Modulation par PPARa des concentrations en microparticules dans un modèle murin d’athérosclérose et de stéato-hépatite non alcooliqueL'athérosclérose et la stéato-hépatite non alcoolique sont des pathologies complexes fréquemment associées au syndrome métabolique. Elles se caractérisent par une accumulation de lipides et le développement d’une inflammation chronique susceptible d’induire un stress cellulaire qui peut conduire à la formation de microparticules (MPs). Ces petites vésicules membranaires (0,1-1µm) produites par les cellules activées, sont susceptibles d’exacerber l’inflammation. Il a été montré que le fénofibrate, une molécule hypolipémiante dont le mécanisme d’action passe par l’activation du récepteur nucléaire PPARa (Peroxisome Proliferator-Activated Receptor a), inhibe le développement de l’athérosclérose et de la stéato-hépatite dans un modèle expérimental murin. L’objectif de notre travail a été d’une part 1) d’étudier l’influence du développement de l’athérosclérose et de la stéatose hépatique sur les concentrations en MPs au niveau plasmatique et au niveau des lésions d’athérosclérose et du foie, respectivement, en utilisant un modèle expérimental murin développant une athérosclérose et une stéato-hépatite non alcoolique, la souris apoE2-KI, 2) d’analyser la modulation par PPARa des concentrations en MPs dans les lésions athéroscléreuses, le foie et la circulation sanguine. Nous avons montré que le développement de lésions d’athérosclérose chez la souris apoE2-KI était lié à une augmentation de la concentration en MPs dans le sinus aortique, siège du développement de ces lésions. Un traitement par le fénofibrate réduit la concentration en MPs, ceci parallèlement à son effet inhibiteur du développement de l’athérosclérose mais également dans des lésions établies, sur lesquelles le fénofibrate n’a pas d’effet curatif en terme de surface des lésions et du contenu en lipides et en macrophages. Ces effets n’apparaissent pas dans la souris E2-KI déficiente pour PPARa, montrant l’implication du récepteur dans ces processus. Le développement de la stéatose hépatique induit également une augmentation de la concentration en MPs dans le foie. Cependant, le fénofibrate n’a pas d’effet sur la concentration en MPs, en dépit de son effet bénéfique dans le développement de la stéatose hépatique. Ces travaux ont mis en évidence pour la première fois la présence de MPs dans un modèle murin d’athérosclérose et de stéato-hépatite non alcoolique. L’activation de PPAR module différemment les concentrations en MPs dans la lésion d’athérosclérose et le foie des souris apoE2-KI. II) Rôle de PPARg dans l’efférocytose par les macrophages alternatifs humainsL’efférocytose est un processus physiologique permettant d’éliminer les cellules en apoptose, évitant ainsi qu’elles n’entrent en nécrose et ne libèrent leur contenu toxique. C’est un processus complexe faisant intervenir de nombreuses voies et molécules, notamment la thrombospondine-1 (TSP-1). PPARg, un récepteur nucléaire appartenant à la famille des PPARs, est principalement exprimé dans le tissu adipeux, mais également dans les macrophages. L’objectif de ce travail a été d’étudier l’effet de l’activation de PPARg sur l’efférocytose par les macrophages alternatifs humains.Nous avons comparé l’expression de plusieurs gènes impliqués dans l’efférocytose entre des macrophages primaires humains différenciés classiquement (RM) ou alternativement (M2), activés ou non avec un agoniste de PPARg (GW1929) à la fin de la différenciation. L’expression de différents gènes codant pour des protéines impliquées dans le processus d’efférocytose augmente dans les M2 par rapport aux RM. Nous avons comparé l’expression de ces mêmes gènes dans des zones de plaques d’athérosclérose humaines définies comme M2 ou non selon des marquages immunohistochimiques (détection du mannose-récepteur). / Atherosclerosis and non-alcoholic-steatohepatitis (NASH) are complex pathologies associated withmetabolic syndrome. They are characterized by lipid accumulation and chronic inflammation which can inducecellular stress and microparticle (MP) formation. These small membrane vesicles (0.1-1μm) produced fromactivated cells have deleterious properties such as inflammation enhancement. Fenofibrate, a hypolipemic drugactivating PPARa (Peroxisome Proliferator-Activated Receptor a), inhibits atherosclerosis and NASHdevelopment in a mouse experimental model.The aim of our work was first to study effects of atherosclerosis and NASH development on MPconcentrations in the plasma, atherosclerotic lesions and in the liver, and second to study PPARa modulation ofMP concentration in these contexts. For these studies, we used the apolipoprotein E2 knock-in (apoE2-KI)mouse.We showed that atherosclerosis development in apoE2-KI mice was linked to an increase of MPconcentration in the aortic sinus, location of atherosclerosis lesions in this model. Fenofibrate treatment reducedMP concentration during lesion development but also in established lesions, where this treatment has no curativeeffect on lesion area, lipid and macrophage contents. These effects did not occur in apoE2-KI PPARa deficientmice, proving PPARa implication in these processes. NASH development induced also increased MPconcentration in the liver. However, despite fenofibrate has beneficial effects on steatosis and inflammation inthe liver, this treatment did not modify MP concentration.This study put in evidence for the first time MPs in a mouse experimental model of atherosclerosis andNASH. PPARa activation differently modulates MP concentrations in atherosclerotic lesions and in the liver ofapoE2-KI mice.II) PPARg implication in efferocytosis by human alternative macrophagesEfferocytosis is a physiological mechanism allowing apoptotic cell elimination, avoiding necrosis andtoxic content liberation, triggering anti-inflammatory cytokine production by macrophages. This complexprocess depends on numerous pathways and molecules, such as thrombospondin-1 (TSP-1). Studies havereported that alternative differentiation of macrophages influenced phagocytic capacity, without addressing themolecular mechanism.The nuclear receptor Peroxisome Proliferator-Activated Receptor (PPAR)g is expressed in macrophageswhere it exerts anti-inflammatory properties and its activation by synthetic ligands during monocytedifferentiation induces an alternative polarization state.The aim of our work was to study the effects of PPARg activation on efferocytosis by human alternativemacrophages.We analysed the expression of several genes implicated in efferocytosis in primary human restingmacrophages (RM) or in alternatively differentiated macrophages (M2) with or without PPARg activation byGW1929, added at the end of the differentiation. The expression of genes involved in efferocytosis was higher inM2 macrophages compared to RM. We then compared the expression of these genes in alternative M2macrophages present in the human atherosclerotic lesions. Interestingly, efferocytosis gene expression wasincreased in M2 macrophages ex vivo.We also showed that TSP-1 expression is increased by PPARg activation in human macrophages, in aPPARg-dependent manner. Using a functional phagocytosis assay with labelled apoptotic cells and fluorescentbeads, we confirmed that phagocytotic activity was increased in M2 macrophages compared to RM. Moreover,PPARg activation induced phagocytosis capacity in M2 macrophages.These results showed a new property of PPARg in macrophages. In addition to the established antiinflammatoryproperties, PPARg activation could increase apoptotic cell phagocytosis in atherosclerotic lesion,with consequences on early stage development of the pathology.

L'Homme est continuellement exposé à de nombreuses molécules chimiques, notamment les polluants environnementaux, qui peuvent cibler le foie et moduler par la suite les pathologies hépatiques. Le chlordécone appartient à la famille des polluants organiques persistants. Interdit définitivement depuis 1993, il est toujours présent dans l'environnement des régions où il a été utilisé. Ce pesticide, présente une grande affinité vis-à-vis du foie, où il s'accumule et interagit avec d'autres substances toxiques pour amplifier leur hépatotoxicité. Nous avons évalué l'impact du chlordécone sur l'évolution des hépatites aigues et chroniques chez la souris. Dans une première étude, nous avons développé des modèles murins de co-exposition au chlordécone et à des hépatites aiguës de différentes étiologies. Trois types d'hépatite ont été étudiés, une hépatite alcoolique induite par une consommation importante d'alcool, une hépatite auto-immune, induite par la Concanavaline A (Con A), et une hépatite virale fulminante induite par le virus de l'hépatite murine (MHV3). Nous avons montré, pour la première fois, que le chlordécone sensibilise les foies de souris soumises à la toxicité de l'alcool et amplifie l'hépatite auto-immune induite par la Con A. Dans notre modèle, le chlordécone n'a pas eu d'effet sur l'hépatite induite par le virus MHV3, en revanche, il a favorisé l'entrée de ce virus dans les cerveaux des souris entrainant ainsi une mort plus précoce. Dans une deuxième étude, nous avons développé un modèle murin de co-exposition chronique au chlordécone et à un agent hépatotoxique, le tétrachlorure de carbone (CCl4). Nous avons montré, dans ce modèle, que le chlordécone potentialise la fibrose hépatique dans les hépatites chroniques murines. En conclusion, nos études sur le modèle murin, montrent bien un effet potentialisateur du chlordécone sur certains types d'hépatites aigues ainsi que sur l'évolution de la fibrose hépatique au cours d'hépatites chroniques. Enfin, la localisation du chlordécone dans le foie a pour la première fois était étudiée par l'imagerie MALDI ce qui permettra une meilleure compréhension de sa distribution au sein du tissu ainsi qu'une identification de ses cellules cibles. / Humans are constantly exposed, in their daily life, to many chemical molecules, particularly environmental pollutants that can target the liver and subsequently modulate liver diseases. Chlordecone is a persistent organic pollutant that has been prohibited permanently since 1993, but still contaminating area where it was used. This pesticide has a high affinity to the liver where it can accumulate and amplify the noxious action of hepatotoxic agents. We investigated the impact of chlordecone on acute and chronic hepatitis. In the first study, we developed three different models of mouse acute hepatitis; an alcoholic hepatitis induced by a high intake of alcohol, an auto-immune hepatitis induced by Concanavalin A (Con A) and a fulminant viral hepatitis induced by the murine virus (MHV3). We have shown that chlordecone enhances the susceptibility of mice liver to alcohol toxicity and potentiates the auto-immune hepatitis induced by Con A. In our experimental model, chlordecone has not shown any effect on MHV3 induced hepatitis but it has promoted the MHV3 invasion of mice brain leading to an early death. In our second study, we developed a mouse model of chronic co-exposure to chlordecone and to a hepatotoxic agent, the carbon tetrachloride (CCl4). We have shown that chlordecone potentiates liver fibrosis in mouse chronic hepatitis. To conclude, our studies have shown that chlordecone enhances hepatotoxicity in some mouse models of acute hepatitis and potentiates liver fibrosis in mouse models of chronic hepatitis. Finally, the localization of chlordecone in the liver, by MALDI imaging, will enable a better understanding of its distribution within the tissue and will be a way to identify its target cells.

Thèse ou mémoire avec insertion d'articles. / Titre de l'écran-titre (visionné le 23 octobre 2023) / Le norovirus humain (HuNoV) et le virus de l'hépatite A (VHA) ont été détectés plusieurs fois dans les petits fruits, tandis que le HuNoV, le VHA et le virus de l'hépatite E (VHE) ont été associés à des épisodes de contamination des huîtres et des moules dans les dernières années. Ces virus sont principalement transmis par la voie féco-orale, mais le VHE peut également être transmis par voie zoonotique. Le HuNoV et le VHA peuvent contaminer les aliments via l'eau, notamment lors de l'irrigation avec de l'eau contaminée ou en cas de déversement dans les zones de production. De plus, le VHE peut être transmis aux aliments par les fèces d'animaux contaminés. Cependant, les connaissances sur la contamination des aliments cultivés au Québec par ces virus sont limitées. Le but de ce projet était d'évaluer la contamination des canneberges par le HuNoV et le VHA ainsi que celle des huîtres par le HuNoV, le VHA et le VHE, entre deux zones de production. Pour ce faire, 234 échantillons de canneberges ont été récoltés chez 44 producteurs québécois et 260 huîtres ont été prélevées près de la côte, et 260 huîtres au large de la côte des Îles-de-la-Madeleine, chaque échantillon étant représenté par 10 huîtres. L'ARN viral a été détecté et quantifié par détection moléculaire, en respectant la méthodologie de la méthode ISO 15216-1 : 2017. Parmi les 234 échantillons de canneberges testés, seulement trois étaient positifs au HuNoV GI (1,28 %). Aucun des 52 échantillons d'huîtres n'a été considéré comme positif pour le HuNoV, le VHA ou le VHE. Ces résultats suggèrent que le risque de contamination par des canneberges et des huîtres cultivées au Québec est faible et que la contamination des huîtres près de la côte n'est pas significativement différente de celle des huîtres au large de la côte. / Human norovirus (HuNoV), hepatitis A virus (HAV) and hepatitis E virus (HEV) have been the cause of many global epidemics, such as those caused by HuNoV and HAV in berries or even HuNoV, HAV and HEV in shellfish in recent years. These viruses are primarily transmitted through the fecal-oral route, although HEV can also be transmitted through zoonotic routes. HuNoV and HAV can contaminate food through water, especially during irrigation with contaminated water when spilled in production areas. In addition, HEV can be transmitted to food through contaminated water but also when in contact with contaminated animal feces. However, limited information is available on the contamination of food grown in Quebec by these foodborne viruses. The objective of this project was to evaluate the levels of HuNoV and HAV contamination in cranberries, as well as levels of HuNoV, HAV and HEV contamination in oysters, between two production areas. For this purpose, 234 cranberry samples were collected from 44 Quebec producers. As for molluscs, 260 oysters were obtained near the coast and 260 oysters were collected offshore of Magdalen Islands, each sample consisting of 10 oysters. The presence of viral RNA was detected and quantified using molecular detection methods in accordance with ISO 15216-1:2017. Among the 234 cranberry samples tested, only three were positive for HuNoV GI (1.28%). None of the 52 oyster samples were found to be positive for HuNoV, HAV or HEV. These findings suggest that the risk of contamination of cranberries and oysters cultivated in Quebec is low, and that there is no significant difference in contamination between oysters near the coast and those offshore in this project.

Les hépatites B (VHB) et C (VHC) constituent un problème de santé publique, particulièrement dans les pays à faible ou moyen revenu. Au Mali, Afrique de l'Ouest, peu de données existent sur la prévalence de la co-infection par ces hépatites et le Virus de l'Immunodéficience Humaine (VIH) chez les groupes vulnérables comme les travailleuses du sexe (TS). Cette étude transversale conduite à Bamako (ville principale du Mali), chez 400 TS (200 VIH+ et 200 VIH-) avait pour but de déterminer la prévalence et les facteurs associés à l'antigène HBs d'une part et aux anticorps anti-VHC d'autre part. Un questionnaire a été administré, des prélèvements sanguins et un auto-prélèvement vaginal ont été effectués. Les prévalences ont été présentées selon le statut par rapport au VIH avec un intervalle de confiance (IC) à 95% et la régression logistique multivariée a été utilisée pour les mesures d'association. La prévalence de l'antigène HBs et des anticorps anti-VHC étaient, respectivement, de 6,5% et 4,5 % chez les VIH+ et 8,5 % et 6,0 % chez les VIH-. En analyses multivariées, l'âge au premier rapport sexuel payant (moins de 18 ans) et la présence d'anti-VHC étaient fortement associés au VHB (Rapport de Cote ajusté [RCa]; Intervalle de Confiance à 95% [IC95%] : 3,3; 1,24, 8,63) et 3,7; 1,21, 11,54, respectivement). Seul, l'antigène HBs était associé aux anticorps anti-VHC (RCa; IC95% : 4,1; 1,29, 12,56). La fréquence relativement élevée des hépatites virales B et C chez les TS vivant ou non avec le VIH au Mali nécessiterait un programme de prévention mieux adapté à leur condition de vie et de travail. / Hepatitis B (HBV) and C (HCV) are a public health problem, particularly in low- and middle-income countries. In Mali, West Africa, few data exist on the prevalence of co-infection with these hepatitis and Human Immunodeficiency Virus (HIV) among vulnerable groups such as female sex workers (FSWs). This cross-sectional study conducted in Bamako (main city of Mali), among 400 FSWs (200 HIV+ and 200 HIV-) aimed to determine the prevalence and factors associated with HBs antigen on one hand and HCV antibodies on the other. A questionnaire was administered, blood samples were taken and a vaginal self-sample was collected. Prevalences are presented according to HIV status with 95% Confidence Intervals (CI) and multivariate logistic regression was used for measures of association. The prevalence of HBsAg and HCV antibodies were 6.5% and 4.5% in HIV+ and 8.5% and 6.0% in HIV- women, respectively. In multivariate analyses, age at first sexual intercourse (less than 18 years) and presence of anti-HCV were strongly associated with HBV (adjusted Odds Ratio [aOR]; 95%[CI]: 3.3; 1.24, 8.63 and 3.7; 1.21, 11.54, respectively). Only HBsAg was associated with HCV antibodies (aOR; 95%CI: 4.1; 1.29, 12.56). The relatively high frequency of viral hepatitis B and C among FSWs living with or without HIV in Mali would require a targeted prevention programme.

Malgré de nombreux progrès thérapeutiques, la seule réelle option thérapeutique des malades atteints d’une cirrhose terminale ou d’hépatite aiguë fulminante est la transplantation hépatique, cependant limitée par la pénurie d’organes. De même, la prise en charge des pathologies pancréatiques aigues et chroniques consiste essentiellement en traitements supportifs et des complications. La réaction inflammatoire au cours des maladies hépatiques et pancréatiques joue un rôle majeur dans l’évolution de ces maladies car elle influence la sévérité de l’affection aiguë et se complique fréquemment de fibrose et de cirrhose. Les chimiokines constituent une famille de peptides possédant des propriétés chimiotactiques et activatrices sur les leucocytes, et de ce fait jouent un rôle primordial dans la réaction inflammatoire en recrutant des cellules inflammatoires vers un site lésé. Les chimiokines exercent leurs activités en se liant à une famille de récepteurs à 7 hélices transmembranaires situés sur les leucocytes. Le CCR5 est un récepteur pour les chimiokines CCL3 (MIP-1α), CCL4 (MIP-1β), CCL5 (RANTES) et CCL8 (MCP-2). Le CCR5 joue un rôle important de corécepteur dans l’infection par le virus de l’immunodéficience humaine. Chez l’humain, il existe une mutation relativement fréquente du CCR5, appelée CCR5Δ32, qui confère chez les patients homozygotes pour la mutation une protection presque complète contre l’infection par le virus de l’immunodéficience humaine. Plus récemment, la mutation CCR5Δ32 a été rapportée comme étant associée à certaines maladies hépatiques et des traitements expérimentaux chez l’homme par inhibiteurs du CCR5 ont entraînés des cas d’hépatotoxicité sévère. De même, il a été rapporté que l’expression pancréatique de CCR5 était augmentée chez les patients atteints de pancréatite chronique. Cependant, le rôle du récepteur CCR5 et de ses ligands dans la pathogénie des maladies hépatiques et pancréatiques n’est pas connu. Dans un premier temps, nous avons démontré dans un modèle expérimental d’hépatite médiée par les lymphocytes T qu’il existe une production hépatique de CCL3, CCL4 et CCL5 au cours de la maladie et que le foie des souris malades est caractérisé par une infiltration accrue de cellules CCR5+. En utilisant des souris CCR5-déficientes, nous avons ensuite montré que l’absence de CCR5 est associée à une maladie plus sévère, à une production accrue de cytokines pro-inflammatoires et des chimiokines liant le CCR5 (CCL3, CCL4 et CCL5), ainsi que par un recrutement plus important de cellules inflammatoires, particulièrement des cellules CCR1+. Nous avons ensuite montré que la production accrue des ligands du CCR5 joue un rôle important dans l’exacerbation de la maladie observée chez les souris CCR5-déficientes, puisque leur neutralisation réduit fortement la sévérité de la maladie ainsi que le recrutement hépatique de cellules inflammatoires. Dans un second temps, nous avons étudié l’expression et le rôle du CCR5 et de ses ligands dans un modèle murin de pancréatite aiguë sécrétagogue, induite par des injections répétées d’un analogue de la cholécystokinine. Précocément après l’induction de la maladie, nous avons observé une augmentation de l’expression de CCL2 (MCP-1), CCL3 et CCL4 alors que l’augmentation d’expression de CCL5 est observée plus tardivement au cours de la maladie. Nous avons ensuite montré que les souris CCR5-déficientes développent une pancréatite plus sévère, ainsi qu’une production accrue de CCL2, CCL3 et CCL4, et un infiltrat inflammatoire plus marqué que les souris ‘’wild-type’’. Nous avons également montré que la production accrue de ces chimiokines joue un rôle dans l’exacerbation de la pancréatite aiguë chez les souris CCR5-déficientes. En effet, la neutralisation simultanée de ces chimiokines par des anticorps monoclonaux réduit significativement la sévérité de la maladie pancréatique chez ces souris. De même, la neutralisation simultanée des ligands du CCR5 chez des souris wild-type réduit également la sévérité de la pancréatite aiguë, suggérant un rôle de ces molécules dans la pathogénie de la pancréatite aiguë. En conclusion, nous avons montré que l’absence du récepteur CCR5 augmente la susceptibilité aux maladies inflammatoires hépatiques et pancréatiques expérimentales. Le développement d’inhibiteurs du CCR5 dans l’arsenal thérapeutique contre le virus de l’immunodéficience humaine devra tenir compte de ces données, d’autant plus que des cas d’hépatotoxicité sévère ont été récemment rapportés avec certains inhibiteurs en développement et que l’association du virus de l’immunodéficience humaine avec la présence de maladies hépatiques est fréquente. Enfin, ces travaux ouvrent de nouveaux champs d’investigation au niveau de l’étude d’association du CCR5Δ32 avec les maladies inflammatoires pancréatiques et hépatiques, et des perspectives thérapeutiques ciblant CCL3, CCL4 et CCL5.

En 2005, le comité sur l’immunisation du Québec recommandait de passer du programme de vaccination contre l’hépatite B (HB) des préadolescents à celui des nourrissons lorsqu’un vaccin hexavalent serait disponible. Pour déterminer l’impact d’un tel changement, un bilan épidémiologique de l’HB a été réalisé à partir des cas déclarés au fichier des maladies à déclarations obligatoires. De 2005 à 2009, une vaccination des nourrissons aurait potentiellement pu prévenir 0,0335 (IC 95%: 0.0334-0.0336) cas aigus par 100 000 personnes-années chez les moins de 20 ans. De 2010 à 2013, aucun cas aigu n’a été rapporté dans ce groupe d’âge. Le programme de vaccination actuel des préadolescents est hautement efficace. En 2014, changer ce programme pour une vaccination des nourrissons avec un vaccin hexavalent n’apporterait pas de bénéfice épidémiologique mais permettrait d’augmenter la couverture vaccinale de 8-12%. / In 2005, the Quebec immunization committee recommended to replace the hepatitis B (HB) school-based immunization program by an infant program when an hexavalent vaccine would become available. To estimate the potential impact of such a program change, we summarized the HB epidemiology based on reported cases retrieved from the provincial registry of notifiable diseases. Between 2005 and 2009, 0.0335 (95% CI: 0.0334-0.0336) acute case per 100,000 person-years reported in 0-19 year-olds could have potentially been prevented by an infant immunization program. Between 2010 and 2013, no acute cases were reported in this age group. The current vaccination program is highly effective. In 2014, changing for an infant vaccination program using the hexavalent vaccine can hardly bring additional epidemiological benefit but may increase the vaccine coverage rate by 8-12%.

Mémoire numérisé par la Direction des bibliothèques de l'Université de Montréal.

L’hépatite C est un problème majeur de santé publique qui touche environ 160 millions de personnes dans le monde. L’agent étiologique responsable de cette maladie, le virus de l’hépatite C (HCV), est un petit virus enveloppé dont le génome est codé par un acide ribonucléique (ARN) simple brin de polarité positive. Actuellement, il n’existe aucun vaccin contre ce pathogène et les traitements utilisés sont insatisfaisants du fait de leur spécificité d’action limitée. Ainsi, afin d’établir une thérapie antivirale efficace évitant l’apparition et la sélection de mutants de résistance aux antiviraux, l’utilisation de plusieurs agents antiviraux ciblant directement la particule virale (direct acting antiviral agents ou DAAs) en combinaison est préconisée. C’est pourquoi la découverte de nouveaux DAAs à large spectre d’action ciblant diverses étapes du cycle viral infectieux est indispensable.Au cours de ma thèse, nous avons identifié un nouvel inhibiteur de l’entrée du HCV : l’épigallocatéchine-3-gallate (EGCG). Cette molécule, extraite du thé vert, inhibe l’infection des cellules par le HCV. Plus précisément, en utilisant des particules rétrovirales pseudotypées avec les glycoprotéines d’enveloppe E1 et E2 du HCV, nous avons démontré que cette catéchine naturelle, agit à une étape très précoce de l’entrée virale, indépendamment du génotype. De même, en nous servant du virus produit en culture cellulaire, nous avons montré que cette molécule agit directement sur la particule virale. Puis, par RT-PCR quantitative (quantitative real-time polymerase chain reaction), nous avons confirmé l’inhibition de la liaison du virus à la surface cellulaire, en présence d’EGCG. Par conséquent, nos travaux suggèrent que l’EGCG interagit avec la particule virale, probablement en se liant aux glycoprotéines d’enveloppe virales, bloquant ainsi une étape initiale d’attachement entre le virus et les facteurs cellulaires présents à la surface de l’hépatocyte. Puis, en inhibant la transmission libre du virus, à l’aide, soit d’agarose, soit d’anticorps neutralisants, nous avons démontré que l’EGCG inhibe la transmission du virus de cellule à cellule. Enfin, nous avons montré que l’EGCG élimine le virus présent dans le surnageant de culture cellulaire après quatre passages successifs sur des cellules naïves.La concentration d’EGCG nécessaire pour inhiber la moitié de l’infection virale (IC50) en culture cellulaire est 11 µM. Ainsi, afin d’identifier de nouvelles molécules présentant un mode d’action similaire à celui de l’EGCG et possédant une meilleure activité antivirale, nous avons sélectionnés différentes molécules naturelles et les avons testés pour leur potentiel effet anti-HCV. C’est ainsi que le chlorure de delphinidine, une anthocyanidine, a également été identifié en tant que nouvelle molécule inhibitrice de l’entrée du HCV. De même que l’EGCG, le chlorure de delphinidine cible directement la particule virale à une étape précoce de l’entrée, indépendamment du génotype, probablement en inhibant l’attachement du virus à la surface cellulaire et sans affecter ni l’étape de réplication, ni l’étape d’assemblage/maturation. De plus, le chlorure de delphinidine présente une activité anti-HCV améliorée avec une IC50 de 3 µM.Finalement, au cours de cette thèse, nous avons identifié deux nouvelles molécules naturelles inhibant l’étape d’entrée virale du HCV. Ces molécules pourraient être utilisées comme nouveau traitement en combinaison avec d’autres DAAs et pourraient également servir d’outil afin d’étudier les mécanismes d’entrée du HCV dans l’hépatocyte. / Hepatitis C is a major global health burden with 160 million infected individuals worldwide. This long-term disease, caused by a small positive-strand ribonucleic acid (RNA) enveloped virus, namely hepatitis C virus (HCV) evolves slowly. Nowadays, no vaccine is available and current treatments are unsatisfactory due to their restricted spectrum of action. For this reason, it is suggested that the combination of several drugs will prevent viral resistance and might conduct to an efficient antiviral therapy. Thus, the discovery of new direct acting antiviral agents (DAAs), with a broad spectrum of action, targeting different steps of the virus life cycle is still needed. Here, we identified (-)-epigallocatechin-3-gallate (EGCG) as a new inhibitor of HCV entry. Epigallocatechin-3-gallate, extracted from green tea, inhibits HCV infection. More precisely, this natural catechin molecule acts at a very early step of entry regardless of the genotype as illustrated with HCV pseudoparticles expressing HCV envelope glycoproteins E1 and E2 assays and cell-cultured HCV assays. Moreover, this molecule inhibits the docking of the virus to the cell surface as showed by the quantification of bound viruses during the attachment step using quantitative real-time polymerase chain reaction. Furthermore, EGCG inhibits viral cell-to-cell transmission as demonstrated by inhibiting cell-free transmission using agarose or neutralizing antibodies assays. Finally, EGCG clears HCV from cell culture supernatants after four passages.The half maximal inhibitory concentration (IC50) of EGCG in cell culture is approximately 11 µM. In order to identify new molecules exhibiting an enhanced anti-HCV activity and displaying similarities from EGCG scaffold, a series of natural compounds were selected and were tested for their anti-HCV activities. Thus, the anthocyanidin delphinidin chloride was identified as another inhibitor of HCV entry. Like EGCG, delphinidin chloride acts directly on the virus at a very early step of entry, regardless of the genotype, probably by inhibiting the docking of the virus to the cell surface without affecting replication or viral assembly/secretion. Finally, with an IC50 of 3 µM, delphinidin chloride displays a more potent anti-HCV activity.Together, these data indicate that EGCG and delphinidin chloride are new interesting anti-HCV molecules that inhibit entry and might be used as a new treatment in combination with other DAAs. Furthermore, these two inhibitors might be novel tools to further dissect the mechanisms of HCV entry into the hepatocyte.

L’hétérogénéité de l’histoire naturelle de l’hépatite C est expliquée par l’existence de facteurs environnementaux ou liés au malade qui influencent l’évolution de la maladie. L’obtention d’une réponse virologique soutenue est l’objectif principal de la prise en charge thérapeutique car c’est la seule façon de réduire l’incidence de la cirrhose et la mortalité liée au virus de l’hépatite C. Pour être efficaces, les stratégies thérapeutiques doivent être élaborées à deux niveaux. A l’échelle individuelle, elles doivent optimaliser les chances de réponse virologique tout en limitant l’exposition aux effets secondaires. A l’échelle d’une population, la meilleure stratégie est celle qui aura l’impact le plus important sur l’incidence de la cirrhose et sur la mortalité liées au virus de l’hépatite C.<p>Les travaux réalisés dans le cadre de cette thèse ont permis d’identifier des critères virologiques autorisant l’arrêt d’un traitement inefficace dès le terme de la 4ème semaine chez les malades présentant des transaminases normales et chez les malades non répondeurs à un premier traitement, de quantifier la perte de chance de réponse virologique lorsque la durée du traitement est limitée à 24 semaines chez les malades infectés par un génotype 1, d’évaluer la place de l’amantadine dans l’arsenal thérapeutique, de quantifier l’impact d’une insulino-résistance sur le taux de réponse virologique, de contribuer à l’élaboration d’une stratégie thérapeutique permettant une meilleure tolérance hématologique chez les malades hémodialysés et de quantifier l’impact des polymorphismes de l’interleukine 28B sur le taux réponse virologique des malades infectés par un génotype 2 ou 3. Nos travaux ont également permis de mesurer l’impact d’une consommation excessive d’alcool sur la morbi-mortalité liée au virus de l’hépatite C à l’échelle d’une population et de quantifier l’impact des mesures thérapeutiques actuelles et de stratégies thérapeutiques alternatives sur cette morbi-mortalité. <p>Au cours de la prochaine décennie, le traitement de l’hépatite chronique C sera articulé autour des molécules antivirales spécifiques agissant directement contre le virus de l’hépatite C. De nouvelles stratégies thérapeutiques intégrant la cinétique virale et les marqueurs génétiques prédictifs de la réponse virologique soutenue devront être élaborées afin d’offrir les meilleures chances d’éradication virologique au plus grand nombre de malades. / Doctorat en sciences médicales / info:eu-repo/semantics/nonPublished

Des anticorps monoclonaux, dirigés contre l'antigène de surface du virus de l'hépatite B (HBsAg) ont été obtenus par fusion de lymphocytes de souris immunisées avec de l'antigène purifié par chromatographie d'affinité et des cellules de myélome de souris (Sp2/0) maintenues en culture exponentielle. Le dépistage des clones sécréteurs a été effectué par RIA en phase liquide. Pour chaque fusion, nous avons obtenu entre 10 et 20% de clones sécréteurs. La sélection a été effectuée d'après le titre de l'anticorps sécrété dans le surnageant de culture. Les hydrides intéressants ont été clonés par dilution limite. Parmi le souches obtenues, deux ont été sélectionnées comme composantes d'une trousse de dépistage. Ces anticorps sont dirigés contre le déterminant commun "a" de l'HBsAg. Le seuil de sensibilité de cette trousse, indépendamment du sous- type ("ad" et "ay") est de 0.06 ng./ml de sérum. Tous les échantillons trouvés positifs lors de 1'utilisation de réactifs commerciaux l'ont été aussi avec cette trousse. Par contre, nous avons trouvé parmi 1114 donneurs de sang un faux positif dû à la présence d'anticorps anti-immunoglobulines de souris. Cette reaction a pu être neutralisée par addition d'immunoglobulines de souris a l'anticorps révélateur. Des essais complémentaires sur les échantillons du "College of American Pathologist", démontrent que la trousse, mise au point avec des anticorps monoclonaux, est supérieure à celles utilisées dans les laboratoires inscrits à ce service. / Montréal Trigonix inc. 2018