Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico. Programa de Pós-Graduação em Engenharia Ambiental. / Made available in DSpace on 2012-10-20T15:19:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 198734.pdf: 455399 bytes, checksum: 33119cfc4d386da3d5993bfc7984fc89 (MD5)

Giardia lamblia é um protozoário que acomete mais comumente animais jovens e que convivem em grupos. Apesar da alta prevalência, nem todos animais apresentam a doença clínica. Mesmo assim, a giardíase tem importância epidemiológica por possuir um elevado potencial zoonótico. O presente estudo teve como objetivo determinar a freqüência de Giardia lamblia em cães no município de Canoas, RS, Brasil, através do Método de Faust e cols. (1939) e da Técnica de Coloração da Auramina. Os grupos experimentais foram divididos de acordo com a procedência e o sexo. Das 332 amostras analisadas com o Método de Faust e cols, a estimativa em ponto da freqüência obtida foi de 34,04%, podendo variar de 28,95 a 39,13%, dentro de um intervalo de confiança de 95%. Destas amostras, 40,96% foram positivas em animais de canil e 27,11% de rua. O Teste Exato de Fisher aplicado a esses dados revelou existir uma diferença significativa (p = 0,0107) entre as variáveis resultado e procedência. A variável sexo, neste método não apresentou diferença significativa em relação ao resultado (p = 0,8162) totalizando 33,11% de machos positivos e 34,08% de fêmeas infectadas com o parasita. Das 147 amostras realizadas com a Técnica de Coloração da Auramina, 23 foram positivas, totalizando 15,65%. A análise estatística através do Teste McNemar revelou existir diferença significativa entre as duas técnicas (p = 0,0004). O valor Kappa foi igual a 0,07, considerado como um grau de concordância fraco. Os resultados encontrados neste estudo nos permitem afirmar que o Método de Faust e cols. foi o mais adequado para o diagnóstico na infecção por Giardia lamblia, entre os métodos analisados.

A giardíase e a criptosporidiose estão entre as enfermidades de veiculação hídrica originadas por protozoários que têm ganhado maior notoriedade nas últimas décadas. Os microrganismos causadores dessas doenças têm-se tornado um desafio para as empresas de abastecimento de água. Este trabalho teve como objetivo verificar a ocorrência dos protozoários Cryptosporidium sp e Giardia sp nas águas brutas de quatro afluentes do Lago Guaíba: Rios Taquari, Caí, dos Sinos e Gravataí. Juntos, abastecem uma população de dezenas de municípios da Região Metropolitana de Porto Alegre. Foram feitas amostragens mensais, durante doze meses, em cada afluente. Foi empregado o método de filtração em membrana para pré-concentração, centrifugação para concentração, separação imunomagnética para purificação e comparados três métodos de detecção para ambos os microrganismos: DAPI (4’,6-diamidino-2-fenilindol), Safranina e Kinyoun para Cryptosporidium e DAPI, Iodo Lugol e Iodo Tricrômico para Giardia. A avaliação microscópica e contagem de (oo)cistos foram feitas utilizando-se microscopia de imunofluorescência e contraste de fase para o DAPI e microscopia óptica para as demais colorações. Obtiveram-se os seguintes resultados: para os Rios Taquari, Caí, dos Sinos e Gravataí, respectivamente: 75, 42, 33 e 25% das amostras foram positivas para Cryptosporidium e 92, 83, 67 e 50% para Giardia. As concentrações médias de Giardia foram superiores às de Cryptosporidium em todos os quatro afluentes. Os valores médios observados foram: 80 oocistos e 176 cistos/100L no Taquari; 47 oocistos e 66 cistos/100L no Caí; 19 oocistos e 53 cistos/100L no Sinos; 16 oocistos e 92 cistos/100L no Gravataí. Estes podem estar subestimados devido à baixa recuperação dos métodos analíticos existentes e empregados. As densidades encontradas indicam que os protozoários estão disseminados nas águas superficiais dos formadores do Lago Guaíba.

Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Parasitic infections are among the commonest health problems that affect birds. The identification of Cryptosporidium spp. and Giardia spp. in wild birds is relevant, since these animals can act as disseminators of these parasites to humans through environmental contamination. The aim of this research was to determine the occurrence and to perform the molecular characterization of Cryptosporidium and Giardia species/genotypes in feces from free-living and captive wild birds treated in the Laboratory of Wild Animals Research from the Federal University of Uberlândia (LAPAS) and kept in the Zoo of the Municipal Park of Sabiá, in Uberlândia, Minas Gerais, Brazil. The DNA extracted directly from feces was submitted to nested-PCR and semi-nested PCR analysis for amplification of fragments of the SSU rRNA and gdh genes of Cryptosporidium spp. and Giardia spp., respectively. Results showed that out of 256 samples collected, 10 (3.9%) were positive for Cryptosporidium spp., and 8 (3.1%) for Giardia spp.. Out of 172 samples of captive birds, six (3.49%) were positive for Cryptosporidium spp., and four (2.32%) for Giardia spp.. Out of 84 samples of free-living birds, four (4.76%) for Cryptosporidium spp. and four (4.76%) for Giardia spp. were positive. The occurrence of parasites in waterfowl (n=39) was two (5.13%) for Cryptosporidium spp., and four (10.26%) for Giardia spp.; in non-aquatic birds (n=217), it was eight (3.7%) and four (1.84%), respectively. There was no significant difference in the occurrence of Cryptosporidium spp. and Giardia spp. among captive and free-living birds (p = 0.62 and 0.29, respectively). Although no statistical analysis was performed for the positivity of Cryptosporidium spp. and Giardia spp. between waterfowl and non aquatic birds, the meeting of these parasites in waterfowl may have implications for the transmission of these protozoa to humans and other animals. RFLP and sequencing analysis have identified C. meleagridis in two birds of the Anatidae family, in two Aratinga leucophthalma (White-eyed parakeet), and in two Athene cunicularia (Burrowing Owl). They have also found C. baileyi in three Amazona aestiva (Blue-fronted Parrot) and in one Amazona amazonica (Orange-winged Parrot). Only three positive samples for Giardia spp. - classified as Giardia duodenalis assemblage B - were sequenced, two of them found in Rupornis magnirostris (Roadside Hawk), and one in Theristicus caudatus (Buff-necked Ibis). The essay concluded that Cryptosporidium spp. and Giardia spp. are present in wild birds in the microregion of Uberlândia, MG. The existence of zoonotic C. meleagridis and G. duodenalis assemblage B in the animals of this study may have a negative impact on public health. / Infecções parasitárias estão entre os problemas sanitários comuns que acometem aves em todo mundo. A identificação de Cryptosporidium spp. e Giardia spp. em aves silvestres é relevante, visto que esses animais podem agir como veiculadoras dos parasitos para o ser humano, por meio da contaminação ambiental. O objetivo deste estudo foi determinar a ocorrência e caracterizar geneticamente as espécies/genótipos de Cryptosporidium e Giardia em aves silvestres de cativeiro e vida livre atendidas no Laboratório de Pesquisa em Animais Silvestres da Universidade Federal de Uberlândia (LAPAS-UFU) e procedentes do zoológico do Parque Municipal do Sabiá, Uberlândia, Minas Gerais, Brasil. O DNA, extraído diretamente das fezes coletadas, foi submetido a reações de nested-PCR e semi-nested PCR para amplificação de fragmentos dos genes SSU rRNA e gdh de Cryptosporidium spp. e Giardia spp., respectivamente.Das 256 amostras coletadas, 10 (3,9%) foram positivas para Cryptosporidium spp. e 8 (3,1%) para Giardia spp. Das 172 amostras de aves de cativeiro, seis (3,49%) foram positivas para Cryptosporidium spp.. e quatro (2,32%) para Giardia spp.; das 84 amostras de aves de vida livre, quatro (4,76%) para Cryptosporidium spp. e quatro (4,76%) para Giardia spp. foram positivas. A ocorrência dos parasitos em aves aquáticas (n=39) foi dois (5,13%) para Cryptosporidium spp. e quatro (10,26%) para Giardia spp.; em aves não aquáticas (n=217), oito (3,7%) e quatro (1,84%), respectivamente. Não foi encontrada diferença significante na ocorrência de Cryptosporidium spp. e Giardia spp. entre os grupos de aves de cativeiro e vida livre (p=0,62 e 0,29, respectivamente). Apesar de não ter sido realizada análise estatística para a positividade de Cryptosporidium spp. e Giardia spp. entre aves aquáticas e não aquáticas, ressalta-se que o encontro desses parasitos nas aves aquáticas pode ter implicações na transmissão desses protozoários para o homem e outros animais. Análises de RFLP e sequenciamento identificaram C. meleagridis em duas aves da família Anatidae, duas Aratinga leucophthalma (Maritaca) e duas Athene cunicularia (Corujas-buraqueira) e C. baileyi em três Amazona aestiva (papagaio-verdadeiro) e uma Amazona amazonica (papagaio-do-mangue). As amostras sequenciadas para Giardia spp., provenientes de dois Rupornis magnirostris (Gavião-carijó) e uma Theristicus caudatus (Curicaca), foram classificadas como Giardia duodenalis assemblage B. Cryptosporidium spp. e Giardia spp. estão presentes em aves silvestres de cativeiro e vida livre na microrregião de Uberlândia, MG. A presença de C. meleagridis e G. duodenalis assemblage B, considerados zoonóticos, em animais desse estudo, pode gerar impacto negativo na saúde pública. / Mestre em Imunologia e Parasitologia Aplicadas

In two years of observation, (spring 2006, autumn 2006, spring 2007 and autumn 2007) were being screened for parasites in total 495 faecal samples coming out of three farms from Ceske Budejovice (285 samples of sucking pigs not older then 28 days and 174 samples of piglets not older then 8 weeks). The method used to examine those samples was a flotation-concentrating method (Sheather{\crq}s carbohydrate fusion) and in the year of 2007 was also used a specific aniline-carbol-methyl violet staining method to detect the Cryptosporidium spp. followed by positive molecular characterized (direct sequencing of partial SSU rRNA partial genes and PCR-RFLP at the SSU rRNA). In screened samples were mainly detected parasites named Cryptosporidium spp., found in 4,1% of faecal samples in 2006 and in 2007 in 32,8% faecal samples, out of which 14,4% was found in pre-weaned piglets samples and 26,4% in post-weaned piglets. Based on genotyping provided on positive samples out of the year 2007, using method of sequensing analysis SSU rRNA, was the occurence of C. suis, Cryptosporidium pig genotype II aC. Muris described. High prevalence of Isosporou suis 13,9 % (64/459) was also detected with its appearance, in particular, in pre-weaned piglets 21,4 % (61/285). Further on, some of other identified group was Eimerie spp. 5,7 % (26/459) infecting, in the main, post-weaned piglets 10,9% (19/174) and Giardia intestinalis 2,4 % (10/459). Most of the samples mentioned occured in conditioned faeces and there is no seasonal relationship to the parasital occurance.

Mémoire numérisé par la Direction des bibliothèques de l'Université de Montréal.

A giardíase e a criptosporidiose estão entre as enfermidades de veiculação hídrica originadas por protozoários que têm ganhado maior notoriedade nas últimas décadas. Os microrganismos causadores dessas doenças têm-se tornado um desafio para as empresas de abastecimento de água. Este trabalho teve como objetivo verificar a ocorrência dos protozoários Cryptosporidium sp e Giardia sp nas águas brutas de quatro afluentes do Lago Guaíba: Rios Taquari, Caí, dos Sinos e Gravataí. Juntos, abastecem uma população de dezenas de municípios da Região Metropolitana de Porto Alegre. Foram feitas amostragens mensais, durante doze meses, em cada afluente. Foi empregado o método de filtração em membrana para pré-concentração, centrifugação para concentração, separação imunomagnética para purificação e comparados três métodos de detecção para ambos os microrganismos: DAPI (4’,6-diamidino-2-fenilindol), Safranina e Kinyoun para Cryptosporidium e DAPI, Iodo Lugol e Iodo Tricrômico para Giardia. A avaliação microscópica e contagem de (oo)cistos foram feitas utilizando-se microscopia de imunofluorescência e contraste de fase para o DAPI e microscopia óptica para as demais colorações. Obtiveram-se os seguintes resultados: para os Rios Taquari, Caí, dos Sinos e Gravataí, respectivamente: 75, 42, 33 e 25% das amostras foram positivas para Cryptosporidium e 92, 83, 67 e 50% para Giardia. As concentrações médias de Giardia foram superiores às de Cryptosporidium em todos os quatro afluentes. Os valores médios observados foram: 80 oocistos e 176 cistos/100L no Taquari; 47 oocistos e 66 cistos/100L no Caí; 19 oocistos e 53 cistos/100L no Sinos; 16 oocistos e 92 cistos/100L no Gravataí. Estes podem estar subestimados devido à baixa recuperação dos métodos analíticos existentes e empregados. As densidades encontradas indicam que os protozoários estão disseminados nas águas superficiais dos formadores do Lago Guaíba.

Orientador: Regina Maura Bueno Franco / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-06T22:40:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Branco_Nilson_M.pdf: 3324626 bytes, checksum: 922a0ec9e9ca62f657865c7f3811fdb0 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: A presença de espécies dos protozoários Cryptosporidium e de Giardia em água, principalmente as destinadas ao consumo humano, assumiu nos últimos 22 anos grande importância em Saúde Pública devido à veiculação hídrica de suas formas infectantes. Esses protozoários causam gastroenterites no ser humano e em diversas espécies animais. A transmissão desses protozoários ocorre pela via fecal-oral mediante a ingestão de água ou de alimentos contaminados, ou pelo contato direto (pessoa-a-pessoa ou animal-pessoa; transmissão zoonótica). A persistência de oocistos e cistos no ambiente e a grande resistência aos processos de desinfecção contribuem com a veiculação hídrica desses protozoários. Numerosos surtos de gastroenterite aconteceram nos últimos 25 anos devido à ingestão de água de consumo e involuntariamente águas recreacionais contaminadas. No Brasil é crescente a degradação de águas superficiais e subterrâneas devido à deficiência de infra-estrutura no sistema de esgotamento sanitário. Análises realizadas pela Sabesp sobre a qualidade microbiológica da água proveniente das fontes naturais da cidade de Campos do Jordão (nordeste do estado de São Paulo) revelam que 13, de um total de 22 fontes, apresentaram padrão de qualidade impróprio para o consumo humano ¿Observação: O resumo, na íntegra poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: The presence of protozoan parasites Cryptosporidium and Giardia mainly in water destined to the human consumption, assumed in the last 22 years, a great importance in Public Health due to the water transmission of its infectant forms. These protozoa cause gastroenteritis in human and in many animal species. The transmission of these parasites occurs by oral-fecal route, consumption of contaminated water or food or by the direct contact (person to person, animal to person or zoonotic transmission). The persistence of oocysts and cysts in the environment and its resistance to the conventional process of disinfection contribute to the waterbome transmission of these protozoa. Numerous outbreaks of gastroenteritis occurred in the last 25 years due to the consumption water and involuntarily recreational waters contaminated. In Brazil, the degradation of subterranean and superficial waters is growing due to the deficiency of infrastructure in the sanitary system. Analyses carried out by the Sabesp about the microbiological quality of the water originating from the natural springs of the city of Campos do Jordão (northeast of the state of São Paulo) revealed that 13, out of a total of 22 springs, presented standard of quality unfit for the human consumption ...Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Mestrado / Parasitologia / Mestre em Parasitologia

Orientador: Regina Maura Bueno Franco / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-10T17:55:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pereira_MirnaAparecida_D.pdf: 2261433 bytes, checksum: 8a2057547b84881643df7c062530dc1e (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: Cryptosporidium spp. e Giardia spp. são parasitos causadores de gastroenterites destacando se pela elevada incidência de casos, características de resistência aos tratamentos químicos e capacidade de permanência no meio ambiente. O importante papel desses protozoários em vários surtos epidêmicos de veiculação hídrica e alimentar coloca em evidência as hortaliças que, por serem ingeridas cruas, favorecem a aquisição destas parasitoses. No Brasil, são escassos os dados sobre a ocorrência destes protozoários em vegetais como alface e rúcula, alimentos frescos amplamente consumidos pela população. O propósito deste estudo foi investigar a ocorrência destes parasitos em amostras de hortaliças cultivadas na região agrícola de Campinas (SP), e comercializadas pela Central de Abastecimento de Campinas S.A. CEASA, avaliar a água utilizada na irrigação das mesmas, e as condições higiênico sanitárias das Unidades de Produção Agrícola UPAs estudadas (n=15). Para tanto, a presença de oocistos e cistos foi determinada em amostras de alface (Lactuca saliva) e rúcula (Eruca saliva) e parâmetros fisico químicos foram estabelecidos para a água de irrigação destes vegetais, em diferentes épocas do ano. As coletas foram realizadas durante dois anos consecutivos, nos períodos de maior freqüência d<;ls chuvas e de maior ocorrência (esperada) de casos de criptosporidiose em Campinas (devido à acentuada sazonalidade do protozoário no fim do verão e início do outono) e, em períodos que correspondessem a épocas de maior utilização das águas subsuperficiais na irrigação das hortaliças, devido à escassez de chuvas. As diversas amostras de vegetais, após serem lavadas com 100ml de solução contendo Tween 80 (0,01 %), foram filtradas em membranas de ésteres mistos de celulose (47mm de diâmetro e 3/lm de porosidade nominal), seguida de eluição mediante extração mecânica. Após concentração por centrifugação (1050 x g por 10 minutos), os sedimentos resultantes foram examinados mediante a reação de imunotluorescência direta e teste confirmatório das características morfológicas empregando se o corante tluorogênico DAPI (4',6' diamidino 2 phenylindole). Também se utilizou a técnica de centrífugo tlutuação em sulfato de zinco, com o intuito de comparar a eficiência de detecção destes protozoários nos vegetais. Amostras de água de irrigação (2 litros) foram processadas pela mesma metodologia. A presença de cistos de Giardia spp. ocorreu em 4,1% das 120 amostras de hortaliças examinadas, no primeiro e terceiro períodos de coleta, e não foram encontrados na água de irrigação. Cryptosporidium spp. não foi detectado em nenhum dos períodos investigados, tanto em relação às amostras de hortaliças quanto da água de irrigação. A técnica de centrífugo flutuação em sulfato de zinco mostrou se ineficiente, pois não foi revelada a presença de cistos de protozoários e oocistos de Cryptosporidium spp. nas amostras de hortaliças, quando este método foi empregado. A sensibilidade da técnica de filtração em membranas para os vegetais foi de 2,3 % a 63,1 % para oocistos e, para cistos, 1,1 % a 29,3 %. Em amostras de água de irrigação, a sensibilidade desta metodologia variou de 6,0 % a 15 % para Cryptosporidium spp. e, de 23,6 % a 25,8 % para Giardia spp.. Cistos foram encontrados em 6,6 % das amostras de alface, com densidade de 180 a 230 cistos/50g e, 1,6% das amostras de rúcula, com densidade de 180 cistos/50g de folhas de vegetal o que representa elevada importância em Saúde Pública, dada a possibilidade de aquisição de giardiose. O esclarecimento sobre a dispersão destes protozoários no ambiente e o aperfeiçoamento de procedimentos de detecção dos mesmos, quer em amostras hídricas ou alimentares, são vantajosos para o entendimento da epidemiologia destes patógenos / Abstract: Cryptosporidium spp. and Gim-dia spp. are waterborne parasites that cause gastroenteritis. They are known for the high incidence of cases and the chemical resistance to treatments and capacity to stay intact for a prolonged time in environment. Today, the great influence of protozoa in several waterborne and foodborne outbreaks, becomes evident that vegetables eaten raw are dangerous and favor acquisition of intestinal parasitosis. In Brazil, there is little information on transmission of Cryptosporidium spp. and Giardia spp. in fresh vegetables as lettuce and rucola, largely consumed by population. The objective of this study was to investigate the occurrence of Cryptosporidium and Giardia in vegetable samples from agricultural area in Campinas District (SP, Brazil), and commercialized by Central de Abastecimento de Campinas S.A, CEASA, as well to evaluate the water used in vegetable irrigation, and the health and hygiene related conditions of Unidades de Produção Agrícola - UPAs (n = 15). Therefore, the presence of cysts and oocysts was determined in lettuce (Lactuca saliva) and rucola (Eruca saliva) samples and physico chemical parameters were established for irrigation water of vegetables, in different seasons of the year. Collections were made over two consecutive years, in such a way that chqracterized seasons of higher frequency of rains corresponding to months of higher occurrence of cryptosporidiosis cases in Campinas district (due to accentuated seasonality of protozoa in the end of summer and fhe beginning of autumn) and in per~?ds that corresponded to séasons of high peak utilization of subsurface waters in vegetable irrigation due to lack of rain. After washed with 100 ml of Tween 80 (0,01 %) several vegetable samples were filtered through mixed esters of cellulose membranes (4 7mm diameter and 311m nominal porosity), followed by elution by mechanical extraction. After concentration by centrifugation (1050 x g 10 minutes), the resulting sediments were examined by means of direct immunofluorescence reaction and confirmatory morphological test using the fluorogenic stain DAP1 ( 4', 6' diamidino 2 phenylindole), it was also used zinc sulfate centrifugation flotation method to compare detection efficiency of protozoa in vegetables. Irrigation water samples (2L) were processed by the same methodology. The presence of Giardia spp. cysts occurred in 4,1% of 120 vegetable samples, in the first and third collection periods, cysts were not detected in irrigation water. Cryptosporidium spp. was not detected in either investigated seasons Cin relation to vegetable samples and irrigation water) and the presenee of eysts and ooeysts was not detected through zinc sulfate centrifugation flotation method in either vegetable samples. Sensibility of membrane filtration method for vegetables was 2,3 % to 63,1 % oocysts and 1, I % to 29,3 % eysts, respeetively. In irrigation water samples, the sensibility of methodology varied from 6,0 % to 15 % for Cryptosporidium spp. and from 2.,3 % to 25,8 % for Giardia spp.. Cysts were found in 6,6% of lettuce samples with a density of 180 to 230 cysts/50g, and 1,6 % of rueola samples with a density of 180 eysts/50g found on vegetable leaves. Therefore, it has a high importance for public health due to risk faetor for aequisition of giardiasis. The knowledge on protozoa spreading into environment and the improvement of deteetion process in food or water samples are useful for epidemiological understanding of those parasites / Doutorado / Doutor em Parasitologia

Giardia intestinalis is a two-staged flagellated protozoan parasite which infects the lumen of the small intestine causing the gastrointestinal disease called giardiasis. This disease infects millions of people per year, commonly caused by inadequate water treatment and proximity to livestock. The main line of treatment against this disease has been metronidazole, a member of the nitroimidazole family of prodrugs, which when activated cause non-specific damage to the proteins and genetic material within anaerobic cells. Until recently, G. intestinalis has shown little resistance to metronidazole, but as resistance climbs it has become clear that genetic regulation is key. This study attempts to investigate a select number of key genes through the use of modified transfected plasmids for overexpression and with knockdown using morpholino oligos. Wild type (WB) G. intestinalis cells, transfected with plasmids modified to both overexpress specific genes and incorporate the human influenza hemagglutinin tag (HA-tag) were seen to change in survival rate when exposed to metronidazole. Localization of a select group of these genes was also found using the HA-tag. Two of these genes (quinone oxidoreductase and nitroreductase 1) had protein folding simulations run in order to be visualizee and compare their structures to closely matching equivalents. Finally, morpholino oligo nucleotides were used to knockdown expression in these two genes, leading to a significant decrease in survival for those targeted against quinone oxidoreductase when exposed to metronidazole.