Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2008. / Submitted by Jaqueline Oliveira (jaqueoliveiram@gmail.com) on 2008-12-08T15:39:31Z No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO_2008_JoaoPauloFigueiroLongo.pdf: 1396472 bytes, checksum: 17c87181fe0c1ec9b0fb4788d415cbe0 (MD5) / Approved for entry into archive by Georgia Fernandes(georgia@bce.unb.br) on 2009-02-16T15:45:06Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO_2008_JoaoPauloFigueiroLongo.pdf: 1396472 bytes, checksum: 17c87181fe0c1ec9b0fb4788d415cbe0 (MD5) / Made available in DSpace on 2009-02-16T15:45:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO_2008_JoaoPauloFigueiroLongo.pdf: 1396472 bytes, checksum: 17c87181fe0c1ec9b0fb4788d415cbe0 (MD5) / O tratamento atual para o câncer de boca é feito através de cirurgia, radioterapia, quimioterapia ou uma associação destas modalidades terapêuticas. Por promoverem graves efeitos adversos aos pacientes, constantes esforços são tomados no desenvolvimento de novos protocolos terapêuticos que possam substituir ou auxiliar os tratamentos convencionais. A Terapia Fotodinâmica (TFD) é uma alternativa que tem sido utilizada clinicamente com sucesso para o tratamento de tumores superficiais com efeitos colaterais mínimos. Esta dissertação teve como objetivo a avaliação da aplicação da TFD mediada pela Alumínio-Cloro-Ftalocianina (AlClFt) em formulação lipossomal sobre o Câncer de Boca em modelos experimentais in vitro e in vivo. Experimentos in vitro utilizando células derivadas de carcinoma epidermóide bucal humano (linhagem OSCC) demonstraram alta eficiência daTFD na destruição destas células tumorais. Para os experimentos in vivo, foram induzidos três diferentes modelos experimentais: (1) indução química pela aplicação tópica do carcinógeno 4-NQO na língua de camundongos Swiss; (2) injeção das células OSCC no subcutâneo dorsal de camundongos nude-Balb/c; (3) injeção de células derivadas do tumor de Ehrlich na lingua de camundongos Swiss. A análise histológica dos três modelos experimentais monstrou que a TFD atua na destruiçao tumoral pela (1) indução de citotoxidade direta às células tumorais e (2) pela promoção de efeitos lesivos nos vasos do microambiente neoplásico, que culminaria no desenvolvimento de necrose tumoral por hipóxia. Os resultados apresentados indicam excelentes perspectivas para a utilização da TFD mediada pela AlClFt em ensaios clínicos posteriores. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Surgery, chemotherapy, radiotherapy or a combination of these three methods are common treatments for oral cancer. Although these protocols have demonstrated some effectiveness in oral cancer therapy, they can promote a series of side effects for patients during treatment. Alternatively for these traditional treatments, Photodynamic Therapy (PDT) has been used clinically for oral cancer and precancerous lesions treatment. The objective of this study was the evaluation of PDT mediated by Aluminum-Chlorine-Phtalocyanine (AlClPc) in different in vitro and in vivo oral cancer models. In vitro experiments showed PDT as a high citotoxic treatment in oral squamous cell carcinoma cell line (OSCC). As animal model, three different tumor were induced: (1) 4-NQO carcinogenesis induction in Swiss mice tongue; (2) injection of OSCC cell line in dorsal subcutaneous Balb/c-nude mice; (3) Ehrlich tumor cell injection in Swiss mice tongue. Histopathological analyses showed that PDT produce a (1) direct citotoxicity in tumor cells and (2) vascular damage that could produces hypoxia areas in tumor microambient. Taken together, the results indicated that PDT mediated by AlClPt has excellent perspectives to be applied in future clinical trials.

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2015-09-29T16:35:13Z No. of bitstreams: 1 Anderson F. Suzart Miranda ...2015.pdf: 1366998 bytes, checksum: 77aaca114530e82c696b0330413431a9 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2015-09-29T16:35:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Anderson F. Suzart Miranda ...2015.pdf: 1366998 bytes, checksum: 77aaca114530e82c696b0330413431a9 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-09-29T16:35:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Anderson F. Suzart Miranda ...2015.pdf: 1366998 bytes, checksum: 77aaca114530e82c696b0330413431a9 (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / O câncer é considerado a segunda maior causa de morte em países ocidentais. Nos Estados Unidos da América (EUA) as mortes por câncer anualmente superam a soma das mortes provocadas em guerras como Vietnã, Coreia e as Grandes Guerras Mundiais. Apresentando-se como a mais agressiva das neoplasias dermatológicas, o melanoma cutâneo está associado à cerca de 75% das causas de morte por câncer de pele. Um dos tratamentos estudados para aplicação em pacientes com esta e outras patologias é a Terapia Fotodinâmica (TFD), que é baseada no uso de corantes de baixa toxicidade, que tem seletividade por alguns tecidos ou células e quando ativados por baixas doses de luz visível induzam alterações celulares como a produção ERO. Os fenotiazínicos são moléculas catiônicas com, absorção de luz na região entre 620-660nm, espectro que permite maior penetração nos tecidos, promovendo maior ação do composto em tecidos mais profundos. A irradiação foi feita com luz lazer com λ= 660nm, com potência de 100 mW, densidade de energia de 150 J/cm2 por 1 min. As quantificações de viabilidade celular foram feitas por método colorimétrico, e realizada a leitura em leitor de microplaca a 655 nm. A determinação das IC50 do Azul de Metileno e Azul de Toluidina O foi 2,5 μM e 8,4 μM, respectivamente. Utilizando a TFD observamos que os efeitos citotóxicos dos compostos fenotiazínicos apresentam significância estatística (p<0,05) tanto em AM quanto em ATO. Em microscopia óptica com coloração por May-Grunwald-Giemsa observamos que existe uma aparente diminuição do conteúdo citoplasmático e preservação nuclear nas células tratadas com TFD, além da diminuição da quantidade de células por campo. A avaliação ultraestrutural por Microscopia de varredura mostra células com visível extração citoplasmática após a TFD, apontando uma lesão membranar. Novas avaliações precisam ser feitas como estabelecer um melhor protocolo para aumentar os efeitos da TFD. / Cancer is considered the second leading cause of death in Western countries. In the United States of America (USA) cancer deaths annually exceed the total of deaths in wars like Vietnam, Korea and the Great World Wars. Presenting as the most aggressive of the skin neoplasms, cutaneous melanoma is associated with circa 75% of the deaths from skin cancer. One of the therapies used in patients with melanoma and other pathologies is Photodynamic Therapy (PDT), which is based upon the use of dyes of low toxicity, which has selectivity for certain tissues or cells and low doses when activated by visible light induce cellular changes such as ROS production. The phenothiazic dyes are cationic molecules, absorption of light in the region between 620-660 nm, allowing greater spectrum tissue penetration, promoting higher activity of the compound in deeper tissues. The irradiation was performed with laser light with λ = 660 nm with 100 mW, energy density of 150 J/cm2 for 1 min. Quantification of cell viability was performed by the colorimetric method, and performed a reading in a microplate reader at 655nm. Determination of IC50 of Methylene Blue and Toluidine Blue O was 2.5 μM and 8.4 μM respectively. Using the protocol of PDT observed that there is one of the cytotoxic effects of phenothiazine compounds with statistical significance (p <0.05) in both MB and in TBO. Through optical microscopy by staining with fast Panotic was observed that there is an apparent decrease in the cytoplasm in cells treated with MB and TBO as well as reduced number of cells per field. The Scanning Electron Microscopy, shows cells with cytoplasm extraction, after PDT, indicated possibility, membrane damage. New assessments need to be made to establish a better protocol to potentiate the effects of PDT.

Orientador: Prof. Dr. Maurício Domingues Coutinho Neto / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do ABC, Programa de Pós-Graduação em Ciência & Tecnologia - Química, 2015. / Derivados porfirínicos têm encontrado uso promissor como fotossensibilizadores na terapia fotodinâmica (TFD) por possuírem uma janela de absorção intensa dentro da região terapêutica desejada. Entretanto, processos de agregação em solução, comum a estes compostos, reduzem a eficiência da absorção de luz e da TFD como um todo. Esforços na direção de diminuir o grau de agregação destes compostos com a introdução de substituintes volumosos produziu resultados promissores. O presente trabalho estudou por meio de cálculos químico-quânticos os derivados porfirínico Clorina, Hematoporfirina e seu derivado 21,22 [N,N-dicarbonil-N-4(formilfenil)]-8,12-di[2-(metoxicarbonil)etil]-2,7,13,17-tetrametil-18 vinil2,21,22,23-tetrahidrobenzil[b] porfirina com o objetivo descrever a energética de agregação destes compostos em meio aquoso. Este último composto foi sintetizado recentemente e obteve sucesso em inibir processos de agregação em água. A Teoria do Funcional da Densidade aliada ao funcional M06-2X com função de base 6-311G(d,p) foi utilizada para o cálculo de perfis de interação na configuração H destes compostos em vácuo. A inclusão de efeitos do meio aquoso foi feita via o modelo de soltavação implícito IEF-PCM. Verificou-se também o impacto na energia de interação da introdução do Zinco(II) complexado ao anel porfirínico presente nos compostos. Os resultados obtidos concordaram com verificações experimentais de que a clorina é o composto com a maior tendência de agregação, e que o derivado substituído da Hematoporfirina possui a menor. Em todos os casos, o efeito do meio aquoso foi o de diminuir a energia de agregação quando comparado a resultados no vácuo. O efeito do meio aquoso é ainda mais pronunciado para os compostos substituídos com Zn(II). / Porphyrin derivatives have found promising use as photosensitizers in photodynamic therapy (PDT) for having an intense absorption window within the desired therapeutic area. Nevertheless, aggregation in solution processes, common to these compounds, reduces the efficiency of light absorption and TFD as a whole. Efforts in the direction of decreasing the degree of aggregation of these compounds through the introduction of bulky substituents yielded promising results. The present investigation used quantum-chemical calculation on the porphyrin derivatives Chlorine, Hematoporphyrin and a derivative thereof 21,22-[N, N-dicarbonyl-N-4- (formylphenyl)] - 8,12-Di [2- (methoxycarbonyl) ethyl ] -2,7,13,17-tetramethyl-18 vinil-2,21,22,23-tetrahidrobenzo[b] porphyrn in order to describe the energy aggregation of these compounds in an aqueous medium. This latter compound was synthesized recently and was successful in inhibiting aggregation processes in water. Density Functional Theory coupled to the M06-2X functional and 6-311G (d, p) basis function was used to produce interaction profiles in the H dimer configuration for these compounds vacuum. Solvent effects were included using the implicit solvent IEF-PCM method. The impact on the aggregation energetic due to the introduction of a Zn(II) to the porphyrinic ring was also investigated. Results agree with experimental observations that the chlorine compound has the greatest tendency to aggregate while the substituted hematoporphyrin derivative has the lowest. In all cases, the effect of the aqueous medium was to decrease the dimer interaction when compared to results in vacuum. Moreover, it was observed that effect of the aqueous medium is more pronounced for compounds substituted with Zn(II).

Orientador: Prof. Dr. Anderson Orzari Ribeiro / Dissertação (doutorado) - Universidade Federal do ABC. Programa de Pós-Graduação em Ciência e Tecnologia/Química, 2016. / Organocalcogenetos sao importantes reagentes e intermediarios em sintese organica tendo especial destaque a preparacao e aplicacoes dos derivados vinilicos. Outro ambito com nascente potencial consiste no estudo de propriedades biologicas de derivados organicos contendo grupos funcionais com os atomos de Selenio ou Telurio. Os derivados hipervalentes destes compostos sao inibidores de cisteina proteases envolvidas em diversas patologias por isso sao alvos como cancer, mal de Alzheimer, e doencas causadas por parasitas (malaria, doenca de Chagas, leishmaniose, por exemplo). Para a obtencao desta classe de compostos sao descritas diversas metodologias, entretanto, alguns destes metodos requerem elevadas temperaturas e pressao, varias etapas reacionais, longos tempos reacionais, e baixos rendimentos, dificultando com isso, a sintese destes compostos. O presente estudo visa a obtencao de organocalcogenetos vinilicos derivados de acidos carboxilicos ¿¿,¿À-insaturados para o estudo de sua reatividade frente a tiois e inibicao de cisteina proteases. Embora nao tenha sido exitosa a preparacao dos derivados calcogenados, uma serie de nitro-olefinas, foi testada como inibidores de cisteina proteases e outras proteases tiol-dependentes. Os experimentos realizados permitiram a verificacao de que estes compostos sao capazes de atuarem como inibidores de cisteina proteases e de proteases cuja atividade catalitica seja dependente de tiois. / Organic chalcogenides are useful reagents and intermediates in organic synthesis with special emphasis on the applications of vinyl derivatives. Another brach of investigation lies on the study of biological properties of organochalcogenides. The study the biological properties of organic derivatives with functional groups containing selenium or tellurium atoms hypervalent derivatives of these compounds are inhibitors of cysteine proteases involved in several pathologies, therefore are targets such as cancer Alzheimer's disease bad, and diseases caused by parasites (Malaria, Chagas disease, leishmaniasis, for example). For this class of compounds are described several methods, however, some of these methods require high temperatures and pressures, various reaction steps, long reaction times and low yields, makes difficult the synthesis of these compounds. This study aims to obtain organic chalcogenides vinylic derived from á, â-unsaturated carboxylic acids to the study of his face thiol reactivity and inhibiting cysteine proteases. A series of nitro-olefins or papain was tested as inhibitors of cysteine proteases using as a template. The experiments led to the discovery that these compounds are capable of being enzyme inhibitors.

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:36:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 5303.pdf: 8333184 bytes, checksum: b25ca1b60f49f5b7b3e1fefe4acfa539 (MD5) Previous issue date: 2012-10-26 / Universidade Federal de Sao Carlos / The main objective of this work was to construct amphiphilic chlorins with low aggregation in a physiological environment. The synthesis and structural characterization of the target compounds were carried out, and preliminary photophysical studies have been performed to point out the best candidates for further photochemical and biological studies (PDT studies) Initially, the porphyrin precursor 2 was synthesized using accessible reagents and a simple methodology, as described in Scheme 3. Scheme 3. Synthesis of new chlorins. i) C6H5Cl/PTSA, reflux, 2h and then ii) MeOH/H2SO4 5%, rt, overnight, 72% yield (2 steps); iii) solvent/conditions (Tabela 1) and maleiimide 9; iv) solvent/conditions (Tabela 2) and maleiimide 10; v) NH2OCH2CH2OH, THF, reflux. The second part of the work involved the Diels Alder reactions between the dienophiles (9 and 10) and porphyrin 2, as shown in Scheme 3. The synthesis of the dienophiles involved initial protection with ethylene glycol (to 7) or ethylenedithiol (to 11). The ethylene glycol protected compound 7 did not provide the expected results yielding only by-products. On the other hand, the approach using ethylenedithiol as protecting group allowed the effective synthesis of maleimides 9 and 10 (Scheme 4). Scheme 4. Synthesis of maleimides. We decided to study the relative reactivity of maleimides 9 and 10 under the Diels-Alder reactions conditions with porphyrin 2, as well as establish the ideal conditions to obtain chlorins 3a/3b and 4a/4b. Our best results were obtained for chlorins 3a and 3b with 37% and 37% yield for both; for chlorins 4a and 4b the yields were 36% and 35%, respectively. Finally, the versatility of chlorins 4a and 4b, as multi-functionalizable photosensitizers, was evaluated. These compounds reacted with 2-aminoxyethanol and the oxime-type amphiphilic derivatives 5a/5b were obtained in 67% and 74% yield, respectively. The reported compounds in this dissertation were characterized by 1D and 2D NMR spectroscopy, UV-Vis spectroscopy, infrared spectroscopy and low or high resolution mass spectrometry. The structures were assigned unambiguously. Through the synthetic studies, some photophysical tests, such as singlet oxygen production measurements, were conducted in order to evaluate the potential of chlorins 3a/3b and 4a/4b for PDT studies. 1H NMR aggregation studies were also performed to demonstrate the absence of aggregation in solution at the studied concentrations (high concentrations). / Neste trabalho empreendemos esforços para produzir clorinas anfifílicas e de baixa agregação em meios fisiológicos. Além da síntese e caracterização estrutural dos novos compostos, foram realizados estudos fotofísicos preliminares, com o objetivo de apontar os melhores candidatos para estudos fotoquímicos e biológicos posteriores (estudos em PDT). Para a síntese dos novos fotossensibilizadores, foi realizada inicialmente a preparação da porfirina de partida 2, pelo uso de reagentes acessíveis e metodologias simples, conforme descrito no Esquema 1. Esquema 1. Síntese de novas clorinas. i) C6H5Cl/PTSA, reflux, 2h e então ii) MeOH/H2SO4 5%, ta, 12h, 72% rendimento (2 etapas); iii) solvente/condições (Tabela 1) e maleimida 9; iv) solvente/condições (Tabela 2) e maleimida 10; v) NH2OCH2CH2OH, THF, PTSA, t.a. Para a realização das reações de Diels Alder propostas no Esquema 1, utilizaram-se dois dienófilos (9 e 10) sintetizados de acordo com o Esquema 2. A abordagem envolvendo a proteção com etileno glicol não forneceu os resultados esperados, entretanto, a abordagem utilizando etilenoditiol como grupo protetor permitiu a síntese das maleimidas 9 e 10 de forma eficiente. Esquema 2. Síntese das maleimidas. Em seguida, foram realizados estudos sistemáticos das reações de Diels-Alder entre 2 e as maleimidas 9 e 10 com o objetivo de comparar as reatividades relativas dos dienófilos, bem como estabelecer as melhores condições reacionais para a obtenção das clorinas 3a/3b a 4a/4b. Os melhores resultados obtidos nas sínteses das clorinas 3a e 3b foram 37% de rendimento para ambas, e, para as clorinas 4a e 4b, 36% e 35% de rendimento, respectivamente. Por fim, visando testar a versatilidade das clorinas 4a e 4b enquanto fotossensibilizadores multi-funcionalizáveis, realizou-se a síntese dos derivados anfifílicos do tipo oxima 5a e 5b pelo uso de 2-aminoxietanol com rendimentos de 70% e 74%, respectivamente. Os compostos sintetizados neste trabalho foram caracterizados utilizando-se técnicas de espectroscopia de RMN 1D e 2D, espectroscopia na região do UV-Vis, espectroscopia na região do Infra-vermelho e espectrometria de massas de baixa e alta resolução, atribuindo as estruturas de forma inequívoca. Ao longo das abordagens sintéticas foram realizados alguns estudos fotofísicos preliminares (medidas de produção de oxigênio singlete) de modo a qualificar as clorinas 3a/3b e 4a/4b enquanto precursoras ou potenciais fotossensibilizadores. Também foram realizados estudos de agregação por RMN de 1H demonstrando-se que as estas estruturas são isentas de agregação em solução.

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:36:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 6332.pdf: 6523947 bytes, checksum: 2b7ba973e865ccf5b2cbc9b8b7fbb27c (MD5) Previous issue date: 2014-02-28 / Universidade Federal de Minas Gerais / In this work we have developed the synthesis of 3,4-disubstituted pyrroles, aiming at the preparation of strategically designed (continue...) / Neste trabalho desenvolvemos a síntese de pirróis 3,4-dissubstituídos visando à síntese de porfirinas estrategicamente substituídas nas posições (continua...)

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:36:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 6474.pdf: 7823491 bytes, checksum: cbbaea4fa6954870c877181c315c0a3d (MD5) Previous issue date: 2014-07-28 / Universidade Federal de Minas Gerais / In this work the synthesis of new porphyrin derivatives were proposed. The preparations of new compounds containing uracil groups at &#946;-pirrolic position were studied based on their interest in organics synthesis. We also have performed reactions with metals salt in order to evaluate the different photophysical properties of the porphyrin complex. In the first step was performed the synthesis of precursors 2, 3 and 4 in order to prepare porphyrins 5 and 6 (SCHEME 1). The pyrrole 3 was obtained from the protected uracil 2. For the synthesis of the pyrrole 4, a deprotection was performed before, to yield the compound 3. After the synthesis both 3 and 4, tetramerization reactions were tested under acid conditions, to yield porphyrins 5 and 6 after aromatization. Classic conditions for the porphyrin synthesis were tested aiming at the obtainment of porphyrinoids in good yields, thus a systematic study was performed. Until this part, only the porphyrin 5a was obtained. And the synthesis of the compound 5a, we have observed a regioisomer mixture through the 1H NMR. It was expected since pyrrole 3 was not symmetric. (CONTINUE.......) / Neste trabalho foram propostas as sínteses de novos heterociclos do tipo porfirinas, com grupos uracila fundidos nas posições &#946;-pirrólicas. Também foram realizadas reações de complexação com metais, tendo como objetivo avaliar diferenças nas características fotofísicas. Na primeira abordagem sintética foi feita a síntese dos precursores 2, 3 e 4, visando a preparação das porfirinas 5 e 6 (ESQUEMA 1). O pirrol 3 foi obtido a partir da uracila protegida 2. Para a síntese do pirrol 4, foi feita a desproteção dos nitrogênios da pirimidina do composto 3. Depois da síntese destes dois precursores 3 e 4 foram feitos testes de tetramerização em condições ácidas, seguido de aromatização do heterociclo para a obtenção das porfirinas 5 e 6. Foram testadas condições clássicas de síntese de porfirinas e uma vez sintetizada a molécula desejada, foi feito um estudo sistemático objetivando melhores rendimentos. Nesta primeira etapa somente foi obtido o composto 5a. Através do espectro de RMN de 1H deste, foi observado a formação de uma mistura de regioisômeros, devido à não simetria do pirrol 3. (CONTINUA.......)

Tese (doutorado)Universidade de Brasília, Instituto de Física, Programa de Pós-Graduação em Física, 2015. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-04-06T13:09:04Z No. of bitstreams: 1 2015_AlineBessaVeloso.pdf: 3011069 bytes, checksum: 61d077f74db5584bd1edd367dc8122cb (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2016-04-07T20:33:18Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_AlineBessaVeloso.pdf: 3011069 bytes, checksum: 61d077f74db5584bd1edd367dc8122cb (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-07T20:33:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_AlineBessaVeloso.pdf: 3011069 bytes, checksum: 61d077f74db5584bd1edd367dc8122cb (MD5) / O câncer de mama é o tipo de câncer mais comum entre as mulheres e a causa de mais de meio milhão de mortes no mundo a cada ano. Como alternativa aos tratamentos convencionais, a terapia fotodinâmica (TFD) tem se mostrado uma modalidade terapêutica promissora para tratamento de vários tumores malignos, pois é pouco invasiva e de baixo custo. Contudo, sua aplicação clínica tem sido limitada devido a baixa solubilidade dos fotossensibilizadores em meio aquoso, o que tem motivado a busca por novas formulações como nanoemulsões a base Alumínio-Cloro-Ftalocianina (NP/AlClPc). Assim, neste trabalho foi estudada, pela técnica Espectroscopia Raman intensificada por superfície (SERS), a solubilidade de AlClPc em meios aquoso e oleoso. Os dados SERS mostraram que, mesmo no meio oleoso, o aumento da concentração da AlClPc induz a formação de agregados moleculares devido à interação entre os macrociclos centrais das moléculas de AlClPc. Em complemento, a técnica SERS foi utilizada no estudo de células de câncer de mama tradadas por terapia fotodinâmica, mediadas por NP/AlClPc. A partir dos espectros SERS e da análise multivariacional, foi possível distinguir os diferentes grupos celulares obtidos após tratamento por TFD (grupos controle, viáveis e mortas) com diferentes concentrações de NP/AlClPc. Os resultados evidenciaram que o tratamento por TFD levou a significantes mudanças relacionadas aos teores de proteínas, lipídios e DNA. A partir destas mudanças foi constatado que a necrose é o principal mecanismo de morte celular após tratamento por TFD, nas condições aqui empregadas. Os resultados ainda sugeriram que os mecanismos de defesa celular, induzidos pelo estresse oxidativo advindo da TDF, levaram à produção de proteínas nas células viáveis as quais podem estar associadas com proliferação e controle do processo de divisão celular. / Breast cancer is the most common type of cancer among women and it is the cause of over half million deaths worldwide every year. As an alternative to conventional therapies, photodynamic therapy (PDT) has been shown to be a promising therapeutic modality for several malignant tumor treatments, as it is less invasive and has low cost. However, its clinical application has been limited due to the low solubility of photosensitizers in aqueous solution, which has motivated the search for new formulations, such as nanoemulsion bases in aluminum-chloro-phthalocyanine (NP/AlClPc). In this work the solubility of AlClPc in aqueous and oily medium was studied by SERS technique (Surface Enhanced Raman Spectroscopy). Even in oily medium, SERS data showed the concentration of AlClPc induces the formation of molecular aggregates due to the interaction between the central macrocycles of AlClPc molecules. In addition, SERS technique was used in the study of breast cancer cells treaded by photodynamic therapy mediated by NP/AlClPc. SERS spectra and multivariate analysis allowed the distinction of different cellular groups after they have been treated by PDT (control, viable and dead groups) with different concentrations of NP/AlClPc. The results showed treatment by PDT yielded significant changes related to proteins, lipids and DNA in the cells. From these changes, it was found that necrosis is the main cell death mechanism after treatment with PDT, under the conditions of this study. Moreover, the results suggested that cellular defense mechanisms, induced by oxidative stress of PDT, caused some protein production in viable cells that may be associated with proliferation and the control of cell division process.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2016. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2016-04-18T13:37:34Z No. of bitstreams: 1 2016_JanainaGomesPenteado.pdf: 1707561 bytes, checksum: 7d887c75501d8d6d5bb010f333c4e8e9 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2016-04-18T20:06:56Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_JanainaGomesPenteado.pdf: 1707561 bytes, checksum: 7d887c75501d8d6d5bb010f333c4e8e9 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-18T20:06:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_JanainaGomesPenteado.pdf: 1707561 bytes, checksum: 7d887c75501d8d6d5bb010f333c4e8e9 (MD5) / Entre os tipos de câncer de pele, o melanoma é responsável por 4% dos casos. É o mais agressivo, por possuir um alto potencial metastático. Como proposta para um tratamento mais efeciente e que cause menos danos estéticos, foi utilizada a Terapia Fotodinâmica (TFD) como um sistema que proporcionasse uma futura utilização por via tópica. No presente trabalho as micelas de Pluronic® F127 contendo 1, 5 e 10 μg/mL do fotossensibilizante alumínio-cloro-ftalocianina (NP F127/AlClPc), as micelas foram utilizadas para investigar os efeitos da TFD em células de melanoma murino. NP F127/AlClPc foram avaliadas quanto a sua estabilidade e caracterização fotofísica e fotoquímica O diâmetro hidrodinâmico (DH) médio de NP F127/AlClPc com 1 μg/mL de ALCLPc foi de 22 nm ; 42,03 nm para 5 μg/mL e 152,9 nm para 10 μg/mL a ~25 °C. O índice de polidispersão foi 0,43 para 1 μg/mL; 0,68 para 5 μg/mL; 0,37 para 10 μg/mL, e o potencial zeta (PZ) de -2,71mV para 1 μg/mL; -0,11mV para 5 μg/mL e -0,58 mV para 10 μg/mL, mostrando que as micelas são polidispersas. NP F127/AlClPc apresentou máxima absorbância a 670 nm e fluorescencia a 680 nm.Duas linhagens celulares foram utilizadas: B16F10 (melanoma murino) e B16F10FF (melanoma murino modificadas com FireFly Luciferase). Somente a irradiação com a luz LED ou a exposição das células a diferentes concentrações de NP F127/AlClPc não causaram toxicidade em ambas as linhagens celulares. Quando aplicada a TFD com fluência de 85,1 J/cm2. Os resultados de citotoxicidade da NP F127/AlClPc, com vários tempos de incubação, mostrou uma maior eficácia em células B16F10 do que em células B16F10FF. A concentração de 1 μg/mL; 5 μg/mL;10 μg/mL mostraram-se mais eficaz no tempo de incubação de 20 e 25 minutos para as células B16F10. Pelo mesmo tempo de exposição de 25 minutos, as células B16F10FF mostraram-se mais resistentes ao tratamento. A citotoxicidade sem irradiação e com irradiação do LED mostrou que as micelas não causaram toxicidade em ambas as linhagens celulares. As células expostas à NP F127/AlClPc nas concentração de 1 μg/mL; 5 μg/mL; 10 μg/mL por 15, 20 e 25 minutos e irradiadas com a fluência de 85,1 J/cm2, mostraram que células B16F10 tratadas com a NP F127/AlClPc 10 μg/mL apresentaram viabilidade de 25%, enquanto as células B16F10FF sob as mesmas condições apresentaram viabilidade de 64%. A citotoxicidade nas células B16F10FF foi de 7% para o tempo de incubação de 20 minutos e de 3 a 4% nos tempos de 15 e 25 minutos, quando estas células sofream duas incubações (24-48 horas) e duas aplicações de TFD (24-48 horas). Pode-se concluir então que, a NP F127/AlClPc apresentou características fotofísicas e fotoquímicas favoráveis para o seu uso da TFD. _______________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Melanoma accounts for 4% of cases among skin cancer types. But it is the most aggressive with a high metastatic potential. Photodynamic therapy (PDT) was used as an alternative efficient and less damage inducing treatment in comparison to chemotherapy for topical application. In the present work Pluronic® F127 micelles containing 1, 5 and 10 μg /mL of the photosensitizer aluminum-chlorophthalotocyanine (F127/AlClPc). The micelles were used to investigate the effects of PDT on murine melanoma cells. Their stability, photophysical characteristics and photochemistry was evaluated. The hydrodynamic diameter for the micelles carrying 1μg/mL, 5μg/mL and 10μg/mL was 22nm, 42.04nm and 152.9nm respectively. The poly dispersity index for the micelles with 1mg/mL, 5mg/mL and 10mg/mL were 0.43, 0.68 and 0.37 respectively. The zeta potential for the micelles with 1μg/mL, 5μg/mL and 10μg/mL F127/AlClPc were -2.7mV,-0.11mV and -0.58mV. The micelles showed maximum absorbance at 670nm and fluorescence at 680nm. Two cell lines were evaluated B16F10 (murine melanoma) and B16F10FF (murine melanoma modified with firefly luciferase). The irradiation of LED with light or with different concentration of F127 / AlClPc did not cause toxicity to both cell lines when the PDT fluent was 85.1 J / cm2. The cytotoxity results of the micelles F127/AlClPc at various incubation times was more prominent with B16F10 than B16F10FF. The concentration of 1μg/mL, 5μg/mL and 10 μg/mL were more effective against B16F10 cells when incubated for 20 minutes and 25 minutes. However, for B16F10FF cells they were resistant to treatment after 25 minutes of incubation. The cytotoxicity with either irradiation or without showed that the micelles did not cause toxicity to both cells. Upon exposure to 1μg/mL, 5μg/mL and 10 μg/mL for 15, 20 and 25 minutes and irradiation of fluency 85.1 J / cm2 B16F10 presented a viability of 25% while B16F10FF had 64%. After incubation of 15, 20 and 25 minutes the cytotoxicity of B16F10FF cells was 3%, 7% and 4% respectively when the cells were incubated (24-48 hours) and PDT was applied twice (24-48 hours). It can be concluded that the micelles with F127 / AlClPc presented photophysical and photochemical characteristics favorable for use in photodynamic therapy.

Orientador: Antonio Olavo Cardoso Jorge / Banca: Juliana Campos Junqueira / Banca: Graziella Nuernberg Back Brito / Banca: Martha Simões Ribeiro / Banca: Célia Regina Gonçalves e Silva / Resumo: Os micro-organismos estão se tornando cada vez mais resistentes aos antimicrobianos e cepas de Candida albicans resistentes aos antifúngicos tem sido isoladas, assim, torna-se importante e necessário a realização de pesquisas que avaliem os efeitos de novos métodos terapêuticos, como a inativação fotodinâmica antimicrobiana (aPDI). Assim, o objetivo deste estudo foi verificar os efeitos da inativação fotodinâmica sobre biofilmes de Candida albicans, avaliando seus efeitos sobre a expressão dos genes TEC1 (fator de transcrição), HWP1 (proteína de parede celular das hifas), EFG1 (regulador transcricional relacionado com a morfogênese), BCR1 (regulador da formação de biofilme e da parede celular), CPH1 (regulador transcricional envolvido na morfogênese) e ALS3 (adesina) de C. albicans. Foram avaliadas 30 amostras isoladas de pacientes portadores de HIV e 30 amostras de pacientes com estomatite protética, quanto a produção de biofilme, peso seco e filamentação. Destas, foram selecionadas as amostras mais virulentas de cada grupo que apresentaram melhor capacidade de formação de biofilme e filamentação. Assim, foi utilizada uma amostra clínica de C. albicans isolada de paciente portador de HIV, uma amostra clínica de C. albicans isolada de paciente com estomatite protética e uma cepa padrão ATCC 18804. A quantificação da expressão dos genes foi relacionada à produção desses genes nas amostras clínicas e na cepa de referência utilizando-se ensaio de PCR em tempo real. Para a aPDI, ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Micro-organisms are becoming increasingly resistant to antimicrobial agents and Candida albicans resistant strains to antifungal has been isolated, so it is important and necessary to carry out studies that evaluates the effects of new therapeutic methods, such as antimicrobial photodynamic inactivation (aPDI). The objective of this study was verify the effects of aPDI on C. albicans biofilms, evaluating its effects on genes expression: TEC1 (transcription factor), HWP1 (cell wall protein hyphae), EFG1 (transcriptional regulator related to morphogenesis), BCR1 (regulator of biofilm formation and cell wall), CPH1 (transcriptional regulator involved in morphogenesis) and ALS3 (adhesin) of C. albicans. Were evaluated 30 samples isolated from patients with HIV and 30 samples from patients with denture stomatitis, as the production of biofilm, dry weight and filamentation. Of these, the most virulent strains of each group that presented better biofilm formation capacity and filamentation were selected. Therefore, were used a clinical sample of C. albicans isolated from HIV positive patient, a clinical sample of C. albicans isolated from patient with denture stomatitis and a standard strain ATCC 18804. The quantification of gene expression was related to the production of these genes in clinical samples and in the reference strain using PCR assay in real time. For aPDI, were used the photosensitizer methylene blue at 300 uM and erythrosine at 400 uM, sensitized with low power laser... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor