Nesse trabalho foram estudadas 2 estratégias visando a purificação de IgM a partir de plasma humano. A primeira estratégia baseou-se em um processo desenhado para a fábrica de produção de hemoderivados do Instituto Butantan para a produção dos fatores de coagulação VIII e IX, albumina e IgG. Após 2 colunas cromatográficas, a IgM foi separada das 2 proteínas mais abundantes do plasma, a albumina e a IgG e o enriquecimento da IgM em relação a IgA e IgG foi bastante satisfatória. A segunda estratégia está inserida no processo de fracionamento de plasma desenvolvida em nosso laboratório. Através de um estudo sistemático em coluna de troca aniônica, obtivemos uma fração contendo IgG, uma contendo albumina, ambos praticamente puros e uma terceira contendo IgM e outras proteínas contaminantes. Os resultados obtidos indicam que a IgM pode ser purificada com sucesso empregando ambas as estratégias. Entretanto, para se obter um produto mais homogêneo, será necessário ainda adicionar uma ou mais etapas de purificação. / In this work we studied two strategies for the purification human plasma IgM. The first strategy was based on a process designed for the hemoderivatives production factory of the Butantan Institute for the production of coagulation factors VIII and IX, albumin and IgG. After 2 chromatographies, IgM was separated from the 2 most abundant plasma proteins, that is, albumin and IgG and the achieved enrichment of IgM in relation to IgG and IGA was very satisfactory. The second strategy is part of a plasma fractionation process under development in our laboratory. Through a systematic study using an anionic exchange column we separated a fraction containing IgG, a second containing albumin, being both nearly pure and a third fraction containing IgM and other contaminating proteins. The obtained results indicate that IgM can be purified successfully by both strategies. However, to obtain a more homogeneous product, additional purification steps are necessary.

Nesse trabalho foram estudadas 2 estratégias visando a purificação de IgM a partir de plasma humano. A primeira estratégia baseou-se em um processo desenhado para a fábrica de produção de hemoderivados do Instituto Butantan para a produção dos fatores de coagulação VIII e IX, albumina e IgG. Após 2 colunas cromatográficas, a IgM foi separada das 2 proteínas mais abundantes do plasma, a albumina e a IgG e o enriquecimento da IgM em relação a IgA e IgG foi bastante satisfatória. A segunda estratégia está inserida no processo de fracionamento de plasma desenvolvida em nosso laboratório. Através de um estudo sistemático em coluna de troca aniônica, obtivemos uma fração contendo IgG, uma contendo albumina, ambos praticamente puros e uma terceira contendo IgM e outras proteínas contaminantes. Os resultados obtidos indicam que a IgM pode ser purificada com sucesso empregando ambas as estratégias. Entretanto, para se obter um produto mais homogêneo, será necessário ainda adicionar uma ou mais etapas de purificação. / In this work we studied two strategies for the purification human plasma IgM. The first strategy was based on a process designed for the hemoderivatives production factory of the Butantan Institute for the production of coagulation factors VIII and IX, albumin and IgG. After 2 chromatographies, IgM was separated from the 2 most abundant plasma proteins, that is, albumin and IgG and the achieved enrichment of IgM in relation to IgG and IGA was very satisfactory. The second strategy is part of a plasma fractionation process under development in our laboratory. Through a systematic study using an anionic exchange column we separated a fraction containing IgG, a second containing albumin, being both nearly pure and a third fraction containing IgM and other contaminating proteins. The obtained results indicate that IgM can be purified successfully by both strategies. However, to obtain a more homogeneous product, additional purification steps are necessary.

A disponibilidade de hemoderivados é um parâmetro importante para medir a qualidade da saúde em um país. Dentre os produtos hemoderivados, imunoglobulinas tem alto valor agregado. O Instituto Butantan tem por objetivo o estabelecimento de uma planta industrial para fracionamento de plasma, com um processo produtivo baseado principalmente em cromatografias. Eventos tromboembólicos a partir de infusões de imunoglobulinas por via intravenosa (IgIV) foram relacionados com presença de Fator XI de coagulação (FXI) como contaminantes nas preparações de IgIVs. Com objetivo de detectar o FXI nas frações, o processo cromatográfico foi testado em escala piloto, bancada, e em cromatografia direta e o FXI foi dosado nas frações iniciais e no produto final IgIV. Foram estabelecidos os métodos de dosagem de atividade de FXI por tempo de coagulação e ensaio cromogênico. Concluímos que o FXI acompanha a IgG nas etapas iniciais dos processos cromatográficos e verificamos que ocorre a presença de FXI nos produtos finais. Este trabalho contribui para o desenvolvimento do conjunto de testes de controle de qualidade de biofármacos derivados de plasma humano. / The availability of hemoderivatives is an important parameter to measure a countrys health quality. Among hemoderivatives products, immunoglobulin have high value.. Instituto Butantan, aims the establishment of an industrial plant for plasma fractionation with a process drawn, based mainly in chromatographies. Thromboembolic events from infusions of intravenous immunoglobulins (IVIg) have been related with the presence of coagulation Factor XI (FXI) as contaminant in the IVIG preparations. With an objective of tracking FXI in the chromatographic fractions, the process was tested in pilot and bench scales and in direct chromatography and the FXI was measured in the initial fractions and in the final product IVIg. The methods of measurement of FXI activity thru coagulation time and chromogenic assay were established. We have concluded that FXI accompanies IgG in the early stages of the chromatographic processes and verified that the presence occurs in the final products, This work contributes to the development of the set of quality control tests of biopharmaceuticals derivatives from human plasma.

A disponibilidade de hemoderivados é um parâmetro importante para medir a qualidade da saúde em um país. Dentre os produtos hemoderivados, imunoglobulinas tem alto valor agregado. O Instituto Butantan tem por objetivo o estabelecimento de uma planta industrial para fracionamento de plasma, com um processo produtivo baseado principalmente em cromatografias. Eventos tromboembólicos a partir de infusões de imunoglobulinas por via intravenosa (IgIV) foram relacionados com presença de Fator XI de coagulação (FXI) como contaminantes nas preparações de IgIVs. Com objetivo de detectar o FXI nas frações, o processo cromatográfico foi testado em escala piloto, bancada, e em cromatografia direta e o FXI foi dosado nas frações iniciais e no produto final IgIV. Foram estabelecidos os métodos de dosagem de atividade de FXI por tempo de coagulação e ensaio cromogênico. Concluímos que o FXI acompanha a IgG nas etapas iniciais dos processos cromatográficos e verificamos que ocorre a presença de FXI nos produtos finais. Este trabalho contribui para o desenvolvimento do conjunto de testes de controle de qualidade de biofármacos derivados de plasma humano. / The availability of hemoderivatives is an important parameter to measure a countrys health quality. Among hemoderivatives products, immunoglobulin have high value.. Instituto Butantan, aims the establishment of an industrial plant for plasma fractionation with a process drawn, based mainly in chromatographies. Thromboembolic events from infusions of intravenous immunoglobulins (IVIg) have been related with the presence of coagulation Factor XI (FXI) as contaminant in the IVIG preparations. With an objective of tracking FXI in the chromatographic fractions, the process was tested in pilot and bench scales and in direct chromatography and the FXI was measured in the initial fractions and in the final product IVIg. The methods of measurement of FXI activity thru coagulation time and chromogenic assay were established. We have concluded that FXI accompanies IgG in the early stages of the chromatographic processes and verified that the presence occurs in the final products, This work contributes to the development of the set of quality control tests of biopharmaceuticals derivatives from human plasma.