Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2017. / Made available in DSpace on 2017-10-17T03:24:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 347962.pdf: 2412946 bytes, checksum: f1b46700e578592f0cb294573fe93f24 (MD5) Previous issue date: 2017 / Entre os tumores que acometem o Sistema Nervoso Central (SNC), os gliomas são os mais frequentes. O glioblastoma é o tipo de glioma mais comum e agressivo. Além disso, é muito resistente às terapias existentes, visto que mesmo sob tratamento, os pacientes atingem sobrevida média de um ano. Na busca por terapias mais eficientes, novas moléculas estão sendo desenhadas. Para cânceres do sistema nervoso, como o glioblastoma, moléculas que tem a capacidade de atravessar a barreira hematoencefálica, por apresentarem as propriedades físico-químicas adequadas, atendem ao principal requisito. Neste sentido, a tacrina foi indicada para este estudo e modificações foram realizadas na estrutura da molécula. Entre as modificações de sucesso tem-se a inclusão de anéis espiro-heterociclos na tacrina, resultando em seis derivados. Estas moléculas foram testadas quanto à atividade citotóxica utilizando para isso uma linhagem celular de glioblastoma (SF295). Como objetivo, pretendeu-se avaliar o efeito citotóxico de derivados de tacrina em linhagem celular de glioblastoma (SF295), bem como o mecanismo de morte celular envolvido. Os derivados de tacrina mostraram-se mais ativos do que a temozolomida, visto que os compostos são mais citotóxicos para as células tumorais do que para as células não tumorais. Observou-se ainda que os compostos induziram morte celular por apoptose e/ou necrose. Adicionalmente, foi observado aumento das atividades das caspases -3, -8, -9 e -12, indicando que possivelmente o tipo de morte celular predominante seja a apoptose. Foi observado também que alguns dos derivados de tacrina aumentaram a formação de espécies reativas de oxigênio, bem como diminuíram o potencial de membrana mitocondrial, sugerindo que estresse oxidativo e danos mitocondriais podem estar envolvidos no mecanismo de morte induzido por algumas moléculas. Além disso, os derivados de tacrina possuíram ação sobre proteínas relacionadas ao glioblastoma como p53, HLA-DR, BAF-47, beta-catenina, IBA-1, MAP2c, olig-2 e IDH1, sendo estas consideradas bons alvos para o tratamento deste tipo de câncer. Portanto, através destes resultados, conclui-se que os derivados de tacrina apresentaram resultados promissores e a utilização deles no desenvolvimento de novos fármacos para o tratamento do glioblastoma pode ser satisfatória.<br> / Abstract : Among tumors affecting the Central Nervous System (CNS), gliomas are the most frequent, accounting for 80% of all cases of malignancy among tumors in the brain and CNS. Glioblastoma is the most common and aggressive glioma, characterized by brain invasion capability. In addition, the disease is very resistant to therapies currently employed, since even under treatment, which mainly consists in surgery and chemotherapy with temozolomide, patients achieve a median survival of one year. In the search for more efficient therapies, new molecules are being drawn. For nervous system cancers, such as glioblastoma, molecules that have the capability to cross blood-brain barrier are optimal. Considering the former information, tacrine was chosen for this study, since the drug is used in Alzheimer's disease treatment and molecule's struture has modified. Among successful modifications made to be tested in this work was the inclusion of spiro-heterocyclic rings, resulting in six derivatives. Cytotoxic activity of tacrine derivatives was assayed using glioblastoma cell line (SF295). The objective was to evaluate the cytotoxic effect of derivatives on SF295, as well as the related mechanism of cell death. Between tacrine derivatives and temozolomide's effects, tacrine derivatives are more effective. This conclusion was based on the fact that compounds were selective for tumor cells, unlike temozolomide. Cell death by apoptosis and/or necrosis was observed as general mechanism of the compounds. Additionally, increased caspases -3, -8, -9 and -12 activities were observed, indicating that the predominant type of cell death was apoptosis. Additional ocurrance are some tacrine derivatives increased reactive oxygen species formation, as well as decreased mitochondrial membrane potential. These results suggest that oxidative stress and mitochondrial damage may be involved in cell death mechanism induced by some of the molecules. In addition, tacrine derivatives acted on several glioblastoma-related proteins, considered adequated targets for glioblastoma treatment, including p53, HLA-DR, BAF-47, beta-catenin, IBA-1, MAP2c, olig-2 and IDH1. Through these results, tacrine derivatives are presented as promising molecules to the development of new drugs for glioblastoma treatment could be indicated.

Glioblastoma é um tumor cerebral que apresenta uma alta taxa de invasão, sendo que os pacientes portadores do mesmo possuem uma baixa sobrevida. Um dos maiores desafios encontrados é a resistência do tumor ao principal agente quimioterápico utilizado, a temozolomida, além de apresentar um fenótipo de resistência cruzada a outros quimioterápicos tradicionais como a doxorrubicina. Diversos estudos tem mostrado uma ativação contínua do fator de transcrição Transdutor de sinais e ativador de transcrição 3 (STAT3) em glioblastomas resistentes a quimioterapia. Neste trabalho nós examinamos se células de glioma de rato da linhagem C6 que se tornaram resistentes aos quimioterápicos doxorrubicina e/ou temozolamida, apresentam um conteúdo elevado de STAT3 fosforilada (p-STAT3) e se a inibição deste fenômeno pelo inibidor específico de JAK2/STAT3 AG490, poderia sensibilizar novamente estas células a quimioterápicos. Nós observamos que nossas linhagens resistentes apresentaram um IC50 para temozolamida 11 vezes maior do que a linhagem paterna e 33 vezes maior para doxorrubicina em comparação com a linhagem paterna. Além disto, ambas as linhagens resistentes apresentaram um imunoconteúdo elevado de STAT3. A inibição de STAT3 pelo inibidor de JAK2, AG490, apresentou um decréscimo no imunoconteúdo de p-STAT3, uma parada no ciclo celular na fase G2/M e uma consequente ressensibilização das linhagens resistentes aos seus quimioterápicos. Em suma, os dados aqui apresentados nos levam a acreditar que a inibição de STAT3 poderia ser uma interessante terapia adjuvante a ser estudada para a ressensibilização de pacientes com glioblastoma à quimioterapia. / Glioblastoma is a brain tumor whit high invasiveness and low survival. One of the main characteristics of the tumor is the resistance to the standard chemotherapy to the alkylating agent temozolomide, and the multidrug resistance to other traditional chemotherapeutics like doxorubicin. Signal Transducer and Activator of Transcription 3 (STAT3) has been shown to be constitutive active in glioblastomas resistant to chemotherapy. In this work we examined if C6 cells that became resistant to temozolomide and/or doxorubicin have increased STAT3 phosphorylation (p-STAT3) and if the inhibition of this phosphorylation could re-sensitize these cells. We observed that our two resistant lineages showed higher IC50 for TMZ and DOX in order of 11 and 33 fold higher respectively, and elevated p-STAT3 immunocontent when compared to their parental C6 lineage. The inhibition of p-STAT3 by AG490 50 μM decreased the p-STAT3 immunocontent, induced a G2/M arrest in cell cycle and re-sensitizes the resistant C6-TR and C6-DR to their chemotherapeutics showing a synergetic effect with both chemotherapeutics used in this work. In summary, data present here suggest that the inhibition of STAT3 could be an interesting adjuvant therapy for glioblastoma cells that became resistant to the traditional chemotherapy.

Made available in DSpace on 2015-12-10T14:23:00Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-02-17. Added 1 bitstream(s) on 2015-12-10T14:29:14Z : No. of bitstreams: 1 000851655.pdf: 1706170 bytes, checksum: 990d3d441221c8d5284639c96fcf57c8 (MD5) / Os tumores cerebrais primários mais comuns são denominados gliomas. Eles são definidos patologicamente pela presença de características histológicas e imuno-histoquímicas que evidenciam diferenciação glial. De acordo com a suposta linhagem de origem, eles são classificados como astrocitomas, oligodendrogliomas ou ependimomas. Dentre eles, os astrocitomas são os mais comuns e agressivos. O tratamento atualmente utilizado inclui remoção cirúrgica seguida de quimioterapia com temozolamida (TMZ) e radioterapia, porém sua eficácia é muito baixa devido à alta resistência das células tumorais. Buscando encontrar genes associados com a elevada resistência dos astrocitomas, realizamos um estudo anterior de expressão gênica diferencial utilizando uma coleção de genes de reparo de DNA. Nesta análise foram identificados sete genes significantemente superexpressos em glioblastoma multiforme (GBM), o tipo mais agressivo de astrocitoma. Estes genes são: APEX1, BRCA2, BRIP1, EXO1, NEIL3, RAD54L e XRCC2. Através de RT-PCR quantitativo, avaliamos os níveis de expressão destes genes em um painel expandido de 54 casos clínicos de astrocitomas de diferentes graus de malignidade e em 5 linhagens celulares de GBM. Todos os genes analisados mostraram-se mais expressos nos astrocitomas, com exceção de RAD54L em amostras de astrocitoma de grau II. Além disso, a superexpressão dos 7 genes avaliada isoladamente não exerce influência direta na sobrevida dos pacientes. Evidenciou-se ainda a superexpressão mais acentuada de EXO1 e NEIL3, que foram selecionados para realização de ensaios funcionais de silenciamento, e avaliação do ciclo celular e taxas de apoptose/morte efetiva das células. Estes ensaios foram realizados com as linhagens celulares T98G e U138MG, que apresentaram maiores níveis de expressão destes genes. Nos ensaios funcionais, observamos que o silenciamento... / Gliomas are the most common type of primary brain cancers. They are pathologically defined by the presence of histological and immunehistochemical characteristics that evidence glial differentiation. According to the hypothetical cell of origin they are classified in: astrocytomas, oligodendrogliomas and ependimomas. Among them, astrocytomas are the more common and aggressive type. The treatment currently used for GBM includes surgical resection of tumor followed by chemotherapy with temozolamide (TMZ) and radiotherapy, but this protocol is still insufficient due to the high resistance of cancer cells. Searching for repair genes associated with the high resistance of astrocytomas, we developed a previous study of differential gene expression using a collection of DNA repair genes. In this analysis, we identified seven genes significantly overexpressed in glioblastoma multiforme (GBM), namely: APEX1, BRCA2, BRIP1, EXO1, NEIL3, RAD54L and XRCC2. Using quantitative RT-PCR, we evaluated the expression of these genes in an expanded panel of samples with 54 clinical cases of different grade astrocytomas and five GBM cell lines. All genes showed expression significantly higher in astrocytomas, except RAD54L in grade II astrocytomas. Moreover, the overexpression of this 7 genes evaluated individually doesn't exert direct influence upon patient's survival rate. Remarkably, EXO1 and NEIL3 showed the higher fold changes and were chosen for functional silencing assays. This experiments were performed with T98G and U138MG cell lines that showed the higher expression levels among the GBM cell lines analyzed. In the functional assays, we observed that the silencing of EXO1 or NEIL3 doesn't induce changes in the apoptosis and cell death rates and doesn't change the distribution of cells in cycle. Beyond this, the silencing of this two genes doesn't sentisizes cells to ionizing radiation.

Ecteinascidina 743 (ET-743) é uma nova droga isolada de um tunicado marinho, a Ecteinascidia turbinata, que está na fase III dos estudos clínicos por sua marcada atividade anticâncer. Apesar de seu mecanismo de ação não estar completamente elucidado, tem sido demonstrado que a ET-743 se liga ao DNA formando adutos covalentes com o N2 da guanina. Além disso, a ET-743 tem sido relatada como potente inibidora da transcrição. No presente estudo, utilizou-se como modelo para a investigação dos efeitos antiproliferativos deste composto a linhagem celular derivada de glioblastoma humano, U-251 MG. Uma vez que o foco principal de atenção nos estudos sobre o mecanismo de ação da ET-743 esteja concentrado em suas interações com o DNA, a autora buscou avaliar outros aspectos de sua atividade antiproliferativa, quais sejam, o seu efeito sobre a distribuição das células no ciclo celular, sobre a atividade de enzimas associadas ao processo de apoptose, bem como sobre o conteúdo celular da proteína Hsp70. Em incubações de 0,5 nM por 48 h, a ET-743 causou um significante acúmulo das células na fase G2M do ciclo celular, o mesmo ocorrendo com doses mais elevadas (1,0 e 1,5) e incubações mais prolongadas (72 h). A ET-743 induziu morte celular dose-dependente e este efeito foi significativamente prevenido pelo inibidor de caspases z-VAD-fmk. Contudo, não foi observado aumento significativo nos níveis de Hsp70 após tratamento com ET-743. Considerando que alta expressão de Hsp70 é um dos principais mecanismos de proteção das células em condições de estresse, incluindo-se o tratamento com drogas citotóxicas, a não elevação de seus níveis na presença da ET-374 pode estar, ao menos em parte, relacionada à citotoxicidade produzida por este agente na linhagem estudada.

Glioblastoma é um tumor cerebral que apresenta uma alta taxa de invasão, sendo que os pacientes portadores do mesmo possuem uma baixa sobrevida. Um dos maiores desafios encontrados é a resistência do tumor ao principal agente quimioterápico utilizado, a temozolomida, além de apresentar um fenótipo de resistência cruzada a outros quimioterápicos tradicionais como a doxorrubicina. Diversos estudos tem mostrado uma ativação contínua do fator de transcrição Transdutor de sinais e ativador de transcrição 3 (STAT3) em glioblastomas resistentes a quimioterapia. Neste trabalho nós examinamos se células de glioma de rato da linhagem C6 que se tornaram resistentes aos quimioterápicos doxorrubicina e/ou temozolamida, apresentam um conteúdo elevado de STAT3 fosforilada (p-STAT3) e se a inibição deste fenômeno pelo inibidor específico de JAK2/STAT3 AG490, poderia sensibilizar novamente estas células a quimioterápicos. Nós observamos que nossas linhagens resistentes apresentaram um IC50 para temozolamida 11 vezes maior do que a linhagem paterna e 33 vezes maior para doxorrubicina em comparação com a linhagem paterna. Além disto, ambas as linhagens resistentes apresentaram um imunoconteúdo elevado de STAT3. A inibição de STAT3 pelo inibidor de JAK2, AG490, apresentou um decréscimo no imunoconteúdo de p-STAT3, uma parada no ciclo celular na fase G2/M e uma consequente ressensibilização das linhagens resistentes aos seus quimioterápicos. Em suma, os dados aqui apresentados nos levam a acreditar que a inibição de STAT3 poderia ser uma interessante terapia adjuvante a ser estudada para a ressensibilização de pacientes com glioblastoma à quimioterapia. / Glioblastoma is a brain tumor whit high invasiveness and low survival. One of the main characteristics of the tumor is the resistance to the standard chemotherapy to the alkylating agent temozolomide, and the multidrug resistance to other traditional chemotherapeutics like doxorubicin. Signal Transducer and Activator of Transcription 3 (STAT3) has been shown to be constitutive active in glioblastomas resistant to chemotherapy. In this work we examined if C6 cells that became resistant to temozolomide and/or doxorubicin have increased STAT3 phosphorylation (p-STAT3) and if the inhibition of this phosphorylation could re-sensitize these cells. We observed that our two resistant lineages showed higher IC50 for TMZ and DOX in order of 11 and 33 fold higher respectively, and elevated p-STAT3 immunocontent when compared to their parental C6 lineage. The inhibition of p-STAT3 by AG490 50 μM decreased the p-STAT3 immunocontent, induced a G2/M arrest in cell cycle and re-sensitizes the resistant C6-TR and C6-DR to their chemotherapeutics showing a synergetic effect with both chemotherapeutics used in this work. In summary, data present here suggest that the inhibition of STAT3 could be an interesting adjuvant therapy for glioblastoma cells that became resistant to the traditional chemotherapy.

Ecteinascidina 743 (ET-743) é uma nova droga isolada de um tunicado marinho, a Ecteinascidia turbinata, que está na fase III dos estudos clínicos por sua marcada atividade anticâncer. Apesar de seu mecanismo de ação não estar completamente elucidado, tem sido demonstrado que a ET-743 se liga ao DNA formando adutos covalentes com o N2 da guanina. Além disso, a ET-743 tem sido relatada como potente inibidora da transcrição. No presente estudo, utilizou-se como modelo para a investigação dos efeitos antiproliferativos deste composto a linhagem celular derivada de glioblastoma humano, U-251 MG. Uma vez que o foco principal de atenção nos estudos sobre o mecanismo de ação da ET-743 esteja concentrado em suas interações com o DNA, a autora buscou avaliar outros aspectos de sua atividade antiproliferativa, quais sejam, o seu efeito sobre a distribuição das células no ciclo celular, sobre a atividade de enzimas associadas ao processo de apoptose, bem como sobre o conteúdo celular da proteína Hsp70. Em incubações de 0,5 nM por 48 h, a ET-743 causou um significante acúmulo das células na fase G2M do ciclo celular, o mesmo ocorrendo com doses mais elevadas (1,0 e 1,5) e incubações mais prolongadas (72 h). A ET-743 induziu morte celular dose-dependente e este efeito foi significativamente prevenido pelo inibidor de caspases z-VAD-fmk. Contudo, não foi observado aumento significativo nos níveis de Hsp70 após tratamento com ET-743. Considerando que alta expressão de Hsp70 é um dos principais mecanismos de proteção das células em condições de estresse, incluindo-se o tratamento com drogas citotóxicas, a não elevação de seus níveis na presença da ET-374 pode estar, ao menos em parte, relacionada à citotoxicidade produzida por este agente na linhagem estudada.

Glioblastoma é um tumor cerebral que apresenta uma alta taxa de invasão, sendo que os pacientes portadores do mesmo possuem uma baixa sobrevida. Um dos maiores desafios encontrados é a resistência do tumor ao principal agente quimioterápico utilizado, a temozolomida, além de apresentar um fenótipo de resistência cruzada a outros quimioterápicos tradicionais como a doxorrubicina. Diversos estudos tem mostrado uma ativação contínua do fator de transcrição Transdutor de sinais e ativador de transcrição 3 (STAT3) em glioblastomas resistentes a quimioterapia. Neste trabalho nós examinamos se células de glioma de rato da linhagem C6 que se tornaram resistentes aos quimioterápicos doxorrubicina e/ou temozolamida, apresentam um conteúdo elevado de STAT3 fosforilada (p-STAT3) e se a inibição deste fenômeno pelo inibidor específico de JAK2/STAT3 AG490, poderia sensibilizar novamente estas células a quimioterápicos. Nós observamos que nossas linhagens resistentes apresentaram um IC50 para temozolamida 11 vezes maior do que a linhagem paterna e 33 vezes maior para doxorrubicina em comparação com a linhagem paterna. Além disto, ambas as linhagens resistentes apresentaram um imunoconteúdo elevado de STAT3. A inibição de STAT3 pelo inibidor de JAK2, AG490, apresentou um decréscimo no imunoconteúdo de p-STAT3, uma parada no ciclo celular na fase G2/M e uma consequente ressensibilização das linhagens resistentes aos seus quimioterápicos. Em suma, os dados aqui apresentados nos levam a acreditar que a inibição de STAT3 poderia ser uma interessante terapia adjuvante a ser estudada para a ressensibilização de pacientes com glioblastoma à quimioterapia. / Glioblastoma is a brain tumor whit high invasiveness and low survival. One of the main characteristics of the tumor is the resistance to the standard chemotherapy to the alkylating agent temozolomide, and the multidrug resistance to other traditional chemotherapeutics like doxorubicin. Signal Transducer and Activator of Transcription 3 (STAT3) has been shown to be constitutive active in glioblastomas resistant to chemotherapy. In this work we examined if C6 cells that became resistant to temozolomide and/or doxorubicin have increased STAT3 phosphorylation (p-STAT3) and if the inhibition of this phosphorylation could re-sensitize these cells. We observed that our two resistant lineages showed higher IC50 for TMZ and DOX in order of 11 and 33 fold higher respectively, and elevated p-STAT3 immunocontent when compared to their parental C6 lineage. The inhibition of p-STAT3 by AG490 50 μM decreased the p-STAT3 immunocontent, induced a G2/M arrest in cell cycle and re-sensitizes the resistant C6-TR and C6-DR to their chemotherapeutics showing a synergetic effect with both chemotherapeutics used in this work. In summary, data present here suggest that the inhibition of STAT3 could be an interesting adjuvant therapy for glioblastoma cells that became resistant to the traditional chemotherapy.

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2016-01-18T14:03:34Z No. of bitstreams: 3 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Tese_FINAL-A4.pdf: 4196135 bytes, checksum: 547188bb7660475ceab2a2f39962a9f5 (MD5) Tese_FINAL-A4.pdf: 4196135 bytes, checksum: 547188bb7660475ceab2a2f39962a9f5 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-18T14:03:34Z (GMT). No. of bitstreams: 3 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Tese_FINAL-A4.pdf: 4196135 bytes, checksum: 547188bb7660475ceab2a2f39962a9f5 (MD5) Tese_FINAL-A4.pdf: 4196135 bytes, checksum: 547188bb7660475ceab2a2f39962a9f5 (MD5) Previous issue date: 2014-03-24 / Glioblastoma (grau IV) é o tumor mais agressivo e infiltrante do sistema nervoso central (SNC), que mostra uma série de mutações, bem como alto grau de vascularidade, polimorfismo e atipia celular nuclear. Infelizmente, diagnóstico precoce de tumores cerebrais é difícil, uma vez que ferramentas de imagem não são eficientes para o diagnóstico correto desses tipos de tumores, levando a falhas no tratamento. Aqui nós descrevemos a síntese, caracterização e conjugação de pontos quânticos ou quantum dots (QDs) de telureto de cádmio (CdTe) recobertos com tiol e com o anticorpo contra a proteína ácida fibrilar glial (anti-GFAP), bem como, a preparação de lipossomas. O método de congelamento e descongelamento foi utilizado para encapsular os QDs em diferentes tipos de lipossomas e liberá-los em células tronco. Os lipossomas vazios e contendo CdTe QDs foram caracterizados por microscopia de fluorescência, microscopia eletrônica de transmissão, tamanho e potencial zeta. Os QDs CdTe-anti-GFAP foram utilizados para um novo direcionamento in vivo e método de imagem para detecção do tipo de tumor glioblastoma U87 xenotransplantado em cérebro de camundongos suíços machos. CdTe QDs não conjugados e CdTe QDs conjugados foram utilizados para marcar U87 linha de células de tumor in vitro e astrócitos saudáveis. A citotoxicidade dos CdTe QDs com fluorescência no verde (530 nm) e no vermelho (644 nm), foi avaliada utilizando MTT nas células U87. O crescimento do tumor foi visualizado no interior do cérebro pela marcação com hematoxilina e eosina e mostrou a entrega com sucesso nas células U87 no parênquima cerebral. CdTe QDs conjugados com anti - GFAP foram injectados na região do tumor e a sua marcação na linhagem celular U87 foi visualizada por microscopia de fluorescência, mostrando dupla marcação com especificidade para vimentina em glioblastomas imunorreactivos. Em comparação com as células tumorais U87, que facilmente foram marcadas com o CdTe QDs conjugados com anti- GFAP, observouse que os astrócitos saudáveis mantidos em culturas primárias tiveram uma maior resistência à sua marcação e foram fracamente marcados. Os resultados descritos aqui direcionam para novas perspectivas na utilização de CdTe QDs na detecção de gliobastoma , sugerindo uma potencial aplicação em cirurgia guiada por imagem. / Glioblastoma (grade IV) is the most aggressive and infiltrating tumor of the central nervous system (CNS), showing a variety of mutations as well as high degree of vascularity, cell polymorphism and nuclear atypia. Unfortunately, early diagnostic of brain tumors is hard, as imaging tools are not efficient for proper diagnosis of these types of tumors, leading to treatment failures. Here we describe the synthesis, characterization and conjugation of thiol-capped CdTe with anti-glial fibrillar acidic protein (anti-GFAP) and preparation of liposomes. The freeze and thaw method was used to encapsulate the QDs in different types of liposomes and deliver them into stem cells. The empty and containing CdTe QDs liposomes were characterized by fluorescence microscopy, transmission electron microscopy, size and zeta potential. A new in vivo targeting and imaging method for U87 glioblastoma tumor type xenotransplanted into male swiss mice brain using aqueous colloidal CdTe quantum dots conjugated to anti-GFAP (CdTeanti- GFAP QDs) was developed. The red emitting CdTe QDs and the conjugated red-emitting CdTe QDs were used to label U87 tumor cell line in vitro and health astrocytes. Toxicity of isolated green (530 nm) and red (644 nm) emitting CdTe QDs, was evaluated using MTT assay applied to U87 cells. The tumor growth was visualized inside the brain by the hematoxylin and eosin staining and showed the successful delivery of the U87 cells into the brain parenchyma. CdTe-anti-GFAP QDs were injected into the tumor region and their uptake by the U87 cell line was visualized by fluorescence microscopy, showing specific double-labeling of vimentinimmunoreactive glioblastoma. Compared to U87 tumor cells, which easily take up anti-GFAP conjugated red-emitting CdTe QDs, healthy astrocytes kept in primary cultures offered more resistance to their incorporation and were weakly labeled. The results reported here provide new perspectives for using CdTe QDs in gliobastoma detection, suggesting their potential application in imaging-guided surgery.

Os tumores do sistema nervoso central representam aproximadamente 2% de todos os tipos de cânceres. Embora a incidência dos tumores do SNC seja pequena, comparada com outras neoplasias, estes tumores estão entre as mais graves malignidades humanas, pois afetam o órgão responsável pela coordenação e integração de todas as atividades orgânicas. Os gliomas são os tumores mais comuns do SNC. Apesar do progresso marcante na caracterização da patogênese molecular dos gliomas, esses tumores permanecem incuráveis e, na maioria dos casos, refratários aos tratamentos, devido à sua heterogeneidade molecular. O aparecimento desses tumores ocorrem a partir do acúmulo de alterações genéticas nas células. Para entender o mecanismo molecular de formação e progressão tumoral é indispensável identificar os genes que acumulam essas alterações. Um polimorfismo de base única (SNP Single Nucleotide Polymorphism) é geralmente definido como uma substituição estável de apenas uma base na molécula de DNA com frequência maior que 1%, em pelo menos uma população Os SNPs são reconhecidos como importantes ferramentas na genética humana e médica e têm sido amplamente utilizados nos estudos de associação genética de várias doenças complexas, como por exemplo: distúrbios cardiovasculares, psiquiátricos e autoimunes, obesidade, osteoporose, diabetes e câncer Sendo assim, este trabalho teve como objetivo analisar polimorfismos entre populações caso e controle na intenção de identificar associações destes genótipos na suscetibilidade aos tumores. A técnica utilizada para a análise de polimorfismos foi de PCR-RFLP onde observamos diferenças nas distribuições genotípicas entre pacientes e controles nos SNPs EGF+61, GSTP-1Ile 105 Val, XRCC1 Arg 194 Trp, Pro 206 Pro, Arg 280 His, Arg 399 Gln, Gln 632 Gln, XRCC2 Arg 188 His, XRCC3 Thr 241 Met e XRCC4 G1394T, onde as variantes EGF G61, Trp194, Val105, Pro206, His280, Gln632, His188, Met241 e XRCC4 T1394 foram observados com maior freqüência entre os portadores de gliomas. Dessa forma, estas variantes podem ser fatores de susceptibilidade para o desenvolvimento dos tumores. / The Central nervous system tumors represent about 2% of all cancers. Although the incidence of CNS tumors is small compared with other cancers, these tumors are among the most serious human malignancies, because they affect the body responsible for coordination and integration of all organic activities. Gliomas are the most common tumors of the CNS. Despite remarkable progress in characterizing the molecular pathogenesis of gliomas, these tumors remain incurable and, in most cases, refractory to treatment, due to its molecular heterogeneity. The appearance of these tumors occurs from the accumulation of genetic changes in cells. To understand the molecular mechanism of tumor formation and progression is essential to identify genes that accumulate these changes. A single base polymorphism (SNP Single Nucleotide Polymorphism) is generally defined as a stable replacement of only one base in the DNA molecule often greater than 1% in at least one population SNPs are recognized as important tools in human genetics and medical and have been widely used in genetic association studies of various complex diseases, such as: cardiovascular, psychiatric and autoimmune diseases, obesity, osteoporosis, diabetes and cancer. Thereby, the objective of this study was to analyze the polymorphisms between cases and control the intention to identify associations of these genotypes in susceptibility to tumors. The technique used for the analysis of polymorphisms were PCR-RFLP where we observe differences in genotype between patients and controls in the EGF +61, GSTP-1 Ile105Val, XRCC1 Arg 194 Trp, Pro 206 Pro, Arg 280 His, Arg 399 Gln, Gln 632 Gln, XRCC2 Arg 188 His, XRCC3 Thr 241 Met and XRCC4 G1394T, where the variants EGF G61, Trp194, val105, Pro206, His280, Gln632, His188, Met241 and XRCC4 T1394 were observed more frequently among patients with gliomas. Thus, these variants can be important factors of susceptibility to the tumor development.

Made available in DSpace on 2014-06-12T22:58:23Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo2810_1.pdf: 2283343 bytes, checksum: ca8cbd5bb4e2ceac8a7c25a7641281a7 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2011 / O Glioblastoma multiforme é uma neoplasia astrocitária maligna e infiltrativa que se torna mais freqüente com a idade e tem uma incidência de 12% a 15% dentre as neoplasias intracranianas com uma sobrevida pós-operatória de 12 meses. Angiogênese é um dos principais pré-requisitos para o crescimento tumoral e para metástase. Em glioblastomas, a presença de vascularização atípica estabelece de forma marcante a malignidade de suas células que secretam fatores próangiogênicos alterando totalmente a estrutura do vaso, tornando-o similar a um glomérulo renal. O estudo dos indicadores de anaplasia (mitose, celularidade e necrose em paliçada) em região circunvizinha a angiogênese típica e atípica, em glioblastomas, esclarecerá a importância da estrutura vascular normal ou alterada para o desenvolvimento deste tipo de tumor. O presente estudo teve por objetivo avaliar a influência dos parâmetros histopatológicos de hipercelularidade, mitose e necrose em paliçada na vasculatura dos glioblastomas. Foram utilizados blocos de parafina com fragmentos teciduais cujos diagnósticos histopatológicos foram de glioblastomas. Foram preparadas lâminas e, após análise histológica, selecionados os casos que apresentaram vasculatura atípica. Em cada caso foram analisados os parâmetros de malignidade: hipercelularidade, mitose e presença de necrose em paliçada em áreas vasculares típicas para comparação com áreas vasculares atípicas. Após essa análise, a morfometria gerou as médias da contagem do número de células tumorais e número de mitoses que foram comparadas intra-grupo e esses achados foram correlacionados com a presença ou ausência de necrose em paliçada. O número de mitoses e células em regiões circunvizinhas a vasos atípicos foi estatisticamente superior, estando fortemente relacionados entre si. Constatou-se, que regiões onde há o aumento do número de células e mitoses predispõem a formação de vascularização atípica. A necrose em paliçada não teve correlação com o aumento do número de mitoses em áreas vasculares típicas ou atípicas, mas sua presença foi significativa quanto ao número de células, sendo encontrada uma maior celularidade nos casos em que estava presente esse tipo de necrose. Há interferência dos parâmetros histopatológicos relacionados a hipercelularidade e número de mitoses na áreas vasculares atípicas dos glioblastomas em relação às áreas vasculares típicas