Orientador: Denise Fecchio / Coorientador: Célia Regina Nogueira / Banca: Selma Giorgio / Banca: Dulce Helena Jardim Costantino / Banca: Paula de Oliveira Montandon Hokama / Banca: Rozany Mucha Dofloth / Resumo: A importância do estrógeno (E2) no desenvolvimento do câncer de mama é bem estabelecido na literatura. O uso de antagonistas de E2 para o tratamento de tumores positivos para o receptor de estrógeno mostra-se importante para a sobrevida de pacientes acometidas pela doença. Amphiregulin (Areg), um fator de crescimento regulador multifuncional que pode ser induzido por estrógeno, possui papel central no desenvolvimento da glândula mamária e na morfogênese de órgãos e é expresso tanto em tecidos normais como cancerosos. Estudos clínicos sugerem que amphiregulin também desempenha papel importante na progressão do câncer da mama humano e a sua expressão aumentada tem sido associada com doença agressiva. Para investigar o mecanismo pelo qual o E2 induz a expressão de AREG, células MCF-7 e MDA-MB-231 foram tratadas durante 10 minutos, 30 minutos, 1 hora e 4 horas com veículo (controle) ou E2 isoladamente ou em associação com Fulvestrant (ICI, inibidor do receptor de estrógeno), Actinomicina D (ACTD, inibidor da transcrição gênica), Ciclohexamida (CHX, inibidor da síntese proteica) ou LY (inibidor da via PI3K). Os inibidores também foram utilizados isoladamente. O RNAm foi extraído das células pelo método de trizol e a expressão de AREG foi analisada por qRT-PCR. O tratamento de ambas as células com E2 induziu aumento do RNAm de AREG em todos os tempos analisados. Esse aumento foi parcialmente dependente de ER nas células MCF-7 nos tempos de 10 minutos, 1 e 4 horas. Em 30 minutos não foi observado a ligação do E2 com o ER para que houvesse o aumento da expressão do gene alvo. Nas células MDA-MB-231 o estrógeno aumentou o RNAm de AREG por pelo menos duas vias distintas em todos tempos analisados. Uma das vias ativa a via PI3K para que este efeito ocorra. Nossos resultados demonstram que o E2 é capaz de induzir a expressão de AREG em linhagens de células de câncer de ... / Abstract: The relevance of estrogen in breast cancer development is well established in the literature. The use of E2 antagonists for ER-positive breast cancer treatment is shown to be important to patients' survival. Amphiregulin, a multifunctional growth regulator factor that may be induced by estrogen plays a central role in development of mammary glands and organ morphogenesis, is expressed in both normal and cancerous tissues. Clinical studies suggest that amphiregulin also is important in human breast cancer progression and its expression has been associated with aggressive disease. To investigate the mechanism whereby E2 induces AREG expression, MCF-7 and MDA-MB-231 cells were treated for 10 minutes, 30 minutes, 1 hour or 4 hours with vehicle (control) or estrogen (E2) isolated or in association with Fulvestrant (ICI, estrogen receptor inhibitor), Actinomycin D (ACTD, gene transcription inhibitor), Cycloheximide (CHX, protein synthesis inhibitor ) or LY (PI3K inhibitor). The inhibitors were also used alone. mRNA was extracted from the cells by the Trizol method and AREG expression analyzed by qRT-PCR. Treatment of both cell types with E2 increased AREG mRNA expression at all moments. This increase was partially ER-dependent in MCF- 7 cells at 10 minutes, 1 and 4 hours. At 30 min, no binding of E2 to ER was obseved. In MDA-MB-231 cells, the estrogen-induced AREG mRNA was enhanced by two distinct pathways at the moments analyzed and PI3K pathways participated in one of them. Our results showed that E2 was able to induce the AREG expression in breast cancer cell lines in an ER-dependent and -independent manner / Doutor

Orientador: José Jurandir Fagliari / Coorientador: Ana Maria Centola Vidal / Banca: Paulo Francisco Domingues / Banca: Daniela Gomes Silva / Banca: Kalina Maria de Medeiros Gomes Simplício / Banca: Viviani Gomes / Resumo: O estudo teve como objetivo avaliar as alterações da secreção láctea de cabras com mastite mediante o uso do teste da caneca de fundo escuro, California Mastitis Test (CMT), contagem de células somáticas (CCS) e perfil microbiológico, bem como determinar o perfil bioquímico, em especial de proteínas de fase aguda, do soro sanguíneo e soro lácteo de cabras com mastite clínica ou subclínica, de ocorrência natural. Foram constituídos três grupos experimentais compostos de 30 metades mamárias de cabras sadias, com secreção láctea negativa na prova da caneca de fundo escuro, CMT e no exame microbiológico (grupo controle - G1), 30 metades mamárias com secreção láctea negativa ao teste da caneca de fundo escuro, reação moderada (2+) ou intensa (3+) no CMT e positividade no exame microbiológico (Grupo mastite subclínica - G2) e 12 metades mamárias com secreção láctea positiva na prova da caneca de fundo escuro e no exame microbiológico (grupo mastite clínica - G3). Após antissepsia dos tetos foram colhidas amostras de leite para CCS, cultura microbiológica e determinação do perfil bioquímico do soro lácteo, inclusive o proteinograma mediante fracionamento em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE), e amostras de sangue venoso para determinação do perfil bioquímico sérico. A contagem automática de células somáticas (CCS) e por contagem microscopia direta foi maior nas amostras de secreção láctea das cabras com mastite subclínica (G2: 4.500.000 células/mL e 20.830.000 células/mL, respectivamente) e com mastite clínica (G3: 7.500.000 células/mL e 39.100.000 células/mL, respectivamente). Staphylococcus aureus, Staphylococcus coagulase negativa (SCN), Staphylococcus coagulase positiva (SCP), Corynebacterium spp. e Streptococcus spp. foram os microrganismos isolados nas amostras de leite das cabras do G2 e G3. As amostras de soro lácteo das cabras do G2 e G3 apresentaram maiores atividades das enzimas... / Abstract: The study aimed to evaluate the changes in milk from goats with mastitis by using the strip cup test, California Mastitis Test (CMT), somatic cell count (SCC) and microbiological profile as well as to determine the biochemical profile, especially acute phase proteins, in blood serum and whey from goats with naturally occurring clinical or subclinical mastitis. Three experimental groups were formed by 30 mammary glands from healthy goats with milk samples negative to strip cup test, CMT and microbiological examination (control group - G1); 30 mammary glands with milk samples negative to strip cup test but with moderate (2+) or intense (3+) reaction in CMT and microbiological examination (group with subclinical mastitis - G2), and 12 mammary glands with positive results to strip cup test and microbiological examination (group with clinical mastitis - G3). After asepsis of the teats milk samples were collected for SCC, microbiological culture, and to determine the biochemical profile in whey, including proteinogram by fractionation in poliacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). At the same time, blood samples were obtained to determine the serum biochemical profile. Automatic and microscopic methods were higher in milk samples from goats with subclinical mastits (G2: 4,500.000 cells/mL e 20,830,000 cells/mL, respectively) e with clinical mastitis (G3: 7,500,000 células/mL e 39,100,000 cells/mL, respectively). Staphylococcus aureus, Coagulase-negative Staphylococcus (CNS), Coagulase-positive Staphylococcus (CPS), Corynebaterium spp. and Streptococcus spp. were the microorganisms isolated in milk samples from goats of G2 and G3. Whey samples from goats of G2 and G3 showed higher activity of alkaline phosphatase (G2: 122 U/L and G3: 207 U/L) and gamma-glutamyltransferase (G2: 483 U/L and G3: 571 U / L), and higher concentrations of albumin (G2: 0.18 g/dL and G3: 0.29 g/dL), total protein (G2: 1.50 g/dL and G3: 1.67 g/dL), chlorides ... / Doutor

Resumo não disponível.

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Orientador: Nereu Carlos Prestes / Banca: José Paes de almeida Nogueira Pinto / Banca: Lisiane de Almeida Martins / Resumo: Diante da importância do colostro e leite de égua na alimentação e aquisição de imunidade de potros recém nascidos e na sua utilização na dieta humana, o objetivo do estudo foi avaliar a composição, propriedades físico-químicas, perfil microbiológico e contagem de células somáticas (CCS) do colostro e leite de éguas na fase inicial da lactação. As amostras foram coletadas de 36 éguas em sete momentos: M1= momento do parto, M2= 12 horas, M3= 24 horas, M4= 36 horas, M5= 48 horas, M6= onze dias e M7= 15 dias após o parto. Houve queda nos teores de proteína, gordura, sólidos totais e sólidos desengordurados, e aumento dos teores de lactose durante os momentos estudados. Também houve variação nos valores de pH, índice crioscópico e acidez durante os momentos, principalmente entre amostras de colostro e leite de transição. Houve isolamento microbiológico em 5,55% das amostras cultivadas, das quais 28,57% eram Streptococcus não hemolítico, 28,57% Streptococcus α hemolítico, 21,43% Streptococcus equi, 14,29% Micrococcus spp. e 7,14% Bacillus spp. Nenhum animal apresentou mastite clínica. Maiores valores de CCS foram encontrados no M1 e M2, com diminuição significativa no M3, com valores inferiores a 100.000 células somáticas/mL a partir deste momento. Perante os resultados podemos constatar alterações na composição, qualidade físico-química e celularidade durante os 15 primeiros dias de lactação. Onze amostras foram positivas ao California Mastitis Test, sendo observadas no M1 (36,36%), M2 (27,27%), M3 (18,19%), M5 (9,09%) e M7 (9,09%). Bactérias do gênero Streptococcus foram as mais frequentes isoladas. Entretanto, é necessário cautela na utilização de alguns métodos de diagnóstico de mastite, já que não há padronização dos mesmos para a espécie equina / Abstract: Given the importance of colostrum and milk of the mare on feeding and acquisition of immunity of newborn foals and their use in the human diet, the aim of the study was to evaluate the composition, physicochemical properties, microbiological profile and somatic cell count (SCC) of colostrum and milk of mares in early lactation. Samples were collected from 36 mares at seven moments: M1 = moment of partum, M2 = 12 hours, M3 = 24 hours, M4 = 36 hours, M5 = 48 hours, M6 = 11 days and M7 = 15 days post-partum. It was observed decreased levels of protein, fat, total solids and solids non-fat, and increased levels of lactose during the evaluated moments. There was also variation in pH, cryoscopic index and acidity during the moments, especially between samples of colostrum and transitional milk. The microbiological isolation occurred in 5.55% of the cultured samples, of which, 28.57% was non-hemolytic Streptococcus, 28.57% α-hemolytic Streptococcus, 21.43% Streptococcus equi, 14.29% Micrococcus spp. and 7.14% Bacillus spp. No animals showed clinical mastitis. Higher SCC values were found in M1 and M2, with a significant decrease in M3, with values less than 100,000 somatic cells / mL from this moment. Given these results, changes in the composition, physicochemical quality and cellularity during the first 15 days of lactation were observed. Eleven samples were positive on California Mastitis Test, being observed in M1 (36.36%), M2 (27.27%), M3 (18.19%), M5 (9.09%) and M7 (9.09%). Bacteria of the genera Streptococcus were the most frequently isolated. However, caution is needed in the use of some methods for diagnosis of mastitis, because there is no standardization in the equine species / Mestre

Orientador: Ricardo De Oliveira Orsi / Banca: Simone Fernandes / Banca: Hélio Almeida Ricardo / Banca: Maria Luiza Poiatti / Banca: Sarita Bonagurio Gallo / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar se o nível de liberação de cortisol de ovelhas da raça Santa Inês influencia o seu desempenho e incidência de mastite. Foram utilizadas 49 ovelhas da raça Santa Inês, as quais foram submetidas a uma aplicação de ACTH exógeno (1ml/10 kg PV) para posteriormente serem divididas em 2 grupos de acordo com o nível de concentração plasmática de cortisol no pico da sua curva de liberação: AC (alto cortisol) e BC (baixo cortisol). Foram analisados o desempenho de ovelhas e cordeiros ao parto e à desmama, assim como o CMT, CCS, produção de leite, proteína e gordura do leite. Os dados foram analisados utilizando-se a análise de variância e teste de Tukey a 5% de significância. O grupo AC obteve maior média de cortisol plasmático (225,45 ± 52,08 vs 114,65 ± 36,11 ng/ml) do que o grupo BC, entretanto não houve efeito de nível de liberação de cortisol sobre as variáveis consideradas. Foi observado efeito de período (antes e após a desmama) para produção de leite (924,27 vs 232,19 ml) e proteína bruta (4,16 vs 5,79 %), respectivamente. Para CMT e CCS não foram encontradas diferenças. Concluiu-se que o nível de liberação de cortisol não influencia o desempenho nem a incidência de mastite das ovelhas da raça Santa Inês. / Abstract: The aim of this study at evaluating whether cortisol release level of Santa Ines ewes influences their performance and incidence of mastitis. It were used forty nine Santa Inês ewes, which were submitted to an application of exogenous ACTH (1ml/10 kg BW) for later be divided into 2 groups according to the level of plasma cortisol concentration at the peak of its release curve: AC (high cortisol) and BC (low cortisol). It were analyzed ewes and lambs performance for weight gain at lambing and weaning, as well as CMT, CCS, milk production, protein and fat. Data were analyzed using analysis of variance and Tukey test at 5% significance level. The AC group had higher mean plasma cortisol (225.45 ± 52.08 vs 114.65 ± 36.11 ng/ml) than the BC group, but there was no effect level of cortisol release on the variables considered. Effect was observed for period (before and after weaning) for milk production (924.27 vs 232.19 ml) and crude protein (4.16 vs 5.79%), respectively. For CMT and CCS, no differences were found. It was concluded that the level of cortisol release does not affect the performance or the incidence of mastitis of Santa Ines ewes. / Doutor

Orientador: Humberto Tonhati / Coorientador: Daniele Fernanda Jovino / Coorientador: Larissa Fernanda Simielli Fonseca Noronha / Banca: Marcia Cristina de Sena Oliveira / Banca: Rodrigo Pelicioni Savegnago / Resumo: A mastite é a principal doença que acomete os rebanhos leiteiros e promove grandes perdas na produção devido a alterações na composição do leite e prejuízos na saúde do animal, aumentando assim os custos de produção. Caracteriza-se pela resposta inflamatória da glândula mamária a agentes infecciosos, alterando sua fisiologia e metabolismo. Estudo de expressão gênica vem sendo empregado em vários organismos com a finalidade de identificar genes relacionados com características economicamente importantes como resistência a doenças. Com o objetivo de compreender melhor os mecanismos de resposta imune envolvidos no fenótipo de resistência/susceptibilidade à mastite, foi realizada a quantificação da expressão relativa dos genes do Fator Estimulador de Colônias de Granulócitos 3 (CSF3) e Lactoperoxidase (LPO), em leite de búfalas mestiças saudáveis e com mastite, por meio da técnica de PCR quantitativa em tempo real (qRT-PCR). Para isso, foi realizada a extração de RNA total, com Trizol, de células somáticas do leite de doze animais diagnosticados com mastite e de doze animais livres da infecção. Foram realizadas análises de qualidade e quantificação do RNA total e das contaminações por DNA genômico para garantir a integridade das amostras. A quantificação da expressão gênica foi realizada por meio do método do Delta Delta Ct. Os genes GAPH, HPRT1, EEF1A1 e RPLP0, foram selecionados na literatura, e testados como genes de referência. As análises referentes às quanti... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Not available / Mestre

Orientador: Humberto Tonhati / Coorientador: Daniele Fernanda Jovino Gimenez / Coorientador: Nedenia Bonvino Stafuzza / Banca: Eliane Gasparino / Banca: Lucia Galvão de Albuquerque / Banca: Luciana Correia de Almeida Regitano / Banca: Tiago Santana Balbuena / Resumo: A mastite em búfalas leiteiras causa perdas econômicas devido à diminuição da produção de leite, além de ter um efeito negativo no bem-estar dos animais. Deste modo, foram realizados dois estudos: o objetivo do estudo I foi avaliar o nível de expressão dos genes da lactoferrina (LTF), fator de necrose tumoral alfa (TNF-α), interleucina-1 beta (IL-1β), interleucina-8 (IL-8), e toll-like receptors 2 (TLR-2) e 4 (TLR-4) em búfalas Murrah com e sem mastite subclínica. Amostras de leite de 12 búfalas com mastite e 12 de búfalas sem mastite foram coletadas, para a extração de RNA, síntese de cDNA e validação dos perfis de expressão por qRT-PCR. O ΔΔCt foi estimado utilizando contrastes ortogonais da expressão dos genes alvo corrigidos para a expressão dos genes housekeeping entre os tratamentos. A expressão dos genes TLR-2, TLR-4, TNF-α, IL-1β e IL-8 foi regulada positivamente em búfalos com mastite, enquanto que o gene LTF não apresentou expressão diferencial. O estudo desses genes da função imune que são ativos na glândula mamária é importante para o desenvolvimento de estratégias destinadas a preservar a saúde do úbere. O objetivo do estudo II foi avaliar as proteínas presentes no soro do leite de búfalas com e sem mastite subclínica, utilizando uma abordagem proteômica para identificar proteínas diferencialmente expressas e potencial biomarcador para a doença. Para isso, 16 amostras de leite de búfalas Murrah foram coletadas, sendo oito animais com e oito animais sem mastite su... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Mastitis in dairy buffalo causes economic losses due to decreased milk production, along with having a negative effect on the animals' welfare. Thus, two studies were performed: the objective of study I was to evaluate the expression levels of lactoferrin (LTF), tumor necrosis factor alpha (TNF-α), interleukin-1 beta (IL-1β), interleukin- 8 (IL-8) and toll-like receptors 2 (TLR-2) and 4 (TLR-4) in Murrah buffaloes with and without subclinical mastitis. Milk samples were collected from 12 buffaloes with mastitis and 12 buffaloes without mastitis for RNA extraction, cDNA synthesis, and validation of expression profiles by qRT-PCR. The ΔΔCt was estimated using orthogonal contrasts of the target genes expression adjusted for the expression of the housekeeping genes between both treatments. The expression of the TLR-2, TLR-4, TNF-α, IL-1β and IL-8 genes were upregulated in buffaloes with mastitis, while the LTF gene showed no differential expression. The study of these immune function genes that are active in the mammary gland is important for the development of strategies aimed at preserving the health of the udder. The objective of study II was to evaluate the proteins present in the milk whey from buffaloes with and without subclinical mastitis, using a proteomic approach to identify differentially expressed proteins and potential biomarkers for the disease. For this, 16 samples of Murrah buffalo milk were collected, comprised of eight animals with and eight animals without sub... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Resumo: Dietas com níveis energéticos elevados e suplementação com bST a novilhas pré-púberes diminuem a idade ao primeiro mas podem causar alterações de móleculas envolvidas no processo de desenvolvimento mamário. No presente trabalho objetivou-se examinar a expressão diferencial de genes relacionados ao desenvolvimento parenquimal de novilhas em crescimento acelerado e suplementadas com bST. Conduziu-se dois experimentos em fatorial 2x2, com 32 amostras de tecidos coletados de novilhas abatidas na fase pós-púbere inicial. Num experimento, aplicou-se a técnica de microarranjos com uma biblioteca de cDNA específica para bovinos (NBFGC) aonde avaliou-se simultaneamente a expressão de 18.263 diferentes ESTs. O segundo experimento analisou a expressão gênica de leptina e seu receptor no parênquima com a técnica de PCR em tempo real (qRT-PCR). Adicionalmente, foi realizado um experimento in vitro com linhagem de células mamárias MAC-T para verificação de possíveis interações entre a IL-6 e IGF-1 na proliferação celular. A administração de bST estimulou a expressão de diversos genes positivamente relacionados ao desenvolvimento parenquimal e inibiu a expressão de genes negativamente relacionados a esse processo, inclusive da leptina. A dieta causou poucas alterações nesses genes, mas aumentou a expressão de leptina no parênquima. A IL-6 diminuiu a proliferação celular induzida pelo IGF-1. Os resultados obtidos demonstraram alterações na expressão de genes relacionados ao desenvolvimento tecidual em ambos os tratamentos, sendo que o bST atenuou os efeitos da dieta em genes negativamente relacionados a esse processo. / Abstract: High-energy diet and bST administration during pre-pubertal phase decrease age at first calving. However, these managements modify mammary development altering the expression of several genes related to parenchyma development. The objective of the present study was to analyze the effects of a highenergy diet and bST administration in the expression of genes related to tissue development in heifer mammary parenchyma. Two experiments were conducted in a 2X2 factorial, with 32 samples collected from animals killed during early post-pubertal phase. In the first experiment, the microarray technique was performed with a bovine specific cDNA library containing 18.263 ESTs. The second experiment focused in the expression of leptin and leptin-receptor in mammary parenchyma, using the qRT-PCR technique. Additionally, an in vitro experiment was conducted using an immortalized mammary epithelial cell line (MAC-T) to check possible interactions between IL-6 and IGF-1 in cell proliferation. bST administration stimulated the expression of several genes positive related to tissue development and inhibited the expression of genes negative related to this process, including leptin. High-energy diet altered the expression of few genes, but increased the expression of leptin in mammary parenchyma. IL-6 decreased IGF-1 induced cell-proliferation. The results point to alteration in expression of genes related to tissue development in both treatments and suggest that bST administration attenuates the effects of high-energy diet in genes negative related to tissue development. / Orientador: Mauro Dal Secco de Oliveira / Coorientador: Michael J. Vandehaar / Banca: Luís Felipe Prada e Silva / Banca: Maria Lúcia Pereira Lima / Banca: Renato Luis Furlan / Banca: Paulo de Figueiredo Vieira / Doutor