Este estudo avaliou os efeitos de extratos de culturas líquidas de Leifsonia xyli subsp. xyli (Lxx) cultivada sob condições de estresse osmótico e na presença de inibidores da rota não-mevalonato (MEP/DOXP) de síntese de pigmentos isoprenóides, na germinação de sementes de alface. Também avaliou a relação entre o efeito tóxico dos extratos e a produção de pigmentos pela bactéria. Os extratos foram obtidos do sobrenadante de culturas de Lxx usando acetato de etila como solvente. Ensaios com sementes de alface embebidas nos extratos indicaram uma ação inibitória na germinação das sementes e no alongamento das radículas quando a bactéria foi cultivada na presença de 7% de PEG 6000 ou 100 mM de NaCl. O extrato foi submetido a vários tratamentos térmicos (temperatura ambiente; 30, 60 e 90oC em banho-maria e 121oC por autoclavagem) e sua ação inibitória em sementes mostrou-se termoestável. A presença de pigmentos isoprenóides de células cultivadas com PEG ou NaCl e de células incubadas sem estes agentes estressantes foi avaliada por espectrofotometria após extração dos pigmentos com metanol. Em células cultivadas na ausência de estresse, notou-se um pico de absorbância bem definido no comprimento de onda de 400 nm, ao passo que este pico foi sensivelmente reduzido em células cultivadas sob estresse. Esse efeito foi mais pronunciado na presença de PEG. Para confirmar a natureza isoprenóide do composto, Lxx foi cultivada na presença de fosmidomicina ou difenilamina, que são inibidores da rota metabólica não-mevalonato destes compostos em Microbacteriaceae. Ambas as substâncias reduziram o pico de absorbância no espectro em relação a células cultivadas sem adição destes antibióticos, confirmando a natureza do composto e sua via de síntese. No entanto, a redução foi mais acentuada no caso da fosmidomicina. Por fim, a fosmidomicina foi utilizada com a finalidade de verificar seu efeito na toxidez dos extratos. Foi observado que o efeito tóxico do extrato foi reduzido quando Lxx foi cultivada na presença do inibidor. Ao se avaliar o conteúdo das células, notou-se também redução expressiva no conteúdo relativo de compostos isoprenóides, como esperado. Os resultados indicaram que a bactéria secreta um produto cuja ação é similar à do ABA e que há uma correlação entre a produção do mesmo e a síntese de pigmentos isoprenóides. Em conjunto, o estudo dá suporte à hipótese levantada anteriormente por Monteiro- Vitorello et al. (2004) com base em análise in silico do genoma de Lxx, segundo a qual a bactéria estaria apta a secretar um composto análogo ao ácido abscísico (ABA). / This study evaluated the effects of extracts of liquid cultures of Leifsonia xyli subsp. xyli (Lxx) grown under osmotic stress and in the presence of inhibitors of the non-mevalonate pathway (MEP/DOXP) of synthesis of isoprenoid pigments on the germination of lettuce seeds. The relationship between the extracts toxic effect and the production of pigments was evaluated as well. The extracts were obtained from the supernatant of Lxx cultures using ethyl acetate as a solvent. Essays with lettuce seeds soaked in the extracts indicated an inhibitory action on germination and on the elongation of the radicles when the bacterium was cultivated in the presence of 7% PEG 6000 or 100 mM NaCl. The extract was submitted to different thermal treatments (room temperature; 30, 60 and 90oC water bath and 121oC autoclaving) and its inhibitory action was shown to be thermostable. The presence of isoprenoid pigments in cells cultivated with PEG, NaCl or in the absence of these stressing agents was evaluated by spectrophotometry after extracting the pigments with methanol. In cells incubated in the absence of stress, a well-defined absorbance peak at 400 nm wavelength was noted, whereas this peak was sensibly reduced in cells cultivated under stress. This effect was more pronounced in the presence of PEG. To confirm the isoprenoid nature of the compound, Lxx was incubated in the presence of fosmidomycin and diphenylamine, which are inhibitors of the nonmevalonate metabolic pathway of these compounds in Microbacteriaceae. Both substances reduced the absorbance peak in the spectrum compared to cells cultivated in the absence of these antibiotics, confirming the nature of the compound and its synthesis pathway. Moreover, the peak reduction was more accentuated in the presence of fosmidomycin. Lastly, fosmidomycin was used to evaluate its effect on the toxicity of the extracts. It was observed that the toxic effect of the extract was reduced when Lxx was cultivated in the presence of this inhibitor. When the cell content was evaluated, an expressive reduction on the relative content of carotenoid compounds has also been noticed, as expected. The results indicated that the bacterium secretes a compound whose action is similar to ABA and that there is a correlation between the production of this compound and the synthesis of isoprenoid pigments. The results support the hypothesis proposed earlier by Monteiro-Vitorello et al. (2004) based upon an in silico analysis of the genome of Lxx, according to which the bacterium would be able to secrete a compound analogous to abscisic acid (ABA)

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Tropical forests play vital role in maintaining the stability and quality of the environment, protecting the soil and water resources, conserving the biodiversity, protecting cultural and recreational values, which contribute to improving the quality of life of the population. Being the germplasm of forest species a wealth to be used and preserved. Schinus terebinthifolius (Anacardiaceae) has medicinal, alimentary and ecological properties, besides being destined for the recomposition of degraded areas of permanent preservation. However, there are few studies on the cytogenetics characterization and promotion growth of this species. Thus, aiming for conservation and sustainable use, the objective is to characterize cytogenetically this species, assess the quality of the seeds S. terebinthifolius from individuals of different accessions of populations of Rio Grande do Sul, as well as, to evaluate the effect of the interaction of Trichoderma spp. on the contamination and in vitro germination and ex vitro vegetative growth of S. terebinthifolius. For the determination of chromosome number were used tissues of root tips. In the germination study, the parcels with seeds were kept in a climatic chamber with a photoperiod of 16 hours at the temperature of 20°C (+/- 2°C). To the study the interaction between S. terebinthifolius and Trichoderma spp. were evaluated the isolates TSM1 and TSM2 of Trichoderma viride, 2B2 and 2B22 of Trichoderma harzianum for the in vitro experiment, through the cellophane technique and the ex vitro experiment was conducted in a greenhouse, where were evaluated the effects of the isolates 2B2 and 2B22 and the commercial product Trichodermil®, all in the presence and absence of growth regulator Stimulate®. It is concluded that the chromosome number of the species S. terebinthifolius determined for 22 accessions collected in Rio Grande do Sul is 2n = 28, indicating that there isn't intraspecific variability. The quality of the seeds of S. terebinthifolius shows great heterogeneity among the different accessions collection. With the technique of in vitro cellophane, all four isolates of Trichoderma spp. tested are efficient in controlling fungal contamination of seeds. In ex vitro cultivation, the difference was significant growth in leaf area index for strain 2B2 / As florestas tropicais desempenham função vital na manutenção da estabilidade e qualidade do meio ambiente, protegem o solo e os recursos hídricos, conservam a diversidade biológica, protegem os valores culturais e recreativos, que contribuem com a melhoria da qualidade de vida da população. Sendo o germoplasma de espécies florestais uma riqueza a ser utilizada e preservada. Schinus terebinthifolius (Anacardiaceae) possui propriedades medicinais, alimentícias e ecológicas, além de serem destinados à recomposição de áreas degradadas de preservação permanente. No entanto, ainda são poucos os estudos sobre a caracterização citogenética e promoção de crescimento dessa espécie. Assim, visando à conservação e a utilização sustentável, objetiva-se caracterizar citogeneticamente esta espécie, avaliar a qualidade das sementes de S. terebinthifolius provenientes de indivíduos de diferentes acessos do Rio Grande do Sul, bem como, avaliar o efeito da interação de Trichoderma spp. na contaminação e germinação in vitro e no crescimento vegetativo ex vitro de S. terebinthifolius. Para a determinação do número de cromossomos, foram utilizados tecidos de pontas de raízes. No estudo de germinação, as parcelas com as sementes foram mantidas em câmara climática com fotoperíodo de 16 horas à temperatura de 20°C (+/- 2°C). Para o estudo da interação entre S. terebinthifolius e Trichoderma spp. foram avaliados os isolados TSM1 e TSM2 de Trichoderma viride, 2B2 e 2B22 de Trichoderma harzianum para o experimento in vitro, através da técnica do papel celofane e o experimento ex vitro foi realizado em casa de vegetação, onde se avaliou os efeitos dos isolados 2B2 e 2B22, e o produto comercial Trichodermil®, todos na presença e ausência do regulador de crescimento Stimulate®. Conclui-se que o número de cromossomos da espécie S. terebinthifolius determinado para 22 acessos coletados no Rio Grande do Sul é de 2n = 28, indicando que não ocorre variabilidade intraespecífica. A qualidade das sementes de S. terebinthifolius apresenta grande heterogeneidade entre os diferentes acessos de coleta. Com a técnica in vitro do papel celofane, os quatro isolados de Trichoderma spp. testados são eficientes no controle da contaminação fúngica das sementes. No cultivo ex vitro, observou-se diferença significativa de crescimento no índice de área foliar para o isolado 2B2;

Viguiera arenaria Baker é uma Asteraceae de Cerrado de porte herbáceo, filotaxia alterna, inflorescência em capítulo e que apresenta formação de raízes tuberosas. Apesar de análises fitoquímicas terem encontrado substâncias com atividades biológicas de interesse terapêutico, sabe-se pouco sobre a biologia da planta. Neste trabalho, buscou-se contribuir para o conhecimento de aspectos relacionados ao desenvolvimento de V. arenaria, visando atingir três objetivos específicos: verificar a taxa de germinação em condições in vitro; estabelecer um protocolo de regeneração in vitro; verificar modificações epigenéticas (metilação de citosina) no DNA de células cambiais de raízes tuberizadas e não-tuberizadas que possam estar associadas ao processo de tuberização. As sementes e raízes foram coletadas em área de Cerrado no Estado de São Paulo, Brasil, em duas épocas diferentes: em maio de 2008 (apenas sementes) e março de 2009 (sementes e raízes). Sementes e embriões de V. arenaria foram colocados para germinar, respectivamente, em papel filtro embebido com solução de nistatina e em meio de cultura sólido (MS com metade da concentração de macronutrientes), sendo mantidos em sala de crescimento (24°C e 16 horas/ luz) para avaliação do tempo e da porcentagem de germinação e embriões viáveis. No experimento de regeneração in vitro, folhas de plântulas, sete semanas após a germinação e segmentos hipocotiledonares, uma semana após a germinação, foram inoculados no mesmo meio, porém acrescido de diferentes concentrações de NAA (0,0; 0,01 e 0,05 mg.L-1), BAP (0,0; 0,2; 0,4 e 0,8 mg.L-1) e Zeatina (0,0; 0,2; 0,4 e 0,8 mg.L-1). Os explantes foram mantidos sob condições idênticas ao experimento de germinação. No estudo sobre imunolocalização de 5-metilcitosina, lâminas permanentes contendo cortes transversais de raízes tuberizadas e não-tuberizadas foram coradas com anticorpos fluorescentes contra 5-metilcitosina e contracoradas com DAPI. Foi observado um efeito de época de coleta de sementes, sendo aquela realizada em março de 2009 a que apresentou maiores porcentuais de embriões viáveis (72%) e de germinação de sementes e embriões (> 62% e 87%, respectivamente), embora o tempo de germinação tenha sido maior (~7 dias), comparativamente à coleta feita em maio de 2008 (~3 dias). Os experimentos de regeneração demonstraram certa recalcitrância da espécie na regeneração adventícia de brotos, pois os porcentuais de explantes com brotos foram inferiores a 25% na maioria dos tratamentos. Porém, houve 100% de formação de calos em diversos tratamentos. Por fim, verificaram-se mudanças no padrão de metilação e aumento de três vezes no conteúdo de DNA nas raízes tuberizadas relativamente às raízes não-tuberizadas. / Viguiera arenaria Baker is an herbaceous Asteraceae from Cerrado presenting alternate phyllotaxis, capitulum inflorescence and tuberized roots. Although phytochemical analyses have found substances with biological activities of therapeutic interest, little is known about the biology of the plant. In this study, we sought to contribute to the knowledge of aspects related to the development of V. arenaria, aiming to achieve three specific goals: to determine the germination rate under in vitro conditions; to establish a protocol for in vitro regeneration; to check epigenetic modifications (cytosine methylation) in DNA of cambial cells in tuberized and non-tuberized roots, which may be associated with the tuberization process. The seeds and roots were collected in a Cerrado area in the State of Sao Paulo, Brazil, in two different times: in May 2008 (seeds only) and March 2009 (seeds and roots). Seeds and embryos of V. arenaria were placed to germinate, respectively, on filter paper soaked with a solution of nystatin and solid medium (MS with half-strength macronutrients), and maintained in a growth chamber (24 ° C and 16 hours/ light) to evaluate time for germination and percentages of germination and viable embryos. In the experiment of in vitro regeneration, leaves of seedlings, seven weeks after germination and hypocotyl segments, one week after germination were inoculated in the same medium supplemented with different concentrations of NAA (0, 0.01 and 0.05 mg.L-1), BAP (0.0, 0.2, 0.4 and 0.8 mg.L-1) and Zeatin (0.0, 0.2, 0.4 and 0.8 mg.L-1). Explants were kept under the same conditions of the germination experiment. In the study of immunolocalization of 5- methylcytosine, permanent slides containing transverse sections of tuberized and non-tuberized roots were stained with fluorescent antibodies against 5-methylcytosine and counterstained with DAPI. We observed an effect of harvest time, as the one held in March 2009 presented the highest percentage of viable embryos (72%) and germination of seeds and embryos (> 62% and 87% respectively), although the germination rate was higher (~7 days) compared to the harvest made in 2008 (~3 days). The in vitro assays showed some recalcitrance of the species in the regeneration of adventitious buds, as the percentage of explants with shoots were less than 25% in most treatments. However, there was 100% callus formation in different treatments. Finally, changes in the methylation pattern were observed as well as three-fold increase in DNA content in tuberized roots relatively to non-tuberized roots.

Os ecossistemas de ilhas, continentais ou oceânicas, são considerados os mais sensíveis à perturbação humana. A maioria das ilhas costeiras do Brasil sofreu fortes alterações na fauna e flora silvestre. A Ilha Anchieta (Ubatuba, SP) é uma Área Protegida com um longo histórico de perturbação, tendo sido amplamente desmatada no passado e sofrido a introdução de animais. Sabe-se que a fauna possui um papel chave na composição e estrutura da comunidade vegetal, favorecendo algumas espécies e prejudicando outras. Sendo assim, a perda ou alteração dos processos de interações entre animais e plantas afetam na estrutura e composição de espécies. Este estudo analisa as interações antagônicas entre planta e animais como possíveis fatores limitantes no processo de regeneração natural em três ambientes com distintos estágios sucessionais presentes na Ilha Anchieta: campo aberto (CA) e florestas ombrófilas rala (FOR) e densa (FOD). Para isso foram testados nos três ambientes os processos pós-dispersão de sementes: a predação de sementes pós-dispersas, a germinação do banco de sementes e a herbivoria. A predação de sementes apresentou forte efeito espacial (FOD>FOR>CA) e sazonal, com maiores proporções de predação de sementes no período de escassez de alimento (estação seca). Quantitativamente o banco de sementes não representa um fator limitante, porém foi composto por uma baixa diversidade de espécies lenhosas. A capacidade de germinação do banco de sementes do solo foi similar entre os ambientes florestais apresentando menor emersão de plântulas no campo aberto, provavelmente associado ao intenso escoamento superficial no local. Adicionalmente, a mortalidade de juvenis transplantados foi de 72,27%, sendo superior nas parcelas abertas aos vertebrados para todas as espécies em todos os ambientes, demonstrando um forte efeito negativo dos herbívoros vertebrados na comunidade vegetal. Sendo assim, foram detectados distintos gargalos atuando simultaneamente na regeneração natural nos três ambientes da Ilha Anchieta, sendo necessário o estabelecimento de práticas de manejo visando minimizar os efeitos abióticos no campo aberto e floresta ombrófila rala, favorecendo as interações mutualísticas e inibindo a atividade de animais antagônicos nas florestas ombrófilas rala e densa, acelerando assim o processo de regeneração natural na Ilha Anchieta. Considerar simultaneamente os obstáculos no processo de regeneração nos auxiliará a traçar práticas de restauração e recuperação de áreas degradadas mais efetivas e viáveis economicamente. / Island ecosystems, either continental or oceanic, are considered the most sensible to anthropogenic influences. Most Brazilian coastal islands have their original fauna and flora composition altered. The Anchieta Island (southeast Brazil) is a Protected Area that suffered deforestation and introduction of alien species. It is known that the fauna plays a key role in composing and structuring the vegetal community, favoring some species and harming others. Thus, the loss or change of animal-plant interactions affects the framework and composition of species. We simultaneously analyzed the antagonistic animal-plant interactions as possible limiting factors in the natural regeneration on tree successional stages of the Anchieta Island: the old fields (OF), the early secondary forest (ESF) and old growth forest (OGF). Therefore, in each habitat we are evaluating post-dispersal seed predation processes: post-dispersal seed predation, soil seed bank, and the herbivory. We found spatial (OGF>ESF>OF) and temporal effects on seed predation, with highest rates on dry season. Quantitatively, soil seed bank did not represent a limiting factor; but qualitatively, it was composed by few woody species. Our data pointed to the absence of a viable soil seed bank in the OF, probably due to an intense runoff. The forested habitats presented similar soil bank. Moreover, the total mortality of saplings was 72.27%, being higher on the unfenced treatment for all species and in all habitats, showing a very strong negative effect of vertebrate herbivores on the vegetal community. Therefore, we are detecting distinct bottlenecks acting simultaneously in the natural regeneration process in all of the successional stages of the Anchieta Island. Our results showed that management actions are required, aiming to both minimize the abiotic effects on the old fields and in the early secondary forest and to favor the mutual interactions and inhibit the activity of antagonic animals in the old growth and early secondary forests, accelerating, this way, the natural regeneration process of the Anchieta Island. Considering simultaneously the obstacles in the regeneration process will help to define restoration and recuperation procedures of degraded areas more effective and affordable.

Submitted by Johnny Rodrigues (johnnyrodrigues@ufcg.edu.br) on 2018-07-05T14:54:04Z No. of bitstreams: 1 ACÁCIO FIQUEIRÊDO NETO - DISSERTAÇÃO PPGEA 2003..pdf: 4578217 bytes, checksum: 9dbfdf653e3c7c4bbe60a1bba3c2f1ff (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-05T14:54:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ACÁCIO FIQUEIRÊDO NETO - DISSERTAÇÃO PPGEA 2003..pdf: 4578217 bytes, checksum: 9dbfdf653e3c7c4bbe60a1bba3c2f1ff (MD5) Previous issue date: 2003-07 / No processamento de sementes, logo após a colheita e debulha, estas são encaminhadas a Usina de Beneficiamento de Sementes (UBS), onde através de elevadores são conduzidas às máquinas de pré-limpeza, limpeza, separação e classificação, tratamento, embalagem e transporte para o armazenamento. O presente trabalho foi desenvolvido para investigar os impactos mecânicos sofridos pelas sementes de duas variedades de feijão vigna (Cedinha e Rabo de Tatu) com dois teores de umidade (13,5% e 7,3% b.u.) ao passarem pelas operações impostas depois da colheita, debulha e pela UBS e suas consequências no decorrer do armazenamento. Foram utilizadas as sementes com pureza acima de 95%, as quais foram submetidas às operações da UBS. Ao longo do sistema de operação foram coletadas amostras para analisar e verificar os danos devidos aos impactos mecânicos. As amostras de trabalho foram logo submetidas aos testes de germinação e aos diferentes testes de vigor. E, em seguida, outras amostras foram armazenadas nas condições ambientais de Alagoinha - PB, e nas condições controladas de câmara seca em Campina Grande - PB. As sementes com a umidade 7,3% da variedade Rabo de Tatu são mais susceptíveis a quebra ocasionada pelos impactos durante o processo de beneficiamento; as sementes das duas variedades estudadas, demonstraram ante o tempo de armazenamento, os impactos sofridos e os teores de umidade iniciais, tendências e um mesmo comportamento, embora quantitativamente diferentes e que os impactos sofridos pelas sementes na UBS durante o seu beneficiamento não exerceram efeitos imediatos sobre a germinação e o vigor das sementes. O teste de vigor que melhor correlacionou com o teste padrão de germinação (TPG) foi o índice de velocidade de emergência (IVE), com um coeficiente de correlação acima de 97%, podendo ser empregado na avaliação do vigor dessas sementes. / In the processing of seeds, soon after the crop and it thrashes, these are directed tha Plant of Improvement of Seeds, where through elevators the machines of before-cleaning, cleaning, separation and classification, treatment, packing and storage are led. This work was developed to investigate the mechanical impacts suffered by the seeds of two varieties of bean vigna (Cedinha and Rabo of Tatu) with two moisture contents (13,5% and 7,3% w.b.) to the they go by the operations imposed after the crop and it thrashes and your consequences in elapsing of the storage. The seeds were used with purity above 95%, so that it could submit them the operations of Plant of Improvement of Seeds. In each operation place samples were collected to analyze and to veriíy the damages happened through the impacts. The work samples were soon submitted to the germination tests and the different vigor tests. And, soon after, other samples were stored in the environmental conditions of Alagoinha - PB, and in the controlled conditions of camera it evaporates in Campina Grande - PB. The seeds with the humidity 7,3% of the variety Rabo de Tatu are more fragile the break caused by the impacts during the improvement process; the seeds of the two studied varieties, demonstrated in the face of the time of storage, the suffered impacts and the initial humidity tenors, tendencies and a same behavior, although with different amounts although with different amounts and that the suffered impacts for the seeds during your improvement didn't exercise immediate effects on the germination and the vigor of the seeds. The vigor test that best correlated with the standard test of germination it was the index of emergency speed, with a correlation coefficient above 97%, could be used in the evaluation of the vigor of those seeds.

Os ecossistemas de ilhas, continentais ou oceânicas, são considerados os mais sensíveis à perturbação humana. A maioria das ilhas costeiras do Brasil sofreu fortes alterações na fauna e flora silvestre. A Ilha Anchieta (Ubatuba, SP) é uma Área Protegida com um longo histórico de perturbação, tendo sido amplamente desmatada no passado e sofrido a introdução de animais. Sabe-se que a fauna possui um papel chave na composição e estrutura da comunidade vegetal, favorecendo algumas espécies e prejudicando outras. Sendo assim, a perda ou alteração dos processos de interações entre animais e plantas afetam na estrutura e composição de espécies. Este estudo analisa as interações antagônicas entre planta e animais como possíveis fatores limitantes no processo de regeneração natural em três ambientes com distintos estágios sucessionais presentes na Ilha Anchieta: campo aberto (CA) e florestas ombrófilas rala (FOR) e densa (FOD). Para isso foram testados nos três ambientes os processos pós-dispersão de sementes: a predação de sementes pós-dispersas, a germinação do banco de sementes e a herbivoria. A predação de sementes apresentou forte efeito espacial (FOD>FOR>CA) e sazonal, com maiores proporções de predação de sementes no período de escassez de alimento (estação seca). Quantitativamente o banco de sementes não representa um fator limitante, porém foi composto por uma baixa diversidade de espécies lenhosas. A capacidade de germinação do banco de sementes do solo foi similar entre os ambientes florestais apresentando menor emersão de plântulas no campo aberto, provavelmente associado ao intenso escoamento superficial no local. Adicionalmente, a mortalidade de juvenis transplantados foi de 72,27%, sendo superior nas parcelas abertas aos vertebrados para todas as espécies em todos os ambientes, demonstrando um forte efeito negativo dos herbívoros vertebrados na comunidade vegetal. Sendo assim, foram detectados distintos gargalos atuando simultaneamente na regeneração natural nos três ambientes da Ilha Anchieta, sendo necessário o estabelecimento de práticas de manejo visando minimizar os efeitos abióticos no campo aberto e floresta ombrófila rala, favorecendo as interações mutualísticas e inibindo a atividade de animais antagônicos nas florestas ombrófilas rala e densa, acelerando assim o processo de regeneração natural na Ilha Anchieta. Considerar simultaneamente os obstáculos no processo de regeneração nos auxiliará a traçar práticas de restauração e recuperação de áreas degradadas mais efetivas e viáveis economicamente. / Island ecosystems, either continental or oceanic, are considered the most sensible to anthropogenic influences. Most Brazilian coastal islands have their original fauna and flora composition altered. The Anchieta Island (southeast Brazil) is a Protected Area that suffered deforestation and introduction of alien species. It is known that the fauna plays a key role in composing and structuring the vegetal community, favoring some species and harming others. Thus, the loss or change of animal-plant interactions affects the framework and composition of species. We simultaneously analyzed the antagonistic animal-plant interactions as possible limiting factors in the natural regeneration on tree successional stages of the Anchieta Island: the old fields (OF), the early secondary forest (ESF) and old growth forest (OGF). Therefore, in each habitat we are evaluating post-dispersal seed predation processes: post-dispersal seed predation, soil seed bank, and the herbivory. We found spatial (OGF>ESF>OF) and temporal effects on seed predation, with highest rates on dry season. Quantitatively, soil seed bank did not represent a limiting factor; but qualitatively, it was composed by few woody species. Our data pointed to the absence of a viable soil seed bank in the OF, probably due to an intense runoff. The forested habitats presented similar soil bank. Moreover, the total mortality of saplings was 72.27%, being higher on the unfenced treatment for all species and in all habitats, showing a very strong negative effect of vertebrate herbivores on the vegetal community. Therefore, we are detecting distinct bottlenecks acting simultaneously in the natural regeneration process in all of the successional stages of the Anchieta Island. Our results showed that management actions are required, aiming to both minimize the abiotic effects on the old fields and in the early secondary forest and to favor the mutual interactions and inhibit the activity of antagonic animals in the old growth and early secondary forests, accelerating, this way, the natural regeneration process of the Anchieta Island. Considering simultaneously the obstacles in the regeneration process will help to define restoration and recuperation procedures of degraded areas more effective and affordable.

Viguiera arenaria Baker é uma Asteraceae de Cerrado de porte herbáceo, filotaxia alterna, inflorescência em capítulo e que apresenta formação de raízes tuberosas. Apesar de análises fitoquímicas terem encontrado substâncias com atividades biológicas de interesse terapêutico, sabe-se pouco sobre a biologia da planta. Neste trabalho, buscou-se contribuir para o conhecimento de aspectos relacionados ao desenvolvimento de V. arenaria, visando atingir três objetivos específicos: verificar a taxa de germinação em condições in vitro; estabelecer um protocolo de regeneração in vitro; verificar modificações epigenéticas (metilação de citosina) no DNA de células cambiais de raízes tuberizadas e não-tuberizadas que possam estar associadas ao processo de tuberização. As sementes e raízes foram coletadas em área de Cerrado no Estado de São Paulo, Brasil, em duas épocas diferentes: em maio de 2008 (apenas sementes) e março de 2009 (sementes e raízes). Sementes e embriões de V. arenaria foram colocados para germinar, respectivamente, em papel filtro embebido com solução de nistatina e em meio de cultura sólido (MS com metade da concentração de macronutrientes), sendo mantidos em sala de crescimento (24°C e 16 horas/ luz) para avaliação do tempo e da porcentagem de germinação e embriões viáveis. No experimento de regeneração in vitro, folhas de plântulas, sete semanas após a germinação e segmentos hipocotiledonares, uma semana após a germinação, foram inoculados no mesmo meio, porém acrescido de diferentes concentrações de NAA (0,0; 0,01 e 0,05 mg.L-1), BAP (0,0; 0,2; 0,4 e 0,8 mg.L-1) e Zeatina (0,0; 0,2; 0,4 e 0,8 mg.L-1). Os explantes foram mantidos sob condições idênticas ao experimento de germinação. No estudo sobre imunolocalização de 5-metilcitosina, lâminas permanentes contendo cortes transversais de raízes tuberizadas e não-tuberizadas foram coradas com anticorpos fluorescentes contra 5-metilcitosina e contracoradas com DAPI. Foi observado um efeito de época de coleta de sementes, sendo aquela realizada em março de 2009 a que apresentou maiores porcentuais de embriões viáveis (72%) e de germinação de sementes e embriões (> 62% e 87%, respectivamente), embora o tempo de germinação tenha sido maior (~7 dias), comparativamente à coleta feita em maio de 2008 (~3 dias). Os experimentos de regeneração demonstraram certa recalcitrância da espécie na regeneração adventícia de brotos, pois os porcentuais de explantes com brotos foram inferiores a 25% na maioria dos tratamentos. Porém, houve 100% de formação de calos em diversos tratamentos. Por fim, verificaram-se mudanças no padrão de metilação e aumento de três vezes no conteúdo de DNA nas raízes tuberizadas relativamente às raízes não-tuberizadas. / Viguiera arenaria Baker is an herbaceous Asteraceae from Cerrado presenting alternate phyllotaxis, capitulum inflorescence and tuberized roots. Although phytochemical analyses have found substances with biological activities of therapeutic interest, little is known about the biology of the plant. In this study, we sought to contribute to the knowledge of aspects related to the development of V. arenaria, aiming to achieve three specific goals: to determine the germination rate under in vitro conditions; to establish a protocol for in vitro regeneration; to check epigenetic modifications (cytosine methylation) in DNA of cambial cells in tuberized and non-tuberized roots, which may be associated with the tuberization process. The seeds and roots were collected in a Cerrado area in the State of Sao Paulo, Brazil, in two different times: in May 2008 (seeds only) and March 2009 (seeds and roots). Seeds and embryos of V. arenaria were placed to germinate, respectively, on filter paper soaked with a solution of nystatin and solid medium (MS with half-strength macronutrients), and maintained in a growth chamber (24 ° C and 16 hours/ light) to evaluate time for germination and percentages of germination and viable embryos. In the experiment of in vitro regeneration, leaves of seedlings, seven weeks after germination and hypocotyl segments, one week after germination were inoculated in the same medium supplemented with different concentrations of NAA (0, 0.01 and 0.05 mg.L-1), BAP (0.0, 0.2, 0.4 and 0.8 mg.L-1) and Zeatin (0.0, 0.2, 0.4 and 0.8 mg.L-1). Explants were kept under the same conditions of the germination experiment. In the study of immunolocalization of 5- methylcytosine, permanent slides containing transverse sections of tuberized and non-tuberized roots were stained with fluorescent antibodies against 5-methylcytosine and counterstained with DAPI. We observed an effect of harvest time, as the one held in March 2009 presented the highest percentage of viable embryos (72%) and germination of seeds and embryos (> 62% and 87% respectively), although the germination rate was higher (~7 days) compared to the harvest made in 2008 (~3 days). The in vitro assays showed some recalcitrance of the species in the regeneration of adventitious buds, as the percentage of explants with shoots were less than 25% in most treatments. However, there was 100% callus formation in different treatments. Finally, changes in the methylation pattern were observed as well as three-fold increase in DNA content in tuberized roots relatively to non-tuberized roots.