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Caracterização taxonómica de espécies do complexo Cladosporium cladosporiotdes depositadas na micoteca URM da Universidade Federal de Pernambuco

FREIRE, Karla Torres Lins de Sousa 27 February 2015 (has links)
Submitted by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-04-13T19:32:28Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO Karla Torres Lins de Sousa Freire.pdf: 955817 bytes, checksum: 797b4b52f98ea76917d7a2f7c23619d8 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-13T19:32:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO Karla Torres Lins de Sousa Freire.pdf: 955817 bytes, checksum: 797b4b52f98ea76917d7a2f7c23619d8 (MD5) Previous issue date: 2015-02-27 / CNPQ / Diante da crescente necessidade de um rigor taxonômico e do grande número de espécies de fungos que ainda existem para ser revisada e descrita, a identificação baseada apenas em características morfológicas não fornece dados suficientes para uma correta identificação de um grande número de espécies, inclusive aquelas pertencentes ao Complexo Cladosporium cladosporioides. Desta forma, estudos de biologia molecular vem sendo adicionados ao método tradicional com o intuito de fornecer dados mais precisos, auxiliando no processo de distinção de espécies morfologicamente próximas. Neste contexto, este estudo teve como objetivo caracterizar taxonomicamente espécies pertencentes ao Complexo Cladosporium cladosporioides depositadas na Micoteca URM da Universidade Federal de Pernambuco por abordagem morfológica e molecular. Para isso, foram utilizadas 40 culturas de fungos pertencentes às espécies C. cladosporioides (32) e C. tenuissimum (8) e realizadas análises das características macroscópicas dos fungos através do cultivo em meio de cultura BDA (Batata Dextrose Ágar), MEA (Extrato de Malte Ágar), SNA (Synthetic Nutrient-poor Agar) e AO (ágar aveia) por um período de 14 dias a 25ºC no escuro, e microscópicas através de culturas crescidas em meio SNA e BDA por 7 dias sob luz UVA contínua. Para as análises moleculares, foi realizado o sequenciamento parcial da região ITS, e dos genes actina (ACT) e do fator de alongamento da tradução (tef1). Através da ferramenta BLAST, todas as culturas de fungos utilizadas neste estudo apresentaram identidade igual ou superior a 97% com sequências de fungos do gênero Cladosporium depositadas no Banco de dados GenBank para as regiões ITS1-5,8S-ITS2, e os genes ACT e tef1. Outras sequências de referência foram utilizadas para o alinhamento nesse estudo e após a reconstrução filogenética mais parcimoniosa foi constatado que 30 culturas pertencem ao Complexo Cladosporium cladosporioides e 6 ao Complexo Cladosporium sphaerospermum. Sendo assim, os genes ACT e o tef1 foram considerados os marcadores moleculares com maior poder de resolução para as espécies pertencentes ao Complexo Cladosporium cladosporioides. Desta forma, foi possível atualizar o status taxonômico das culturas das espécies C. cladosporioides e C. tenuissimum depositadas na Micoteca URM da UFPE. / Given the growing need for taxonomic accuracy and the large number of fungal species that still exist to be reviewed and described, only identification based on morphological characteristics does not provide sufficient data for a correct identification of a large number of species, including those belonging to Cladosporium cladosporioides complex. Thus, molecular biology studies have been added to the conventional method in order to provide more accurate data, helping the process of morphologically distinguish closely related species. In this context, this study aimed to characterize taxonomically species of the Cladosporium cladosporioides complex deposited in the URM Culture Collection of the Federal University of Pernambuco by morphological and molecular approach. For this, we used 40 fungal cultures belonging species C. cladosporioides (32) and C. tenuissimum (8) and carried out analyzes of macroscopic characteristics of fungi by growing in PDA culture medium (Potato Dextrose Agar), MEA (Extract Malt agar), SNA (Synthetic Nutrient-poor agar) and AO (oatmeal agar) for a period of 14 days at 25 ° C in the dark and microscopic using SNA and cultures grown in PDA medium for 7 days under continuous UV light. For molecular analysis, we performed the partial sequencing of the ITS region, and actin genes (ACT) and the translation elongation factor (TEF1). Through BLAST tool, all cultures of fungi used in this study showed similarity equal to or greater than 97% with fungi of the genus Cladosporium sequences deposited in the GenBank database for ITS1-5.8S-ITS2 regions, and ACT genes and TEF1. Other reference sequences were used for this study alignment and phylogenetic reconstruction after most parsimonious 30 was found to belong to the crops Cladosporium cladosporioides complex and the 6 to Cladosporium sphaerospermum complex. Thus, the ACT and the TEF1 genes were considered molecular markers with higher resolution for the species belonging to Cladosporium cladosporioides Complex. Thus, it was possible to update the taxonomic status of the cultures of C. cladosporioides and C. tenuissimum deposited in the URM Culture Collection of UFPE.
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Quitosana produzida por Syncephalastrum racemosum UCP 1302 usando resíduos agroindustriais: caracterização e aplicação

LEITE, Marcela Vieira 27 June 2014 (has links)
Submitted by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-04-16T22:40:23Z No. of bitstreams: 1 TESE Marcela Vieira Leite.pdf: 1088629 bytes, checksum: e53477084b77ddc1a4657dfb91bc9c0a (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-16T22:40:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TESE Marcela Vieira Leite.pdf: 1088629 bytes, checksum: e53477084b77ddc1a4657dfb91bc9c0a (MD5) Previous issue date: 2014-06-27 / Syncephalastrum racemosum UCP 1302, fungo filamentoso da classe Zygomycetes, isolado de solo da Caatinga de Pernambuco, Brasil, caracterizado por apresentar polímeros de β1,4-D-glicosamina (quitosana) e N-acetil-D-glucosamina (quitina) nas paredes celulares, o qual foi investigado o potencial biotecnológico na produção de quitosana utilizando diferentes resíduos agroindustriais (bagaço da cana-de-açúcar, cascas de tangerina, de abacate e de banana). Neste sentido, foram realizadas fermentações submersas com os diferentes resíduos agroindustriais de baixo custo, suplementados com milhocina (resíduo do processamento do milho), empregando planejamentos fatoriais, na produção de biomassa e quitosana. Como variáveis respostas foram avaliados o pH, produção de biomassa e produção de quitosana. A partir da biomassa liofilizada foi realizada a extração da quitosana, utilizando tratamento álcali-ácido. A caracterização da quitosana foi realizada por espectroscopia vibracional vibracional na região do infravermelho para determinação do grau de desacetilação, e peso molecular por viscosidade, além de avaliar a atividade antibacteriana e antifúngica. Os resultados obtidos indicaram como resultados mais promissores as fermentações com casca de tangerina (Citrus reticulata ), correspondendo a 25g/L de biomassa e 30mg/g de quitosana; seguido de bagaço de cana-de-açúcar (Saccharum officinarum L.) produzindo 32g/L de biomassa e 25mg/g de quitosana; casca de banana ( Musa paradisíaca L.) com 18g/L de biomassa e 25mg/g de quitosana e por último casca de abacate (Persea americana) produzindo 17g/L de biomassa e 16,4mg/g de quitosana. As quitosanas analisadas demonstraram um bom grau de desacetilação e médio a baixo peso molecular com valores de 80% e 7,36 x 10-3 g/mol (bagaço da cana-de-açúcar), 78% e 3,29 x 10-4 g/mol (casca tangerina), 74,3% e 1,42 x 10-4 g/mol (casca banana), 70% e 2,97 x 10-4 g/mol (casca abacate). Nos testes de atividade antimicrobiana observaram-se atividades semelhantes para Staphyloccocus aureus, Escherichia coli, Candida albicans, C. pelliculosa e C. tropicalis para as quitosanas obtidas em fermentações com cascas de tangerina, abacate e banana; contudo, a quitosana extraída do cultivo com bagaço de cana-de-açúcar apresentou atividade apenas para as leveduras. Portanto, os resultados obtidos demonstram serem promissores, considerando o potencial antimicrobiano das quitosanas produzidas a partir de resíduos agroindustriais. / Syncephalastrum racemosum UCP 1302, filamentous fungi of class Zygomycetes isolated from soil of Caatinga of Pernambuco, Brazil, characterized in that polymers of β1 ,4-D-glucosamine (chitosan) and N-acetyl-D-glucosamine (chitin) in the cell walls , which was investigating the potential of biotechnology in the production of chitosan using different agroindustrial waste (bagasse from cane sugar, tangerine peel, avocado and banana). In this sense, submerged fermentations were carried out with different agroindustrial wastes low cost, supplemented with corn steep liquor (waste from the processing of corn), employing factorial designs, the production of biomass and chitosan. As response variables pH, biomass and production of chitosan were evaluated. From the lyophilized biomass extraction of chitosan was performed using alkali-acid treatment. The characterization of chitosan was performed by vibrational vibrational spectroscopy in the infrared region for determining the degree of deacetylation and molecular weight by viscosity, and to evaluate the antibacterial and antifungal activity. The results showed most promising results as the fermentations with tangerine peel (Citrus reticulata), corresponding to 25g.L-1 of biomass and 30mg.g-1 of chitosan; followed by bagasse sugarcane (Saccharum officinarum L.) yielding 32g.L-1 of biomass and 25mg.g-1 of chitosan; peel banana (Musa paradisiaca L.) 18g.L-1 of biomass and 25mg.g-1 of Chitosan and lastly peel avocado (Persea americana) yielding 17g.L-1 of biomass 16.4mg.g-1 chitosan. The chitosan samples analyzed showed a good degree of deacetylation and medium to low molecular weight values of 80% and 7.36 x 10-3 g.mol-1 (bagasse from sugar cane), 78% and 3.29 x 10-4 g.mol-1 (tangerine peel), 74.3% and 1.42 x 10-4 g.mol-1 (banana peel), 70% and 2.97 x 10-4 g.mol-1 (avocado peel). In tests of antimicrobial activity observed similar activity for Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Candida albicans, C. tropicalis and C. pelliculosa for chitosans obtained in fermentations with tangerine peel, avocado and banana; However, chitosan extracted from cultivation with crushed cane sugar showed activity only for yeasts. Therefore, the results obtained show are promising, considering the antimicrobial potential of chitosan produced from agroindustrial wastes.
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Purificação e caracterização de uma lectina antimicrobiana da raiz de Portulaca elatior

SILVA, José Dayvid Ferreira da 26 February 2016 (has links)
Submitted by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-04-20T18:19:01Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO José Dayvid Ferreira da Silva.pdf: 839784 bytes, checksum: 287d11363cf24c40e3b1c3570966448e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-20T18:19:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO José Dayvid Ferreira da Silva.pdf: 839784 bytes, checksum: 287d11363cf24c40e3b1c3570966448e (MD5) Previous issue date: 2016-02-26 / CAPES / Plantas contêm lectinas, ligantes de carboidratos e proteínas hemaglutininantes, capazes de induzir respostas biológicas em células de plantas e animais. Portulaca elatior é uma planta tóxica para o gado e cabras. Este estudo identificou um tecido de P. elatior com atividade hemaglutinante (AH), isolado a lectina a partir dele e determinada às características da lectina isolada. Extratos de folhas, caule e raiz foram investigados e o extrato de raiz foi o único a apresentar HA, com isso foi selecionado para isolamento da lectina por cromatografia em coluna de quitina. A lectina de raiz de P. elatior (PeRoL) eluída da coluna de quitina apresentou peptídeos com 32 e 15 kDa na SDS-PAGE sob condições não redutoras e redutoras, respectivamente. A AH de PeRoL se manteve a 120ºC e numa faixa de pH de 4.0 a 8.0 e os íons Ca2+ e Mn2+ não estimularam a lectina. O dissacarídeo trealose foi o melhor carboidrato inibidor da AH. Ensaios revelaram que o extrato da raiz de P. elatior contêm trealose e apresentou uma AH de 4-1 e pós-purificado de 4096-1 enquanto o extrato tratado com trealase apresentou AH de 256-1. Estes resultados revelam que trealose é o inibidor endógeno da AH de PeRoL. PeRoL apresentou atividade bacteriostática contra Pseudomonas aeruginosa (CMI 32,5 µg/mL), Enterococcus faecalis (CMI 8,1 µg/mL) e Staphylococcus aureus (CMI 4,06 µg/mL) e atividade fungicida contra Candida albicans (CMI e CMF 16,5 µg/mL), Candida parapsilosis, Candida krusei e Candida tropicalis (CMI e CMF 15 µg/mL). O estudo demonstrou que a raiz de P. elatior contem PeRoL, um ligante de quitina e lectina antimicrobiana, bem como a trealose, o carboidrato inibidor de PeRoL. / Plants contain lectins, carbohydrate binding and hemagglutinin proteins, capable of induce biological responses in cells of plants and animals. Portulaca elatior is a plant toxic to cattle and goats. This study identified the P. elatior tissue with the best specific hemagglutinating activity (SHA), isolated the lectin from it and determined characteristics of isolated lectin. Leaf, stem and root extracts were investigated and the root extract, which was the one that presented HA, was selected to isolate lectin by chitin column chromatography. P. elatior root lectin (PeRoL) eluted from chitin column showed polypeptide bands with 32 and 15 kDa on SDS-PAGE under non-reducing and reducing conditions, respectively. The PeRoL HA was active at 120ºC and pH range from 4.0 to 8.0 and Ca2+ and Mn2+ did not affect its HA. The disaccharide threalose was the best carbohydrate inhibitor of HA. Assays revealed that the root extract containing threalose and showed HA 4-1 and post-purification 4096-1 while the root extract treated with threalase showed HA 256-1. These data revealed that trehalose is an endogenous inhibitor of PeRoL HA. PeRoL showed bacteriostatic activity against Pseudomonas aeruginosa (MIC 32.5 µg/mL), Enterococcus faecalis (MIC 8.1 µg/mL) and Staphylococcus aureus (MIC 4.06 µg/mL) and fungicide activity against Candida albicans (MIC and MFC 16.5 µg/mL), Candida parapsilosis, Candida krusei and Candida tropicalis (MIC and MFC 15 µg/mL). The study demonstrated that root of P. elatior contain PeRoL, a chitin-binding and antimicrobial lectin as well as threalose, a carbohydrate inhibitor of PeRoL.
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Aspectos ecofisiológicos de espécies lenhosas nativas da Caatinga associadas a fungos micorrízicos arbusculares sob condições de seca e salinidade

FARIA, Gabriella Frosi Albuquerque Figueiroa 17 February 2017 (has links)
Submitted by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-05-23T18:11:33Z No. of bitstreams: 1 TESE Gabriella Frosi Albuquerque Figueirôa Faria.pdf: 11947277 bytes, checksum: cda58ee7c558adcc09e4928c05cfc718 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-23T18:11:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TESE Gabriella Frosi Albuquerque Figueirôa Faria.pdf: 11947277 bytes, checksum: cda58ee7c558adcc09e4928c05cfc718 (MD5) Previous issue date: 2017-02-17 / CNPQ / FACEPE / A seca e salinidade são os principais estresses abióticos causadores de perda de produtividade nas plantas, comuns em áreas áridas e semiáridas, como o Nordeste brasileiro. Duas ferramentas que podem mitigar os efeitos deletérios desses estresses nas plantas são os fungos micorrízicos arbusculares (FMA) e suprimento de fósforo inorgânico foliar (Pi), aumentando as chances de recuperação dessas áreas. O presente estudo analisou a simbiose com FMA de duas espécies lenhosas nativas da região, Poincianella pyramidalis e Cnidoscolus quercifolius, em diferentes níveis de fósforo no solo, além de aspectos ecofisiológicos de uma dessas espécies associada com FMA e aplicação de Pi foliar sob seca e salinidade em casa de vegetação. Foram avaliadas a colonização micorrízica, trocas gasosas, solutos orgânicos, pigmentos fotossintéticos, biomassa e nutrientes. Ambas espécies realizaram associação com FMA e foram beneficiadas no crescimento. Para P. pyramidallis e C. quercifolius, os níveis de 33 e 15 mg dm-3 de fósforo no solo, respectivamente, promoveram maior crescimento nas plantas micorrizadas. P. pyramidalis foi selecionada para os demais experimentos devido aos ganhos mais representativos. Nos experimentos de seca e salinidade, essa espécie na condição hidratada foi mais beneficiada com FMA isolado, com maior fotossíntese e biomassa. Quando submetidas à seca, plantas com FMA, Pi ou ambos não tiveram reduções da biomassa aérea e acumularam prolina; plantas com FMA isolado tiveram maiores concentrações de açúcares e clorofilas. Após reidratação, plantas com FMA, Pi ou ambos tiveram recuperação das trocas gasosas, enquanto plantas sem FMA e Pi apresentaram recuperação parcial comparado ao Controle. Entretanto, plantas com FMA isolado submetidas à seca tiveram fotossíntese superior ao Controle após reidratação. Sob condição salina, plantas com FMA, Pi ou FMA+Pi foram beneficiadas, apresentando menores reduções nas trocas gasosas e sem redução na biomassa da parte aérea. As plantas com FMA isolado sob salinidade tiveram menor acúmulo de Na+ e Cl- nas folhas e raízes, enquanto plantas com Pi e FMA+Pi tiveram maiores concentrações de Cl- nas folhas. Já plantas sem FMA e Pi na condição salina apresentaram maior concentração de Cl- na raiz. Portanto, a aplicação de Pi, FMA ou ambos promoveram maior tolerância de P. pyramidalis à seca e salinidade. Entretanto, a resposta superior foi observada nas plantas com FMA isolado. / Drought and salinity are the main abiotic stresses that cause loss in plant productivity, common in arid and semiarid areas, such the Brazilian Northeast. Two tools that can to mitigate the deleterious effects of these stresses are arbuscular mycorrhizal fungi (AMF) and leaf inorganic phosphorus supply (Pi), increasing the chances of recovery of these areas. The present study analyzed the symbiosis with AMF of two native woody species in the region, Poincianella pyramidalis and Cnidoscolus quercifolius, at different phosphorus levels in the soil, in addition to ecophysiological aspects of one these species associated with AFM and leaf Pi in a greenhouse. Were evaluated the mycorrhizal colonization, gas exchange, organic solutes, photosynthetic pigments, biomass and nutrients. Both species perform associations with AMF and were benefited in growth. For P. pyramidalis and C. quercifolius, the phosphorus levels of 33 e 15 mg dm-3, respectively, promoted the higher growth in mycorrhizal plants. P. pyramidalis was selected for the other experiments by presenting more representative gains. In drought and salt experiments, this species under well-watered condition was more benefited with AMF isolated, with higher photosynthesis and biomass. When submitted to drought, plants with AMF, Pi or both did not have reductions in shoot biomass and had a proline accumulation; plants with AMF isolated had higher concentrations of sugars and chlorophyll. After rehydration, plants with AMF, Pi or both had a recovery in gas exchange, while plants without AMF and Pi showed a partial recovery compared to Control plants. However, plants with AMF isolated submitted to drought had a higher photosynthesis compared to Control after rehydration. Under saline condition, plants with AMF, Pi or both were benefited, showed lower reductions in gas exchange and no reduction in shoot biomass. Plants with AMF isolated under salt had less accumulation of Na+ and Cl- in leaves and roots, while plants with Pi and AMF+Pi had higher accumulation of Cl- in leaves. Plants without AMF and Pi showed a higher concentration of Cl- in roots. Therefore, the leaf Pi supply, AMF or both promoted a higher tolerance in P. pyramidalis to drought and salt. However, the superior response was observed in plants with isolated AMF.
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Fungos hipógeos (Basidiomycota) na Mata Atlântica do Nordeste do Brasil

SULZBACHER, Marcelo Aloisio 18 February 2016 (has links)
Submitted by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-06-07T17:39:00Z No. of bitstreams: 1 TESE Marcelo Aloísio Sulzbacher.pdf: 4102980 bytes, checksum: d202dab1ee16f71bb521b95e117d554f (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-07T17:39:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TESE Marcelo Aloísio Sulzbacher.pdf: 4102980 bytes, checksum: d202dab1ee16f71bb521b95e117d554f (MD5) Previous issue date: 2016-02-18 / CAPES / Os basidiomicetos sequestroides hipógeos têm sido considerados importantes integrantes de diversos ecossistemas terrestres, notadamente os florestais. Estão constituídos por diversas linhagens distintas que apresentam como características comuns os basidiomas angiocárpicos e subterrâneos. A distribuição destes fungos ainda é pouco compreendida e as comunidades de fungos hipógeos ocorrentes nas regiões tropicais e subtropicais são praticamente desconhecidas. Para o Brasil, os registros de fungos hipógeos são escassos, estes, geralmente são associados à vegetação exótica. Com o objetivo de ampliar o conhecimento sobre estes fungos naturalmente encontrados nas florestas da região Nordeste do Brasil, um estudo foi desenvolvido a partir da análise de espécimes coletados entre 2011 a 2013, nos fragmentos florestais de Mata Atlântica nos Estados do Rio Grande do Norte e Paraíba. Além dos estudos in situ, compilaram-se também dados de literatura, com o principal objetivo de fornecer um atual estado de conhecimento destes fungos em todo o continente Sul Americano. Para os estudos in loco, foram realizadas 33 expedições científicas nas áreas de estudo e um total de 24 coleções amostradas. Todo o material coletado foi também separado para extração, amplificação e sequenciamento do DNA, utilizando-se os marcadores ITS, LSU, apt6, e TEF-1alpha. Dentre os principais resultados deste estudo destacam-se a proposta de estabelecimento de dois novos gêneros para a ciência, Restingomyces (Phallales) e Sulcatospora (Boletales) e além das espécies novas Sulcatospora flava, Restingomyces reticulatus e Hysterangium atlanticum. A associação ectomicorrízica entre Hysterangium atlanticum foi determinada para espécies de Coccoloba alnifolia e C. laevis (Polygonaceae). Os resultados demonstraram que as florestas de Mata Atlântica no Nordeste do Brasil apresentam uma comunidade nativa de fungos hipógeos ainda pouco explorada. Muitos espécimes coletados são inéditos para a ciência, o que torna a pesquisa de fungos hipógeos na Mata Atlântica extremamente importante. / Hypogeous sequestrated Basidiomycota have been considered important members of various terrestrial ecosystems, notably forestry. These fungi comprise diverse independent lineages that have as common characteristics belowground basidiomata and enclosed hymenial development. The geographical distribution of these fungi is poorly understood and the hypogeous fungal communities related to tropical and subtropical areas remain virtually unknown. To Brazil, there are few reports of hypogeous fungi, these are generally associated with exotic forests. With the aim to increase the knowledge of these fungi naturally occurring in association with the Northeastern Brazilian vegetation, a study was developed based on the analysis of specimens sampled between 2011 and 2013 in fragments of the Brazilian Atlantic forest in the states of Rio Grande do Norte and Paraíba. In addition to the in situ surveys, literature records were also compiled to obtain the current knowledge of this group of fungi in the entire South American continent. In total, 33 field trips were carried out and a total of 24 specimens sampled. All material was also sampled for molecular studies using the ITS, LSU, apt6, and TEF-1α markers. Among the main results, the proposition of two new genera, Restingomyces (Phallales) and Sulcatospora (Boletales), and the new species Restingomyces reticulatus, Sulcatospora flava and Hysterangium atlanticum. The ectomycorrhizal status of Hysterangium atlanticum and species of Coccoloba alnifolia and C. laevis (Polygonaceae) was also determined. The results has shown that Atlantic forest in Northeastern Brazil have a native community of hypogeous fungi and remains undersampled. Many of the specimens collected are new to science, which makes the study of great importance in the Brazilian Atlantic forests.
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Quantificação de ácidos graxos da biomassa de Mucorales Coprófilos do semiárido de Pernambuco

SOUZA, Carlos Alberto Fragoso de 25 February 2015 (has links)
Submitted by Fernanda Rodrigues de Lima (fernanda.rlima@ufpe.br) on 2018-07-10T19:35:44Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Carlos Alberto Fragoso de Souza.pdf: 2160643 bytes, checksum: 3c9a10b0966e61d5e1020d81f90b71c8 (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-07-12T21:39:13Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Carlos Alberto Fragoso de Souza.pdf: 2160643 bytes, checksum: 3c9a10b0966e61d5e1020d81f90b71c8 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-12T21:39:13Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Carlos Alberto Fragoso de Souza.pdf: 2160643 bytes, checksum: 3c9a10b0966e61d5e1020d81f90b71c8 (MD5) Previous issue date: 2015-02-25 / FACEPE / Mucorales são fungos morfologicamente simples pertencentes ao subfilo Mucoromycotina, caracterizados pela produção de esporos de origem sexuada, denominados zigósporos. Em maioria, esses microrganismos são sapróbios e comumente isolados de solo, excrementos, grãos estocados, plantas, de outros fungos, de vertebrados e invertebrados. Embora os Mucorales tenham sido estudados em alguns países, como Brasil, Estados Unidos, China, Índia e Inglaterra, poucos são os relatos sobre a comunidade desses fungos em regiões semiáridas. Espécies dessa ordem têm sido amplamente estudadas, não apenas pelas relações ecológicas que estabelecem com outros seres nos ecossistemas, mas pelo elevado potencial biotecnológico que apresentam, tendo algumas sido citadas como promissoras para a produção de biosisel. Desta forma, essa dissertação teve como objetivos inventariar e comparar as comunidades de Mucorales em excrementos de diferentes espécies e raças de animais herbívoros do semiárido de Pernambuco, pela frequência de ocorrência e riqueza de espécies, bem como conhecer e quantificar os ácidos graxos da biomassa dos táxons. Foram realizadas oito coletas de excrementos de bovinos (Bos taurus L.), caprinos (Capra hircus L.) e ovinos (Ovis aries L.) nas estações do Instituto Agronômico de Pernambuco (IPA), localizadas nas cidades de Arcoverde, Serra Talhada e Sertânia. As amostras foram acondicionadas em sacos plásticos limpos, transportadas ao laboratório e incubadas em câmaras úmidas, em triplicata, por 10 dias. Para a extração de ácidos graxos, inóculos utilizados para o crescimento em meio líquido foram obtidos a partir de culturas crescidas em placas de Petri contendo BDA durante cinco dias a 28ºC. Após este período, blocos de gelose foram transferidos para os Erlenmeyers contendo 100 mL de MEA e incubados a 28°C por 7 dias, sob rotação. Após o crescimento, 10 mg da biomassa de cada espécie foram pesadas para a extração e metilação dos ácidos graxos e, em seguida, analisadas por cromatografia gasosa. Foram isolados 24 táxons de Mucorales distribuídos entre Absidia, Circinella, Cunninghamella, Lichthemia, Mucor, Pilobolus, Rhizopus e Syncephalastrum. Os excrementos de ovinos apresentam maior riqueza de espécies de Mucorales, seguidos pelos de bovinos, sendo M. circinelloides f. griseocyanus o mais frequente, seguido por M. ramosissimus. A composição das espécies de Mucorales foi mais similar entre as raças Guzerá e Sindi (bovinos), seguidas por Girolando (bovino) e Morada Nova (ovino). Treze ácidos graxos diferentes foram encontrados na biomassa dos Mucorales, estando os ácidos palmítico e o oléico presentes em todas as espécies analisadas. Maiores concentrações de ácidos graxos foram verificadas para o ácido oléico em M. circinelloides f. griseocyanus e em C. echinulata var. echinulata, tendo Lichtheimia brasiliensis apresentado a mais variada composição desses ácidos. / Mucorales are morphologically simple Mucoromycotina characterized by the production of zygospores. These microorganisms are commonly isolated as saprobes from soil, dung, stored grain, plants, other fungi, vertebrates and invertebrates. Although these fungi have been studied in several countries, such as Brazil, USA, China, India and England, there are relatively few reports of these fungi in semiarid areas. Mucorales have been widely studied for the ecological relationships they establish with other beings in ecosystems. Some of these microorganisms have been cited as promising for industrial scale biodiesel production. Therefore, the aim of the present study was to assess and compare the Mucorales communities in the dung of different species and breeds of herbivores in the semiarid region of Pernambuco, based on the frequency of occurrence and species richness, as well as to quantify fatty acids from the biomass of the taxa. Eight samplings of cattle (Bos taurus L.), goat (Capra hircus L.) and sheep (Ovis aries L.) dung were performed at IPA (Instituto Agronômico de Pernambuco) stations in the cities of Arcoverde, Serra Talhada and Sertânia. The samples in triplicate were placed in clean plastic bags for transportation to the laboratory and then incubated in moist chambers for 10 days. For the extraction of fatty acids the inoculum used for the growth in liquid medium was obtained from cultures grown in Petri dishes containing PDA at 28ºC for five days. After this time blocks of agar were transferred to Erlenmeyer flasks containing 100 mL of MEA and incubated at 28 °C for 7 days under rotation. After cultivation, 10 mg of biomass was weighed for the extraction and methylation of fatty acids, before being analyzed using gas chromatography. Altogether, 24 taxa of Mucorales distributed among Absidia, Circinella, Cunninghamella, Lichthemia, Mucor, Pilobolus, Rhizopus and Syncephalastrum were identified. The highest species richness was found in sheep excrement. Mucor circinelloides f. griseocyanus was the most common taxon, followed by M. ramosissimus. The similarity of the composition of Mucorales species was greatest between the Guzerá and Sindi breeds (cattle), followed by Girolando (cattle) and Morada Nova (sheep). Thirteen different fatty acids were found in the biomass of the Mucorales, with palmitic and oleic acid found in all species. The greatest fatty acid concentrations were found for oleic acid in M. circinelloides f. griseocyanus and C. echinulata var. echinulata. Lichtheimia brasiliensis exhibited the most varied composition of these acids.
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Fungos contaminantes da pluma do algodão e seus efeitos sobre as características tecnológicas da fibra

NASCIMENTO, Jacilane Fernandes do 13 February 2015 (has links)
Submitted by Fernanda Rodrigues de Lima (fernanda.rlima@ufpe.br) on 2018-07-10T20:18:20Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Jacilene Fernandes do Nascimento.pdf: 529146 bytes, checksum: 76248fe41729c5bffa909c8ee41d0974 (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-07-12T21:48:17Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Jacilene Fernandes do Nascimento.pdf: 529146 bytes, checksum: 76248fe41729c5bffa909c8ee41d0974 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-12T21:48:17Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Jacilene Fernandes do Nascimento.pdf: 529146 bytes, checksum: 76248fe41729c5bffa909c8ee41d0974 (MD5) Previous issue date: 2015-02-13 / O agronegócio do algodão é uma atividade de grande importância econômica tanto na geração de renda como na ocupação de mão de obra e na criação de emprego no mundo. A pluma do algodão destaca-se como a mais importante matéria-prima utilizada em toda a cadeia têxtil do Brasil, que é um dos principais segmentos da indústria de transformação e, consequentemente, da economia do país. As fibras de algodão contêm 94% de celulose na sua massa seca. A degradação deste componente conduz a uma perda completa da estrutura e resistência das fibras. Os fungos são importantes contaminantes da pluma do algodoeiro e podem determinar a perda de qualidade do produto. Microrganismos celulolíticos desempenham um papel importante na biosfera, pela reciclagem de celulose, o hidrato de carbono mais abundante produzida pelas plantas. As celulases secretadas por fungos filamentosos são formadas por três componentes principais: as exoglucanases ou celobiohidrolases, as endoglucanases ou celodextrinases, e as celobiases ou β-glicosidases. Os objetivos deste trabalho foram isolar, identificar e avaliar a capacidade de fungos contaminantes da pluma do algodão em produzir celulases que pudessem alterar as características tecnológicas da fibra interferindo na sua qualidade da intrínseca. Plumas de algodão de sete estados (Mato Grosso, Bahia, Mato Grosso do Sul, Goiás, Ceara, Rio Grande do Norte e Paraíba) foram fornecidas pela empresa Coteminas S/A e de pequenos produtores. Foram obtidos 128 isolados fúngicos pertencentes a 16 gêneros (Aspergillus, Penicillium, Cladosporium, Colletotrichum, Paecilomyces, Fusarium, Scolecobasidium, Phomopsis, Phoma, Torula, Rhizopus, Periconia, Fusiocladium, Acremonium, Wallemia, Bipolaris). Desses 128 isolados analisados, 35 isolados fúngicos (27,35 %) apresentaram atividade de degradação da carboximetilcelulose. Os valores dos índices enzimáticos (IE) variaram de 1,05 a 2,75. Oito isolados com maiores IE foram reinoculados na fibra e armazenados e mensalmente amostras de 10 gramas em triplicata foram retiradas e suas características tecnológicas analisadas pelo aparelho High Volume Instrument (HVI). Com as análises de variância dos dados obtidos para as variáveis da fibra observou-se que houve significância estatística para a maioria das variáveis, em especial para comprimento médio, resistência, maturidade, índice de micronarie, refletância e grau de amarelo, que foi em nível de 5% de probabilidade. Para as características intrínsecas, comprimento médio, resistência, maturidade, índice micronarie, índice de fiabilidade a interação dos isolados e tempo foi significativa. Para as características extrínsecas da fibra, como reflectância e grau de amarelecimento houve modificações após a colonização fúngica sendo que o grau de amarelecimento aumentou e a reflectância diminuiu. Com os resultados obtidos conclui-se que fungos que contaminam a pluma do algodão possuem potencial celulolítico e sua colonização pode interferir nas características intrínsecas da fibra e consequentemente em sua qualidade. / The agribusiness cotton is an important economic activity both in the generation of income as the hand of occupation of work and job creation in the world. The plume cotton stands out as the most important raw material used throughout the textile chain in Brazil, which is one of the main segments of the manufacturing industry and hence the economy. Cotton fibers containing 94% cellulose in its dry mass. The degradation of this component leads to a complete loss of structure and fiber strength. Fungi are important contaminants of cotton lint and can determine the loss of product quality. Cellulolytic microorganisms play an important role in the biosphere, recycling cellulose, the most abundant carbohydrate produced by plants. The cellulase secreted by filamentous fungi are formed by three main components: exoglucanases or cellobiohydrolases, endoglucanases or celodextrinases, and celobiases or β- glucosidases. The objectives of this study was to isolate, identify and assess the ability of fungal contaminants of cotton lint to produce cellulases that could alter the technical characteristics of the fiber interfering in its intrinsic quality. Seven states of cotton down (Mato Grosso, Bahia, Mato Grosso do Sul, Goias, Ceara, Rio Grande do Norte and Paraíba) were provided by the company Coteminas S / A and small producers. 128 were obtained fungal isolates belonging to 16 genera (Aspergillus, Penicillium, Cladosporium, Colletotrichum, Fusarium, Paecilomyces, Scolecobasidium, Phomopsis, Phoma, Torula, Rhizopus, Periconia, Fusiocladium, Acremonium, Wallemia, Bipolaris). Of these 128 isolates analyzed, 35 fungal isolates (27.35%) had the carboxymethyl cellulose degradation activity. The values of the enzymatic indices (SI) varied from 1.05 to 2.75. Eight strains with higher IE were reinoculated in fiber and stored in monthly samples of 10 grams in triplicate were removed and their technological characteristics analyzed by High Volume Instrument instrument (HVI). In the analyzes of variance of the data obtained for the variables fiber was observed that there were significant for most variables, particularly for medium length, resistance, maturity, micronarie index, reflectance and degree of yellow, which was level of 5% probability. For the intrinsic characteristics, medium length, strength, maturity, micronarie index, reliability index the interaction of the individual and time was significant. For the extrinsic characteristics of the fiber, such as reflectance and the degree of yellowing were no changes after fungal colonization and the degree of yellowing increased and decreased reflectance. With the results obtained it is concluded that fungi that contaminate the plume cotton have cellulolytic potential and its colonization can interfere with the intrinsic characteristics of the fiber and their quality.
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Funcionamento e estrutura da comunidade microbiana em áreas reflorestadas com Eucalyptus grandis após extração de argila no litoral sul de Pernambuco

SANTOS, Vilma Maria dos 15 March 2013 (has links)
Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-07-31T21:29:17Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Vilma Maria dos Santos.pdf: 1259682 bytes, checksum: 5cc1c3e4cd8503ed8da9b1400900352e (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-08-02T17:48:10Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Vilma Maria dos Santos.pdf: 1259682 bytes, checksum: 5cc1c3e4cd8503ed8da9b1400900352e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-02T17:48:10Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Vilma Maria dos Santos.pdf: 1259682 bytes, checksum: 5cc1c3e4cd8503ed8da9b1400900352e (MD5) Previous issue date: 2013-03-15 / FACEPE / Em todo o mundo, grandes áreas vêm sendo devastadas pela atividade mineradora e a recuperação ou reabilitação desses locais é motivo de grande preocupação. O objetivo geral desta tese foi avaliar a intensidade e indicar a direção das mudanças no funcionamento microbiológico (FM) e na estrutura da comunidade microbiana do solo promovidas pela revegetação com Eucalyptus grandis em áreas degradadas pela mineração de argila no litoral de Pernambuco, Brasil. O estudo foi conduzido no município de Cabo de Santo Agostinho em quatro áreas pós-mineração, três reflorestadas com eucalipto com diferentes idades e uma em processo de recuperação espontânea. Uma área adjacente sob vegetação nativa (Mata Atlântica) foi usada como referência das características originais do solo. O funcionamento microbiológico do solo foi representado pelas análises de carbono da biomassa microbiana, respiração basal e atividade das enzimas β-glicosidase, urease, β-glicosaminidase, fosfatase ácida, arilsulfatase, desidrogenase e hidrólise do diacetato de fluoresceína. A estrutura da comunidade microbiana foi determinada pela análise de ésteres metílicos de ácidos graxos (FAMEs). Os resultados demonstram que a revegetação com eucalipto promove o rápido restabelecimento do FM e o desenvolvimento da comunidade microbiana em solos após mineração de argila. As mudanças observadas são no sentido da recuperação das condições existentes nas áreas anteriormente à mineração, no entanto o grau desta recuperação é dependente do tempo de revegetação com eucalipto. / Throughout the world, large areas have been devastated by mining activity and the recovery or rehabilitation of these sites is cause for great concern. The general aim this thesis was to evaluate the intensity and indicate the direction of changes in the microbiological functioning (MF) and in the structure of the microbial community promoted by revegetation with Eucalyptus grandis in areas degraded by clay mining in the coast of Pernambuco, Brazilian Northeast. The study was conducted in the municipality of Cabo de Santo Agostinho in four post-mining areas, three reforested with eucalyptus with different ages and one in the process of spontaneous recovery. An adjacent area under native vegetation (Atlantic Forest) was used as reference of the original soil characteristics. The microbiological functioning of soil was represented by microbial biomass carbon analysis, basal respiration and activity of enzymes β-glucosidase, urease, β-glucosaminidase, acid phosphatase, arylsulfatase, dehydrogenase and hydrolysis of fluorescein diacetate. The structure of the microbial community was determined by the analysis of fatty acid methyl ester (FAMEs). The results demonstrate that revegetation with eucalyptus promotes the rapid reestablishment of MF and the development of the microbial community in clay mining soils. The observed changes are towards the recovery of existing conditions in the areas prior to mining; however, the degree of this recovery is dependent on the time of revegetation with eucalyptus.
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Produção de inóculo micorrízico: otimização em substrato com adubos orgânicos

COELHO, Ieda Ribeiro 08 March 2012 (has links)
Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-07-31T21:18:20Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Ieda Ribeiro Coelho.pdf: 382504 bytes, checksum: 79cc4bf87d75e83442feb42baa5e2cec (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-08-02T17:50:12Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Ieda Ribeiro Coelho.pdf: 382504 bytes, checksum: 79cc4bf87d75e83442feb42baa5e2cec (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-02T17:50:12Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Ieda Ribeiro Coelho.pdf: 382504 bytes, checksum: 79cc4bf87d75e83442feb42baa5e2cec (MD5) Previous issue date: 2012-03-08 / CAPES / O sistema de produção de inóculo de fungos micorrízicos arbusculares (FMA) usando areia e vermiculita irrigados com solução nutritiva é promissor. Porém, fontes orgânicas adicionadas ao substrato de cultivo podem estimular a esporulação dos FMA e substituir a solução nutritiva. O objetivo deste estudo foi selecionar substratos orgânicos que, adicionados ao sistema areia:vermiculita, maximizem a produção de inóculo micorrízico. Foram conduzidos três experimentos: o primeiro para selecionar o substrato orgânico para produção de inóculo; o segundo para determinar a infectividade dos inóculos que produziram mais esporos; o terceiro para avaliar a eficiência dos inóculos produzidos. No primeiro experimento testaram-se quatro substratos usando areia e vermiculita adicionados de: (a) solução nutritiva = controle; (b) 10 % de vermicomposto; (c) 10 % de pó de coco; (d) 10 % de Tropstrato® e quatro isolados de FMA: Acaulospora longula, Claroideoglomus etunicatum, Dentiscutata heterogama e Gigaspora albida. Como hospedeiro, utilizou-se painço (Panicum miliaceum). Após 60 dias de manutenção dos potes em telado quantificaram-se os esporos. No segundo experimento, utilizaram-se amostras dos inóculos produzidos com 10 % de vermicomposto. Amostras do inóculo, constituído por esporos, hifas e raízes colonizadas, foram diluídas nas proporções 1:10; 1:100: 1:1000 (v/v) com areia autoclavada utilizando-se milho como planta hospedeira. Após 30 dias em telado, foi avaliada a presença de estruturas micorrízicas nas raízes para determinar o número mais provável de propágulos infectivos. Raízes cultivadas no substrato 1:10 também foram usadas para avaliação da infectividade dos inóculos pelo método da percentagem média de infecção. No terceiro experimento, os isolados produzidos com vermicomposto (10%) foram testados quanto à eficiência em plantas de milho, em solo coletado em área de Caatinga nativa. Após 70 dias da inoculação avaliou-se a biomassa das mudas. A produção de esporos variou em função da fonte orgânica adicionada. O vermicomposto adicionado à areia e vermiculita proporcionou maior esporulação para o isolado de A. longula, em relação aos demais substratos. O inóculo de A. longula produzido também apresentou elevado número de propágulos infectivos e eficiência em promover acúmulo de biomassa em plantas de milho. Conclui-se que o sistema de produção de inóculo utilizando areia e vermiculita + 10 % vermicomposto favorece a produção de inóculo infectivo de A. longula, com o fungo beneficiando o crescimento do hospedeiro. / The system of production of inoculum of arbuscular mycorrhizal fungi (AMF) using sand and vermiculite irrigated with nutrient solution is promising. However, organic amendments added to the substrate can stimulate sporulation of AMF and replace the nutrient solution. The aim of this study was to select organic substrates which, added to the system sand: vermiculite, maximize the production of mycorrhizal inoculum. Three experiments were conducted: the first to select the organic substrate for the production of inoculum; the second to determine the infectivity of inoculum that produced more spores; the third to evaluate the efficiency of the inoculum produced. In the first experiment, the treatments consisted of four substrates [sand and vermiculite added of: (a) nutrient solution = control; (b) 10 % of vermicompost; (c) 10 % of coconut powder; (d) 10 % Tropstrato®] and four AMF: Acaulospora longula, Claroideoglomus etunicatum, Dentiscutata heterogama and Gigaspora albida. Panicum miliaceum (millet) was used as host. After 60 days of maintenance of the pots in a greenhouse the spores were quantified. In the second experiment, inoculum produced with 10% vermicompost was used. Samples of inoculum consisting of spores, hyphae and colonized roots were diluted [1:10, 1:100, 1:1000 (v / v)] with autoclaved sand using Zea mays (maize) as host plant. After 30 days in the greenhouse the presence of mycorrhizal structures was assessed in the roots to determine the most probable number of infective propagules. Roots grown in the substrate 1:10 were also used to evaluate the infectivity of the inoculum by the average percentage of infection. In the third experiment, the efficiency of the inoculum produced in vermicompost (10 %) was tested in maize plants, in soil collected in an area of native Caatinga. After 70 days of inoculation, biomass of the seedlings was evaluated. The production of spores varied according to the organic source added. The vermicompost added to sand and vermiculite provided the highest number of spores of A. longula, compared to other substrates. The inoculum of A. longula also showed a high number of infective propagules and promoted biomass accumulation in maize plants. In conclusion, the inoculum production system using sand and vermiculite + 10 % vermicompost favors the production of infective inoculum of A. longula with the fungus benefiting the host growth.
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Purificação da β-Galactosidase produzida por Penicillium islandicum URM5073 mediante Concanavalina-A imobilizada em nanopartículas magnéticas

FIRMINO, Thiago Véras Cavalcanti 24 February 2015 (has links)
Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-08-02T18:30:16Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Thiago Véras Cavalcanti Firmino.pdf: 1092318 bytes, checksum: 50dae88dbca7c74c9478dfe47efd7484 (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-08-03T21:04:05Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Thiago Véras Cavalcanti Firmino.pdf: 1092318 bytes, checksum: 50dae88dbca7c74c9478dfe47efd7484 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-03T21:04:05Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Thiago Véras Cavalcanti Firmino.pdf: 1092318 bytes, checksum: 50dae88dbca7c74c9478dfe47efd7484 (MD5) Previous issue date: 2015-02-24 / FACEPE / O objetivo deste trabalho foi imobilizar covalentemente concanavalina-A (Con-A) à nanopartículas magnéticas do tipo magnetita-PANI para purificação da β-galactosidase a partir do fungo Penicillium islandicum URM5073. As condições de imobilização da Con-A e purificação da β-galactosidase, foram aperfeiçoadas através de planejamento fatorial fracionado 2⁶⁻², cuja análise foi realizada em função de duas respostas: quantidade de lectina imobilizada às nanopartículas e β-galactosidase retida na lectina imobilizada, com variáveis independentes a concentração de proteínas, o pH de solução, quantidade de suporte (mg), tempo de reação com o glutaraldeído, concentração do glutaraldeído e tempo de imobilização. A análise estatística mostrou os efeitos estimados das variáveis sobre o processo de imobilização da concanavalina-A em resposta a quantidade de proteína ligada ao suporte. De acordo com esta análise duas variáveis influenciaram significativamente a imobilização de concanavalina-A em suporte magnético, concentração de proteína e pH da reação. A concentração de proteína mostrou efeito positivo significativo, sugerindo que um aumento no valor deste parâmetro aumenta a imobilização de concanavalina-A às nanopartículas. No entanto, pH mostrou efeito negativo significativo, sugerindo que uma redução no valor do parâmetro aumenta a quantidade de proteína fixada ao suporte. A análise de amostras a partir da purificação de β-galactosidase do extrato bruto de Penicillium islandicum, a enzima comercial de Aspergillus oryzae e a β-galactosidase comercial contaminada com caseína e albumina foi realizada usando os dados obtidos a partir da dosagem de proteínas pelo método de dosagem de Lowry e realizada uma eletroforese SDS-PAGE. Esta metodologia indicou que a enzima purificada revelou uma redução de bandas de proteínas, sendo a β-galactosidase indicada com uma massa molecular aproximadamente de 100 kDa. Uma patente será depositada com base nos resultados obtidos da imobilização de Con-A em nanopartículas magnéticas e sua aplicação na purificação de β-galactosidase. / The aim of work was to immobilize concanavalin-A (Con-A) covalently to magnetic nanoparticles of magnetite-PANI type for purification of β-galactosidase produced by the fungus Penicillium islandicum URM5073. The conditions of Com A immobilization and β-galactosidase purification, were optimized by factorial design 2⁶⁻², whose analysis was performed according to two dependent variables: amount of lectin immobilized on nanoparticles and β-galactosidase retained in lectin. The Pareto chart analysis showed the estimated effects of variables on the process of Con-A immobilization in response to amount of protein bound to support. According this analysis, two significantly variables influence the immobilization of concanavalin-A on magnetic nanoparticle, the protein concetration and pH reaction. The protein concentration showed a significant positive effect, suggesting that an increase in the value of this parameter increases the immobilization of concanavalin-A to the nanoparticles. However, pH showed significant adverse effects, suggesting that a reduction in the value of the parameter increases the amount of protein attached to the support. The analysis of samples from the purification of β-galactosidase crude extract fermented by Penicillium islandicum, commercial Aspergillus oryzae enzyme and β-galactosidase contaminated commercial casein and albumin was performed using the data obtained from the protein content Lowry dosage method and used for SDS-PAGE electrophoresis. This method indicated that the purified enzyme showed a reduction of protein bands, with the β-galactosidase indicated with a molecular mass of approximately 100 kDa. A patent shall be paid based on the results of Con-A immobilized on magnetic nanoparticles and its application in β-galactosidase purification.

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