related GTPases.

RESUMO: Determinadas espécies de fungos são responsáveis por diversas doenças no ser humano. Estudos epidemiológicos avaliam essas infecções tanto superficiais quanto profundas, e alguns destes avaliam em relação ao trabalho e condição de vida e saúde de trabalhadores de diversas áreas. Entretanto a contaminação por fungos filamentosos na região da cavidade oral com relação à atividade laboral rural não apresenta referência. OBJETIVOS: Avaliar a incidência de contaminação fúngica na região orofaringe normal de trabalhadores agrícolas das culturas de cana-de-açúcar, laranja e abacaxi do município de Frutal, Minas Gerais. MÉTODOS: Esse é um trabalho longitudinal, prospectivo, tipo coorte, não randomizado, em que os participantes eram migrantes vindos para trabalho temporário nas culturas referidas. Foram selecionados 60 participantes no momento das contratações após realizados os exames pré-admissionais. Avaliou-se as características sociodemográficas dos participantes. A coleta de material investigativo seguiu a ordem: região do sulco gengivo - labial, próximo à região do freio superior e freio inferior; material da mucosa jugal direita e esquerda, com um swab para cada região e dispostos na placa de Petri, respeitando a anatomia descrita. A coleta e análise do material dos trabalhadores e do meio ambiente seguiram os tempos de cada cultura, determinados de (t0), (t1), (t2). Também foram usados para caracterizar cada fase de coleta, cultura e análise das amostras. As amostras foram semeadas em meio Agar Sabouraud Dextrose. Após o crescimento dos isolados, as culturas filamentosas foram submetidas às técnicas de colônias gigantes e microcultivo. Os fungos foram identificados no microscópio com objetiva de 40 vezes. RESULTADOS: Não houve diferença entre idade e sexo nos três grupos analisados. Houve predomínio de homens afrodescendentes nas culturas de cana e laranja quando comparados ao abacaxi, que apresentou um predomínio de caucasianos. Trabalhadores de origem oriental foram detectados apenas na cultura de abacaxi. Quanto à renda, os trabalhadores de abacaxi recebem salários mais elevados do que os outros dois grupos de trabalhadores. Não houve diferença em relação ao tabagismo e a ingestão de álcool entre os três grupos analisados. Em relação à contaminação do meio ambiente, tanto na planta quanto no ar, encontrou-se um maior índice de placas de Petri contaminadas nas plantações de abacaxi e cana-de-açúcar, respectivamente. Observou-se um predominio de F. moniliforme na cultura de cana-de-açúcar e de F.subglutians nas culturas de laranja e de abacaxi nos tempos definidos dessa pesquisa. A contaminação dos trabalhadores ocorreu no segundo tempo da pesquisa. A respeito dos voluntários das plantações de abacaxi, 13,3% dos trabalhadores foram infectados entre os sessenta analisados; todos os trabalhadores foram contaminados com F.subglutinans. Na cultura de cana-de-açúcar, 8,3% deles foram encontrados infectados, sendo 5% por A. niger e 3,3% por F.moniliforme. Dois voluntários infectados pelo A. niger apresentaram infecção concomitante com C. albicans. Na lavoura de laranja 1,6% foram infectados por F.subglutians. CONCLUSÕES: Esse estudo demonstrou que trabalhar na cultura do abacaxi se mostrou um fator de risco para infecção fúngica na mucosa oral quando comparado às atividades na cultura da laranja. Houve também contaminação fúngica na cultura de cana-de-açúcar quando comparado ao grupo de referência. Outros fatores como idade, ingestão de álcool, tabagismo, renda familiar ou etnia não se mostraram estatisticamente significativos para incidência da infecção / ABSTRACT: Certain species of fungi are responsible for several diseases in humans. Epidemiologic studies rate those infections, both superficial and profound, and some of them rate regarding the occupation and life and health conditions of workers from several areas. However, the filamentous fungal infection in the oral cavity regarding laboral activity presents no reference. OBJETIVE: To rate the incidence of fungal contamination in the normal oropharynx of agricultural workers of sugar cane, orange and pineapple crops in the municipal district of Frutal, Minas Gerais. METHODS: This is a longitudinal, prospective and cohort work, in which the participants were migrants to temporary work in the aforesaid crops. Sixty participants were selected in the hiring moment after pre-admission examinations. The participants\' sociodemographic features were rated. The gathering of investigative materials followed the order: region of the gingival sulcus, close to the upper and lower lip curb region; material from the right and left jugal mucous with a swab for each region and arranged in a Petri dish, respecting the anatomy described. The gathering and analysis from workers and environment material followed the time of each culture, determined of (t0), (t1), (t2). They were also used to feature each stage of gathering, culture and analysis of samples. The samples were sown amid Sabouraud Dextrose Agar. After the growth of the isolates, the filamentous cultures were subjected to the techniques of giant colonies and microcultivation. The fungi were identified in the microscope with a 40x magnification. RESULTS: There was no difference between age and sex in the three groups studied. There was a predominance of African descent men in cane and orange crops compared to pineapple, which showed a predominance of Caucasians. Oriental workers were detected only in pineapple crop. As for income, the pineapple workers receive higher wages than the other two groups of workers. There was no difference regarding smoking and alcohol intake among the three groups analyzed. Regarding the environment contamination, both in the plant and in the air, a higher rate was found in Petri dishes contamined in pineapple and sugar cane crops, respectively. There was a predominance of F. moniliforme in the sugar cane crop and of F.subglutians in orange and pineapple crops in the times defined in this research. Contamination of workers occured in the second half of the research. Regarding the volunteers of pineapple crops, 13,3% workers were infected among the sixty analyzed; all workers were contamined with F. subglutinans. In the sugar cane crop, 8,3% of them were found infected, 5% by A. niger and 3,3% by F. moniliforme. Two volunteers infected by the A. niger presented concomitant infection with C. albicans. A worker of the orange crop was infected (1,6% ) by F. subglutians. CONCLUSIONS: This study demonstrated that working in the pineapple crop showed a risk factor for the fungal infection in the oral mucosa when compared to the activities in the orange crop. Also, there was a fungal contamination in the sugar cane crop when compared to the reference group. Other factors such as age, alcohol intake, smoking, family income or ethnicity were not statistically significant for the incidence of infection

RESUMO: Determinadas espécies de fungos são responsáveis por diversas doenças no ser humano. Estudos epidemiológicos avaliam essas infecções tanto superficiais quanto profundas, e alguns destes avaliam em relação ao trabalho e condição de vida e saúde de trabalhadores de diversas áreas. Entretanto a contaminação por fungos filamentosos na região da cavidade oral com relação à atividade laboral rural não apresenta referência. OBJETIVOS: Avaliar a incidência de contaminação fúngica na região orofaringe normal de trabalhadores agrícolas das culturas de cana-de-açúcar, laranja e abacaxi do município de Frutal, Minas Gerais. MÉTODOS: Esse é um trabalho longitudinal, prospectivo, tipo coorte, não randomizado, em que os participantes eram migrantes vindos para trabalho temporário nas culturas referidas. Foram selecionados 60 participantes no momento das contratações após realizados os exames pré-admissionais. Avaliou-se as características sociodemográficas dos participantes. A coleta de material investigativo seguiu a ordem: região do sulco gengivo - labial, próximo à região do freio superior e freio inferior; material da mucosa jugal direita e esquerda, com um swab para cada região e dispostos na placa de Petri, respeitando a anatomia descrita. A coleta e análise do material dos trabalhadores e do meio ambiente seguiram os tempos de cada cultura, determinados de (t0), (t1), (t2). Também foram usados para caracterizar cada fase de coleta, cultura e análise das amostras. As amostras foram semeadas em meio Agar Sabouraud Dextrose. Após o crescimento dos isolados, as culturas filamentosas foram submetidas às técnicas de colônias gigantes e microcultivo. Os fungos foram identificados no microscópio com objetiva de 40 vezes. RESULTADOS: Não houve diferença entre idade e sexo nos três grupos analisados. Houve predomínio de homens afrodescendentes nas culturas de cana e laranja quando comparados ao abacaxi, que apresentou um predomínio de caucasianos. Trabalhadores de origem oriental foram detectados apenas na cultura de abacaxi. Quanto à renda, os trabalhadores de abacaxi recebem salários mais elevados do que os outros dois grupos de trabalhadores. Não houve diferença em relação ao tabagismo e a ingestão de álcool entre os três grupos analisados. Em relação à contaminação do meio ambiente, tanto na planta quanto no ar, encontrou-se um maior índice de placas de Petri contaminadas nas plantações de abacaxi e cana-de-açúcar, respectivamente. Observou-se um predominio de F. moniliforme na cultura de cana-de-açúcar e de F.subglutians nas culturas de laranja e de abacaxi nos tempos definidos dessa pesquisa. A contaminação dos trabalhadores ocorreu no segundo tempo da pesquisa. A respeito dos voluntários das plantações de abacaxi, 13,3% dos trabalhadores foram infectados entre os sessenta analisados; todos os trabalhadores foram contaminados com F.subglutinans. Na cultura de cana-de-açúcar, 8,3% deles foram encontrados infectados, sendo 5% por A. niger e 3,3% por F.moniliforme. Dois voluntários infectados pelo A. niger apresentaram infecção concomitante com C. albicans. Na lavoura de laranja 1,6% foram infectados por F.subglutians. CONCLUSÕES: Esse estudo demonstrou que trabalhar na cultura do abacaxi se mostrou um fator de risco para infecção fúngica na mucosa oral quando comparado às atividades na cultura da laranja. Houve também contaminação fúngica na cultura de cana-de-açúcar quando comparado ao grupo de referência. Outros fatores como idade, ingestão de álcool, tabagismo, renda familiar ou etnia não se mostraram estatisticamente significativos para incidência da infecção / ABSTRACT: Certain species of fungi are responsible for several diseases in humans. Epidemiologic studies rate those infections, both superficial and profound, and some of them rate regarding the occupation and life and health conditions of workers from several areas. However, the filamentous fungal infection in the oral cavity regarding laboral activity presents no reference. OBJETIVE: To rate the incidence of fungal contamination in the normal oropharynx of agricultural workers of sugar cane, orange and pineapple crops in the municipal district of Frutal, Minas Gerais. METHODS: This is a longitudinal, prospective and cohort work, in which the participants were migrants to temporary work in the aforesaid crops. Sixty participants were selected in the hiring moment after pre-admission examinations. The participants\' sociodemographic features were rated. The gathering of investigative materials followed the order: region of the gingival sulcus, close to the upper and lower lip curb region; material from the right and left jugal mucous with a swab for each region and arranged in a Petri dish, respecting the anatomy described. The gathering and analysis from workers and environment material followed the time of each culture, determined of (t0), (t1), (t2). They were also used to feature each stage of gathering, culture and analysis of samples. The samples were sown amid Sabouraud Dextrose Agar. After the growth of the isolates, the filamentous cultures were subjected to the techniques of giant colonies and microcultivation. The fungi were identified in the microscope with a 40x magnification. RESULTS: There was no difference between age and sex in the three groups studied. There was a predominance of African descent men in cane and orange crops compared to pineapple, which showed a predominance of Caucasians. Oriental workers were detected only in pineapple crop. As for income, the pineapple workers receive higher wages than the other two groups of workers. There was no difference regarding smoking and alcohol intake among the three groups analyzed. Regarding the environment contamination, both in the plant and in the air, a higher rate was found in Petri dishes contamined in pineapple and sugar cane crops, respectively. There was a predominance of F. moniliforme in the sugar cane crop and of F.subglutians in orange and pineapple crops in the times defined in this research. Contamination of workers occured in the second half of the research. Regarding the volunteers of pineapple crops, 13,3% workers were infected among the sixty analyzed; all workers were contamined with F. subglutinans. In the sugar cane crop, 8,3% of them were found infected, 5% by A. niger and 3,3% by F. moniliforme. Two volunteers infected by the A. niger presented concomitant infection with C. albicans. A worker of the orange crop was infected (1,6% ) by F. subglutians. CONCLUSIONS: This study demonstrated that working in the pineapple crop showed a risk factor for the fungal infection in the oral mucosa when compared to the activities in the orange crop. Also, there was a fungal contamination in the sugar cane crop when compared to the reference group. Other factors such as age, alcohol intake, smoking, family income or ethnicity were not statistically significant for the incidence of infection

Submitted by Celso Magalhaes (celsomagalhaes@ufrrj.br) on 2018-09-24T15:13:44Z No. of bitstreams: 1 2017 - Enely Maris da Silveira Firmiano.pdf: 12307016 bytes, checksum: d58bee7e5ddc0113fa072ab4e9aabc29 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-24T15:13:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017 - Enely Maris da Silveira Firmiano.pdf: 12307016 bytes, checksum: d58bee7e5ddc0113fa072ab4e9aabc29 (MD5) Previous issue date: 2017-08-29 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Cap. I The aim of the current study is to investigate the histological and histochemical description, as well as the presence and immunohistochemical distribution of cytoskeleton proteins such as alpha smooth muscle actin, desmin and vimentin in the ovaries, testes and epididymis of Enyalius bilineatus, Enyalius perditus and Urostrophus vautieri. These species are representatives of family Leiosauridae, in order to help developing a database on the reproductive biology of these lizards, which could be compared to that of other reptile species and vertebrates. The herein studied specimens are deposited in the Herpetological Collection of Federal University of Juiz de Fora. The animals? ovaries, epididymis and testes were removed and sent to the Histology and Embryology Laboratory (UFRRJ), where they were fixed, processed and then subjected to histological, histochemical and immunohistochemical techniques. The ovaries of these leiosauridae are functionally-active paired organs filled with ovarian follicles at different follicular development stages. These organs are covered by a simple cubic epithelium, which presents an underlying connective tissue layer called tunica albuginea. The testes are covered by the tunica albuginea and hold septa forming lobes where the seminiferous tubules are located in. The epididymis of these lizards are convolute ducts internally coated by an epithelium, whose shape ranges from simple cylindrical to simple cubic with stereocilia. The immunohistochemical analysis applied to the ovaries of the herein studied lizards showed moderate to strong reaction to the alpha smooth muscle actin in the teak layer and in endothelial cells of blood vessels. With respect to the species? testes, this cytoskeleton protein showed strong reaction in the tunica albuginea, interstitial tissue, and in endothelial cells of blood vessels. As for the epididymis, the alpha-actin showed immunohistochemical reaction in the capsule and in the interstitial tissue of the lizards. The antibody ?desmin? showed strong immunostaining in the albuginea and ovarian stroma of E. perditus, only; however, the endothelial cells in the blood vessels of the three herein analyzed species showed positive reaction to this intermediate filament. Desmin showed immunoreactivity in the testicular albuginea and in the endothelial cells of the blood vessels in the herein analyzed leiosauridae testes; however, only E. bilineatus showed immunostaining in the interstitial region. Desmin showed positive immunoreaction in the epididymis of E. perditus and E. bilineatus, only. Vimentin did not show immunostaining in the ovaries, testes and epididymis of the three analyzed lizards. The consistent results found in the current study provide additional data on the reproductive biology of the investigated species. These data may be used for phylogenetic and behavioral comparisons between the herein studied species and other species belonging to family Leiosauridae or other reptiles Cap. II The aim of the current study is to investigate the histological description, as well as the presence and immunohistochemical distribution of alpha smooth muscle actin, desmin and vimentin in the testes and epididymis of Enyalius bilineatus, Enyalius perditus and Urostrophus vautieri, which are representatives of family Leiosauridae, in order to help developing a database on the reproductive biology of these lizards, which could be compared to that of other reptile species and vertebrates. The herein studied specimens are deposited in the Herpetological Collection of Federal University of Juiz de Fora. The animals? epididymis and testes were removed and sent to the Histology and Embryology Laboratory (UFRRJ), where they were fixed, processed and then subjected to histological and immunohistochemical techniques. The shape of the testes varies reasonably among the studied leiosauridae. These organs are covered by the tunica albuginea and hold septa forming lobes, where the seminiferous tubules are located in. The epididymis of these lizards are convolute ducts internally coated by an epithelium, whose shape ranges from simple cylindrical to simple cubic with stereocilia. The immunohistochemical analysis applied to the testes of the herein studied lizards showed strong positive reaction to the alpha smooth muscle actin in the tunica albuginea, interstitial tissue, and in endothelial cells of blood vessels. Desmin showed strong immunoreactivity in the testicular albuginea of E. bilineatus and moderate immunoreactivity in E. perditus and U. vautieri; however, only E. bilineatus showed immunostaining in the interstitial tissue region. The endothelial cells of blood vessels showed positive immunoreaction to desmin in the three herein analyzed species. The epididymis showed moderate immunohistochemical reaction to alpha smooth muscle actin in the capsule and in the interstitial tissue, whereas desmin showed positive immunoreaction in the epididymis of E. perditus and E. bilineatus, only. Vimentin did not show immunostaining in the testes and epididymis of the three analyzed lizards. The consistent results found in the current study provide additional data on the reproductive biology of the investigated species. These data may be used for phylogenetic and behavioral comparisons between the herein studied species and other species belonging to family Leiosauridae or other reptiles. / Cap. I Este trabalho investiga, al?m da descri??o histol?gica e histoqu?mica, a presen?a e distribui??o imuno-histoqu?mica de alfa-actina de m?sculo liso, desmina e vimentina nos ov?rios, test?culos e epid?dimos de Enyalius bilineatus, Enyalius perditus e Urostrophus vautieri, representantes da fam?lia Leiosauridae, para ajudar a formar uma base de dados sobre a biologia reprodutiva destes lagartos que possam ser comparados com outras esp?cies de r?pteis, bem como com outros vertebrados. Os esp?cimes estudados encontram-se depositados na Cole??o Herpetol?gica da UFJF. Os ov?rios, epid?dimos e test?culos dos animais foram removidos e encaminhados ao Laborat?rio de Histologia e Embriologia (UFRRJ), onde foram fixados, processados e ent?o submetidos ?s t?cnicas histol?gicas, histoqu?micas e imuno-histoqu?micas. Os ov?rios destes leiosaur?deos s?o ?rg?os pareados, repletos de fol?culos ovarianos, em distintos est?gios de desenvolvimento folicular. Estes s?o revestidos por epit?lio c?bico simples, com uma camada de tecido conjuntivo subjacente, a t?nica albug?nea. Os test?culos encontram-se envolvidos pela t?nica albug?nea e em seu interior cont?m septos que formam l?bulos, nos quais se localizam os t?bulos semin?feros. Os epid?dimos destes lagartos s?o ductos convolutos, revestidos internamente por um epit?lio que varia de cil?ndrico simples a c?bico simples com estereoc?lios. A imuno-histoqu?mica, nos ov?rios dos lagartos estudados, mostra uma rea??o moderada a acentuada para alfa-actina de m?sculo liso na camada da teca e em c?lulas endoteliais dos vasos sangu?neos, enquanto nos test?culos destas esp?cies nota-se uma acentuada rea??o para esta prote?na do citoesqueleto, na t?nica albug?nea, no tecido intersticial e nas c?lulas endoteliais dos vasos sangu?neos. Nos epid?dimos observa-se imunomarca??o para alfa-actina na c?psula e no tecido intersticial destes lagartos. Quanto ao anticorpo desmina, apenas em E. perditus, foi poss?vel imunorrea??o na albug?nea e no estroma ovariano, no entanto, nas tr?s esp?cies analisadas, as c?lulas endoteliais dos vasos sangu?neos demonstraram rea??o positiva a este filamento intermedi?rio. Nos test?culos dos leiosaur?deos estudados, a desmina foi imunolocalizada na albug?nea testicular e nas c?lulas endoteliais dos vasos sangu?neos, entretanto, apenas em E. bilineatus ocorreu imunomarca??o, na regi?o do interst?cio. Nos epid?dimos, a desmina demonstrou imunorrea??o positiva apenas em E. perditus e E. bilineatus. N?o houve rea??o imuno-histoqu?mica para vimentina nos ov?rios, test?culos e epid?dimos dos tr?s lagartos analisados. Este estudo obteve resultados consistentes, fornecendo assim mais dados sobre a biologia reprodutiva das esp?cies aqui investigadas, que poder?o ser utilizados para compara??es filogen?ticas e comportamentais com outras esp?cies da fam?lia Leiosauridae e outros r?pteis. Cap. II Este trabalho investiga, al?m da descri??o histol?gica, a presen?a e distribui??o imuno-histoqu?mica de alfa-actina de m?sculo liso, desmina e vimentina nos test?culos e epid?dimos de Enyalius bilineatus, Enyalius perditus e Urostrophus vautieri, representantes da fam?lia Leiosauridae, para ajudar a formar uma base de dados sobre a biologia reprodutiva destes lagartos que possam ser comparados com outras esp?cies de r?pteis, bem como com outros vertebrados. Os esp?cimes estudados encontram-se depositados na Cole??o Herpetol?gica da Universidade Federal de Juiz de Fora. Os epid?dimos e test?culos dos animais foram removidos e encaminhados ao Laborat?rio de Histologia e Embriologia (UFRRJ), onde foram fixados, processados e ent?o submetidos ?s t?cnicas histol?gicas e imuno-histoqu?micas. O formato dos test?culos varia razoavelmente entre os leiosaur?deos estudados. Estes ?rg?os encontram-se envoltos pela t?nica albug?nea e no seu interior cont?m septos que formam l?bulos incompletos, nos quais se localizam os t?bulos semin?feros. Os epid?dimos destes lagartos s?o ductos convolutos. Estes ductos s?o revestidos internamente por um epit?lio que varia de cil?ndrico simples a c?bico simples com estereoc?lios. A imuno-histoqu?mica revela uma acentuada rea??o positiva para alfa-actina de m?sculo liso nos test?culos dos leiosaur?deos analisados, na t?nica albug?nea e no tecido intersticial, assim como, nas c?lulas endoteliais dos vasos sangu?neos. A desmina apresentou acentuada imunorreatividade na albug?nea testicular em E. bilineatus e moderada em E. perditus e U. vautieri, entretanto, na regi?o do tecido intersticial, apenas em E. bilineatus ocorreu imunomarca??o. Nas tr?s esp?cies analisadas, as c?lulas endoteliais dos vasos sangu?neos demostraram imunorrea??o positiva para desmina. Nos epid?dimos observou-se rea??o imuno-histoqu?mica moderada para alfa-actina de m?sculo liso na c?psula e no tecido intersticial, enquanto a desmina demonstrou imunorrea??o positiva apenas em E. perditus e E. bilineatus. N?o houve imunomarca??o para vimentina nos test?culos e epid?dimos dos tr?s lagartos analisados. Este estudo obteve resultados consistentes, fornecendo assim mais dados sobre a biologia reprodutiva das esp?cies aqui investigadas, que poder?o ser utilizados para compara??es filogen?ticas e comportamentais com outras esp?cies da fam?lia Leiosauridae e outros r?pteis.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:51:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1357885 bytes, checksum: 94cbad5284c486e24d0ad442975d1eda (MD5) Previous issue date: 2010-06-25 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / In Nostoc isolates, the vegetative cells multiplication and differentiation of some of them in heterocyst is the life cycle phase in which biomass production occurs. In other phase, many environmental changes can trigger hormogonium differentiation, a transient and a non-growth state. The use of cyanobacteria strains in biotechnological processes have been studied for many years, however, the production of biomass is influenced, and can be limited, by the fact that the colonies growth intensify the selfshading. Consequently, changes in light intensity and quality received by cells can occur. The aims of this work were: 1) to characterize biomass and pigments production by Nostoc isolates in response to changes in light intensity; 2) to analyze the effect of pre-cultivation and exposure in different light intensities in the same parameters and in cellular differentiation processes; 3) and to relate, for isolate Nostoc CCLFM XXI, growth phases to predominant cellular differentiation processes. The greater biomass production was achieved at 20, 45 and 75 μmoles m-2 s-1, respectively in Nostoc CCLFM I, VIII and XXI. In Nostoc CCLFM I, only phycoerithrin content changed with light intensity, been maximum at 15 μmoles m-2 s-1, decreasing with increasing light intensities. Pigment contents, in Nostoc CCLFM VIII did not vary with light intensities. In Nostoc CCLFM XXI phycocyanin and alophycocyanin contents varied with light intensity, reaching a maximum at 45 μmoles m-2 s-1, been constant up to 105 μmoles m-2 s-1. Biomass pre-cultivated at 15 μmoles m-2 s-1, when exposed to lower light intensities led to an intense akinetes differentiation in Nostoc CCLFM VIII and XXI, fact that did not occur in Nostoc CCLFM I. When biomass pre-cultivated at 75 μmoles m-2 s-1 were exposed to lower light intensities, filaments with smaller cells than vegetative ones were observed, indicating probably, the occurrence of hormogonium differentiation in Nostoc CCLFM I and VIII. When cultivated at 15 μmoles m-2 s-1, Isolate XXI showed intense akinetes differentiation, and when cultivated at 60 μmoles m-2 s-1 it showed distinct cellular differentiation patterns in phases in which biomass production was not observed. Hormogonia were observed only in the early non-growth phase, while akinetes were observed in middle and late non-growth phases. Therefore, there is relation between light intensity and patterns of cellular differentiation. In lowest light intensities the akinetes differentiation predominates over other differentiation process. However, in higher intensity hormogonia and akinetes were observed, with hormogonia associated with the first non-growth phase and akinetes with middle and late nongrowth phase, indicating a sequence in which cellular differentiation occur, probably related with light energy available to photosynthesis. / Em isolados do gênero Nostoc, a multiplicação das células vegetativas e a diferenciação de algumas células em heterócitos em intervalos regulares é a etapa do ciclo de vida em que ocorre a produção de biomassa. Em outra etapa do ciclo de vida, vários fatores do ambiente podem induzir a diferenciação de hormogônios, filamentos nos quais não ocorre produção de biomassa. A aplicação biotecnológica de cianobactérias pode ser limitada pela intensificação do auto-sombreamento durante o crescimento destas em foto-biorreatores. Em conseqüência, pode ocorrer diminuição na intensidade e alteração da qualidade espectral da luz que atinge as células. Os objetivos deste trabalho foram: 1) caracterizar a produção de biomassa e de pigmentos por isolados do gênero Nostoc cultivados em diferentes intensidades luminosas; 2) analisar o efeito do pré-cultivo e subseqüente exposição a diferentes intensidades luminosas sobre os mesmos parâmetros e sobre os processos de diferenciação celular e 3) caracterizar durante o cultivo de Nostoc CCLFM XXI em duas intensidades luminosas, a relação das fases de crescimento com os processos de diferenciação celular predominantes. As maiores produções de biomassa foram obtidas a 20, 45 e 75 μmoles m-2 s-1, respectivamente em Nostoc CCLFM I, VIII e XXI. Em Nostoc CCLFM I, apenas a concentração de ficoeritrina variou com a intensidade luminosa, apresentando-se máxima a 15 μmoles m-2 s-1, e diminuindo com aumentos na intensidade luminosa. As concentrações de pigmentos em Nostoc CCLFM VIII não variaram com a intensidade luminosa. As concentrações de ficocianina e aloficocianina, em Nostoc CCLFM XXI, variaram com a intensidade luminosa, atingindo um máximo à 45 μmoles m-2 s-1, e mantendo-se constantes nas maiores intensidades. O pré-cultivo a 15 μmoles m-2 s-1 e exposição às baixas intensidades luminosas levou, em Nostoc CCLFM VIII e XXI a uma intensa diferenciação de acinetos, o que não ocorreu para Nostoc CCLFM I. Quando o pré-cultivo foi realizado a 75 μmoles m-2 s-1, observou-se, em Nostoc CCLFM I e VIII, filamentos com células menores que as células vegetativas, indicativo de diferenciação de hormogônios. Nostoc CCLFM XXI quando cultivado a 15 μmoles m-2 s-1 apresentou intenso padrão de diferenciação de acinetos, ao passo que o cultivo a 60 μmoles m-2 s-1 apresentou distintos padrões de diferenciação celular nas faixas de parada de produção de biomassa. Nas fases iniciais de cultivo houve predominância de hormogônios, e de acinetos nas fases intermediária e final da curva. Desta forma, há uma relação entre intensidade luminosa e diferenciação celular, sendo que as mais baixas levam à diferenciação de acineto. No entanto, em maiores intensidades, observase tanto diferenciação de hormogônios quanto de acinetos, sendo os primeiros observados na primeira parada de produção de biomassa e os acinetos nas faixas mais tardias de parada, indicando uma sequência na ocorrência destes processos relacionada à disponibilidade de energia luminosa adequada à fotossíntese.

Septinas constituem uma família de proteínas de ligação a GTP que foram inicialmente identificadas em levedura Saccharomyces cerevisiae, mas também estão presentes em outros eucariotos com exceção de plantas. Septinas são purificadas de leveduras, Drosophila e cérebros de mamíferos na forma de filamentos, porém o mecanismo através do qual acorre a formação destes filamentos ainda não é muito bem compreendido. Septinas são constituídas de três regiões principais: um N-terminal variável, um domínio central GTPase altamente conservado e um domínio coiled-coil C-terminal. O gene SEPT4 foi identificado por M. Tanaka e colaboradores a partir do cDNA de cérebro humano e apresentou duas distintas transcrições: Bradeiona ? e ?. Interessantemente, além de cérebro e coração, as proteínas Bradeiona Α e Β. são detectadas somente em câncer do cólon, reto, próstata e melanoma maligno. Neste trabalho, o gene da proteína Bradeiona Β foi subclonado em um vetor de expressão bacteriano, produzido em E. coli e purificado com sucesso. O espectro de dicroísmo circular (CD) mostrou o perfil característico de proteínas com hélices a na estrutura secundária. Resultados de cromatografia de exclusão molecular (SEC) e espalhamento dinâmico de luz (DLS) indicam que a septina Bradeina foi produzida na forma de um estável oligômero com características monodispersivas, que foi subseqüentemente cristalizado em PEG6000. A atividade GTPase da Bradeiona Β foi comprovada através da técnica de eletroforese capilar (CE), mostrando-se absolutamente dependente de íons Mg2+. Inibição da atividade GTPase foi verificada em altas concentrações de Mg2+ (maiores que 5 mM). Com a finalidade de caracterizar os domínios preditos da Bradeiona Β (Fragmento Conservado e domínio GTPase), essas regiões foram previamente definidas, expressas em E. cozi e purificadas com sucesso. Resultados de CD, SEC, espectroscopia de fluorescência e NMR-600MHz indicam que o FC foi produzido na forma de um estável monômero com pouca estrutura secundária regular. Resultados de DLS e CD indicam que a fusão 6xHis-DGTPase foi produzida na forma de um oligômero com a presença de hélices a na estrutura secundária. A fusão 6xHis-DGTPase mostrou-se instável a altas concentrações na ausência de imidazol. A atividade GTPase da fusão GST+DGTPase foi comprovada, similarmente a Bradeiona , através da técnica de CE. Novamente, verificou-se dependência de íons Mg2+ (para a atividade catalítica) e inibição em altas concentrações de Mg2+. A fusão GST+DGTPase também foi capaz de hidrolisar ATP. Espera-se que as informações relatadas neste estudo proporcionem um alicerce para estudos estruturais/funcionais futuros das proteínas Bradeiona Α e Βoutras septinas. / Septins form a class of eukaryoyic guanine nucleotide-binding proteins that were first identified in budding yeast. Septins purified from yeast, Drosophila and mammalian brain form filaments, however the mechanism by which the filaments assemble is unclear. Septins have a highly conserved structure, which includes a central GTP-binding domain, a variable N-terminal region, and most septins also contain a coiled coil domain at the Cterminus. Bradeion p is one of the splice variants of the human septin gene, SEPT4, recently isolated by expression screening of an adult human brain cDNA library. The Bradeion gene resides at 17q23, and has been shown to present specific expression in both human colorectal cancer, urologic cancers and malignant melanoma. In order to characterize the GTPase activity of Bradeion Β , the protein was successfully expressed in E. coli and purified. The recombinant protein was characterized by circular dichroism (CD), dynamic light scattering (DLS) and a novel non-radioactive enzyme assay, which utilizes capillary electrophoresis (EC) to monitor GTP hydrolysis. The CD spectrum exhibited the typical shape characteristic of the presence of helical elements of secondary structure and the DLS pattern was indicative of a monodisperse solution, which was readily crystallized in the presence of PEG6000. GTP hydrolysis was shown to be Mg2+ dependent within the low millimolar range but at 5 mM was inhibitory. In order to characterize the predicted domains of Bradeion Β, these defined regions were successfully expressed in E. cozi and purified. The CD spectrum of CF exhibited the shape typically found for non-regular structure. The results of fluorescence spectroscopy, gel filtration (SEC) and NMR-600MHz also corroborate with the CD results indicating an irregular structure. The fusion protein 6xHis-DGTPase exhibited a CD spectrum with the typical shape characteristic of the presence of helical elements but was show to be instable at high concentrations in the absence of imidazole. To characterize the GTPase activity of the fusion protein GST+DGTPase, the CE technique was used to monitor GTP hydrolysis. Analysis by CE showed that GST+DGTPase was functional, since both GTP and ATP hydrolysis was observed in a Mg2+ dependent manner. This work provides novel approaches, which should aid in the fbture study of the structure and fùnction of Bradeion Α e Β, others septins and related GTPases.