Se realizó el estudio electroforético de proteínas seminales totales de 18 individuos de poblaciones silvestres de Caesalpinia spinosa (Molina) Kuntze, procedentes de Tarma, Ayacucho y Cajamarca, en geles de poliacrilamida con Sodio Dodecil Sulfato SDS-PAGE. Las proteínas fueron extraídas a partir de la harina de la semilla mediante el uso de un buffer de extracción que contenía 0.5M Tris-HCl (pH 8.0), 0.2% SDS, 5M úrea y 1% 2-mercaptoetanol, glicerol al 10 % (v/v). La cantidad de proteínas se determinó mediante el método de Biuret. Asimismo mediante el análisis densitométrico se logró identificar 22 bandas proteicas las cuales mostraron diferencias en sus movilidades. De esta manera se obtuvieron modelos electroforéticos diferentes para algunos de los individuos y mediante un análisis de conglomerados (método UPGMA) se obtuvo un dendrograma que mostró la distinción entre individuos en dicho carácter, permitiendo expresar las diferencias entre ellos. Se identificó que existen bandas únicas las cuales solamente se encuentran en individuos de Cajamarca (banda de 94-91 kDa y de 49-46 kDa) y bandas que son excluyentes pues solamente se encuentran en individuos de Tarma y Ayacucho (64-61 kDa). Por lo que se concluye se concluye que la cantidad de proteínas no guarda relación con la zona de procedencia, que los individuos analizados comparten un mismo acervo genético y que el patrón electroforético de la semillas de “tara” analizadas permite identificar su procedencia geográfica.

Orientador: Antonio Baldo Geraldo Martins / Banca: Carlos Ruggiero / Banca: Rogerio Falleiros Carvalho / Banca: Aparecida Conceição Boliani / Banca: Simone Rodrigues da Silva / Resumo: O cultivo da pitaya pode ser uma fonte de diversificação da atividade agrícola e são espécies promissoras, pois agrega rusticidade de cultivo e beleza dos frutos aliada a uma composição rica em compostos funcionais, trazendo benefícios a quem a consome. Visando contribuir com informações sobre a cultura, este trabalho objetivou selecionar materiais possíveis para utilização em programas de melhoramento, ou para lançamento como variedade, de forma a diversificar o produto oferecido, e discutir técnicas de produção e manejo de mudas. A partir de cruzamentos manuais controlados utilizando-se a espécie Hylocereus undatus como planta mãe e pólen das espécies H. polyrhizus e H. setaceus, foram obtidos 45 híbridos potenciais, que apresentaram maior vigor, com características distintas entre si, comparados a partir de descritores morfológicos. Destes, 13 mostraram-se promissores para serem posteriormente avaliados quanto à qualidade de frutos e usados em programa de melhoramento. Um segundo experimento visou verificar a possibilidade de enxertia de H. megalanthus sobre H. undatus, avaliando-se diferentes métodos e material de enxertia. Os resultados mostram ser possível t a realização tanto da enxertia convencional como a enxertia de mesa, com pegamento superior a 80% quando utilizado fenda cheia ou inglês simples, e que o material utilizado influencia no sucesso da propagação. No terceiro experimento avaliou-se o tamanho da estaca utilizada para estaquia para quatro espécies de pitaya (H. undatus, H. polyrhizus, H. setaceus e H. megalanthus). Há diferenças em relação à resposta ao enraizamento em virtude da espécie e do tamanho da estaca, sendo que estacas de 20 cm foram as que proporcionaram melhores resultados para todas as espécies estudadas. O quarto experimento visou avaliar a utilização de substratos alternativos compostos a partir de resíduo da indústria ... / Abstract: Not available / Doutor

Orientador: Gustavo Vitti Môro / Banca: Marcelo Marchi Costa / Banca: Rinaldo César de Paula / Resumo: O comportamento diferencial de um grupo de genótipos avaliados em diferentes ambientes ocorre devido às interações entre genótipos e ambientes. Essas interações são amplamente estudadas, pois o seu entendimento pode caracterizar os ambientes de experimentação, podendo agrupar locais semelhantes e também identificar ambientes que possam levar a maior ou menor expressão das características de interesse de cada genótipo. Além disso, a compreensão da interação genótipo x ambiente é importante para que os métodos de seleção sejam calibrados para reduzir os seus efeitos e proporcionar resultados eficientes na identificação dos genótipos superiores, sejam eles estáveis ou de ampla ou específica adaptação. Assim, o presente trabalho teve como objetivo avaliar o resultado de produção de grãos e podridão de colmo de 36 genótipos de milho em 22 ambientes na safra 2012/2013. Os ambientes fazem parte da rede de experimentação da empresa Dow AgroSciences. A estratificação formou 24 grupos para produção de grãos e 21 para podridão de colmo. E a interação genótipo x ambiente foi predominantemente do tipo complexa para ambas as características. Utilizando os dois métodos em conjunto foi possível reduzir 3 pares de ambientes (1,03%) ) para produção de grãos e 10 pares de ambientes (4,33%) para podridão de colmo. Essa baixa redução demonstra a baixa similaridade entre os locais avaliados garantindo uma boa eficiência na seleção de genótipos de milho. Os genótipos mais estáveis, de adaptabilidade ampla e alta média de Produção de Grãos foram: HE30PW, HE12PW e HE22PW. E os mais estáveis, de adaptabilidade ampla e baixa média de Podridão de Colmo foram: HE31PW, HE16PW e HE17PW. Pelo teste de média os genótipos com o maior número de vitorias foram para Produção de Grãos: HE28PW, HE10PW, HE02PW, HE29PW e HE16PW e para Podridão de Colmo: HE29PW, HE27PW, HE16PW, HE08PW e HE02PW / Abstract: The differential behavior of a group of genotypes at different environments is due to the interaction between genotypes and environment. These interactions are widely studied, because its understanding can distinguish the environments for experimentation, by gathering similar environments and also to identify environments that can lead the genotype to express more or less its main phenotypes. Furthermore, the comprehension of the interaction it is important to calibrate the methods for selection of superior genotypes: stables one, or with specific or wide adaptability. Therefore, our objective was to evaluate the results of yield and stalk rots of 36 corn genotypes at 22 locations during the season 2012/2013. All the experiments are part of the Dow AgroSciences evaluation fields. Stratification formed 24 groups for yield and 21 for stalk rot. The interaction was mainly of the complex type for both traits. Analyzing both methods at the same time 3 environments pair (1,03%) could be reduced for yield and 10 pairs (4,33%) for stalk rot. This low location reduce capacity, shows the low similarity between locations and is an indication of the efficiency of the locations for corn selection. The most stable, with wide adaptability and highest yield were the genotypes: HE 30 PW, HE12PW and HE22PW. The most stable, with wide adaptability lowest stalk rot were: HE31PW, HE16PW and HE17PW. The Scott-Knott test showed that the genotypes with no significant difference to the checks in a higher number of locations for yield were: HE 28PW, HE 10PW, HE 02PW, HE 29PW and HE 16PW. For Stalk Rot the genotypes were: HE 29PW, HE 27PW, HE 16PW, HE 08PW and HE 02PW / Mestre

Resumo: O presente trabalho objetivou a avaliação da divergência genética entre linhagens e cultivares de soja com resistência ao nematóide de cisto (NCS) através de marcadores moleculares do tipo microssatélite, a fim de identificar genótipos similares e grupos heterogêneos. Foram utilizadas 30 cultivares de soja e 10 genótipos em geração F8, todos resistentes ao NCS. As análises foram realizadas com 12 iniciadores, a saber: Satt185, Satt308, Satt187, Satt070, Satt009, Satt129, Satt154, Satt152, Satt175, Satt045, Satt162 e Satt163. As análises de dissimilaridade foram realizadas através do complemento dos coeficientes de Coincidência Simples e de Rogers e Tanimoto. Os agrupamentos foram realizados pelos Métodos de Otimização de Tocher, Vizinho mais Próximo, Vizinho mais Distante, Ward, Ligação Média Dentro de Grupo, UPGMA e WPGMA. Em adição, foram feitas as projeções no plano bi e tridimensional. Os resultados mostraram coeficientes de dissimilaridade de Coincidência Simples e de Rogers e Tanimoto com médias de 0,36 e 0,5, respectivamente. Foram observados genótipos mais semelhantes e grupos mais divergentes, na maioria das vezes concordando com as respectivas fontes de resistência. Os resultados dos diferentes métodos aglomerativos confirmaram a existência de uma estrutura natural de agrupamento em função da similaridade genética entre os genótipos. Entretanto, o emprego de mais de um método de agrupamento pode ser recomendado devido às diferenças entre as metodologias. Alguns métodos mais comumente utilizados como o Vizinho Mais Distante, Ward, WPGMA e UPGMA foram considerados adequados ao agrupamento de genótipos no presente estudo, apresentando coincidência de resultados, inclusive em relação às genealogias dos genótipos analisados. As projeções no plano... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The present work aimed the evaluation of the genetic divergence among soybean lines and cultivars, resistant to cyst nematode (NCS). Therefore microsatellite molecular markers were used, with the objective of identify similar genotypes and heterogeneous groups. There were used 30 soybean cultivars and 10 genotypes in F8 generation, all of them resistant to NCS. The analyses were made using 20 primers (Satt185, Satt308, Satt187, Satt070, Satt009, Satt129, Satt154, Satt152, Satt175, Satt045, Satt162 and Satt163). The dissimilarity analyses were made through the complement of Simple Coincidence and Rogers and Tanimoto Coefficients. Clusters were performed by the following methods: Tocher Optimization, Single Linkage, Complete Linkage, Ward, Average Link Within a Group, UPGMA and WPGMA. In addition, the bi and tridimensional plan projections were made. The results showed average values of 0,36 and 0,5 in the Simple Coincidence and Rogers and Tanimoto dissimilarity coefficients, respectively. Most similar genotypes and most divergent groups were found, usually according to the respective resistant sources. Results of the different cluster methods confirmed a group's structure according to genotypes similarity. However, the use of many clustering methods should be recommended, because of their methodology differences. Some of the most used methods, like Complete Linkage, Ward, WPGMA and UPGMA, were considered adequate for clustering the genotypes in this case. There were observed coincidence of results confirming the genotypes genealogies. The plan projections were not satisfactory for these analyses, showing high distortion and stress. The results combination can be useful in the parental choice for crosses of Soybean Breeding Programs. / Orientador: Antonio Orlando Di Mauro / Coorientador: Sandra Helena Unêda Trevisoli / Banca: Rinaldo César de Paula / Banca: Antonio Luis de Oliveira / Mestre

Orientador: Catalina Romero Lopes / Banca: Edson Seizo Mori / Banca: Rogério Abdallah Curi / Resumo: O Arachis Pintoi é uma leguminosa forrageira de alta qualidade, apresentando valores de 18 a 25% de proteína bruta, 60 a 67% de digestibilidade "in vitro" da matéria seca e 60 a 72% de digestibilidade da energia bruta, além de apresentar grande aceitabilidade pelos animais. O valor nutritivo do A. Pintoi é mais alto quando comparado com gramíneas e leguminosas tropicais. No sistema de produção animal em pasto a utilização de leguminosa forrageira deve ser valorizada pela qualidade de produção e pelo alto valor nutritivo que é oferecido à dieta e também pelo aporte de nitrogênio atmosférico incorporado aos ecossistemas das pastagens. O uso de leguminosas em pastagens, no Brasil, ainda é muito limitado, seja porque o portfólio de cultivares é pequeno, ou porque o preço da semente ou do material vegetativo é elevado. Neste trabalho foram avaliados quatro genótipos de A. Pintoi (G1, G2, G3 e G4) oriundos de pré-seleção de um híbrido natural da espécie, utilizando o marcador molecular microssatélite visando à seleção de plantas homozigotas para, a partir delas, seguir o processo de melhoramento em cada genótipo para obtenção de linhagens puras. Foram utilizados nesta avaliação 14 locos de microssatélites dos quais, dez mostraram-se polimórficos e quatro monomórficos. O número de alelos observado variou de 1 a 11 por loco, com um total de 85 alelos e média de 8,5 por loco. A heterozigose observada variou de 0,3377 no loco AP183CV a 0,8701 no loco AP190CV com média de 0,6403. As plantas de maior homozigose foram selecionadas para dar continuidade ao processo de melhoramento e após avaliação agronômica poderão ser lançadas como potenciais cultivares de A. Pintoi. Considerando-se somente as plantas com homozigose superior a 70%, foi possível selecionar cinco plantas do genótipo G1 ...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Not available. / Mestre

Orientador: Ivan de Godoy Maia / Banca: Luis Eduardo Aranha Camargo / Banca: Adriane Pinto Wasko / Banca: Edson Seizo Mori / Banca: Esteban Roberto González / Resumo: Os cassetes de expressão empregados atualmente para a produção de plantas geneticamente modificadas são baseados, na sua maioria, em promotores constitutivos que determinam a expressão generalizada do transgene na planta, o que muitas vezes não é necessário nem desejado. A alternativa mais viável para substituição de tais promotores é investir na identificação e caracterização de promotores órgão/tecidoespecíficos ou estímulo-dependentes nas espécies de interesse. O presente projeto teve como objetivos identificar e caracterizar genes com padrão de expressão órgãoespecífico em eucalipto e, a partir dessas informações, isolar e caracterizar as seqüências promotoras adjacentes. Predições in silico no banco de dados do projeto de seqüências expressas do eucalipto (FORESTs), e informações disponíveis na literatura a respeito de genes com padrão de expressão órgão-específico, foram utilizadas na seleção. Assim, 59 genes preditos como possuindo expressão exclusiva em dado órgão foram selecionados para a validação via RT-PCR. Dos candidatos validados, 2 eram de raiz, 1 de folha, 1 de botão floral e 1 de botão floral e fruto, concomitantemente. Três candidatos ubíquos também foram selecionados. Dois desses candidatos tiveram seus perfis de expressão em diferentes órgãos de eucalipto avaliados por PCR quantitativa, indicando que o primeiro é preferencialmente expresso em folhas, e o segundo expresso especificamente em raiz. A partir de estratégias de "genome walking" foram isolados diferentes promotores putativos, sendo que o promotor do candidato com expressão preferencial em folha (1.2 kb) foi selecionado para a caracterização funcional em plantas usando o gene uidA, que codifica a -glucuronidase (GUS), como repórter. Em plântulas transgênicas de tabaco da geração T1, a expressão de GUS foi detectada majoritariamente... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Many plant genetic engineering applications require spatial expression of transgenes, which in turn depends upon the availability of tissue- and organ-specific promoters. In the present work, the identification of genes with organ-specific expression in Eucalyptus grandis was performed aiming the subsequent isolation and characterization of contiguous promoter sequences. Candidates genes were selected by in silico predictions in the Eucalyptus EST project (FORESTs) database or by searching the available literature for genes with specific expression patterns. Fifty-nine genes with predicted organ-specific expression were selected for further RT-PCR validation. Among the validated candidate genes, 2 were root-specific, 1 was leaf-specific, 1 was flower-bud-specific and 1 was flower-bud and fruit specific. Three genes ubiquitously expressed were also selected. The relative expression levels of two of them (one leafspecific and one root-specific) over a broad range of eucalyptus organ/tissues were determined using real time PCR. The 5' putative regulatory sequences of the validated genes were isolated using genome walking strategies, and the activity of the leafspecific promoter (1.2 kb) was further investigated in transgenic tobacco plants using a GUS reporter system. In transgenic seedlings from the T1 generation, GUS expression driven by this promoter was detected preferentially in cotyledons. In adult plants, however, GUS expression was detected in both stem and root, but in lower intensity if compared to the expression observed in leaves. This promoter was also able to modulate the transient expression of GUS in seedlings of Eucalyptus grandis. / Doutor

Resumo: A cafeína é um alcalóide do grupo das metilxantinas. Em café, sua síntese depende da ação de três enzimas: Metilxanthosina sintase (MS), Teobromina sintase (TS) e Cafeina sintase (CS). A crença de que o consumo de cafeína pode trazer problemas à saúde como também a sensibilidade aos efeitos da cafeína, em alguns consumidores, determinou um crescimento do mercado dos cafés descafeinados em pelo menos 10%. O processo de descafeinização hoje é baseado no uso de solventes, que acarreta em significante perda de compostos essenciais ao sabor e qualidade de bebida. Recentemente, foram descobertas três plantas de Coffea arabica naturalmente descafeinadas no banco de germoplasma do Instituto Agronômico de Campinas (IAC). Estas plantas foram nomeadas AC. Análises bioquímicas nas folhas de AC1 mostraram que esta planta acumula teobromina, percussor da cafeína, não sendo detectada atividade da cafeína sintase. Maluf em 2009 descreveu, a existência de transcritos extras em todas as fases de desenvolvimento de frutos de AC1. Estes transcritos também estão presentes nos estágios verde-cana e cereja de frutos do cultivar mundo novo. Esses resultados obtidos sugerem que o transcrito extra está relacionado ao mecanismo de não produção de cafeína em frutos maduros. Tais resultados representam a possibilidade do desenvolvimento de um cultivar naturalmente descafeinado, e estratégias de melhoramento vêm sendo utilizadas para a transferência desta característica para outros cultivares. O presente trabalho caracterizou as plantas com baixos teores de cafeína através de análises genéticas e moleculares. Através da analise da regulação da expressão do gene caffeine sinthase (CCS), em folhas de café com teores normais e baixos de cafeína. As quantificação dos níveis de expressão, analisados via PCR quantitativo em tempo real revelaram baixa expressão do gene em folhas... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Caffeine is an alkaloid from the methilxanthine group. In coffee the synthesis of caffeine is carried out by three enzymes, methylxanthosine synthase (MS), theobromine synthase (TS) and caffeine synthase (CS). Due to the belief that the caffeine could cause health problems and also to consumers sensitivity to caffeine, the consumption of decaffeinated coffee increased in about 10%. The decaffeination process is based on the use of solvents, this process results in a loss of essentials compounds of flavor and cup quality. Recently, three coffee plants with extremely low levels of caffeine were identified in the IAC Coffea Germoplasm Collection, among non-cultivated C. arabica accessions. They are named AC's. Bioquimistry assays in AC1 leaves show teobromine accumulation, caffeine precursor, no activity of caffeine synthase was detected. Maluf in 2009 described the existence of extra transcript in all development of AC1 fruit. Those transcripts are also present on latter development stages, yellowish-green and cherry. The Author suggest that this extra transcript is related to non-synthesis of caffeine in mature fruits of cultivar MN and during the development of AC1 fruits. These results represent the possibility of the development of low-caffeine cultivars and coffee breeding programs are been used due to transfer this characteristic to others cultivars. In this work, the naturally caffeine free plants have been caracterizated by molecular and genetics assays. Throught the characterization of the regulation of caffeine synthase gene expression. The quantification of expression by qRT PCR show low expression in leaves of ACs plants comparing the expression of MN and ET4, same cultivar of AC. Expression assays show that abramulosa mutant has low expression comparing to MN cultivar but seperflorens mutant showed a normal expression... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Ivan de Godoy Maia / Coorientador: Mirian Perez Maluf / Banca: Celso Luis Marino / Banca: Oliveiro Guerreiro Filho / Mestre

Orientador: Ivan de Godoy Maia / Banca: Celso Luis Marino / Banca: Marcio José da Silva / Resumo: A identificação de promotores com expressão tecido-específica é uma alternativa viável para substituição dos promotores com expressão ubíqua geralmente utilizados em transgenia. Nesse contexto, o presente trabalho teve como objetivos caracterizar funcionalmente o promotor de um gene de eucalipto que codifica um transportador de potássio com expressão específica em raiz bem como isolar e caracterizar a região promotora de um gene de eucalipto selecionado como apresentando expressão específica em folha. Plantas transgênicas de tabaco (Nicotiana tabacum SR1) contendo um cassete de expressão composto pelo promotor de raiz fusionado ao gene repórter GUS (que codifica a β-glucoronidase) foram usadas em ensaios histoquímicos e histológicos para investigar a especificidade da expressão determinada pelo promotor em estudo. Os resultados evidenciaram que o promotor investigado dirige a expressão do gene repórter em tecido vascular de folhas e raízes. A expressão em feixes vasculares de folhas e raízes foi confirmada em cortes histológicos. Visando avaliar a resposta deste promotor a baixas concentrações de potássio, duas linhagens da geração T2 foram submetidas à deficiência de potássio, e a expressão relativa do gene repórter GUS foi determinada por PCR em tempo real. Nas linhagens submetidas a estresse de potássio observou-se um aumento da expressão relativa do gene repórter GUS em função da privação do elemento. Em paralelo, um gene selecionado in silico como apresentando expressão em folha de eucalipto teve seu perfil de expressão validado por RT-PCR. A construção de um cassete de expressão contendo o referido promotor fusionado ao gene repórter GUS foi empreendida visando futuras validações funcionais / Abstract: The identification of tissue-specific promoters is of great value to substitute the ubiquitous promoters generally used in transgenic production. In this context, the present study aimed to functionally characterize the promoter of a Eucalyptus grandis gene encoding a potassium transporter showing root specific expression, and to isolate and functionally characterize the promoter region of an E. grandis gene selected as showing specific expression in leaf. Transgenic tobacco plants (Nicotiniana tabacum SR1) harboring a promoter:GUS fusion were used to investigate the expression specificity of the selected root promoter. The results showed that the investigated promoter drives a reporter gene expression in vascular tissues of leaves and roots. The expression in vascular bundles of leaves and roots was confirmed in histological crosssections. To evaluate the promoter responsiveness to low potassium concentrations, two transgenic lines (T2) were submitted to potassium starvation and the relative expression of the GUS reporter gene was determined by real time PCR. An increase in the relative expression of GUS in response to potassium starvation was observed. In parallel, the expression pattern of a gene showing leaf specific expression in Eucalyptus grandis was validated by RT-PCR. The construction of an expression cassette containing this promoter fused to the GUS reporter gene was performed aiming future functional characterization / Mestre

Orientador: Janete Apparecida Desidério / Coorientador: Odair Aparecido Fernandes / Banca: Maria Inês Tiraboschi Ferro / Banca: Juliana Regina Vieira da Costa / Resumo: A bactéria Bacillus thuringiensis (Bt) possui a capacidade de produzir inclusões protéicas (proteína Cry) e proteínas vegetativas (Vip). Estas proteínas podem ser tóxicas para insetos e por meio de transgenia, a expressão em plantas, podem também proporcionar controle de importantes pragas agrícolas. Nesse sentido, esta pesquisa teve por objetivo avaliar o potencial de controle das proteínas Cry1Aa, Cry1Ac, Cry1Ca, Vip3A(1), Vip3A(2) e Vip3A(3) em uma população brasileira da lagarta-da-maçã, Heliothis virescens (Lepidoptera: Noctuidae), bem como o efeito subletal e efeito sinérgico entre estas proteínas e a proteólise pelo suco do intestino do inseto praga em estudo. Para tanto, clones de Escherichia coli recombinantes portadores de genes únicos foram cultivados em meio para a indução das proteínas e os lisados obtidos foram utilizados para as análises de toxicidade por meio de bioensaios. Diferentes concentrações protéicas foram utilizadas para conduzir os bioensaios. A mortalidade foi avaliada e obteve-se a CL50. Desta forma, observou-se que, dentre as proteínas testadas, Cry1Ac (CL50 39,89 ng.cm-2), Vip3A(2) (CL50 945,77 ng.cm-2) e Vip3A(3) (CL50 874,45 ng.cm-2 ) foram as mais tóxicas e houve correlação negativa entre a concentração de proteínas e o peso das lagartas. Nos ensaios referentes ao efeito sinérgico das proteínas, ativadas e não ativadas com tripsina comercial, foram encontradas possíveis combinações eficientes no controle da praga em estudo destacando-se Vip3A(2)/Cry1Aa, Vip3A(1)/Cry1Aa, Vip3A(1)/Cry1Ac, e Vip3A(2)/Cry1Ac. Os resultados referentes à interação das enzimas digestivas do intestino de H. virescens com as toxinas Cry1 e Vip3A permitiram constatar que as proteínas são ativadas / Abstract: Bacillus thuringiensis (Bt) produces protein inclusions (Cry proteins) and vegetative proteins (Vip). Such proteins may act as toxic to some insects and through transgenesis plants they may be able to control important agricultural pests. Thus this work aimed to evaluate the control potential of Cry1Aa, Cry1Ac, Cry1Ca, Vip3A(1), Vip3A(2) and Vip3A(3) proteins in a Brazilian population of Heliothis virescens (tobacco budworm) (Lepidoptera: Noctuidae), as well as to analyze the sublethal and the synergic effects among these proteins and the proteolysis on the intestinal juice of this pest. In order to do this, Escherichia coli clones expressing each one of the above mentioned proteins were induced to produce them and the obtained lysates were used to determine the level of toxicity through bioassays with neonatal larvae of H. virescens. Different protein concentrations were used to carry out the bioassays. The mortality was evaluated and it was possible to detect the CL50. It was possible to observe that among the tested proteins, Cry1Ac (CL50 39.89 ng.cm-2), Vip3A(2) (CL50 945,77 ng.cm-2) and Vip3A (3) (CL50 874,45 ng.cm-2) were the most toxic and showed a negative correlation between the protein concentration and larvae weight. During the bioassays concerning the synergistic effect of these proteins, which were either previously activated or not using commercial trypsin, there we found efficient combinations for the control of the pest under study in this work, being that the combinations Vip3A(2)/Cry1Aa, Vip3A(1)/Cry1Aa, Vip3A(1)/Cry1Ac and Vip3A(2)/Cry1Ac were considered the best ones. The results with reference to the interaction of the digestive enzymes from the intestine of H. virescens larvae when using the toxins Cry1 and Vip3A allowed us to detect that these proteins are activated / Mestre

Orientador: Antônio Orlando Di Mauro / Coorientador: Sandra Helena Unêda-Trevisoli / Banca: Luís Fernando Alliprandini / Banca: Vanoli Fronza / Banca: Gustavo Vitti Moro / Banca: João Carlos de Oliveira / Resumo: Atualmente, a soja destaca-se como a mais importante oleaginosa cultivada no mundo. Os investimentos em pesquisa levaram à "tropicalização" da soja, permitindo, pela primeira vez na história, que o grão fosse plantado com sucesso, em regiões de baixas latitudes, entre o Trópico de Capricórnio e a linha do Equador. Em função disso tem-se buscado o desenvolvimento de genótipos com ampla adaptabilidade, o que implica em uma baixa interação genótipo x ambiente. O entendimento do tipo de interação permite um melhor posicionamento e indicação de regiões de plantio da cultivar em questão facilitando o trabalho do melhorista. A presença desse fenômeno pode acarretar uma redução da produtividade global de uma área para a qual se faça uma indicação geral de uma dada cultivar. Por outro lado, pode-se tirar proveito de sua existência usando-se procedimentos estatísticos que identifiquem o padrão dessa interação, e gerem informações que possibilitem o agrupamento de locais em zonas dentro das quais a magnitude da interação não seja significativa, permitindo indicações específicas de cultivares para tais zonas. O uso de ferramentas moleculares tem se apresentado como uma opção para seleção de características com base no genótipo e eliminando assim o efeito do ambiente na expressão da característica em questão. O melhoramento assistido por marcadores moleculares tem sido tema de inúmeros trabalhos de seleção assistida, cujos resultados variam de concretos e positivos a controversos e pouco significativos em termos de ganhos genéticos, econômicos e eficiência, quando comparados com a seleção fenotípica. Os capítulos seguintes permitem apresentar resultados de metodologias moleculares e convencionais aplicadas em um programa de melhoramento para seleção de genótipos superiores de soja. / Abstract: Nowadays, soybean highlights as the most important oilseed cultivated in the world. The investments in research led to soybean "tropicalization", allowing, for the first time in history, that the grain was seeded with success, in low latitudes, between the tropic of Capricorn and the Equator. Due to this, researchers have tried to develop wide adaptability genotypes, which implies in a low genotype x environment interaction. The comprehension of the type of interaction allows a better placement and indications of cultivar planting regions, facilitating the breeder's work. The presence of this phenomenon may result in a global productivity decrease of an area that make up an overall indication of a given cultivar. On the other hand, it is possible to take advantage of their existence using statistical procedures to identify the pattern of this interaction, and generate information that allow the grouping of local areas within which the magnitude of the interaction is not significant. Specific cultivar indication for these zones. The use o molecular tools have shown as an option for characteristics selection base on genotype and then eliminating the environment effect in the expression of the characteristic in question. The molecular marker-assisted breeding has been the subject of numerous works assisted selection, whose results varies from concrete and positive to controversial and little significant in terms of genetic gains, and economic efficiency compared to phenotypic selection. The following chapters present results provide molecular and conventional methodologies applied in a breeding program for superior genotypes selection. / Doutor