Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2015-11-17T03:11:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 335901.pdf: 4870376 bytes, checksum: 73e7dcac4a62522fd32b800ac7070dd8 (MD5) Previous issue date: 2015 / De acordo com a classificação da OMS (2008), as neoplasias de células maduras B (NCLM-B) abrangem os linfomas de células B (LCB) e as neoplasias de células plasmocitárias (NCP). O diagnóstico das NCLM-B é baseado nos exames morfológicos, fenotípicos e genéticos, associados aos dados clínicos do paciente. No entanto, mesmo com essas ferramentas diagnósticas, em alguns casos não é possível definir o subtipo de NCLM-B. Assim, o objetivo do presente estudo foi avaliar os casos de NCLM-B diagnosticados entre 2011 e 2014 e acompanhados no HU-UFSC a fim de traçar o perfil desses pacientes. Foram incluídos no estudo 93 pacientes adultos portadores de NCLM-B. Os subtipos mieloma múltiplo (MM), leucemia linfocítica crônica de células B (LLC/LLP), linfoma difuso de grandes células B (LDGCB), linfoma folicular (LF) e linfoma de Burkitt (LB) foram os mais frequentes, representando 23,7%, 15,1%, 12,9%, 11,8% e 7,5% dos casos, respectivamente. A idade mediana dos pacientes no momento do diagnóstico foi de 58 anos, com uma relação entre os gêneros masculino e feminino de 1,3:1. Foi observada diferença significativa entre os subtipos de LCB em relação aos parâmetros idade, atividade da LDH e expressão de Ki-67. De acordo com os índices prognósticos, observou-se que a maioria dos pacientes portadores de MM foi estratificada como de alto risco, enquanto que a maioria dos portadores de LLC/LLP foi estratificada como de baixo risco. Os pacientes portadores de LB foram os que apresentaram maiores índices de recidiva/progressão. Para todos os pacientes, a frequência de óbito durante o período de estudo foi de 31,2% e a média de sobrevida global (SG) foi de 27,6 meses. Foi observada diferença significativa entre os tempos de SG dos pacientes portadores de LB daqueles com LLC/LLP, LF e LDGCB. A concordância entre os exames de imunofenotipagem (IMF) e de imuno-histoquímica foi de 100%, 47,5%, 93,2%, 71,7% e 46,9%, para os subtipos MM, LLC/LLP, LDGCB, LF e LB, respectivamente. Em relação à expressão fenotípica, para auxílio diagnóstico, destaca-se a expressão dos marcadores CD200, CD81 e CD62L nas células de LLC/LLP; CD10, CD43 e CD81 nas células de LB; CD10 e CD95 nas células de LF; e CD39 nas células de LDGCB. Em conclusão, o perfil dos pacientes diagnosticados com NCLM-B no HU-UFSC é semelhante àquele observado na literatura e a IMF se mostrou uma excelente ferramenta diagnóstica, concordante com a IHQ.<br> / Abstract : According to the World Health Organization (WHO) classification (2008), mature B-cell neoplasms (MBCN) are a heterogeneous group of diseases that comprises B-cell lymphomas (BCL) and plasma cell disorders (PCD). MBCN current diagnosis is usually based on a combination of morphology, immunophenotype, recurrent cytogenetic aberration and clinical features. However, even with these diagnostic tools, in some cases aberrant and overlapping phenotypes often can make the definitive diagnosis difficult. In this view, the aim of this study was to assess the profile of patients diagnosed with MBCN and monitored at the University Hospital of UFSC between 2011 and 2014. The study included 93 adult patients with MBCN diagnosis. The most frequent subtypes were multiple myeloma (MM), chronic lymphocytic leukemia (CLL), diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL), follicular lymphoma (FL), and Burkitt lymphoma (BL), representing 23.7%, 15.1%, 12.9%, 11.8%, and 7.5% of the cases, respectively. The median age at diagnosis was 58 years with a male-to-female ratio of 1.3:1. There were statistical differences in terms of age at diagnosis, LDH levels and Ki-67 expression among BCL subtypes. According to the prognostic indexes, it was observed that the majority of MM patients was stratified as high risk, while the majority of CLL patients was classified as low risk. LB patients showed the highest rates of recurrence/progression. Regarding all patients, the incidence of death during the study period was 31.2% and the average overall survival (OS) was 27.6 months. Statistical differences were found in terms of OS between BL and CLL, BL and FL, and BL and DLBCL. The concordance between immunophenotypic and immunohistochemical methods were 100%, 47.5%, 93.2%, 71.7% e 46.9%, for MM, CLL, DLBCL, FL, and BL, respectively. Regarding phenotypic expression, the expression of CD200, CD81 and CD62L markers by CLL cells; CD10, CD43 and CD81 by BL cells; CD10 and CD95 by FL cells; and CD39 by DLBCL cells, were considered as relevant in order to assist diagnosis. In conclusion, the profile of MBCN patients diagnosed and monitored at our Institution is similar to that observed in the literature, besides, immunophenotyping showed good concordance with immunohistochemistry.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2017. / Made available in DSpace on 2017-10-17T03:22:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 347963.pdf: 5315133 bytes, checksum: 479bf40f096e7da108ddccad20292210 (MD5) Previous issue date: 2017 / O diagnóstico das neoplasias de células linfoides B maduras (NCLBM) é baseado nos exames histopatológicos, imunofenotípicos, citogenéticos e moleculares. Atualmente, a imunofenotipagem por citometria de fluxo é considerada uma ferramenta fundamental para o diagnóstico dessas neoplasias e existe uma tendência de tentar alcançar a subclassificação correta das NCLBM com apenas a avaliação do imunofenótipo. No entanto, devido à sobreposição fenotípica, esse propósito não pode ser atingido em todos os casos. Assim, o objetivo do presente estudo foi investigar a importância dos novos marcadores imunofenotípicos CD150 e CD307a para o diagnóstico diferencial das NCLBM. Por conseguinte, foi avaliada a expressão de ambos antígenos por meio da citometria de fluxo em 120 amostras de pacientes portadores de NCLBM. As amostras foram marcadas com o painel anticorpos monoclonais pela técnica de marcação direta e a expressão de CD150 e CD307a foi avaliada por meio da intensidade de fluorescência média (IFM) nas células B neoplásicas e qualitativamente por meio da comparação com o controle negativo interno. Os resultados mostram que existe uma expressão diferencial do antígeno CD150 entre os casos de linfoma de Burkitt (LB) e as neoplasias de células B precursoras, portanto, a expressão de CD150 parece ser útil na identificação dos casos de LB com características fenotípicas de precursor B. A forte expressão de CD150 nos dois casos de linfoma folicular (LF) grau 3A avaliados sugerem que esse marcador é importante para o diagnóstico diferencial desse subtipo de NCLBM e o LF de baixo grau. A perda da expressão de CD150 observada nos plasmócitos clonais dos linfomas com diferenciação plasmocitária (LDP), representa um achado inédito e a única alteração fenotípica observada em todos casos de LDP estudados. Foi observado que todos os casos de linfoma de células do manto (LCM) apresentaram diminuição da expressão de CD307a em relação aos linfócitos B normais. Em contrapartida, a expressão desse marcador no grupo das leucemias linfoides crônicas (LLC) foi heterogênea com casos totalmente negativos até casos com expressão forte e maior à observada nos linfócitos B normais. Assim, pode ser inferido que a expressão moderada e forte desse marcador poderia excluir o diagnóstico de LCM. Foi corroborado que tanto o marcador CD150 quanto o CD307a apresentam menor expressão nos casos de LLC com marcadores prognósticos desfavoráveis. Em vista dos resultados obtidos, a inclusão desses marcadores no painel imunofenotípico de rotina pode contribuir com o aprimoramento da imunofenotipagem por citometria de fluxo para o diagnóstico diferencial das NCLBM.<br> / Abstract : Diagnosis of mature B cell neoplasms (MBCN) is based on results yielded by histopathological, immunophenotypic, cytogenetic and molecular analysis. Consequently, flow cytometric immunophenotyping is deemed fundamental as a tool for B cell neoplasms diagnosis. Given the advantages this methodology provides, there exists a tendency to attempt to fully subclassify MBCN solely on the basis of flow cytometric immunophenotyping results. However, due to the existence of overlapping phenotypes this aim is not achieved in every single case. Because of that, the goal of the present study was to investigate on the importance of novel immunophenotypic markers CD150 and CD307a in the differential diagnosis of the MBCN. To accomplish that, the expression of both antigens was analyzed in 120 samples taken from patients diagnosed with MBCN. Samples were assessed with a panel of monoclonal antibodies using a direct staining protocol and the CD150 and CD307a expression was quantitated by calculating the mean fluorescence intensity (MFI) for neoplastic B cell in each case, and was also ascertained in qualitative terms in comparison with internal negative control. A differential expression of CD150 has been proven to exist between Burkitt lymphoma (BL) and precursor B cell neoplasms cases; therefore, the expression of CD150 might identify BL patients with phenotypic features of B cell precursors. Both follicular lymphoma (FL) grade 3A cases studied showed high homogenic levels of that marker, which becomes relevant in differential diagnosis of that entity with low grade FL. Neoplastic plasma cells of B cell lymphomas with plasmacytic differentiation (LPD) showed a loss of expression of CD150 when compared to normal polyclonal plasma cells. Such decrease was the only phenotypic aberration observed in every LPD sample evaluated. It was also ascertained that every mantle cell lymphoma (MCL) case showed lower levels of CD307a in comparison to normal B cell population. Differently, a spectrum of CD307a expression, from negative to bright, was seen in chronic lymphocytic leukemia (CLL). Thus, moderate and bright CD307a expression virtually excludes MCL diagnosis. A lower expression of both markers in CLL patients with unfavorable prognosis was confirmed in this study. In conclusion, these results suggest that the inclusion of both markers in an immunophenotypic panel could improve the differential diagnosis of MBCN by flow cytometry.

Resumo não diponível.

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:47:53Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008 / A leptospirose constitui uma importante zoonose, encontrada em regiões de clima tropical, ocorrendo principalmente em épocas chuvosas. O controle da infecção depende do adequado reconhecimento do microorganismo pelos receptores de reconhecimento de padrão de patógenos, os TLRs, presentes nas células do sistema imune inato do hospedeiro. A ativação dos TLRs é fundamental para o desencadeamento da resposta inflamatória, mediadora da resposta de proteção e de lesão no processo infeccioso. Objetivos: Avaliar a expressão dos receptores TLR2, TLR4 e CD14 na superfície de monócitos e a resposta in vitro aos estímulos LipL32 (extraído de Leptospira sp.), MALP-2 (antígeno sintético de Mycoplasma fermentans) e LPS (antígeno extraído de Salmonella abortus equi) ligantes dos TLRs, medida pela produção de citocinas, em pacientes com leptospirose. Métodos: Foram incluídos 07 pacientes com quadro clínico e laboratorial de leptospirose e 07 voluntários sadios, utilizados como controle. As células mononucleares do sangue periférico (CMSP) foram separadas utilizando ficoll-paque, congeladas e armazenadas em nitrogênio líquido. Após descongelamento, verificação da viabilidade e acerto da concentração de células para 1x106 células/mL foi mensurada a expressão de TLR2, TLR4 e CD14 na superfície de monócitos. O restante da suspensão de células foi incubada por 6 horas com os estímulos de 1000ng/mL de LipL32, 0,4U/mL de MALP-2 ou 100ng/mL de LPS. Após a primeira hora de incubação foi adicionado monensina para bloqueio da secreção de citocina. Em seguida, as CMSP foram marcadas com CD14, fixadas, permeabilizadas e expostas aos anticorpos anti-IL-6 e anti-TNF-α para detecção intracelular da produção destas citocinas inflamatórias nos monócitos. Foram adquiridos 10.000 eventos combinado-se morfologia e positividade para CD14 em citometria de fluxo. Resultados: Não foi observada diferença significativa na resposta inflamatória entre pacientes com leptospirose e voluntários sadios quando CMSP foram estimuladas in vitro com MALP-2 e LipL32 para indução da produção de citocinas inflamatórias (IL-6 e TNF-α) em monócitos. Todavia, a produção de TNF-α foi menor após estímulo com LPS (p=0,035), o que não ocorreu com a produção de IL-6. Em relação à expressão de receptores de superfície, foi observado aumento da expressão de TLR2 (p=0,025) na superfície de monócitos dos pacientes, porém não houve diferença na expressão de TLR4 e CD14. Conclusões: Neste estudo demonstramos que a capacidade de reconhecimento de antígenos pelos monócitos do sangue periférico de pacientes com leptospirose está preservada ou aumentada. Além disso, observamos que a produção de citocinas inflamatórias frente a antígeno da própria Leptospira (LipL32) e outro antígeno agonista de TLR2 (MALP-2) está mantida. Entretanto, a produção de citocina inflamatória frente ao LPS (agonista de TLR4) mostrou-se complexa podendo estar influenciada pela tolerância cruzada. / The Leptospirosis is one of the world's most important zoonoses, found in regions of tropical climate, occurring mainly in rainy seasons. The control of infection depends on the proper recognition of the microorganism by receptors for recognition of patterns of pathogens, the TLRs present in the cells of the innate immune system of the host. The activation of TLRs is crucial for triggering the inflammatory response, mediator of the response of protection in case of injury and infection. Objectives: To evaluate the expression of receptors TLR2, TLR4 and CD14 on the monocytes surface in vitro and response to stimuli LipL32 (extracted from Lestospira sp.), MALP-2 (synthetic antigen of Mycoplasma fermentans) and LPS (antigen extracted from bacteria-gram negative) binders of TLRs, as measured by production of cytokines in patients with leptospirosis. Methods: 07 patients with clinical and laboratory of leptospirosis were included and 07 healthy volunteers, used as controls. The peripheral blood mononuclear cells (PBMC) were separated using ficoll-paque, frozen and stored in liquid nitrogen. After thawing, checking the feasibility and wisdom of the concentration of cells to 1x106 células/mL was measured the expression of TLR2, TLR4 and CD14 on the monocytes surface. The rest of the cell suspension was incubated for 6 hours with the stimuli of 1000ng/mL of LipL32, 0.4 U / mL of MALP-2 or 100ng/mL of LPS. After the first hour of incubation was added monensin for blocking the secretion of cytokine. Then the PBMC were stained with CD14, set, permeabilizaded and exposed to anti-IL-6 and anti-TNF-α for detection of intracellular production of inflammatory cytokines in monocytes. They were acquired 10,000 events combined to morphology and positive for CD14 in flow cytometry. Results: There was no significant difference in the inflammatory response among patients with leptospirosis and healthy volunteers when PBMC were stimulated in vitro with MALP-2 and LipL32 to induce the production of inflammatory cytokines (IL-6 and TNF-α) in monocytes. However, the production of intracellular of TNF-α was lower after stimulation with LPS (p = 0035), which did not occur to the production of IL-6. Regarding the expression of surface receptors, it was observed increased expression of TLR2 (p = 0025) on the monocytes surface of patients, but there was no difference in the expression of TLR4 and CD14. Conclusions: This study demonstrated that the ability of recognition of antigens by peripheral blood monocytes of patients with leptospirosis is preserved or increased. Also, we observed that the production of inflammatory cytokines in front of the Leptospira antigen (LipL32) and another antigen agonist of TLR2 (MALP-2) is maintained. Meanwhile, the production of inflammatory cytokine front of LPS (agonist of TLR4) proved to be complex may be influenced by cross tolerance. / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Submitted by Barroso Patrícia (barroso.p2010@gmail.com) on 2014-08-29T19:51:00Z No. of bitstreams: 1 dissertacao_TAIS_GARDENIA_LOPES_definitiva.pdf: 3599269 bytes, checksum: c9545e07fb22597fc9dedde1d8be85cd (MD5) / Made available in DSpace on 2014-08-29T19:51:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_TAIS_GARDENIA_LOPES_definitiva.pdf: 3599269 bytes, checksum: c9545e07fb22597fc9dedde1d8be85cd (MD5) / Resultados: O vírus da hepatite B (HBV) é um vírus envelopado cujo material genético é armazenado sob a forma de DNA de fita dupla, pertencente à família Hepadnaviridae e que apresenta um tropismo primário por células hepáticas. O HBV é transmitido principalmente pelas vias parenteral e sexual e é considerado 50 a 100 vezes mais infeccioso que o HIV. A hepatite B desencadeia uma resposta imune mediada por células, principalmente por células T e células Natural Killer (NK), consideradas principais responsáveis pela lesão hepática. Objetivo: O objetivo deste trabalho foi avaliar o perfil linfocitário em sangue periférico de indivíduos no curso da infecção pelo vírus da hepatite B. Material e métodos: Foi realizada a contagem total dos leucócitos (citômetro automatizado – Wiener lab. Counter 19) e a contagem linfocitária por análise imunofenotípica em citometria de fluxo (FACSCalibur – BD, software Cell Quest, utilizando os kit Lymphogram® e Perfect-Count Microspheres®), identificando os valores relativos e absolutos de linfócitos B, linfócitos T totais, linfócitos T auxiliar, linfócitos T citotóxicos e células NK de 50 voluntários com hepatite B crônica e 41 voluntários não infectados. Foram realizadas comparações quanto ao tratamento e à carga viral. Os softwares SPSS versão 18 e GraphPad versão 5 foram utilizados para o cálculo. Resultados: Não foram encontradas diferenças nos leucócitos totais e nos linfócitos B entre as populações estudadas. As populações de linfócitos T e de linfócitos T citotóxicos, independente do tratamento e da carga viral, apresentaram-se menores nos indivíduos com hepatite B, enquanto que os valores das células NK foram maiores nos mesmos indivíduos. Conclusão: O perfil linfocitário dos indivíduos infectados pelo HBV apresentou uma diminuição de linfócitos T e de linfócitos T citotóxicas e um aumento de células NK.

Resumo não diponível.

Resumo não diponível.

Para elucidar alguns aspectos da imunopatogenia da uveíte na erliquiose canina, avaliaram-se, por meio da análise imunistoquímica, bulbos oculares de cães experimentalmente infectados por Ehrlichia canis (grupo 1- G1), naturalmente infectados por Ehrlichia canis (grupo 2-G2) e na co-infecção natural de E. canis e Babesia sp. (grupo 3). Parâmetros clínicos e hematológicos foram avaliados. Empregaram-se o dot-blot-Elisa e a reação de imunofluorescência indireta para E. canis e Babesia sp. respectivamente. Para a confirmação diagnóstica, utilizou-se a reação de cadeia de polimerase (PCR) para E.canis. A contagem imunofenotípica para os anticorpos CD3, CD4, CD8, Tal1B5 e MAC 387 não demonstrou diferença significativa nas diferentes regiões analisadas do bulbo ocular. Observou-se no G1, G2 e G3, em todas as regiões analisadas diferença significativa da contagem imunofenotípica de células CD8+ em relação às células CD4+. Evidenciou-se diferença significativa entre a contagem percentual de células IgG2+ e CD79?+ na região de corpo ciliar do G3 em relação ao G1. A região da íris do G3, em relação ao G2, demonstrou diferenças significativas para o anticorpo IgG1. Evidenciou-se nos três grupos, a existência de correlação linear entre as células CD3+ e CD8+ e entre as células IgG2+ e CD79?+ em diversas regiões do bulbo ocular. O infiltrado inflamatório mostrou-se mais intenso nas regiões de corpo ciliar e ângulo iridocorneal, moderado em limbo e íris e mínimo em coróide. A avaliação semiquantitativa por score da intensidade do infiltrado inflamatório mostrou-se mais intensa nos animais que apresentavam co-infecção, sugerindo uma resposta imune mais intensa nesses cães. Demonstrou-se que o infiltrado inflamatório era composto, predominantemente, por linfócitos T CD3+ e B CD79+?. A maior porcentagem de células T CD3+ era CD8+, caracterizando, portanto, uma resposta imune do tipo citotóxica. A presença de células B CD79+? fala a favor de produção local de anticorpos. Observaram-se células imunomarcadas por IgG2 e poucas células marcadas por IgG1, sugerindo uma polarização da resposta imune para o padrão Th1, sendo um possível mecanismo imune de lesão na uveíte. Observou-se alta expressão de moléculas de MHC-classe II, sugerindo uma resposta imune intensa nos tecidos oculares, contudo ineficiente devido a deficiência de células CD4+. / The immunopathogenicity of uveitis in the canine ehrlichiosis was studied by conducting anatomy and immunohistochemical analyses in the ocular globes of dogs experimentally (Group 1) and naturally (Group 2) infected with Ehrlichia canis, and naturally coinfected with Ehrlichia canis and Babesia sp. (Group 3). Clinical and hematological parameters were evaluated. Dot-blot Elisa and indirect immunofluorescent test (IFA) were used to analyze E. canis and Babesia sp., respectively. PCR assay confirmed the diagnosis of the disease caused by E. canis. The immunophenotypic analysis with the antibodies CD3, CD4, CD8, Tal1B5 and MAC 387 revealed no significant differences between the various ocular regions analyzed. Significant differences were observed between the immunophenotypic analysis of CD8+ and CD4+cells from all regions analyzed from G1, G2 and G3; between the percentile counts of IgG2+ and CD79?+ in the ciliary body of G3 dogs when compared to G1, and for the IgG1 antibody counts of the iris region from G3 when compared to G2. A linear correlation between CD3+ and CD8+ cells and between IgG2+ and CD79?+ cells from several regions of the ocular globe was found for all three groups. The cellular inflammatory infiltrate observed in the ocular tissue was severe in the regions of the ciliary bodies and iridocorneal angle, moderate in the limbus and iris, and only slightly present in the choroids. A semiquantitative analysis of the intensity of the inflammatory infiltrate of the ocular globes was more intense in G3, which suggested a greater response of the immune system in these animals. The inflammatory infiltrate was composed of mainly B CD79+? and T CD3+ lymphocytes, which had CD8+ at a high percentage, thus characterizing this as a cytotoxic immune response. Results indicated that B CD79+? cells favored the production of local antibodies. IgG2 and very few IgG1 immunolabeled cells were found. This result indicated a polarization of the immune response to the Th1 pattern, which could be the mechanism of the lesions in the uveitis. A large number of cells expressing the MHC-class II molecules were observed, suggesting an intense immune response in the ocular tissues, however ineffective due to the CD4+ cell´s deficient.

Para elucidar alguns aspectos da imunopatogenia da uveíte na erliquiose canina, avaliaram-se, por meio da análise imunistoquímica, bulbos oculares de cães experimentalmente infectados por Ehrlichia canis (grupo 1- G1), naturalmente infectados por Ehrlichia canis (grupo 2-G2) e na co-infecção natural de E. canis e Babesia sp. (grupo 3). Parâmetros clínicos e hematológicos foram avaliados. Empregaram-se o dot-blot-Elisa e a reação de imunofluorescência indireta para E. canis e Babesia sp. respectivamente. Para a confirmação diagnóstica, utilizou-se a reação de cadeia de polimerase (PCR) para E.canis. A contagem imunofenotípica para os anticorpos CD3, CD4, CD8, Tal1B5 e MAC 387 não demonstrou diferença significativa nas diferentes regiões analisadas do bulbo ocular. Observou-se no G1, G2 e G3, em todas as regiões analisadas diferença significativa da contagem imunofenotípica de células CD8+ em relação às células CD4+. Evidenciou-se diferença significativa entre a contagem percentual de células IgG2+ e CD79?+ na região de corpo ciliar do G3 em relação ao G1. A região da íris do G3, em relação ao G2, demonstrou diferenças significativas para o anticorpo IgG1. Evidenciou-se nos três grupos, a existência de correlação linear entre as células CD3+ e CD8+ e entre as células IgG2+ e CD79?+ em diversas regiões do bulbo ocular. O infiltrado inflamatório mostrou-se mais intenso nas regiões de corpo ciliar e ângulo iridocorneal, moderado em limbo e íris e mínimo em coróide. A avaliação semiquantitativa por score da intensidade do infiltrado inflamatório mostrou-se mais intensa nos animais que apresentavam co-infecção, sugerindo uma resposta imune mais intensa nesses cães. Demonstrou-se que o infiltrado inflamatório era composto, predominantemente, por linfócitos T CD3+ e B CD79+?. A maior porcentagem de células T CD3+ era CD8+, caracterizando, portanto, uma resposta imune do tipo citotóxica. A presença de células B CD79+? fala a favor de produção local de anticorpos. Observaram-se células imunomarcadas por IgG2 e poucas células marcadas por IgG1, sugerindo uma polarização da resposta imune para o padrão Th1, sendo um possível mecanismo imune de lesão na uveíte. Observou-se alta expressão de moléculas de MHC-classe II, sugerindo uma resposta imune intensa nos tecidos oculares, contudo ineficiente devido a deficiência de células CD4+. / The immunopathogenicity of uveitis in the canine ehrlichiosis was studied by conducting anatomy and immunohistochemical analyses in the ocular globes of dogs experimentally (Group 1) and naturally (Group 2) infected with Ehrlichia canis, and naturally coinfected with Ehrlichia canis and Babesia sp. (Group 3). Clinical and hematological parameters were evaluated. Dot-blot Elisa and indirect immunofluorescent test (IFA) were used to analyze E. canis and Babesia sp., respectively. PCR assay confirmed the diagnosis of the disease caused by E. canis. The immunophenotypic analysis with the antibodies CD3, CD4, CD8, Tal1B5 and MAC 387 revealed no significant differences between the various ocular regions analyzed. Significant differences were observed between the immunophenotypic analysis of CD8+ and CD4+cells from all regions analyzed from G1, G2 and G3; between the percentile counts of IgG2+ and CD79?+ in the ciliary body of G3 dogs when compared to G1, and for the IgG1 antibody counts of the iris region from G3 when compared to G2. A linear correlation between CD3+ and CD8+ cells and between IgG2+ and CD79?+ cells from several regions of the ocular globe was found for all three groups. The cellular inflammatory infiltrate observed in the ocular tissue was severe in the regions of the ciliary bodies and iridocorneal angle, moderate in the limbus and iris, and only slightly present in the choroids. A semiquantitative analysis of the intensity of the inflammatory infiltrate of the ocular globes was more intense in G3, which suggested a greater response of the immune system in these animals. The inflammatory infiltrate was composed of mainly B CD79+? and T CD3+ lymphocytes, which had CD8+ at a high percentage, thus characterizing this as a cytotoxic immune response. Results indicated that B CD79+? cells favored the production of local antibodies. IgG2 and very few IgG1 immunolabeled cells were found. This result indicated a polarization of the immune response to the Th1 pattern, which could be the mechanism of the lesions in the uveitis. A large number of cells expressing the MHC-class II molecules were observed, suggesting an intense immune response in the ocular tissues, however ineffective due to the CD4+ cell´s deficient.

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:06:01Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005 / A sepse apresenta crescente incidência e elevada morbidade e mortalidade, sendo a principal causa de óbito nas unidades de terapia intensiva. O controle da infecção depende do adequado reconhecimento dos microrganismos pelas células do hospedeiro e de resposta efetora competente. Paradoxalmente, na sepse, os mecanismos de proteção estão também envolvidos no processo de doença, sendo o limite entre resposta protetora e de lesão ainda impreciso. Objetivos: Avaliar a expressão de receptores de reconhecimento de patógenos na superfície de monócitos e a resposta a estímulos exógenos - LPS, IL-1 P e TNF-α - in vitro, medida pela produção de citocinas, em pacientes em diferentes estádios da sepse. Métodos: Foram incluídos 41 pacientes, classificados de acordo com as definições do consenso de 1992 sendo, 14 com sepse, 12 com sepse grave e 15 com choque séptico. Dezessete voluntários sadios foram incluídos como controle. Através da citometria de fluxo, a expressão de TLR2, TLR4, CD14, CD11b e CD11c foi analisada na superfície dos monócitos em sangue total. A forma solúvel do receptor CD14 (sCD14) também foi mensurada em soro através de ELlSA. A produção de citocinas inflamatórias (TNF-α e IL-6) e antiinflamatória (IL-10) foi mensurada em sobrenadante de células mononucleares do sangue periférico após os estímulos de LPS, IL-1 P e TNF-α in vitro. Resultados: Foi detectado aumento do sCD14 sérico e uma queda expressão de mCD14 em monócitos periféricos nos pacientes em relação aos voluntários sadios (p<0,01). Entretanto não houve diferença entre os grupos estudados quanto à expressão dos receptores TLR2, TLR4, CD11b e CD11c. O grupo com sepse apresentou, comparado com os outros grupos, aumento da produção de IL-6 e TNF-α após o estímulo de LPS. Esta regulação positiva foi menos intensa com IL-1 p e ausente com TNF-α Uma regulação negativa da produção de citocinas inflamatórias foi observada na sepse grave e choque séptico. Não foi observada diferença significante na produção de IL-10 entre os grupos, todavia uma menor produção frente ao estímulo de LPS foi detectada nos pacientes em choque séptico em relação aos pacientes em sepse (p<0,05). A correlação entre receptores de superfície de monócitos e produção das citocinas frente ao LPS pode ser demonstrada quando os resultados obtidos dos pacientes sépticos foram agrupados. Surpreendentemente, detectou-se correlação da expressão dos mesmos receptores com os outros estímulos utilizados, IL-1 p e TNF-α., também foi observada. Conclusões: Neste estudo demonstramos que a resposta inflamatória está associada com o continuum de manifestações clinicas, com uma forte resposta na fase inicial (sepse) e quadro refratário nas fases tardias (sepse grave e choque séptico). A correlação observada entre os receptores de superfície e a produção de citocinas frente aos estímulos de TNF-α e IL-1p e o mesmo padrão de resposta observado com os diferentes estímulos sugere um padrão de resposta imunológica que não depende apenas da expressão dos receptores avaliados e provavelmente, tem uma regulação na via de sinalização intracelular. / Sepsis presents increasing incidence and high morbidity and mortality and is the main cause of death in the intensive care units. The infection control depends on the adequate microorganism recognition by the host cells and competent effector’s response. Paradoxically, in sepsis, the protective mechanisms are also involved in the illness process, with the limit between protective and harmful response still inexact. Purpose: To evaluate the expression of pathogen recognition receptors on monocytes surface and the response to exogenous stimulus - LPS, IL-1β e TNF-α - in vitro, measured by the cytokine production, in patients in different sepsis stages. Methods: Forty one patients, classified in accordance with the definitions of the Consensus of the 1992, had been enrolled: 14 with sepsis, 12 with severe sepsis and 15 with septic shock. Seventeen healthy volunteers were included as control. Through flow cytometry, the expression of TLR2, TLR4, CD14, CD11b and CD11c were analyzed on monocytes surface in whole blood. The soluble form of CD14 receptor (sCD14) also was measured in serum by ELISA. Inflammatory (TNF-α and IL-6) and anti-inflammatory (IL-10) cytokine levels was measured in peripheral blood mononuclear cells supernatants following LPS, IL-1β e TNF -α - stimulus in vitro. Results: An increase in sCD14 in sera and a decreased mCD14 expression on peripheral monocytes were found in patients comparing to healthy volunteers (p<0,01). However, no differences in the expression of TLR2, TLR4, CD11b and CD11c were found among the groups. The sepsis group showed, compared with the others groups, higher IL-6 and TNF-α production after LPS stimulus. This positive regulation was less intense with IL-1β and absent with TNF- α. A negative regulation of the inflammatory cytokine production was observed in severe sepsis and shock septic patients comparing to the sepsis and healthy group, independent of the stimulus. No significant difference in the IL-10 production was found among the groups, yet a lower production after LPS challenge was detected in septic shock compared with the sepsis patients (p<0,05). A correlation between monocytes surface receptors and cytokine production after LPS challenge could be demonstrated when the results of the septic groups had been grouped. Surprising, correlation of the expression of the same receptors with the other stimulus used, IL-1β e TNF-α, were also observed. Conclusions: In this study we show that the inflammatory response is associated with the continuum of clinical manifestations of sepsis, with a strong inflammatory response in the early-phase (sepsis) and refractory picture in the late-phases (severe sepsis and septic shock). The correlation between the cell surface receptors and the cytokine production after IL-1β e TNF-α stimuli and the observation of one same standard response with the different stimulus suggest a pattern of immunology response that does not depend only of the expression of the evaluated receptors and, probably, has a regulation in the intracellular signaling pathways. / BV UNIFESP: Teses e dissertações