Esponjas do gênero Aplysina (Ordem: VERONGIDA) são conhecidas por apresentarem em seu metabolismo secundário compostos derivados da dibromotirosina, os quais são um importante aliado para o processo de identificação dessas esponjas. Este trabalho descreve o estudo do perfil químico de 14 espécimens de esponjas do gênero Aplysina, coletadas na Bahia de Todos os Santos-BA, no ano de 2007. Também foi desenvolvida uma metodologia de desreplicação, utilizando-se da técnica hifenada HPLC-PDA-MS(ESI), busca na literatura (MarinLit) e comparação com padrões. Os resultados obtidos demonstram claramente que essas esponjas apresentam os derivados da dibromotirosina e que a metodologia de desreplicação permitiu confirmar e/ou prever possíveis estruturas desses compostos com eficiência e sem a necessidade do seu isolamento. Entretanto, não foi possível distinguir as espécies dos organismos estudados através do seu perfil químico, uma vez que eles apresentaram praticamente os mesmos metabólitos em todas as frações analisadas. Isto demonstra que a classificação taxonômica em nível de espécie requer, necessariamente, a análise do esqueleto (espículas) das esponjas e possivelmente análises genômicas. A análise das frações aquosas permitiu apenas confirmar a presença desses derivados através da análise das absorções típicas no espectro de UV. Também, este é o primeiro trabalho sobre o estudo do perfil químico dessas esponjas com a utilização de um sistema de desreplicação que inclui a técnica hifenada HPLC-PDA-MS(ESI). / Sponges of the genus Aplysina (Order: VERONGIDA) are commonly recognized by the presence of dibromotyrisine derivates at their secondary metabolites, compounds which are an important tool for their taxonomic identification. The present study describes the chemical profile of 14 sponges of Aplysina sp., collected in Bahia de Todos os Santos-BA. We developed a dereplication methodology using the hyphenated technique HPLC-PDA-MS(ESI), a database research (MarinLit) and comparison with chemical standards. The results showed that the 14 sponges analysed present dibromotyrisine derivates and that the dereplication methodology enabled the prediction and/or confirmation of such structures without their previous isolation. However, the taxonomic identification of the 14 individual sponges at the species level was impossible due to the fact that chemical profile was of the sponges too similar. This result demonstrates that the taxonomic identification Aplysina sponges at the species level also requires the skeleton analysis and possibly genomic studies. Analyses of aqueous fraction confirmed the presence of dibromotyrisine derivates. Furthermore, this is the first study of the chemical profile of Aplysina sponges that utilizes a dereplication methodology which includes the hyphenated technique HPLC-PDA-MS(ESI).

Esponjas do gênero Dysidea (Ordem: Dictyoceratida) caracterizam-se por apresentarem grande diversidade de metabólitos secundários, muitos dos quais apresentam potentes atividades biológicas. Este trabalho descreve o estudo de duas amostras de esponjas da espécie Dysidea robusta, DR1 e DR2, coletadas no litoral da Bahia em 1999. Tal estudo consistiu no fracionamento das amostras, nas análises de seus extratos brutos por LC-MS e técnicas de RMN- mono e bidimensionais. Dentre os extratos de DR1, a fração DR1-EP-5A obtida do extrato éter de petróleo apresentou uma mistura de três ceramidas saturadas (22, 23 e 24). Já da amostra DR2, as frações do extrato aquoso DR2-AQ-6B e DR2-AQ-6D mostraram ser constituídas por derivados do ácido pirodisinóico (18, 19, 20 e 21). Com exceção do ácido pirodisinóico (18), os demais compostos isolados ainda não foram relatados na literatura. / Sponges of the genus Dysidea (Order: Dyctioceratida) are characterized as sources of several biologically active secondary metabolites. This work describes the study of two samples of D.robusta, DR1 and DR2, both collected at the Bahia state coastline, in 1999. The investigation aimed the crude extract fractionation and analysis by LC-MS and by 1D and 2D NMR techniques. Among the extracts DR1, the fraction DR1-EP-5A obtained from the petroleum ether extract showed a mixture of three saturated ceramides, represented by 22, 23 and 24. From the DR2 sample, the fractions obtained from the aqueous extract DR2-AQ-6B and -6D presented pirodisinoic acid derivates 18, 19, 20 and 21. Except for pyrodisinoic acid (18), all other isolated compounds haven´t been reported in the literature yet.

Submitted by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2014-12-29T15:35:19Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertação - Tereza Cristina de Deus Honório - 2013.pdf: 1533455 bytes, checksum: 94b316a371dbbb095635e691df80c2b3 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2014-12-29T15:40:31Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertação - Tereza Cristina de Deus Honório - 2013.pdf: 1533455 bytes, checksum: 94b316a371dbbb095635e691df80c2b3 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-12-29T15:40:31Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertação - Tereza Cristina de Deus Honório - 2013.pdf: 1533455 bytes, checksum: 94b316a371dbbb095635e691df80c2b3 (MD5) Previous issue date: 2013-03-19 / Introduction: Aromatic organic solvents (AOS) are widely used in diverse industrial and laborer activities among others involving manipulating of products likes lacquers, inks and varnishes. Among the most commonly used AOS are toluene, xylene, styrene, ethylbenzene and phenol. Occupational exposure to these compounds can cause damage to the body, which leads to a concern about the health of the worker. Biological monitoring is an important tool used to evaluate exposition to chemical substances in the work environment, that consists of quantify the biomarkers of occupational exposure in biological samples. Brazilian values of AOS biomarkers and maximum allowable biological index (IBMP) are described in the NR7 of the Brazilian legislation (Ministério do Trabalho e Emprego, MTE). Objective: The aim of this work was to validate technical in HPLC-PDA for quantifying the exposure’s biomarkers and than evaluate the exposure’s profile to toluene, xylene, styrene, ethylbenzene and phenol in workers exposed in university community. Methods: To analyze the AOS biomarkers in urine samples by HPLC-PDA, method validation was done according to the preconized parameters by ANVISA described in RE 899/2003. Participate of the study 30 occupationally exposed volunteers that provided urine samples and asked a questionnaire survey to characterize the sampling. The sampling’s characterization was done by applying a survey to volunteers. Both descriptive and multivariate statitical analysis was performed to the analytical and surveying data. Results: The analytical method was to validate and appropriated for the purposes established. About 3,3 % of the volunteers presented levels of hipuric acid above of the allowed by the law. Besides, it was detected 3,4-methylhipuric acids in 13,3 % of volunteers in concentration below the maximum allowable limit. The main symptoms reported were headache, dyspnea, numbness and cough. Conclusion: The analytical method was within acceptable limits. It was observed that higher levels of hippuric acid in volunteers may be linked to a lack of protective equipment and collective environmental protection equipment, and high weekly workload. Additionally, methyl hippuric acid was found below IBMP. It was demonstrated a correlation between exposure to AOS biomarkers and symptoms reported by the volunteers. / Introdução: Os solventes orgânicos aromáticos (SOA) são substâncias amplamente utilizadas em várias atividades industriais laborais, dentre outras que envolvem a manipulação de produtods como tintas, vernizes e lacas. A exposição ocupacional a estes compostos pode causar danos à saúde, o que leva a uma preocupação em relação à saúde do trabalhador. Dentre os solventes aromáticos utilizados, citam-se, pela elevada frequência de exposição, o tolueno, o xileno, o estireno, o fenol e o etil-benzeno. Uma das ferramentas utilizadas para avaliar a exposição ocupacional a agentes químicos é a monitoração biológica que se baseia na quantificação de biomarcadores de exposição ocupacional. Os marcadores disponíveis e os valores de índice biológico máximo permitido (IBMP) se encontram descritos na NR 7 do Ministério do Trabalho e Emprego do Brasil (MTE). Objetivo: O objetivo do trabalho foi validar técnica analítica em HPLC-PDA para quantificar os biomarcadores de exposição aos SOA para avaliar o perfil de exposição ao tolueno, xileno, estireno, etilbenzeno e fenol em voluntários expostos em comunidade universitária. Métodos: Para a quantificação dos biomarcadores dos SOA, realizou-se a validação analítica do método por HPLC-PDA seguindo parâmetros estabelecidos pela RE 899 da ANVISA. Participaram do estudo 30 voluntários expostos aos SOA, os quais fornecerem amostra de urina, além de responderem a um questionário antropométrico e sócio-epidemiológico ocupacional para a caracterização da amostragem. Utilizou-se análise estatística descritiva para a validação analítica e análise multivariada para os dados obtidos do questionário. Resultados: O método analítico foi validado e adequado para os propósitos definidos. Os resultados demonstraram que 3,3 % dos voluntários apresentaram níveis de ácido hipúrico acima dos limites estabelecidos pela legislação e 13,3 % apresentaram níveis de ácido hipúrico acima dos valores de referência e abaixo do Indice Biológico Máximo Permido. Os ácidos 3 e 4- metilhipúricos foram detectados em 16,6 % dos voluntários e as concentrações desses metabólitos estavam abaixo dos limites de tolerância estabelecidos pelo MTE. Os principais sintomas reportados foram cefaleia, dispneia, parestesia e tosse. Conclusão: O método analítico estava dentro dos limites aceitáveis. Observou-se que a elevação dos níveis de ácido hipúrico nos voluntários pode estar ligada à falta de equipamentos de proteção coletiva no ambiente e de equipamentos de proteção individual, além de elevada carga horária de trabalho. Adicionalmente, o ácido metilhipúrico encontrado estava abaixo do IBMP. Demonstrou-se correlação entre exposição a SOA, biomarcadores e sintomatologia relatada pelos voluntários.

Esponjas do gênero Dysidea (Ordem: Dictyoceratida) caracterizam-se por apresentarem grande diversidade de metabólitos secundários, muitos dos quais apresentam potentes atividades biológicas. Este trabalho descreve o estudo de duas amostras de esponjas da espécie Dysidea robusta, DR1 e DR2, coletadas no litoral da Bahia em 1999. Tal estudo consistiu no fracionamento das amostras, nas análises de seus extratos brutos por LC-MS e técnicas de RMN- mono e bidimensionais. Dentre os extratos de DR1, a fração DR1-EP-5A obtida do extrato éter de petróleo apresentou uma mistura de três ceramidas saturadas (22, 23 e 24). Já da amostra DR2, as frações do extrato aquoso DR2-AQ-6B e DR2-AQ-6D mostraram ser constituídas por derivados do ácido pirodisinóico (18, 19, 20 e 21). Com exceção do ácido pirodisinóico (18), os demais compostos isolados ainda não foram relatados na literatura. / Sponges of the genus Dysidea (Order: Dyctioceratida) are characterized as sources of several biologically active secondary metabolites. This work describes the study of two samples of D.robusta, DR1 and DR2, both collected at the Bahia state coastline, in 1999. The investigation aimed the crude extract fractionation and analysis by LC-MS and by 1D and 2D NMR techniques. Among the extracts DR1, the fraction DR1-EP-5A obtained from the petroleum ether extract showed a mixture of three saturated ceramides, represented by 22, 23 and 24. From the DR2 sample, the fractions obtained from the aqueous extract DR2-AQ-6B and -6D presented pirodisinoic acid derivates 18, 19, 20 and 21. Except for pyrodisinoic acid (18), all other isolated compounds haven´t been reported in the literature yet.

Esponjas do gênero Aplysina (Ordem: VERONGIDA) são conhecidas por apresentarem em seu metabolismo secundário compostos derivados da dibromotirosina, os quais são um importante aliado para o processo de identificação dessas esponjas. Este trabalho descreve o estudo do perfil químico de 14 espécimens de esponjas do gênero Aplysina, coletadas na Bahia de Todos os Santos-BA, no ano de 2007. Também foi desenvolvida uma metodologia de desreplicação, utilizando-se da técnica hifenada HPLC-PDA-MS(ESI), busca na literatura (MarinLit) e comparação com padrões. Os resultados obtidos demonstram claramente que essas esponjas apresentam os derivados da dibromotirosina e que a metodologia de desreplicação permitiu confirmar e/ou prever possíveis estruturas desses compostos com eficiência e sem a necessidade do seu isolamento. Entretanto, não foi possível distinguir as espécies dos organismos estudados através do seu perfil químico, uma vez que eles apresentaram praticamente os mesmos metabólitos em todas as frações analisadas. Isto demonstra que a classificação taxonômica em nível de espécie requer, necessariamente, a análise do esqueleto (espículas) das esponjas e possivelmente análises genômicas. A análise das frações aquosas permitiu apenas confirmar a presença desses derivados através da análise das absorções típicas no espectro de UV. Também, este é o primeiro trabalho sobre o estudo do perfil químico dessas esponjas com a utilização de um sistema de desreplicação que inclui a técnica hifenada HPLC-PDA-MS(ESI). / Sponges of the genus Aplysina (Order: VERONGIDA) are commonly recognized by the presence of dibromotyrisine derivates at their secondary metabolites, compounds which are an important tool for their taxonomic identification. The present study describes the chemical profile of 14 sponges of Aplysina sp., collected in Bahia de Todos os Santos-BA. We developed a dereplication methodology using the hyphenated technique HPLC-PDA-MS(ESI), a database research (MarinLit) and comparison with chemical standards. The results showed that the 14 sponges analysed present dibromotyrisine derivates and that the dereplication methodology enabled the prediction and/or confirmation of such structures without their previous isolation. However, the taxonomic identification of the 14 individual sponges at the species level was impossible due to the fact that chemical profile was of the sponges too similar. This result demonstrates that the taxonomic identification Aplysina sponges at the species level also requires the skeleton analysis and possibly genomic studies. Analyses of aqueous fraction confirmed the presence of dibromotyrisine derivates. Furthermore, this is the first study of the chemical profile of Aplysina sponges that utilizes a dereplication methodology which includes the hyphenated technique HPLC-PDA-MS(ESI).

This diploma thesis deals with the determination of nicotine in different products. The theoretical part summarizes review on nicotine, smoking and opportunities how to quit. In the practical part a method for the determination of nicotine by HPLC / PDA was optimized. As the most suitable stationary phase was selected a Kinetex 5u C18 100A 150 x 4.6 mm column, as the optimal mobile phase was chosen a pure methanol with a flow rate of 1 ml min-1 and a temperature of 25 °C. For the analysis of nicotine were chosen: 18 kinds of cartridges for electronic cigarettes, two kinds of nicotine gum, nicotine spray, nicotine pastilles, nicotine orodispersible film and ten species of classic cigarettes. For each type of product the most appropriate method for extracting nicotine and its subsequent analysis by HPLC / PDA was found. For tobacco 24 hour extraction in methanol and 10s ultrasound was selected. The nicotine spray and electronic cigarette refills without flavours were only diluted with methanol. Flavoured refills were first diluted by sodium hydroxide and then with methanol. For chewing gums, pastilles and nicotine film extraction with 5% sodium hydroxide was chosen. In this study also new experimental nicotine product was designed. Nicotine has been encapsulated in alginate-starch material to form small gel particles. As the most suitable medium for storage the water medium was determined.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-04-23T13:12:37Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Maria Augusta Alves Silva - 2014.pdf: 3616508 bytes, checksum: ff3549d426c3e4da5a2e979383c5aa23 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-04-23T13:15:41Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Maria Augusta Alves Silva - 2014.pdf: 3616508 bytes, checksum: ff3549d426c3e4da5a2e979383c5aa23 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-23T13:15:41Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Maria Augusta Alves Silva - 2014.pdf: 3616508 bytes, checksum: ff3549d426c3e4da5a2e979383c5aa23 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2014-02-12 / The toxicological analyzes on various samples are extremely important and can be used for multiple purposes, such as monitoring of drug addicts, forensic analysis, doping control, therapeutic monitoring, analyses of environmental contaminants, etc. The objective of this study was to analyze post - mortem blood samples of the Instituto de Criminalística de Goiás (IC) by immunochromatography and systematic toxicological analysis HPLC - PDA to check the presence or absence of toxic agents. The chromatographic conditions of the method were: mobile phase monobasic potassium phosphate buffer pH 2.3 and acetonitrile, flow rate 1 ml / min, Lichrospher RP8 column, 5μm, 250 x 4.0 mm, scanning range 200-380 nm, the calibration standards were MPPH system, caffeine, benzene and histamine. It was used the database proposed by UVTOX Pragst et al (2001). As part of the partial validation the matrix effect was evaluated by liquid-liquid extraction of whole blood samples contaminated with 8 standards in known concentration. The whole blood samples were extracted at different pH values and analyzed by HPLC -PDA. Through the areas obtained from each standard, it was calculated the standardized factor matrix which showed a coefficient of variation less than 10 %. In order to compare two screening techniques for detection of drugs of abuse, post-mortem blood samples from the IC (n = 35) were also analyzed by immunochromatography, yielding 10 samples positive for amphetamine, 3 for benzoylecgonine and 1 for Δ9THC. The ATS by HPLC – PDA analyses showed only 1 sample positive for benzoylecgonine, 2 samples for amphetamines, and 3 benzodiazepines. In the other samples, no substance toxicological interest was detected. Both immunochromatography as systematic toxicological analysis proved useful tools in screening post-mortem blood. / As análises toxicológicas em diversas amostras são de extrema importância e podem ter várias finalidades, como por exemplo, o monitoramento de dependentes químicos, análises forense, controle de doping, monitoramento terapêutico, análise de contaminantes ambientais dentre outras. O objetivo deste trabalho foi analisar amostras de sangue post-mortem do Instituto de Criminalística de Goiás (IC) através de imunocromatografia e análise toxicológica sistemática por HPLC-PDA para a verificação da presença ou ausência de agentes tóxicos. As condições cromatográficas do método foram: fase móvel tampão fosfato de potássio monobásico pH 2,3 e acetonitrila, fluxo de 1 mL/min, coluna Lichrospher RP8, 5μm, 250 x 4,0mm, faixa de varredura de 200 a 380 nm. Os padrões de calibração utilizados foram MPPH, cafeína, benzeno e histamina. A base de dados utilizada foi a UVTOX proposta por Pragst e colaboradores (2001). Na validação parcial foi avaliado o efeito matriz através da extração líquido-líquido de amostras de sangue total contaminada com padrões de hidroclorotiazida, furosemida, flunitrazepam, flurazepam, amitriptilina, clordiazepóxido, nitrazepam e diazepam, na concentração de de 10 g/mL. As amostras de sangue total foram extraídas em diferentes valores de pH e analisadas por HPLC-PDA. Através das áreas obtidas de cada padrão, calculou-se o fator de matriz normalizado que apresentou coeficiente de variação inferior a 10%. Com o intuito de comparar duas técnicas de triagem para detecção de drogas de abuso, amostras de sangue post-mortem do IC (n=35) foram analisadas também por imunocromatografia, obtendo-se 10 amostras positivas para anfetamina, 3 para benzoilecgonina e 1 para Δ9THC. Por outro lado, na ATS por HPLC-PDA apenas 1 amostra foi positiva para benzoilecgonina, 2 anfetaminas, e outras 3 para benzodiazepínicos. Nas demais amostras não foi detectada nenhuma substância de interesse toxicológico. Tanto a imunocromatografia quanto a análise toxicológica sistemática se mostraram ferramentas úteis na triagem de sangue post-mortem.

O fungo entomopatogênico Beauveria felina produz as destruxinas, hexadepsipeptídeos cíclicos que apresentam diversas atividades biológicas, como por exemplo: atividade inseticida, fitotóxica, citotóxica contra células tumorais, atividade antiviral contra o vírus da hepatite B, dentre outras. Devido à atividade inseticida das destruxinas, os fungos que as produzem têm grande importância econômica. Assim, o objetivo deste trabalho foi realizar a otimização das condições de crescimento e produção das destruxinas pelo fungo Beauveria felina utilizando diferentes meios de cultivo, a fim de se isolar destruxinas em maiores quantidades para a avaliação de seu potencial tóxico. Foram utilizados métodos de planejamento experimental e análise multivariada para a otimização das condições de crescimento, resultando em três condições ótimas de cultivo para cada um dos meios de cultura MF, PDB e SBD. Em todas as condições ótimas de cultivo foram observadas destruxinas conhecidas, desconhecidas e destruxinas que não foram isoladas anteriormente de Beauveria felina. O cultivo de Beauveria felina no meio PDB foi o que mais apresentou destruxinas desconhecidas (5). Em seguida foi realizada uma otimização das condições de análise cromatográfica de destruxinas por CLAD-DAD-DELE-EM e a validação deste método. Uma das frações obtidas do meio de cultura de Beauveria felina apresentou atividade vermífuga contra Haemonchus contortus. Duas de suas frações purificadas, P1 (destruxina Ed1 - m/z 625 e pseudodestruxina B ou pseudodestruxina C - isobáricas, m/z 669) e P7 (destruxina D ou hidroxihomodestruxina B ou roseotoxina C - isobáricas, m/z 623), foram ativas contra o carrapato bovino Rhipicephalus microplus. / The entomopathogenic fungus Beauveria felina produces destruxins, cyclic hexadepsipeptides which have several biological activities, such as insecticidal, phytotoxic, cytotoxic against tumor cells, antiviral activity against hepatitis B virus, among others. Because of the insecticidal activity of destruxins, fungi that produce them have a considerable economic importance. Therefore the aim of this study was to optimize the conditions for the growth of Beauveria felina and its production of destruxins by using different culture media, in order to isolate larger quantities for the evaluation of their toxic potential. Experimental design and multivariate analysis were used for the optimization of growth conditions, resulting in three conditions for optimum growth for each of the culture media MF, PDB and SBD. Both known and unknown destruxins were observed in each of the optimal conditions, along with destruxins that were not previously isolated from Beauveria felina. The cultivation of Beauveria felina in PDB was the one that showed the largest amount of unknown destruxins (5). We then carried out an optimization of the chromatographic analysis of destruxins by HPLC-PDA-ELSD-MS and the validation of this method. One of the fractions obtained from the culture medium of Beauveria felina showed anthelmintic activity against Haemonchus contortus, while two of its purified fractions, P1 (destruxin Ed1 - m/z 625 and pseudodestruxin B or pseudodestruxin C - isobaric m/z 669) and P7 (destruxin D or hydroxyhomodestruxin B or roseotoxin C - isobaric m/z 623), were active against the cattle tick Rhipicephalus microplus.

O fungo entomopatogênico Beauveria felina produz as destruxinas, hexadepsipeptídeos cíclicos que apresentam diversas atividades biológicas, como por exemplo: atividade inseticida, fitotóxica, citotóxica contra células tumorais, atividade antiviral contra o vírus da hepatite B, dentre outras. Devido à atividade inseticida das destruxinas, os fungos que as produzem têm grande importância econômica. Assim, o objetivo deste trabalho foi realizar a otimização das condições de crescimento e produção das destruxinas pelo fungo Beauveria felina utilizando diferentes meios de cultivo, a fim de se isolar destruxinas em maiores quantidades para a avaliação de seu potencial tóxico. Foram utilizados métodos de planejamento experimental e análise multivariada para a otimização das condições de crescimento, resultando em três condições ótimas de cultivo para cada um dos meios de cultura MF, PDB e SBD. Em todas as condições ótimas de cultivo foram observadas destruxinas conhecidas, desconhecidas e destruxinas que não foram isoladas anteriormente de Beauveria felina. O cultivo de Beauveria felina no meio PDB foi o que mais apresentou destruxinas desconhecidas (5). Em seguida foi realizada uma otimização das condições de análise cromatográfica de destruxinas por CLAD-DAD-DELE-EM e a validação deste método. Uma das frações obtidas do meio de cultura de Beauveria felina apresentou atividade vermífuga contra Haemonchus contortus. Duas de suas frações purificadas, P1 (destruxina Ed1 - m/z 625 e pseudodestruxina B ou pseudodestruxina C - isobáricas, m/z 669) e P7 (destruxina D ou hidroxihomodestruxina B ou roseotoxina C - isobáricas, m/z 623), foram ativas contra o carrapato bovino Rhipicephalus microplus. / The entomopathogenic fungus Beauveria felina produces destruxins, cyclic hexadepsipeptides which have several biological activities, such as insecticidal, phytotoxic, cytotoxic against tumor cells, antiviral activity against hepatitis B virus, among others. Because of the insecticidal activity of destruxins, fungi that produce them have a considerable economic importance. Therefore the aim of this study was to optimize the conditions for the growth of Beauveria felina and its production of destruxins by using different culture media, in order to isolate larger quantities for the evaluation of their toxic potential. Experimental design and multivariate analysis were used for the optimization of growth conditions, resulting in three conditions for optimum growth for each of the culture media MF, PDB and SBD. Both known and unknown destruxins were observed in each of the optimal conditions, along with destruxins that were not previously isolated from Beauveria felina. The cultivation of Beauveria felina in PDB was the one that showed the largest amount of unknown destruxins (5). We then carried out an optimization of the chromatographic analysis of destruxins by HPLC-PDA-ELSD-MS and the validation of this method. One of the fractions obtained from the culture medium of Beauveria felina showed anthelmintic activity against Haemonchus contortus, while two of its purified fractions, P1 (destruxin Ed1 - m/z 625 and pseudodestruxin B or pseudodestruxin C - isobaric m/z 669) and P7 (destruxin D or hydroxyhomodestruxin B or roseotoxin C - isobaric m/z 623), were active against the cattle tick Rhipicephalus microplus.

This diploma thesis deals with preparation and characterization of alcohol-free beers with different flavours. Five flavoured and four pure, commercially available beers were tested. Three alcohol-free beers were then selected and used for preparation of flavoured beers. Ingredients used for production of flavour were honey, raspberry, ginger and cranberry. Analysis was focused mainly on substances of phenolic nature. Flavoured beers were also tested in sensory analysis. Ingredients used for flavouring of beers and production of both alcoholic and alcohol-free beers are described in theoretical part of the thesis. Analysis of polyphenols, flavonoids, technological characteristics and anthocyanins was performed using spectrophotometric method. Phenolic substances were identified and quantified by HPLC/PDA. Ascorbic acid was analysed by HPLC-NH2/UV. Results proved an increase of polyphenols, ascorbic acid and anthocyanins during flavouring of alcohol-free beers in dependence of used ingredients. Sensory analysis showed that as the best rated was the Staropramen beer with raspberry flavour. On the contrary, flavoured Bernard beers were poorly rated.