RÊGO, João Paulo Arcelino do. Análise proteômica do plasma seminal de carneiros Santa Inês adulto. 2010. 107 f. : Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Ceará, Centro de Ciências Agrárias, Departamento de Zootecnia, Fortaleza-CE, 2010 / Submitted by Nádja Goes (nmoraissoares@gmail.com) on 2016-07-29T14:08:18Z No. of bitstreams: 1 2010_dis_jparego.pdf: 805870 bytes, checksum: a59ce42229b6d0d23c4b460911c6fe88 (MD5) / Approved for entry into archive by Nádja Goes (nmoraissoares@gmail.com) on 2016-07-29T14:08:32Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_dis_jparego.pdf: 805870 bytes, checksum: a59ce42229b6d0d23c4b460911c6fe88 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-29T14:08:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_dis_jparego.pdf: 805870 bytes, checksum: a59ce42229b6d0d23c4b460911c6fe88 (MD5) Previous issue date: 2010 / Northeastern Brazil has a significant population of sheep and, among the native hairy breeds, Santa Inês is known for its good performance and adaptability to tropical environments. Recently, it has been shown that the protein profile of the seminal plasma of Santa Inês rams changes during sexual development, in concert with changes in semen parameters, such as sperm motility, morphology and concentration. However, the identity of seminal plasma proteins from these hairy rams is still unknown. Therefore, we pursued the identification of seminal plasma proteins from Santa Inês rams using a proteomic approach. Semen samples were collected from eight mature rams, and seminal plasma saved after centrifugation. Seminal plasma protein maps, obtained by two-dimensional electrophoresis, were stained with colloidal Coomassie. The gels were scanned and analyzed using PDQuest software. Protein spots were individually cut, in-gel digested with trypsin and identified after tandem mass spectrometry and database search. On average , we detected 302 spots per gel, from which 143 were present on every member of the match set generated by PDQuest. Thirty-nine spots were positively identified by mass spectrometry, corresponding to 26 different proteins. The major proteins present in the maps were the BSP-like RSVP14 and RSVP22 and the spermadhesins bodhesin 1 and 2. Other proteins detected in the maps included albumin, clusterin, peroxiredoxin, lactoferrin, transferrin, matrix metalloproteinase 2, beta galactosidase and heat shock proteins. The Identity of these proteins suggest their participation on several physiological events, such as sperm protection, regulation of sperm motility and capacitation, modification of sperm membrane and fertilization. The knowledge of the proteome of the ovine seminal plasma is a necessary step towards the understanding of the mechanisms underlying the regulation of sperm function by seminal plasma components in rams / O Nordeste brasileiro é detentor de um expressivo rebanho ovino, e, dentre as raças deslanadas existentes na região, a Santa Inês se destaca por apresentar bom desenvolvimento corporal, ganho de peso e adaptabilidade às condições tropicais. Recentemente, demonstrou-se que o perfil protéico do plasma seminal de carneiros Santa Inês passa por alterações significativas durante o desenvolvimento reprodutivo, simultaneamente a mudanças nos parâmetros de motilidade e concentração espermática. Contudo, ainda não se conhece a identidade de todas essas proteínas. Dessa forma, o presente trabalho foi conduzido com o objetivo de identificar as proteínas do plasma seminal de carneiros Santa Inês maduros, utilizando as técnicas de eletroforese bidimensional associada à espectrometria de massa. Amostras de sêmen foram coletadas de oito carneiros adultos e o plasma seminal obtido através de centrifugação e submetido à eletroforese bidimensional. Os géis foram corados com Coomassie coloidal, digitalizados e analisados no aplicativo PDQuest. Os spots foram cortados individualmente dos géis, digeridos com tripsina, e submetidos a identificação por espectrometria de massa (MALDI-ToF/ToF). A sequência peptídica das proteínas mais abundantes e a distribuição dos domínios foram representadas graficamente utilizando o aplicativo Caititu. Foram detectados, em média, 302 spots por gel. Destes, 143 estavam presentes em todos os géis. Trinta e nove spots foram identificados, correspondendo a 26 diferentes proteínas. As proteínas mais abundantes foram as RSVPs 14 e 22 kDa, pertencentes à família das binder of sperm proteins, e as Bodesinas-1 e 2, pertencentes à família das espermadesinas. Outras proteínas foram identificas no estudo, incluindo albumina, clusterina, peroxiredoxina, lactotransferrina, metaloproteinase de matriz 2 (MMP-2), beta galactosidase e heat shock proteins. Dessa forma, a identidade dessas proteínas sugere que o plasma seminal de carneiros Santa Inês contém componentes que participam de diversos processos fisiológicos, incluindo proteção do espermatozóide, modulação da motilidade e capacitação espermática, modificação da membrana do espermatozóide e interação entre gametas. O conhecimento dessas proteínas contribuirá para uma melhor compreensão dos mecanismos de regulação do plasma seminal sobre a função espermática em ovinos

Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2017-02-09T12:03:21Z No. of bitstreams: 1 Flavia Camila Siqueira Pereira Ramalho.pdf: 838412 bytes, checksum: e92375da22d319dd80763723a0bdbfbf (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-09T12:03:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Flavia Camila Siqueira Pereira Ramalho.pdf: 838412 bytes, checksum: e92375da22d319dd80763723a0bdbfbf (MD5) Previous issue date: 2015-02-09 / In vitro embryo production (IVP) in cattle became an important commercial tool in genetic improvement programs of the world herd, being widely used for this purpose. However in vitro fertilization (IVF) can cause generation of reactive oxygen species that can affect embryo viability. Coenzyme Q10, an important cofactor in the transport chain of mitochondria has antioxidant function on lipid membrane and it was proved a direct correlation between the presence of Coenzyme Q10 and normal spermatozoa parameters such as density, motility, morphology and volume. The objective of this study was to evaluate the effect of Coenzyme Q10 on sperm function in IVF using conventional or sexed semen; also if the addition of this cofactor can improve embryo IVP in bovine oocytes. In experiment 1 was evaluated the effect of sperm function during incubation periods of sexed and conventional semen samples. In experiment 2, IVF medium was supplemented with 0 (control group), 5 μM, 10 μM, 20 μM of Coenzyme Q10. Bovine oocytes were collected from a slaughterhouse located 20 minutes from the lab. It was observed a negative effect of Coenzyme with significant differences in the rates of cleavage or in the production of blastocyst (p< 0.05) at a concentration of 20 μM when compared with all other groups with either sexed as conventional semen. These results demonstrate that supplementation of the Coenzyme Q10 in the IVF medium, do not alter spermatozoa function. We can also infer that there is a tendency to improve embryo production in the concentration of 5 μM in IVF medium. / A produção de embriões in vitro (PIV) em bovinos tornou-se importante ferramenta comercial nos programas de melhoramento genético do rebanho mundial como técnica de multiplicação, sendo amplamente utilizada para esse fim. Entretanto a Fertilização in vitro (FIV) provoca geração de espécies reativas de oxigênio que podem afetar a viabilidade embrionária. A Coenzima Q10, um cofator de importância na cadeia de transporte das mitocôndrias tem função antioxidante na membrana lipídica e foi verificado uma correlação direta entre a Coenzima e os parâmetros normais de sêmen tais como, densidade, motilidade, morfologia e o volume. O objetivo desse trabalho foi avaliar o efeito da Coenzima Q10 na função espermática em FIV utilizando-se sêmen convencional e sexado; e se a adição desse cofator pode melhorar a produção embrionária in vitro de oócitos bovinos. No Experimento o meio de FIV foi suplementado com 0 (grupo controle), 5 μM, 10 μM, 20 μM da Coenzima Q10. Os Oócitos foram coletados de um abatedouro localizado a 20 minutos do laboratório. Foi observado um efeito deletério da coenzima com diferença significativa nas taxas de clivagem ou na produção de blastocisto (p<0,05) na concentração de 20 μM quando comparado com os demais grupos tanto com sêmen sexado como convencional. Estes resultados demonstram que a suplementação da Coenzima Q10 no meio FIV não altera a função espermática, entretanto tem um efeito deletério a partir da concentração de 20 μM. Podemos ainda inferir que na concentração de 5 μM no meio FIV há uma tendência na melhoria da produção embrionária.