Made available in DSpace on 2015-12-06T23:47:21Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008 / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Memoria para optar el título de Bioquímico / Los receptores tipo Toll (TLR) son proteínas de transmembrana que reconocen patrones moleculares asociados a patógenos (PAMPs). El TLR2 reconoce PAMPs de bacterias gram positivas, los cuales activan una vía de señalización clásica que involucra el reclutamiento de la proteína MyD88 y una alternativa donde participa la Fosfoinositol 3-Quinasa (PI3K). A su vez, los glucocorticoides (GCs) son moléculas que suprimen la inflamación y la inmunidad adaptativa, que recientemente han sido reportadas como potenciadoras de la expresión de ciertas moléculas de la inmunidad innata, tales como el TLR2. La importancia de PI3K y los GC en la regulación de la vía alternativa del TLR2 no ha sido estudiada aún. El objetivo general fue determinar la participación de PI3K en la producción de TNFα inducida por agonistas del TLR2 y GCs. Los objetivos específicos fueron: 1) Analizar el efecto de Pam3Cys-Ser-Lys4 un lipopéptido sintético análogo a la porción NH2-terminal de lipoproteínas de bacterias gram positivas, y Dexametasona, sobre la secreción de TNFα y la activación transcripcional de NFκB, en células A549. 2) Estudiar la participación de PI3K-Akt en la ruta de señalización del TLR2 inducida por Pam3Cys-Ser-Lys4 y Dexametasona. 3) Determinar la interacción entre TLR2-PI3K y GR-PI3K. Los resultados obtenidos muestran que la activación del TLR2 por Pam3Cys-Ser- Lys4 provocó un aumento en la expresión de TNFα y la activación transcripcional del TLR2, sin embargo el co-tratamiento con Dexametasona no alteró el efecto del agonista del TLR2. Al mismo tiempo, PI3K aumenta la expresión de TNFα e inhibe la transcripción del TLR2, al usar un dominante negativo para PI3K (p85-DN). PI3K activa la transcripción de genes que responden a la movilización de NFκB y AP-1, ya que células expuestas a Pam3Cys-Ser-Lys4 y que expresan el constructo p85-DN, presentan una disminución significativa de la activación transcripcional de NFκB y APLos resultados indicaron que Pam3Cys-Ser-Lys4 aumentó significativamente la fosforilación de Akt, como un indicador indirecto de la actividad de PI3K, y Dexametasona la revirtió. Por otra parte, se determinó la interacción entre p85 con el GR o el TLR2, siendo la primera modulada exclusivamente por Dexametasona. Estos resultados demuestran que PI3K presenta diversos mecanismos de regulación en la vía de señalización del TLR2 y además proponen mecanismos por los que los GCs intervienen en la ruta transduccional / Toll-like receptors (TLRs) are transmembrane proteins that recognize pathogenassociated molecular patterns (PAMPs). TLR2 identify PAMPs from gram positive bacteria, which activate a classical signaling pathway involving MyD88 recruitment to the receptor intracellular domain, and an alternative signaling pathway, which comprises the activation of the phosphoinositol 3-kinase (PI3K). Moreover, glucocorticoids (GCs) suppress the inflammation and adaptive immune responses, and have been recently reported to enhance the TNFα-induced expression of TLR2. The relevance of GCs in the regulation of the alternative pathway has not yet been described. The general aim of this thesis was to determine PI3K participation on TNFα production induced by TLR2 agonists in the presence or absence of GCs. The specific aims were: 1) To analyze the effect of Pam3Cys-Ser-Lys4, a specific synthetic ligand analogue to the NH2-terminal portion of gram positive bacterial lipoproteins, and Dexamethasone, a synthetic GC, on TNFα expression and NFκB transcriptional activation,in A549 cells. 2) To study the role of PI3K-Akt in the TLR2 signaling pathway induced by Pam3Cys-Ser-Lys4 in the presence or absence of Dexamethasone. 3) To determine the interaction between TLR2-PI3K and GR-PI3K. The results show that TLR2 activation by Pam3Cys-Ser-Lys4 promotes TNFα expression and TLR2 transcriptional activity, however co-treatment of cells with Pam3Cys-Ser-Lys4 and Dexamethasone did not revert TNFα increase. In relation to this pathway, we investigated if PI3K was involved in TNFα expression and TLR2 transcription activity regulation. Pam3Cys-Ser-Lys4 significantly increased Akt phosphorylation, as an indicator of PI3K activity, and Dexamethasone reverted to it. Moreover, by using a PI3K regulatory subunit dominant negative mutant cDNA (p85-DN) transiently expressed in cells, a remarkably decrease in NFκB and AP-1 transcriptional activation was observed. On the other hand, we determined p85 regulatory PI3K subunit interaction with GR or TLR2, and we were able to identify interaction between p85-GR in the presence of Dexamethasone. These results demonstrate that PI3K shows different mechanism of regulation in the TLR2 signaling and propose pathways in which GCs may be participating

NASCIMENTO, I. V. Efeito da corticoterapia sistêmica crônica no desenvolvimento da periodontite apical em ratos.2017. 64 f. Dissertação (Mestrado em Odontologia) - Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2017. / Submitted by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-03-31T12:38:53Z No. of bitstreams: 1 2017_dis_ivnascimento.pdf: 4125640 bytes, checksum: 4f7c99598da68e842d39d0ece94056b9 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-03-31T12:39:01Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_dis_ivnascimento.pdf: 4125640 bytes, checksum: 4f7c99598da68e842d39d0ece94056b9 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-31T12:39:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_dis_ivnascimento.pdf: 4125640 bytes, checksum: 4f7c99598da68e842d39d0ece94056b9 (MD5) Previous issue date: 2017-03-07 / The apical periodontitis is one of the most prevalent oral diseases in the world. The pathogenesis of the disease is very complex, involving many factors related to the immune response, such as immune cells recruitment, release of inflammatory mediators and the periapical bone resorption. The use of chronic systemic corticosteroids may be directly related to a change in the developmental biology of apical periodontitis, which may influence its prognosis and treatment. Therefore, the objective of this study was to evaluate the inflammatory response and the development of apical periodontitis in rats chronically treated with glucocorticoids. Male Wistar rats (Rattus novergicus) were randomly divided into two groups: a prednisone (5 mg / kg / day) treated group and a control group that was given saline solution for 30 days prior to the induction of apical periodontitis, continuing until euthanasia (0, 7, 14 or 28 days after induction of the lesion). The jaws were submitted to radiographic evaluation (lesion size), and posterior histological (type and intensity of inflammation), histomorphometric (osteoclast counts, polymorphonuclear, mononuclear counts), histochemistry (evaluation of the percentage of collagen fibers) and immunohistochemistry (Interleukin 1β) analyses were performed. All analyzes were performed using GraphPad Prism 5.0® software, at a significance level of 95%. There was a significant increase in apical lesion size at day 14 of prednisone-treated animals (p <0.001). Also on day 14, the prednisone group had an acute inflammatory profile (p= 0.007), significantly different from that presented on the saline group, and the intensity of the inflammatory infiltrate of the prednisone group was higher than that of the saline group (p = 0.007). Polymorphonuclear cells (p = 0.006), osteoclast (p = 0.001) and IL-1β-immunolabelled cells counts (p = 0.044) were higher in animals treated with prednisone on the 14th day. The prednisone group also had a decrease in type I collagen (p=0,040) deposition and an increase in type III collagen (p=0,039) on the 28th day. Therefore, the glucocorticoids may alter the development of experimental apical periodontitis induced in rats, causing an early increase in periapical bone resorption and pulpal necrosis. These drugs may also lead to an exacerbation of the acute inflammatory process, as well as an increase in IL-1β and osteoclast levels, as well as a change in the collagen profile of apical connective tissues. / A periodontite apical é uma das doenças orais de maior prevalência em todo o mundo. A patogênese da doença é bastante complexa, envolve diversos fatores relacionados à resposta imunológica, como recrutamento de células de defesa, liberação de mediadores inflamatórios e a reabsorção óssea periapical. O uso de corticoterapia crônica sistêmica pode estar diretamente relacionado com uma modificação na biologia do desenvolvimento da periodontite apical, podendo influenciar o seu prognóstico e tratamento. Portanto, o objetivo deste estudo foi avaliar a resposta inflamatória e o desenvolvimento da periodontite apical em ratos tratados cronicamente com glicocorticoides. Foram utilizados ratos Wistar (Rattus novergicus) machos divididos aleatoriamente em dois grupos: um grupo tratado com prednisona (5 mg/kg/dia) e um grupo controle que foi administrado solução salina, durante 30 dias antes da indução da periodontite apical continuando até o dia de eutanásia (0, 7, 14 e 28 dias) após a indução da lesão. As mandíbulas foram submetidas à avaliação radiográfica (tamanho da lesão) e posteriormente, foram realizadas análises histológica (tipo e intensidade da inflamação), histomorfométrica (contagem de osteoclastos, polimorfonucleares, mononucleares), histoquímica (avaliação do percentual de fibras colágenas) e imunohistoquímica (Interleucina 1β). Todas as análises foram realizadas utilizando o software GraphPad Prism 5.0®, considerando um nível de significância de 95%. Houve um aumento significativo no tamanho da lesão apical ao 14º dia dos animais tratados com prednisona (p<0,001).. Nesse mesmo dia, o grupo prednisona apresentou um perfil inflamatório do tipo agudo, significantemente diferente do apresentado pelo grupo salina (p=0,007) e a intensidade do infiltrado inflamatório do grupo prednisona foi maior que do grupo salina (p=0,007). A contagem de células polimorfonucleares (p=0,006), osteoclastos (p=0,001) e imunomarcadas para IL-1β (p=0,044) mostrou-se aumentada nos animais tratados com prednisona do 14º dia. O grupo prednisona também apresentou uma diminuição na deposição de colágeno tipo I (p=0,040) e o aumento de colágeno tipo III (p=0,039) no 28º dia. Conclui-se que os glicocorticoides modificaram o desenvolvimento da periodontite apical experimental induzida em ratos, causando aumento precoce da reabsorção óssea periapical e da necrose pulpar. Esses fármacos também levaram a uma exacerbação do processo inflamatório agudo, bem como com um aumento nos níveis de IL-1β e dos osteoclastos, além de uma alteração no perfil de colágeno dos tecidos conjuntivos apicais.

Seminario para optar al grado de Ingeniero Comercial / Autores no autorizan el acceso a texto completo de su documento. / Actualmente en nuestro país existe una creciente preocupación por la salud. Es así como, el Ministerio de Salud del Gobierno de Chile ha incluido paulatinamente nuevas enfermedades al Plan GES que día a día afectan a más gente. Por otro lado, el Ministerio de Economía está realizando esfuerzos constantes con el fin de fomentar la innovación en todas sus áreas, generando mayor cantidad de recursos destinados a estas temáticas. En este sentido, la industria de prestación de servicios de laboratorio clínico juega un papel fundamental al estar ligada a la salud de las personas y ser un sector constantemente expuesto a innovaciones tecnológicas y de procesos. De aquí nace la necesidad del proyecto analizado; la detección temprana de la efectividad del tratamiento con glucocorticoides en pacientes con enfermedades autoinmunes, incluyendo la uveítis, la artritis reumatoidea y enfermedad inflamatoria intestinal. Ha sido descrito que el 35% de los pacientes que padecen uveítis son resistentes a los glucocorticoides (Lee, Schewitz, Nicholson, Dayan, & Dick, 2009), por lo que los hospitales y clínicas eventualmente podrían exponer a sus pacientes a deteriorar su salud, sin conseguir los beneficios esperados. La tecnología evaluada en el presente trabajo se basa en la evaluación de los mecanismos moleculares de respuesta a glucocorticoides que permite una identificación temprana de pacientes resistentes a este grupo de fármacos, direccionando, de este modo, la selección adecuada del tratamiento específico para cada paciente: Glucocorticoides solamente (pacientes sensibles) o Glucocorticoides asociados a Inmunosupresores (pacientes resistentes). Este examen se realiza a través de una serie de pasos estandarizados, que implica el uso de distintos equipos, los cuales, manejados por un tecnólogo médico, procesan la sangre de los pacientes dos veces separadas cada una por una ventana de tiempo, para luego de 3 semanas aproximadamente obtener el resultado final, el que definirá si efectivamente el tratamiento con glucocorticoides en el paciente estudiado es efectivo o no. El modelo de negocio se basa en una alianza conjunta con la Clínica Alemana o Las Condes, el Hospital Clínico de la Universidad de Chile o una empresa Start Up de salud, a modo de ocupar sus instalaciones para llevar a cabo el proceso y la administración, a cambio de un porcentaje de los ingresos, en un comienzo estipulado en un 20%. La sangre es trasladada por un repartidor desde las instalaciones médicas hasta el laboratorio las dos veces que se necesitan, para luego elaborar el informe final con los resultados y dejarlo a disposición del cliente vía online. Cabe destacar que la propuesta de valor del modelo, se basa en entregar un servicio de calidad y exclusivo, con información oportuna y útil para cada beneficiario, los que en una primera instancia se encuentran en la Región Metropolitana de Chile. Estimamos que su extensión al año 2016 será de 4.494 beneficiarios, incluyendo las tres patologías mencionadas anteriormente. Esto nos lleva a decir que la demanda sería de 2.180 beneficiarios contabilizando el 48,5% del total del mercado debido a los esfuerzos en publicidad al tercer año, resultando en un potencial de ventas de $68.978.871 el primer año, considerando una demanda igual al 15% del mercado objetivo. El análisis financiero, se realizó en un período de 10 años (2016 al 2026), con una tasa de descuento del 18,17%, reajustando esta tasa y otros valores pertinentes según el IPC anual. El VAN resulta positivo, igual a $4.125.615,94, demostrando el retorno positivo de la inversión.

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / Estudios epidemiológicos realizados en humanos han mostrado que un crecimiento intrauterino alterado está asociado con un incremento de la incidencia de patologías cardiovasculares, metabólicas y otras enfermedades no transmisibles en la vida adulta. En mamíferos, la desnutrición prenatal, evidenciada por un bajo peso de nacimiento, ha sido asociada a hipertensión, enfermedad coronaria y diabetes tipo 2 en la vida adulta. La hipertensión inducida por desnutrición prenatal, se piensa que entre otras causas, podría ser producida por un déficit del mecanismo de control por feedback negativo del eje hipotálamo-hipófisis-adrenal (HHA), lo cual sería programado durante la vida fetal. Dado que, la hormona hipotalámica liberadora de corticotropina (CRH) está implicada en el aumento de la presión arterial de humanos con hipertensión primaria y de ratas espontáneamente hipertensas, y que el RNAm de CRH hipotalámico se encuentra aumentado en ratas que sufrieron desnutrición prenatal, se estudió en ratas Wistar de 40 días de edad, tanto eutróficas como sometidas a desnutrición in utero: (i) presión arterial sistólica y diastólica mediante un sistema pletismográfico automático; (ii) concentración plasmática de CRH mediante RIA; (iii) acción de dexametasona en la concentración sérica de corticosterona mediante RIA. La desnutrición prenatal de las crías fue inducida por restricción dietaria de las madres (10 g diarios de dieta de laboratorio estándar con 20% de proteina). Las crías nacidas de madres con dieta estándar ad libitum se utilizaron como control. A los 40 días de edad, las ratas prenatalmente desnutridas, que tuvieron bajo peso de nacimiento, mostraron aumento de la presión arterial sistólica, aumento de la concentración plasmática de CRH, y aumento de la concentración sérica de corticosterona con una menor reactividad a la acción inhibitoria de dexametasona en los niveles de corticosterona. Estos resultados sugieren fuertemente que el eje HHA se encuentra hiperactivo en la vida postnatal de las ratas que sufrieron desnutrición prenatal debido, probablemente, a la ya reportada disminución en el número de receptores de glucocorticoides de estos animales en estructuras que regulan el eje HHA tales como hipocampo, hipotálamo e hipófisis, lo que podría implicar una disminución del control por feedback negativo que ejercen los glucocorticoides endógenos en la vida postnatal

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / Los efectos de la exposición a bajos niveles de plomo sobre la función endocrina e inmune, no han sido objeto de suficientes estudios, siendo esta situación diferente en el caso de la intoxicación aguda, particularmente en otros sistemas corporales, tales como el nervioso, cardiovascular, reproductivo y gastrointestinal. La presente investigación estudió los efectos de la exposición subaguda a bajos niveles de plomo en el periodo prepuberal, sobre algunos parámetros conocidos que evalúan, en alguna medida, los mecanismos de adaptación inmunoendocrinos frente al stress, considerándose en este estudio, el número de linfocitos T CD4+ y CD8+, número y grado de degranulación de leucocitos eosinófilos y número de receptores para glucocorticoides presentes en timo y bazo de las ratas impúberes analizadas. Ratas Sprague Dowley hembras, mantenidas bajo condiciones de manejo con 12 h de luz y acceso libre a alimento y agua, fueron expuestas a acetato de plomo o suero fisiológico, vía inyecciones subcutáneas sucesivas, alternadas cada 72 h, a partir de los 7 días de edad hasta alcanzar los 19 días, momento en el cual cada animal tratado con plomo recibió una dosis total acumulada de 24.38 mg., distribuida en forma de dosis crecientes, proporcionales al peso de los animales. Después de 48 h de la última dosis de suero fisiológico o acetato de plomo, se aplicó una inyección endovenosa única de suero fisiológico o 18 mg de succinato de hidrocortisona por cada 100 g de peso corporal y 24 h después se anestesió a los animales con gas éter, extrayendo muestra completa de timo y bazo, seleccionando tejido para fijación en formalina al 10%, deshidratación e inclusión en parafina, para luego realizar cortes histológicos seriados, sometiéndolos a tinción con azul de anilina y eosina, para la determinación, bajo microcopía de epifluorescencia, del número y grado de degranulación de eosinófilos. Adicionalmente, se dispusieron cortes para desparafinación y posterior incubación con anticuerpos monoclonales marcados con ficoeritrina o fluoresceína, siendo destinados una primera serie de cortes a reaccionar con los anticuerpos anti-CD8, procediendo en una segunda serie, a la incubación de los cortes con anticuerpos anti-CD4. Paralelamente, se tomaron muestras de bazo y timo de ratas sometidas a inyecciones de plomo o suero fisiológico entre los días 7 y 19 de edad, aplicando intravenosamente suero fisiológico en ambos grupos el día 21, procediendo 24 hrs. después a la recolección de pequeñas muestras de tejido, incubándolas in vitro con dexametasona tritiada, congelando posteriormente los tejidos radiomarcados en propano/butano líquido enfriado en nitrógeno líquido, para luego someter las muestras a la técnica de radioautografía seca, destinada a cuantificar, bajo microscopía óptica, los receptores para glucocorticoides presentes en timo y bazo. Los resultados mostraron una disminución inducida por plomo del número de linfocitos T CD4+ y CD8+ en timo de ratas expuestas a plomo durante la vida prepuberal, encontrándose además un reducido número de linfocitos CD8+ en los grupos tratados con hidrocortisona. El número de receptores para glucocorticoides no demostró variación estadísticamente significativa atribuible al efecto del plomo en el presente estudio experimental. Los animales expuestos a plomo demostraron una disminución en el número de eosinófilos en timo, pero no en bazo. Además, presentaron una disminución inducida por hidrocortisona en el número de eosinófilos en bazo, pero no en timo. Se comprobó un efecto sinérgico entre el plomo y la hidrocortisona, demostrado por el disminuido número de eosinófilos esplénicos en los animales que recibieron plomo y luego fueron tratados con hidrocortisona. Los leucocitos eosinófilos esplénicos se degranulan con mayor intensidad en los animales expuestos a plomo, observándose una reversión de este fenómeno inducido por hidrocortisona, revelada por una menor degranulación en el grupo expuesto a plomo y tratado con hidrocortisona en relación a los animales expuestos a plomo y tratados posteriormente con suero fisiológico. El grado de degranulación de los eosinófilos tímicos, no demostró diferencias significativas producto de algún tratamiento. No obstante, los eosinófilos de timo fueron de menor volumen y de mayor luminosidad que los encontrados en todas las muestras de bazo. Luego del análisis de los resultados es posible afirmar que la exposición subaguda a plomo en ratas a edad prepuberal, modifica variablemente el número de linfocitos T en órganos linfoides, alterando paralelamente la eosinofilia tisular y el grado de degranulación de los leucocitos eosinófilos, sin cambios aparentes en el número de receptores para glucocorticoides analizados en bazo y timo. / Financiamiento FONDECYT 1.950.634

Orientador: Flávio Ruas de Moraes / Coorientador: Marco Antonio de Andrade Belo / Banca: Rogério Salvador / Banca: Maurício Laterça Martins / Resumo: Este ensaio teve por objetivos avaliar o efeito da administração parenteral de dexametasona e fosfato de levamisol sobre a cinética de acúmulo de macrófagos e formação de gigantócitos em lamínulas de vidro, implantadas no tecido subcutâneo de pacus (Piaractus mesopotamicus), na tentativa de simular um estímulo estressante com imunossupressão e a possibilidade de compensa-la usando um imuoestimulante. Foram utilizados 147 peixes juvenis, distribuídos aleatoriamente em vinte e uma caixas de água plásticas de 250 L, contendo sete animais cada, constituindo os tratamentos: NV = não tratado; CL = controle; L 25 = levamisol (25 mg/kg), L 50 = levamisol (50 mg/kg) , D2 = dexametasona (2 mg/kg), D2+L25 = dexametasona (2 mg/kg + levamisol 25 mg/kg), D2+L50 = dexametasona (2 mg/kg + levamisol 50 mg/kg). Os pacus foram anestesiados em solução alcoólica de benzocaína (1:10000 v/v) e submetidos ao implante de lamínulas de vidro esterilizadas no tecido subcutâneo, quando administrou-se, por via intra-muscular, os fármacos de acordo com cada tratamento. Decorridos dois, sete e 15 dias pós-implante (DPI) os peixes foram novamente anestesiados para coleta de sangue e eutanasiados (solução alcoólica de benzocaína, 1:500 v/v) para a retirada das lamínulas. O sangue destinou-se aos exames hematológicos e as lamínulas à avaliação da cinética do acúmulo de macrófagos e formação de gigantócitos. Os resultados foram analisados pelo teste de Tukey, a 5% de probabilidade e demonstraram que ao longo do período experimental observou-se redução do número de eritrócitos e taxa de hemoglobina associadas ao aumento do volume corpuscular médio, quadro que sugere ligeira anemia macrocítica. Na avaliação da cinética de acúmulo celular sobre a lamínula, as maiores contagens de macrófagos isolados ocorreram sete dias após... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of this study was to investigate the effect of parenteral administration of dexamethasone and levamisole phosphate on the kinetics of accumulation of macrophages and formation of giant cells in glass cover slips implanted in subcutaneous tissue of pacu (Piaractus mesopotamicus) to simulate a stressful stimulus with immunosuppression and the possibility to compensate for it using an immunostimulant. We used 147 juvenile fish, randomly divided in twenty-one plastic water tanks of 250 L, containing seven animals each: NV = not treated, and CL = control, L25 = levamisole (25 mg / kg), L 50 = levamisole (50 mg / kg), D2 = dexamethasone (2 mg / kg), D2 + L25 = dexamethasone (2 mg / kg + levamisole 25 mg / kg), D2 + L50 = dexamethasone (2 mg / kg + levamisole 50 mg / kg). Fish were anesthetized with an alcoholic solution of benzocaine (1:10,000 v / v), implanted with sterile glass cover slips at subcutaneous tissue and were administered intra-muscular drugs, according of each treatment. After two, seven and 15 days post-implantation (DPI) fish were anesthetized for blood collection and euthanized (alcoholic solution of benzocaine, 1:500 v / v) to remove the glass cover slips. The blood was used for hematological tests and the glass cover slips to assess the kinetics of accumulation of macrophages and formation of giant cells. Statistical analyses were performed using 5% Tukey test and was observed reduction in the number of erythrocytes and hemoglobin associated with increase of mean corpuscular volume, suggesting slight macrocytic anemia. Kinetic evaluation of cell accumulation on glass cover slip, the highest number of isolated macrophages occurred at seven days after implantation in all groups, associated with increased formation of policariontes cells regardless of the number of cores. The dexamethasone... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Chung Man Chin / Banca: Iracilda Zeppone Carlos / Banca: Gustavo Henrique Goulart Trossini / Resumo: A inflamação é caracterizada como uma resposta do organismo frente à uma agressão, a qual pode resultar em dor, edema e em alguns casos levar à disfunção do órgão ou tecido. Durante o processo inflamatório ocorre a liberação de citocinas, pequenas proteínas transcritas e traduzidas pelo metabolismo intrínseco celular, que realizam uma série de comunicações intra e intercelulares. Uma importante citocina é o fator de necrose tumoral alfa (TNF-α), que atua na manutenção do quadro inflamatório em situações de inflamação crônica, sendo super expressa em diversas doenças inflamatórias. A terapia anti fator de necrose tumoral α (anti-TNF-α) tornou-se uma abordagem interessante no tratamento de doenças inflamatórias crônicas, principalmente daqueles pacientes que não respondem ao tratamento convencional. Entre os fármacos utilizados no tratamento das doenças inflamatórias crônicas, encontram-se os glicocorticoides (GCs), anti-inflamatórios de natureza esteroide. Estes atuam no processo reacional de defesa do organismo minimizando o dano causado pelo agente infeccioso. Porém o uso prolongado de GCs está associado a diversos efeitos adversos, como osteoporose, síndrome metabólica, doenças cardiovasculares, catarata, entre outros, limitando o uso desses fármacos em terapias prolongadas. Dessa forma, nesse trabalho, buscou-se através da estratégia de hibridação molecular, a síntese de novos derivados anti-inflamatórios esteroides, com propriedades de modulação da citocina TNF-α, a fim de se alcançar um sinergismo de ação útil no tratamento de doenças inflamatórias crônicas. Nesse contexto, foram sintetizados e caracterizados seis compostos, série Lapdesf GL-FT, derivados dos glicocorticoides prednisolona (compostos I-III) e budesonida (compostos IV-VI), ligados ao grupamento ftalimida, responsável pela inibição da síntese de TNF-α. Os compostos ... / Abstract: Inflammation is characterized as a organism response against an aggression, which can result in pain, edema and in some cases lead to organ or tissue dysfunction. During the inflammatory process are released of cytokines, small proteins transcribed and translated by intrinsic cellular metabolism, performing a variety of communication intra and intercellular. An important cytokine is tumor necrosis factor alpha (TNF-α), which acts in maintaining the inflammatory in situations of chronic inflammation, being over expressed in many inflammatory diseases. Therapy anti-tumor necrosis factor α (anti-TNF-α) has become an interesting approach in the treatment of chronic inflammatory diseases, especially those patients who do not respond to conventional treatment. Among the drugs used in the treatment of chronic inflammatory diseases are glucocorticoids (GCs), anti-inflammatory steroids. These act in the reactive process of organism defense minimizing the damage caused by the infectious agent. However, prolonged use of GCs is associated with various side effects such as osteoporosis, metabolic syndrome, cardiovascular disease, cataracts, among others, limiting the use of these drugs in prolonged therapies. Thus, in this work, we realized the viability of design and synthesis by molecular hybridization strategy of novel anti-inflammatory steroids with modulating properties of cytokine TNF-α in order to achieve a synergism of action useful in the treatment of diseases chronic inflammatory diseases. In this context, were synthesized and characterized six compounds Lapdesf series GL-FT derived from glucocorticoids prednisolone (compounds I-III) and budesonide (compounds IV-VI), connected to the phthalimide group responsible for inhibition of TNF-α. The obtained compounds were evaluated for anti-inflammatory activity in a model of paw edema and distal ulcerative colitis. Derivatives I and IV showed higher ... / Mestre

Orientador: Marco Antonio de Andrade Belo / Banca: Claudinei da Cruz / Banca: Eduardo Makoto Onaka / Resumo: Na avaliação da participação da insulina e dos efeitos da dexametasona sobre a resposta de tilápias do Nilo, Oreochromis niloticus, durante aerocistite induzida por Aeromonas hydrophila, foram utilizadas 189 tilápias com peso médio 532g (± 74g), constituindo nove tratamentos: Não tratado e Não inoculado (controle); Não tratado e inoculado; Tratado com insulina (INS) e inoculado; Tratado com INS + Aloxano (ALOX) e inoculado; Tratado com insulina (INS)+ dexametasona (DEXA) e inoculado; Tratado com ALOX e inoculado; Tratado com ALOX + DEXA e inoculado; Tratado DEXA e inoculado; Tratados com INS + ALOX + DEXA e inoculado. Após, seis, 24 e 48 horas após inóculo (HPI), as tilápias foram submetidas à anestesia profunda para colheita de sangue para determinação do hemograma completo e bioquímico sérico, assim como, obtenção de exsudato. Da mesma forma, foram realizados estudos dos índices somáticos hepáticos, esplênicos e renais, além do histopatológico destes mesmos órgãos. Contudo, as avaliações na aerocistite infecciosa revelaram o predomínio de neutrófilos no local inflamado, sendo esta alteração mais significativa 24 HPI, apresentando um padrão de inflamação aguda fibrinossupurativa na histopatologia. A neutrofilia apresentou correspondência com as alterações renais na porção cranial, sendo este resultado fortemente influenciado pela tratamento com insulina. O tratamento com dexametasona suprimiu a resposta imune inata das tilápias, resultando em linfopenia e monocitopenia, seguida pela ausência de macrófagos no exsudato durante a evolução da reação inflamatória infecciosa. Hiperglicemia e hipercolesterolemia em tilápias tratadas com dexametasona confirmaram o efeito glicocorticoide sobre o metabolismo intermediário dos peixes. A administração de aloxano resultou em alterações clínico-patológicos no globo ocular, tecido hepático e tecido ... / Abstract: For assessing the contribution of insulin and the dexamethasone effects on the response of Nile tilapia, Oreochromis niloticus, during Aeromonas hydrophila induced aerocistite, were used 189 tilapia mean weight 532g (± 74g) distributed in nine treatments: Untreated and not inoculated (control); Untreated and inoculated; Treated with insulin (INS) and inoculated; Treated with INS + alloxan (ALOX) and inoculated; Treated with insulin (INS) + dexamethasone (DEXA) and inoculated; Inoculated and treated with ALOX; Treated with ALOX + DEXA and inoculated; DEXA Treated and inoculated; Treated with INS + ALOX + DEXA and inoculated. After six, 24 and 48 hours post inoculation (HPI), tilapia were subjected to deep anesthesia for blood samples collection to determinate of complete blood count and serum biochemistry, as well as for obtaining exudate. Studies of liver, spleen and kidney somatic index were performed, and histopathology study was realized with the same organs. However, the infectious aerocistite revealed a predominance of neutrophils in the inflamed site, which was most significant at 24 HPI, with a pattern of fibrinossuppurative exudate, showing correspondence with renal changes in the cranial portion, principally in fish treated with insulin. The immunosuppressive effect of dexamethasone resulted in lymphopenia and monocytopenia, followed by the absence of macrophages in the exudate during the evolution of infectious inflammatory reaction. Hyperglycemia and hypercholesterolemia in dexamethasone treated tilapia confirmed the glucocorticoid effect on the intermediary metabolism. The administration of alloxan resulted in clinical and pathological changes in eyeball, liver tissue, skeletal muscle tissue, accompanied by increase in the amounts of glucose, triglycerides, cholesterol and serum alkaline phosphatase. The histopathology of cutaneous tissue and skeletal muscle in ... / Mestre

Orientador: Sérgio Luiz Felisbino / Coorientador: Wellerson Rodrigo Scarano / Banca: Raquel Fantin Domeniconi / Banca: Luis Antonio Justulin Júnior / Banca: Renata Carolina Piffer / Banca: Glaura Scatamburio Alves Fernandes / Resumo: Estudos têm sugerido que o excesso de glicocorticoides (GCs) durante períodos críticos do desenvolvimento pode alterar a função reprodutiva. Apesar da função essencial da próstata no sucesso reprodutivo e de sua alta susceptibilidade ao desenvolvimento de lesões com o avançar da idade, o impacto tardio de corticoterapias precoces sobre a homeostase da glândula ainda é desconhecido. No presente estudo, investigamos os efeitos da corticoterapia prenatal (PRE), durante a instalação da puberdade (PU), e sua associação (PRE+PU=REE), sobre a morfofisiologia da próstata senescente. Ratas Wistar prenhes receberam betametasona (0.1mg/kg/dia, i.m.), ou salina, nos dias gestacionais 12, 13, 18 e 19. Os descendentes machos receberam doses de betametasona (7mg/kg/dia, gavage), ou salina, do dia pós-natal 35 ao 50 (PND35-50). Na idade senil (PND300), todos os animais foram eutanasiados, amostras de sangue foram coletadas para dosagens hormonais, e a próstata ventral (VP) foi dissecada e processada para a análise morfológica, bem como para quantificação e localização de proteínas (AR, GR, PAR-4 e PCNA). Reduzidos níveis de testosterona e insulina foram observados no grupo PRE, enquanto apenas a insulina mostrou-se reduzida no grupo PU, e nenhuma redução adicional foi observada em REE. Uma tendência de aumento no índice apoptótico e incidência de ácinos com epitélio metaplásico foi detectada dentre os grupos. A quantificação de proteínas revelou menor expressão de AR no grupo PRE, maior expressão do marcador de proliferação celular (PCNA) no grupo REE, porém, diferença significativa alguma foi observada na expressão do marcador de morte celular por apoptose (PAR-4). A análise da reação imunoistoquímica para o GR indicou uma maior expressão do receptor em células epiteliais dos grupos que receberam betametasona. Com base nos resultados, sugerimos que a corticoterapia com betametasona durante o final da ... / Abstract: Studies have suggested that glucocorticoids (GCs) excess during critical developmental time windows can alter reproductive parameters. Despite of the key function of the prostate in the reproductive success, and its high susceptibility to develop lesions in an age-dependent manner, the impact of early GCs excess on the gland homeostasis is still unknown. In the present study, we have investigated the effects of prenatal (PRE), peripubertal (PU) corticotherapy, and its combination (PRE+PU=REE), on aging prostate's morphophysiology. Pregnant Wistar rats received betamethasone (0.1mg/kg/day, i.m.), or saline, on the gestational days 12, 13, 18 and 19. Male descendents received betamethasone (7mg/kg/day, gavage), or saline, from 35th to 50th postnatal day (PND35-50). Late in life (PND300), all animals were euthanized, blood samples were taken for hormones levels estimation, and the ventral prostate (VP) was excised and processed for morphology evaluation, and for proteins (AR, GR, PAR-4 and PCNA) quantification and localization as well. Lower testosterone and insulin levels were detected in group PRE, while only insulin serum levels was reduced in group PU, and no additional decrease was seen in REE. An increasing trend in the apoptosis index and metaplastic epithelium acini incidence was observed along the treated groups. The protein quantifications showed a decreased AR expression in PRE, higher proliferation marker (PCNA) expression in REE, and no significant difference in the expression of the apoptosis marker PAR-4 was detected among the groups. The immunolocalization of GR indicated a higher receptor expression in epithelial cells of treated groups, when compared to NE. Based on these results, we suggest that the corticotherapy with betamethasone during late pregnancy can program fetal prostate, resulting in altered androgen and glucocorticoids signaling permanently. Peripubertal corticotherapy deflagrated cell ... / Doutor