Bifidobacterium spp. são microrganismos probióticos que podem ser incorporados em produtos alimentícios. Entretanto, para que seus efeitos benéficos à saúde humana ocorram, é necessário que o número de células viáveis na hora do consumo seja, no mínimo, 106UFC/g. As bifidobactérias são sensíveis à elevada acidez e, por isso, torna-se necessária a busca por métodos que possam proteger a integridade da célula, sendo um deles a microencapsulação. Em uma primeira etapa do trabalho, Bifidobacterium lactis foi encapsulado em micropartículas de alginato e alginato modificado (alginatoquitosana, alginato-quitosana-sureteric e alginato-quitosana-acryl-eze) e sua sobrevivência e liberação das micropartículas em fluidos simulados do trato gastrintestinal foram mensuradas utilizando-se soluções tampão com pH 1,5, 5,6 e 7,5, na presença e na ausência de pepsina (3g/L), pancreatina (1g/L) e bile (10g/L). A liberação de células das micropartículas teve uma relação direta com o pH do tampão. A microencapsulação aumentou a taxa de sobrevivência de B. lactis, em comparação com células não encapsuladas, em soluções tampão com pH 1,5 sem a presença de enzimas. Em suco gástrico simulado com enzimas digestivas, por outro lado, foi observado que a pepsina proporcionou um efeito protetor sobre as células de B. lactis, e nesse caso, as taxas de sobrevivência do microrganismo estavam diretamente relacionadas com o grau de injúria das células. Em uma segunda etapa do trabalho, leites fermentados com Streptococcus salivarius ssp. thermophilus e Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus foram enriquecidos com culturas de Bifidobacterium lactis submetidas a quatro tratamentos diferentes: desidratação em temperatura ambiente, liofilização/congelamento, encapsulação em alginatoquitosana e encapsulação em alginato-quitosana-acryl-eze. A população sobrevivente de B. lactis foi determinada semanalmente no leite fermentado e também após tratamento simulando condições do trato gastrintestinal. Os resultados indicaram que na ausência de pepsina, as populações de B. lactis foram reduzidas drasticamente após o contato com tampão pH 1,5, não sendo possível a detecção de células viáveis livres ou encapsuladas após 120 minutos de teste. A presença de pepsina influenciou positivamente a recuperação de células viáveis de B. lactis em todas as condições testadas, mas as culturas na forma desidratada apresentaram melhores resultados que as culturas microencapsuladas ou liofilizadas. No caso do leite fermentado contendo as células desidratadas, a população de B. lactis, após o tratamento em suco gástrico com enzimas, foi superior à detectada no produto antes desse tratamento. Conclui-se que a microencapsulação não foi eficiente para proteger B. lactis em leite fermentado contra injúrias causadas pelo trato gastrintestinal simulado. / Bifidobacterium spp. are microorganisms that can be added to foods. However, the benefits for the human health occur when the numbers of viable cells in the moment of the consumption is at least 106CFU/g. Bifidobacteria are acid sensitive, and methods to protect cell integrity, such as microencapsulation, are needed. In the first part of the present study, Bifidobacterium lactis was encapsulated in microparticles of alginate and modified alginate (alginate-chitosan, alginate-chitosan-sureteric and alginate-chitosan-acryl-eze) and the survival and release from microparticles in simulated gastrointestinal conditions were measured, using buffers (pH 1.5, 5.6 and 7.5), in the absence and presence of pepsin (3g/L), pancreatin (1g/L) and bile. The release from microparticles presented a direct relationship with pH. When the pH was 1.5 and no enzyme was present, encapsulation improved the survival of B. lactis, when compared to free cells. However, pepsin had a protective effect on B. lactis, and the survival rate was directly related to the cells injury degree. In the second part of the study, fermented milk samples containing Streptococcus salivarius ssp. thermophilus and Lactobacillus delbrueckii ssp. Bulgaricus were supplemented with B. lactis submitted to four different treatments: dehydration at room temperature, freeze drying, encapsulation in alginate-chitosan and encapsulation in alginate-chitosaacryl-eze. The number of viable B. lactis cells in the fermented milk was determined weekly and also after treatment with simulated gastrointestinal conditions. Results indicated that in the absence of pepsin, the number of viable cells decreased significantly after contact with buffers (pH 1.5), and no viable cell was detected after 120 minutes. Pepsin improved the recovery of viable cells in the assayed gastric conditions, being the dehydrated cultures more resistant than other cultures. In fermented milk containing the dehydrated cells, the number of viable cells increased after treatment with simulated gastrointestinal fluids. Microencapsulation was not an effective procedure to protect B. lactis in fermented milk against injury caused by the simulated gastrointestinal tract.

Os mexilhões cultivados no litoral Norte de São Paulo, município de Ubatuba, são comercializados in natura, constituindo risco à população. Com o crescimento da atividade é possível sugerir a implantação de uma unidade de processamento de mexilhões que promova um aumento do tempo de armazenamento, facilitando a comercialização e permitindo a exportação, além de fornecer ao consumidor um produto de melhor qualidade. Os mexilhões foram submetidos ao processamento por cocção, congelamento e armazenamento, sendo então determinados o ponto de congelamento, a velocidade de congelamento a as curvas de congelamento do mexilhão semidesconchado. A qualidade microbiológica e físico-química do produto foi avaliada. O beneficiamento do mexilhão iniciou-se com a cocção por imersão em água à ebulição por 10 minutos. Após a retirada das conchas, os mexilhões foram congelados individualmente IQF (Individually Quick Frozen) a –20ºC e armazenados a -18ºC durante 90 dias. A curva de congelamento do mexilhão apresentou forma geral típica, com o ponto de congelamento situando-se na faixa de zero a –1,5ºC; a velocidade de congelamento variou de 2 cm/h a 3,3 cm/h, conforme a disposição dentro da câmara de congelamento. Os resultados físico-químicos mostraram que não houve diferença significativa no valor nutricional dos mexilhões in natura, processados e armazenados, apresentando os teores médios de 7,4mg/100g de proteínas, 5,8 mg/100g de carboidratos e 1,4 mg/100g de lipídeos. Os valores encontrados para BNVT, TMA e pH no mexilhão in natura foram, 4,3 mg/100g; 2,0 mg/100g e 6,2, respectivamente, estando dentro dos limites estipulados pela legislação de 30mg/100g para BNVT e 4 mg/100g de TMA. Após o processo de cocção e congelamento houve um aumento no valor do pH para 6,9, enquanto o BNVT manteve-se na média. Todas as amostras de mexilhão in natura atenderam aos padrões microbiológicos estabelecidos pela legislação (RDC, nº12 de 02 de janeiro de 2001). Salmonella sp e Vibrio parahaemolyticus não foram isoladas em nenhuma das amostras de mexilhões in natura, cozidos, congelados e armazenados. O tratamento térmico foi efetivo no controle dos coliformes fecais, redução de coliformes totais, Staphylococcus coagulase+ e psicrotróficos. O processo de congelamento reduziu a contagem de coliformes totais e Staphyloocccus coagulase+, mantendo-se inalterados durante o armazenamento a –18ºC por 90 dias. Concluiu-se que o beneficiamento do mexilhão pelo processo combinado de cocção, congelamento e armazenamento assegura a qualidade físico-química e microbiológica do produto, podendo ser adotado como padrão para industrialização. / The mussels cultivated in the coast North of São Paulo, city of Ubatuba, are commercialized in natura, constituting risk to the population. With the growth of the activity it is possible to suggest the implantation of a unit of mussel processing that promotes an increase of the storage time, facilitating the commercialization and allowing the exportation, besides supplying to the consumer a product of better quality. The mussels had been submitted to the processing for cooking, freezing and storage, being then determined the freezing point, the speed of freezing to the curves of freezing of the semidesconchado mussel. The microbiological quality and physicochemical of the product were evaluated. The processing of the mussel was started with the immersion in boiling water per 10 minutes. After the withdrawal of the shells, the mussels had been frozen individually IQF (Individually Quick Frozen) at -20ºC and stored at -18ºC during 90 days. The curve of freezing of the mussel presented typical general form, with the freezing point placing from zero to -1,5ºC; the freezing speed varied from 2 cm.h-1 to 3,3 cm.h-1, as the disposal

<p>Unsafe food is responsible for causing more than 600 million cases of foodborne illnesses and 420,000 deaths each year. These foodborne illnesses have direct impact on growth and development in children, food and nutrition security, national economies, and sustainable development. Food manufactures, research institutions, governments, and consumers, together, play a pivotal role in establishing and implementing effective food safety systems. <em>Salmonella</em> spp. and <em>Listeria monocytogenes</em> are recognized as major threats to global food safety and security among other 31 known and unknown pathogens associated with foodborne illnesses and deaths. Since these pathogens can be transmitted through contaminated food and water, contaminated environmental surfaces, and subsequently from environment to food via cross-contamination, there is an urgent need for data-driven approaches to identify key points of contamination along the food systems to suggest interventions. While it is important to enhance food safety research in developed economies, developing capacity to enable conditions for food safety research translation and practice in developing economies is crucial for global food safety. In this dissertation, we presented three different research projects as summarized below-</p> <p>In Chapter 2 “Evaluating the efficacy of celery powder in ready-to-eat deli style turkey breast against <em>L. monocytogenes</em> under ideal and temperature abuse conditions”. In this study, we artificially inoculated “clean label” deli style turkey breast formulated with celery powder to evaluate the efficacy of this natural antimicrobial in inhibiting the growth of this pathogen. We stored the inoculated samples at ideal (4 °C) and abuse temperature conditions (7 °C, 10 °C, and 15 °C) for 21 d mimicking the possible temperature abuse along the cold chain, transportation, and at consumer refrigerator. Our findings indicated that although deli meat samples stored at 4 °C and 7 °C did not achieve significant growth of <em>L. monocytogenes;</em> increasing temperatures to 10 °C and 15 °C led to significant increase in the growth rate of this pathogen. This study evaluates the use and effectiveness of celery powder as an antimicrobial used by deli meat processors against <em>L. monocytogenes</em> in deli products. These data underscore the importance of maintaining refrigeration temperatures to complement the efficacy of antimicrobials. </p> <p>Chapter 3 “Investigating sanitary solutions to <em>L. monocytogenes, Salmonella enterica</em> ser. Typhimurium, and <em>Pseudomonas aeruginosa</em> dry surface biofilms”. In this study, we developed <em>in vitro</em> mono- and mix-culture dry surface biofilm (DSB) models of <em>L. monocytogenes, Salmonella enterica</em> ser. Typhimurium, and <em>Pseudomonas aeruginosa</em> leveraging the EPA MLB SOP MB-19 standard protocol using the CDC Biofilm Reactor and evaluated sanitation control strategies currently adopted by low-moisture food (LMF) food processors to determine their ability to inactive DSB, a decidedly difficult reservoir to eliminate. This study targets multiple biological hazards in a research area with very limited publicly available data and is the first of its kind to refine mono- and multi-species <em>in vitro</em> DSB models that mimic LMF facility conditions and combinations of relevant microorganisms for use cases (e.g., EPA adoption). The findings from this study indicated that these foodborne pathogens could form DSBs and serve as a source of pathogen reservoir and cross-contamination. Results from the efficacy testing of sanitizer and microfiber swabbing suggested that current sanitation practices may not be sufficient to remove or inactivate DSBs. This study will define future needs and new strategies to improve confidence in sanitation efficacy with private sector practitioners.</p> <p>Chapter 4 “Enhancing research for development opportunities for Minority Serving Institutions: a case study in food safety”. Most developing economies have limited viable food safety systems due to underdeveloped research capabilities, competing resource demands, and insufficient enabling conditions, which undermines food security. United States Minority Serving Institution (MSIs) researchers and outreach specialists are familiar with and arguably best positioned to address global food safety and security challenges and needs, but MSIs implement limited research for development programs (e.g., U.S. university-led Feed the Future (FTF) Innovation Labs (ILs) funded by the United States Agency for International Development (USAID)) aimed to solve these challenges. Recognizing this opportunity, the Feed the Future Innovation Lab for Food Safety (FSIL) led by Purdue University in partnership with Cornell University, created and implemented an MSI-led research partnerships for global food safety research programs. In this chapter, we put together the process of a three-stage Request for Applications (RFA) process, which included non-competitive and competitive stages to encourage partnership and to refine ideas.  At the end of this process, seven individuals were invited to submit full proposals; two were funded. Intentional research opportunities and partnerships are essential to strengthen MSI competitiveness for research for development programs that develop and scale technologies to address urgent global agriculture, food security, and safety challenges.</p>

Food is one of the main routes by which xenobiotic (synthetic) chemicals enter the body of man and wildlife. The routes could be from wrappers in which the foods are presented with possible transfer of the compounds to consumers, hence need for regular screening. The research work is aimed at investigating possible prevalence of phthalate esters in selected foods (cheese, polony and vienna) and their plastic wrappers from commercial stores in Tshwane metropolis. Food samples were purchased from selected stores, taken to the laboratory and stored at 4oC until analysed. Analysis was done by soxhlet extraction while determination and quantification of phthalates was carried out using Gas Chromatography-Flame Ionization Detection (GC-FID). Quality assurance of the process was by standard addition of the phthalate ester standards. Results obtained revealed good chromatographic separation of the analysed esters which ranged from 5.55 min for Dimethyl phthalate (DMP) to 8.96 min for Benzylbutyl phthalate (BBP). Instrumental detection limit of the esters varied from 0.03 - 0.05 μg/kg. The percentage recovery of the phthalate esters ranged from 75 – 90% from spiked cheese samples; 33 – 66% from spiked polony samples and 69 – 99% from spiked vienna samples. These recoveries are quite acceptable and applicable to the analysis and quantification of the compounds in the samples with the exception of Dibutyl phthalate (DBP) (33%); DMP (34%) and BBP (46 %) in polony samples. Results from chromatographic quantification revealed the absence of or non-detection of most of the analysed phthalate esters in the selected food samples. However, level of 0.031 μg/kg of BBP - 0.816 μg/kg of DMP were obtained in some of the analysed samples. / Environmental Sciences / M.Sc. (Environmental Science)

Para obter resultados rápidos e confiáveis que permitam o monitoramento da segurança microbiológica de alimentos, seja pela indústria ou pelos órgãos de fiscalização, diversos métodos alternativos têm sido desenvolvidos para a detecção e quantificação de Salmonella. Os propósitos do estudo foram avaliar a viabilidade de emprego do QIAamp® DNA Stool Mini Kit para extração e purificação de DNA de Salmonella; validar ensaios baseados em PCR-tempo real (PCR-RT) para quantificar o DNA de Salmonella empregando ttr ou tuf e desenvolver um ensaio para quantificar Salmonella baseado na transcriptase reversa-PCR-tempo real (RT-PCR-RT). Para avaliação do QIAamp® DNA Stool Mini Kit empregaram-se fezes coletadas diretamente do reto de animais infectados ou não, sendo estas últimas artificialmente contaminadas e submetidas à extração segundo protocolo do fabricante. As amostras de DNA isoladas foram quantificadas empregando um ensaio Salmonella-específico PCR-RT utilizando como alvo o lócus ttr. O mesmo ensaio foi utilizado para células de Salmonella provenientes de meio de cultura. O ensaio PCR-RT baseado no alvo tuf foi validado empregando-se primeiramente cepas de diferentes sorotipos de Salmonella e de outras Enterobacteriaceae. A seguir sua eficiência foi avaliada para alimentos-modelo (ave e suíno) artificialmente contaminadas com elevada (&#8776; 6 log UFC/mL) e baixa (&#8776; 2 log UFC/mL) população de Salmonella Typhimurium DT 104. A validação do método quantitativo de Salmonella por RT-PCR-RT foi realizada primeiramente com células em meio de cultura e posteriormente nos mesmos alimentos-modelo utilizados para PCR-RT. Em ambos os métodos, alíquotas dos alimentos-modelo foram mantidas a 20 ºC e a 8 ºC, sendo examinadas em diferentes tempos pós-inoculação. Como controle empregou-se a enumeração de microrganismos mesófilos totais e de Salmonella por técnicas convencionais. A taxa de recuperação de Salmonella em fezes suínas artificialmente inoculadas, após tratamento com QIAamp® DNA Stool Kit, variou entre 25% a 50%, dependendo da quantidade inicial de células. Empregando o DNA extraído e submetendo-o à PCR-RT para o ttr obteve-se limite de detecção de 2,8 log UFC eq/g de fezes; método que foi menos sensível que o convencional. A quantificação de Salmonella por PCR-RT empregando tuf apresentou limite de detecção menor que 1 log UFC eq. Os resultados obtidos com este método, empregando-se células em meio de cultura ou alimentos-modelo, foram, de maneira geral, ligeiramente inferiores aos do método convencional. A eficiência de amplificação para PCR-RT e tuf foi de 94%. O método RT-PCR-RT apresentou limite de detecção semelhante ao obtido com o ttr (2 log UFC eq) e sua eficiência de amplificação foi de 100%. Observou-se que tuf é expresso na fase logarítmica de multiplicação bacteriana, o que o torna um bom indicador da viabilidade de Salmonella. / In order to get fast and trustworthy results that allow monitoring the microbiological food safety either by industries or governmental agencies, diverse alternative methods have been developed for Salmonella detection and quantification. The purposes of this study were to evaluate the viability of the use of QIAamp® DNA Stool Mini Kit for Salmonella DNA extraction and purification; to validate assays based on real time-PCR (PCR-RT) to quantify Salmonella DNA by using ttr or tuf, and to develop an assay to quantify Salmonella based on reverse transcriptase- PCR-real time (RT-PCR-RT). For QIAamp® DNA Stool Mini Kit evaluation feces taken directly from the rectum of infected or health animals were used, with the former being artificially contaminated. Samples were submitted to DNA extraction, according to manufacturers protocol. The isolated DNA were quantified using a Salmonella-specific PCR-RT targeting the ttr locus. The same assay was used for Salmonella cells originated from culture medium. The PCR-RT assay with tuf as target was first validated employing different Salmonella serovars and other Enterobacteriaceae strains. After, its efficiency was evaluated on food-models (chicken and swine) spiked with high (&#8776; 6 log CFU/mL) and low (&#8776; 2 log CFU/mL) Salmonella Typhimurium DT 104 populations. The validation of the quantitative RT-PCR-RT method was first conducted with cells grown in culture medium, and then in the same food-model used for PCR-RT. For both methods aliquots of foodmodels were maintained at 20 ºC and 8 ºC being evaluated at different incubation times. Enumeration of total mesophilic microorganisms and Salmonella based on conventional methods were used as controls. The DNA recovery rate in swine feces artificially inoculated, after QIAamp® DNA Stool Mini Kit treatment, was between 25% to 50% depending the initial amount of cells. Using the extracted DNA and submitting it to PCR-RT for ttr a detection level of 2,8 CFU eq/g of feces was obtained. This method showed lower sensitivity than the conventional. Salmonella quantification by PCR-RT employing tuf showed a detection level lower than 1 log CFU eq. The results obtained with this method and cells suspended in culture medium or in food-model systems were, in general slightly lower that those obtained with the conventional method. The efficiency of amplification for PCR-RT tuf was 94%. Detection limit of RT-PCR-RT was similar to that of ttr (2 log CFU eq) and efficiency of amplification was 100%. tuf was expressed in logarithmic phase of bacteria growth curve showing that it is a good viability indicator for Salmonella.

A questão da segurança alimentar vem ganhando atenção global face as milhões de vítimas de doenças transmitidas pelos alimentos. Mudanças demográficas, econômicas e sociais têm provocado transformações nas sociedades que resultam em maiores riscos à saúde pública. A difusão do comércio de alimento de rua, principalmente nos grandes centros urbanos, pode ser considerada um forte reflexo dessas mudanças. Os bentôs constituem um lanche ou refeição pronta para consumo, considerado o primeiro alimento de rua no Japão, há mais de um século. Em vista das características de comercialização e dos alimentos envolvidos questionou-se a qualidade microbiológica e nutritiva de bentôs comercializados no bairro oriental em São Paulo. Foram analisadas 60 amostras coletadas durante a primavera e o verão e classificadas segundo seu risco epidemiológico. A composição variou de preparações à base de pescado cru às refeições completas. Fez-se a determinação de macronutrientes e a pesquisa de microrganismos indicadores, Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Bacillus cereus e Salmonella spp. O valor nutritivo oscilou bastante, sendo a proporção média em relação ao valor energético total igual a 16% de proteína, 19% de lipídeos e 65% de carboidratos. O valor energético das porções variou de 136 a 885Cal. 65% das amostras foram observadas em condições higiênicas insatisfatórias. Dentre as bactérias patogênicas, B. cereus apresentou o maior risco percentual, sendo que 40% das amostras estavam fora dos padrões considerados seguros. Não houve diferença estatística na contagem microbiana em relação à época de coleta ou ao tipo de amostra. A constatação de que 73,3% das amostras encontravam-se impróprias para consumo pode se agravar, em vista das características intrínsecas e de conservação observadas. O consumo de bentôs representa um perigo potencial à saúde, sendo necessários maiores investimentos em educação em saúde a todos os envolvidos na cadeia alimentar, incluindo os consumidores, como uma forma efetiva de inibir os riscos à saúde pública. / Food safety has become one of the biggest concerns to public health authorities, in view of the millions of victims of foodborne diseases world spread. Face to the social and economical changes in the societies, the public health risks are arising. As a reflex, the popularity of street food commerce exposes the consumers\' health to other threats. Bento is an ancient Japanese tradition of bringing ready-to-eat meals wherever you are, which surpassed the modem way of life and is still a convenience way to have a fast meal. But face to the trading features and composition its quality is doubtful. Therefore, the aim of this study was to evaluate the nutritional and microbiological qualities of bentos sold at the oriental district, in São Paulo. Sixty samples were purchased during spring and summer seasons from 17 points of sale and they were classified according to their epidemiological risk. The macronutrients were determined and the sanitary conditions were evaluated through the research of coliform organisms, Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Bacillus cereus and Salmonella spp. The samples composition ranged from raw fish to :full course meals. The nutritive value presented a large variation and the average proportions of macronutrients in relation to the total energy value was 16% of protein, 19% of lipids and 65% of carbohydrates. The portion energy value ranged from 136 to 885Cal. B. cereus posed the greatest percentage risk of contamination, among the pathogens. The hygienic conditions of the bentos were critical in 65% of the samples. No statistical difference was observed in the microbiological counts related to the sample collection season or its sort. In general, 73.3% of the samples were unsuitable for consumption and considering the time-temperature abuse such proportion can reach higher degrees. The consumption of bentos poses a potential health hazard, showing to be necessary greater investments in health education for every sector of the food chain, including the consumers, as an effective way of inhibiting the risks to public health.

A questão da segurança alimentar vem ganhando atenção global face as milhões de vítimas de doenças transmitidas pelos alimentos. Mudanças demográficas, econômicas e sociais têm provocado transformações nas sociedades que resultam em maiores riscos à saúde pública. A difusão do comércio de alimento de rua, principalmente nos grandes centros urbanos, pode ser considerada um forte reflexo dessas mudanças. Os bentôs constituem um lanche ou refeição pronta para consumo, considerado o primeiro alimento de rua no Japão, há mais de um século. Em vista das características de comercialização e dos alimentos envolvidos questionou-se a qualidade microbiológica e nutritiva de bentôs comercializados no bairro oriental em São Paulo. Foram analisadas 60 amostras coletadas durante a primavera e o verão e classificadas segundo seu risco epidemiológico. A composição variou de preparações à base de pescado cru às refeições completas. Fez-se a determinação de macronutrientes e a pesquisa de microrganismos indicadores, Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Bacillus cereus e Salmonella spp. O valor nutritivo oscilou bastante, sendo a proporção média em relação ao valor energético total igual a 16% de proteína, 19% de lipídeos e 65% de carboidratos. O valor energético das porções variou de 136 a 885Cal. 65% das amostras foram observadas em condições higiênicas insatisfatórias. Dentre as bactérias patogênicas, B. cereus apresentou o maior risco percentual, sendo que 40% das amostras estavam fora dos padrões considerados seguros. Não houve diferença estatística na contagem microbiana em relação à época de coleta ou ao tipo de amostra. A constatação de que 73,3% das amostras encontravam-se impróprias para consumo pode se agravar, em vista das características intrínsecas e de conservação observadas. O consumo de bentôs representa um perigo potencial à saúde, sendo necessários maiores investimentos em educação em saúde a todos os envolvidos na cadeia alimentar, incluindo os consumidores, como uma forma efetiva de inibir os riscos à saúde pública. / Food safety has become one of the biggest concerns to public health authorities, in view of the millions of victims of foodborne diseases world spread. Face to the social and economical changes in the societies, the public health risks are arising. As a reflex, the popularity of street food commerce exposes the consumers\' health to other threats. Bento is an ancient Japanese tradition of bringing ready-to-eat meals wherever you are, which surpassed the modem way of life and is still a convenience way to have a fast meal. But face to the trading features and composition its quality is doubtful. Therefore, the aim of this study was to evaluate the nutritional and microbiological qualities of bentos sold at the oriental district, in São Paulo. Sixty samples were purchased during spring and summer seasons from 17 points of sale and they were classified according to their epidemiological risk. The macronutrients were determined and the sanitary conditions were evaluated through the research of coliform organisms, Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Bacillus cereus and Salmonella spp. The samples composition ranged from raw fish to :full course meals. The nutritive value presented a large variation and the average proportions of macronutrients in relation to the total energy value was 16% of protein, 19% of lipids and 65% of carbohydrates. The portion energy value ranged from 136 to 885Cal. B. cereus posed the greatest percentage risk of contamination, among the pathogens. The hygienic conditions of the bentos were critical in 65% of the samples. No statistical difference was observed in the microbiological counts related to the sample collection season or its sort. In general, 73.3% of the samples were unsuitable for consumption and considering the time-temperature abuse such proportion can reach higher degrees. The consumption of bentos poses a potential health hazard, showing to be necessary greater investments in health education for every sector of the food chain, including the consumers, as an effective way of inhibiting the risks to public health.

O aumento do consumo de vegetais frescos e a globalização do mercado de hortaliças e frutas frescas provocaram um aumento na preocupação com as enfermidades transmitidas por alimentos (ETA) associadas a esses produtos. No Brasil, a produção de hortaliças orgãnicas vem crescendo, aproximadamente 40% ao ano. Considerando o exposto, foram analisadas 108 amostras de agrião orgãnico minimamente processado e irradiado coletadas, aleatoriamente, em produtores da região de São Roque, São Paulo, no período de novembro de 2005 a março de 2007, para avaliar a ecologia microbiana e a concentração de vitamina C ao longo da cadeia produtiva. As amostras de agrião orgãnico coletadas no campo e as de minimamente processado apresentaram populações superiores a 3,0 log UFC/g para aeróbios mesófilos, aeróbios psicrotróficos, Pseudomonas spp, coliformes termotolerantes e E. coli. Salmonella spp, E. coli 0157:H7 e L. monocytogenes não foram detectadas ao longo da cadeia produtiva. Comparando o processo mínimo com a combinação processo mínimo e irradiação constata-se que a combinação é mais eficiente uma vez que o processo mínimo seguido de exposição à dose de 1 kGy foi suficiente para reduzir de maneira significativa os diversos grupos de mícrorganismos no agrião. As concentrações de ácido ascórbico, ácido dehidroáscorbico e de vitamina C variaram em todas as etapas de processamento do agrião orgãnico minimamente processado e irradiado. Ao longo da vida-de-prateleira de agrião orgãnico minimamente processado e irradiado, a população de L. monocytogenes foi reduzida em, aproximadamente, 4,5, 5,5 e 5,9 ciclos log de acordo com as doses de 1 kGy, 2 kGye 3 kGy, respectivamente. Comportamento similar pode ser constatado para a população de Salmonella spp,. Os resultados da análise sensorial mostraram que o conhecimento ou não do processo de irradiação pelo consumidor não prejudica a aceitação e a intenção de compra do produto irradiado. Portanto o processo de irradiação visando a melhoria da qualidade de agrião orgânico é factível desde que sejam seguidas as Boas Práticas Agrícolas, Boas Práticas de Produção e Boas Práticas do Processo de Irradiação. / With the increase in the consumption of fresh vegetables and the globalization of the market for fresh fruits and vegetables, the concern with foodborne diseases associated with these products has also increased. In Brazil, the production of organic vegetables has increased approximately 40% per year in the last decade. Considering the above, 108 samples of irradiated, minimally processed, organic watercress from producers in the region of Sao Roque, Sao Paulo, were collected through November 2005 to March 2007, to assess the microbial ecology and vitamin C content. Samples of organic watercress collected at the farm level and at the industry level showed populations higher than 3,0 UFC/g for aerobic mesophilic, psychrotrophic, Pseudomonas spp, fecal coliforms and E. coli. Salmonella, E. coli O157:H7 and L. monocytogenes were not detected along the production chain. Comparing the minimal process and the combination of minimal process and irradiation, the combination was more efficient since even the lower dose (1 kGy) was sufficient to reduce the population of the various groups of microorganisms. The ascorbic acid, dehidroascorbic acid and vitamin C content varied at all stages of minimal processing as well as with the exposed doses of irradiation (1, 2 and 3 kGy). The population of L. monocytogenes decreased approximately 4.5, 5.5, and 5.9 log cycles, depending on the exposed doses, throughout the shelf life of irradiated minimally processed organic watercress. Similar behavior was showed by the Salmonella population. Sensory evaluation results showed that previous knowledge or none by consumers does not interfere with the acceptance and intention of purchase of irradiated minimally processed organic watercress. Thus the process of irradiation to improve the microbiological quality of minimally processed organic watercress is feasible provided that Good Agricultural Practice, Good Practice Production and Good Irradiation Practice are followed.

O aumento do consumo de vegetais frescos e a globalização do mercado de hortaliças e frutas frescas provocaram um aumento na preocupação com as enfermidades transmitidas por alimentos (ETA) associadas a esses produtos. No Brasil, a produção de hortaliças orgãnicas vem crescendo, aproximadamente 40% ao ano. Considerando o exposto, foram analisadas 108 amostras de agrião orgãnico minimamente processado e irradiado coletadas, aleatoriamente, em produtores da região de São Roque, São Paulo, no período de novembro de 2005 a março de 2007, para avaliar a ecologia microbiana e a concentração de vitamina C ao longo da cadeia produtiva. As amostras de agrião orgãnico coletadas no campo e as de minimamente processado apresentaram populações superiores a 3,0 log UFC/g para aeróbios mesófilos, aeróbios psicrotróficos, Pseudomonas spp, coliformes termotolerantes e E. coli. Salmonella spp, E. coli 0157:H7 e L. monocytogenes não foram detectadas ao longo da cadeia produtiva. Comparando o processo mínimo com a combinação processo mínimo e irradiação constata-se que a combinação é mais eficiente uma vez que o processo mínimo seguido de exposição à dose de 1 kGy foi suficiente para reduzir de maneira significativa os diversos grupos de mícrorganismos no agrião. As concentrações de ácido ascórbico, ácido dehidroáscorbico e de vitamina C variaram em todas as etapas de processamento do agrião orgãnico minimamente processado e irradiado. Ao longo da vida-de-prateleira de agrião orgãnico minimamente processado e irradiado, a população de L. monocytogenes foi reduzida em, aproximadamente, 4,5, 5,5 e 5,9 ciclos log de acordo com as doses de 1 kGy, 2 kGye 3 kGy, respectivamente. Comportamento similar pode ser constatado para a população de Salmonella spp,. Os resultados da análise sensorial mostraram que o conhecimento ou não do processo de irradiação pelo consumidor não prejudica a aceitação e a intenção de compra do produto irradiado. Portanto o processo de irradiação visando a melhoria da qualidade de agrião orgânico é factível desde que sejam seguidas as Boas Práticas Agrícolas, Boas Práticas de Produção e Boas Práticas do Processo de Irradiação. / With the increase in the consumption of fresh vegetables and the globalization of the market for fresh fruits and vegetables, the concern with foodborne diseases associated with these products has also increased. In Brazil, the production of organic vegetables has increased approximately 40% per year in the last decade. Considering the above, 108 samples of irradiated, minimally processed, organic watercress from producers in the region of Sao Roque, Sao Paulo, were collected through November 2005 to March 2007, to assess the microbial ecology and vitamin C content. Samples of organic watercress collected at the farm level and at the industry level showed populations higher than 3,0 UFC/g for aerobic mesophilic, psychrotrophic, Pseudomonas spp, fecal coliforms and E. coli. Salmonella, E. coli O157:H7 and L. monocytogenes were not detected along the production chain. Comparing the minimal process and the combination of minimal process and irradiation, the combination was more efficient since even the lower dose (1 kGy) was sufficient to reduce the population of the various groups of microorganisms. The ascorbic acid, dehidroascorbic acid and vitamin C content varied at all stages of minimal processing as well as with the exposed doses of irradiation (1, 2 and 3 kGy). The population of L. monocytogenes decreased approximately 4.5, 5.5, and 5.9 log cycles, depending on the exposed doses, throughout the shelf life of irradiated minimally processed organic watercress. Similar behavior was showed by the Salmonella population. Sensory evaluation results showed that previous knowledge or none by consumers does not interfere with the acceptance and intention of purchase of irradiated minimally processed organic watercress. Thus the process of irradiation to improve the microbiological quality of minimally processed organic watercress is feasible provided that Good Agricultural Practice, Good Practice Production and Good Irradiation Practice are followed.

Para obter resultados rápidos e confiáveis que permitam o monitoramento da segurança microbiológica de alimentos, seja pela indústria ou pelos órgãos de fiscalização, diversos métodos alternativos têm sido desenvolvidos para a detecção e quantificação de Salmonella. Os propósitos do estudo foram avaliar a viabilidade de emprego do QIAamp® DNA Stool Mini Kit para extração e purificação de DNA de Salmonella; validar ensaios baseados em PCR-tempo real (PCR-RT) para quantificar o DNA de Salmonella empregando ttr ou tuf e desenvolver um ensaio para quantificar Salmonella baseado na transcriptase reversa-PCR-tempo real (RT-PCR-RT). Para avaliação do QIAamp® DNA Stool Mini Kit empregaram-se fezes coletadas diretamente do reto de animais infectados ou não, sendo estas últimas artificialmente contaminadas e submetidas à extração segundo protocolo do fabricante. As amostras de DNA isoladas foram quantificadas empregando um ensaio Salmonella-específico PCR-RT utilizando como alvo o lócus ttr. O mesmo ensaio foi utilizado para células de Salmonella provenientes de meio de cultura. O ensaio PCR-RT baseado no alvo tuf foi validado empregando-se primeiramente cepas de diferentes sorotipos de Salmonella e de outras Enterobacteriaceae. A seguir sua eficiência foi avaliada para alimentos-modelo (ave e suíno) artificialmente contaminadas com elevada (&#8776; 6 log UFC/mL) e baixa (&#8776; 2 log UFC/mL) população de Salmonella Typhimurium DT 104. A validação do método quantitativo de Salmonella por RT-PCR-RT foi realizada primeiramente com células em meio de cultura e posteriormente nos mesmos alimentos-modelo utilizados para PCR-RT. Em ambos os métodos, alíquotas dos alimentos-modelo foram mantidas a 20 ºC e a 8 ºC, sendo examinadas em diferentes tempos pós-inoculação. Como controle empregou-se a enumeração de microrganismos mesófilos totais e de Salmonella por técnicas convencionais. A taxa de recuperação de Salmonella em fezes suínas artificialmente inoculadas, após tratamento com QIAamp® DNA Stool Kit, variou entre 25% a 50%, dependendo da quantidade inicial de células. Empregando o DNA extraído e submetendo-o à PCR-RT para o ttr obteve-se limite de detecção de 2,8 log UFC eq/g de fezes; método que foi menos sensível que o convencional. A quantificação de Salmonella por PCR-RT empregando tuf apresentou limite de detecção menor que 1 log UFC eq. Os resultados obtidos com este método, empregando-se células em meio de cultura ou alimentos-modelo, foram, de maneira geral, ligeiramente inferiores aos do método convencional. A eficiência de amplificação para PCR-RT e tuf foi de 94%. O método RT-PCR-RT apresentou limite de detecção semelhante ao obtido com o ttr (2 log UFC eq) e sua eficiência de amplificação foi de 100%. Observou-se que tuf é expresso na fase logarítmica de multiplicação bacteriana, o que o torna um bom indicador da viabilidade de Salmonella. / In order to get fast and trustworthy results that allow monitoring the microbiological food safety either by industries or governmental agencies, diverse alternative methods have been developed for Salmonella detection and quantification. The purposes of this study were to evaluate the viability of the use of QIAamp® DNA Stool Mini Kit for Salmonella DNA extraction and purification; to validate assays based on real time-PCR (PCR-RT) to quantify Salmonella DNA by using ttr or tuf, and to develop an assay to quantify Salmonella based on reverse transcriptase- PCR-real time (RT-PCR-RT). For QIAamp® DNA Stool Mini Kit evaluation feces taken directly from the rectum of infected or health animals were used, with the former being artificially contaminated. Samples were submitted to DNA extraction, according to manufacturers protocol. The isolated DNA were quantified using a Salmonella-specific PCR-RT targeting the ttr locus. The same assay was used for Salmonella cells originated from culture medium. The PCR-RT assay with tuf as target was first validated employing different Salmonella serovars and other Enterobacteriaceae strains. After, its efficiency was evaluated on food-models (chicken and swine) spiked with high (&#8776; 6 log CFU/mL) and low (&#8776; 2 log CFU/mL) Salmonella Typhimurium DT 104 populations. The validation of the quantitative RT-PCR-RT method was first conducted with cells grown in culture medium, and then in the same food-model used for PCR-RT. For both methods aliquots of foodmodels were maintained at 20 ºC and 8 ºC being evaluated at different incubation times. Enumeration of total mesophilic microorganisms and Salmonella based on conventional methods were used as controls. The DNA recovery rate in swine feces artificially inoculated, after QIAamp® DNA Stool Mini Kit treatment, was between 25% to 50% depending the initial amount of cells. Using the extracted DNA and submitting it to PCR-RT for ttr a detection level of 2,8 CFU eq/g of feces was obtained. This method showed lower sensitivity than the conventional. Salmonella quantification by PCR-RT employing tuf showed a detection level lower than 1 log CFU eq. The results obtained with this method and cells suspended in culture medium or in food-model systems were, in general slightly lower that those obtained with the conventional method. The efficiency of amplification for PCR-RT tuf was 94%. Detection limit of RT-PCR-RT was similar to that of ttr (2 log CFU eq) and efficiency of amplification was 100%. tuf was expressed in logarithmic phase of bacteria growth curve showing that it is a good viability indicator for Salmonella.