Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2010. / Submitted by wiliam de oliveira aguiar (wiliam@bce.unb.br) on 2011-06-30T18:21:36Z No. of bitstreams: 1 2010_MarcioSousaJeronimo.pdf: 1578926 bytes, checksum: 79c20c6135d32319982393e2ad178021 (MD5) / Approved for entry into archive by Guilherme Lourenço Machado(gui.admin@gmail.com) on 2011-07-04T12:37:31Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_MarcioSousaJeronimo.pdf: 1578926 bytes, checksum: 79c20c6135d32319982393e2ad178021 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-07-04T12:37:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_MarcioSousaJeronimo.pdf: 1578926 bytes, checksum: 79c20c6135d32319982393e2ad178021 (MD5) / A cicatrização de ferida é um mecanismo coordenado e regulado por que envolve mediadores solúveis e insolúveis da resposta imunitária. Certas condições são conhecidamente comprometedoras desse mecanismo. A obesidade, diabetes e a imunossupressão interferem em mecanismos chaves do reparo e fazem que este seja comprometido no final. Animais sadios, imunossuprimidos, diabéticos ou obesos foram submetidos a confecção de uma ferida de primeira e segunda intenção no dorso e tratados com L-Arginine topicamente dutrante 5, 7 e 10 dias pós operação. O tecido foi retirado e feito análises histopatológicas e RT-PCR em tempo real para se determinar o quadro de evolução da ferida. A análise estatística foi feita pelo teste T. Nosso trabalho revelou que o uso tópico da L-Arginina em feridas de primeira e segunda intenção melhorou o processo de cicatrização por aumentar a produção de TGF-β e citocinas da fase inflamatória TNF-α e IL1-β. A L-Arginina parece ser uma boa alternativa para o auxílio no reparo de feridas em condições que mecanismos de cicatrização está comprometida. Nosso trabalho abre perspectivas para estudos que envolvam novas formulações e associações que tenham como base esse aminoácido. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The wound healing is a coordinated and regulated mechanism that involves soluble mediators and insoluble immune response. Certain conditions are known to compromising the mechanism. Obesity, diabetes and immunosuppression interfere in key mechanisms of repair and do it to be compromised in the end. Healthy animals, immunosuppressed, diabetic or obese underwent construction of a wound from the first and second intention in the back and treated with L-Arginine topically dutrante 5, 7 and 10 days post operation. The tissue was removed and was the histopathological analysis and RT-PCR in real time to determine the framework of evolution of the wound. Statistical analysis was performed by the test T. Our work showed that the topical use of L-arginine in wounds of first and second intention improved the healing process by increasing the production of TGF-β and cytokines in the inflammatory TNF-α and IL1-β. L-Arginine appears to be a good alternative to aid in wound repair mechanisms in conditions that healing is compromised. Our work opens up perspectives for studies involving new formulations and associations that are based on this amino acid.

A asma é considerada uma das mais importantes doenças crônicas na infância, devido a sua alta incidência e ao aumento na morbidade observada nos últimos anos. Diversas anormalidades imunológicas têm sido descritas em pacientes com asma, incluindo hipogamaglobulinemia e deficiência de subclasses de IgG. O objetivo deste trabalho foi avaliar a imunidade humoral representada pelos níveis séricos totais imunoglobulinas, subclasses de IgG e níveis salivares de IgA e a imunidade específica representada pela resposta a antígenos timo-dependentes, antígenos timo--independentes tipo 1 e timo-independentes tipo 2 em crianças com asma brônquica moderada e grave. Foram coletadas amostras de sangue pré e pós-imunização com vacina Pneumo23® e saliva de 50 crianças, com idades entre 4 e 12 anos. Foram determinados os níveis séricos de IgG, IgA, IgM, IgE e subclasses de IgG (IgG2, IgG3 e IgG4) por nefelometria. A lgA secretória determinada nas salivas, os anticorpos IgG anti-toxóide tetânico, os anticorpos IgG e IgM anti-LPS 0111 e os níveis séricos anticorpos IgG pré e pós-vacinais anti-S. pneumoniae foram determinados por ensaio imunoenzimático. Foram avaliados os níveis séricos de IgE específicos para Dermatophagoides pteronyssinus, e o teste cutâneo para os alérgenos Dermatophagoides pteronyssinus, Dermatophagoides farinae e Blomia tropicalis. Foram observados níveis elevados de IgG total e das subclasses IgG2 e IgG3. Níveis altos IgG4 foram observados em 52% dos pacientes asmáticos, e deficiência de IgG4 apenas 8%. Os níveis séricos totais de IgM foram elevados em 24% dos pacientes, apenas um paciente apresentou resultado inferior ao valor de normalidade. Foi detectada deficiência de IgA sérica associada a deficiência de IgA secretória em 1 paciente. Foram detectados elevados níveis totais de IgE sérica e de anticorpos IgE anti-D. pteronyssinus (classes 4, 5 e 6). Testes cutâneos positivos Dermatophagoides pteronyssinus, Dermatophagoides farinae e Blomia tropicalis foram observados em 73% dos pacientes. Foram observados níveis séricos adequados de anti-toxóide tetânico em 76% das amostras e níveis normais de anticorpos IgG e IgM anti-LPS 0111, sendo que apenas 6% das crianças apresentaram níveis elevados IgM, e 4% de IgG anti-LPS 0111. Apesar da maioria dos pacientes apresentarem resposta de anticorpos anti-pneumococo, foram encontrados 2 pacientes deficiência de resposta de anticorpos para polissacarídeos. Em conclusão, foram identificadas imunodeficiências bem caracterizadas em 3 crianças asmáticas, que poderiam claramente levar a infecções, o que prioriza a importância da avaliação imunidade humoral. / Asthma is considered to be one of the most important chronic diseases childhood, with respect to its high incidence, and the increasing morbidity observed the last years. Several abnormalities have been described in patients with asthma, including hipogammaglobulinemia and IgG subclass deficiencies. The aim was to evaluate the humoral immunity represented by total seric immunoglobulin levels, IgG subclasses and salivary IgA levels and the specific immunity represented by response to thymus-dependent, thymus-independent type 1 and thymus-independent type 2 antigens in children with persistent moderate and severe bronchial asthma. Blood samples before and after immunization with Pneumo23® and saliva were collected from 50 asthmatic children (4-12 years old). IgG, IgA, IgM, IgE and IgG subclasses were analyzed by nephelometry. Secretory IgA, anti-tetanus IgG levels, anti-¬LPS 0111 IgG and IgM levels, and pre and post-immunization anti-pneumococcal IgG antibodies were measured by immunoenzymatic assay. Anti-Dermatophagoides pteronyssinus IgE levels and Prick tests with Dermatophagoides pteronyssinus, Dermatophagoides farinae, Blomia tropicalis were also evaluated. Elevated levels were observed of total IgG, IgG2 and IgG3 subclasses. High IgG4 levels were detected 52% of the asthmatic patients, and IgG4 deficiency in 8%. High seric total IgM levels were founded in 24% of the patients, and only one presented IgM level bellow normal age-matched controls. Seric IgA deficiency associated with secretory IgA deficiency founded in one patient. Elevated seric IgE levels and anti-D. pteronyssinus IgE antibodies (classes 4, 5 and 6) were detected. Positive prick test to Dermatophagoides pteronyssinus, Dermatophagoides farinae and Blomia tropicalis were observed in 73% of the patients. An adequate anti-tetanus toxoid antibody response was observed 76% of the samples and normal anti-LPS 0111 IgG and IgM levels, although 6% of children presented high anti-LPS 0111 IgM levels, and 4% presented high anti-LPS 0111 IgG levels. Although most of the patients showed a good anti-pneumococcal response, two patients presented anti-polysaccharide antibody deficiency. In conclusion, well-characterized immunodeficiencies were identified in three asthmatic children, which could clearly lead to infections, emphasizing the importance evaluating the humoral immunity.

A asma é considerada uma das mais importantes doenças crônicas na infância, devido a sua alta incidência e ao aumento na morbidade observada nos últimos anos. Diversas anormalidades imunológicas têm sido descritas em pacientes com asma, incluindo hipogamaglobulinemia e deficiência de subclasses de IgG. O objetivo deste trabalho foi avaliar a imunidade humoral representada pelos níveis séricos totais imunoglobulinas, subclasses de IgG e níveis salivares de IgA e a imunidade específica representada pela resposta a antígenos timo-dependentes, antígenos timo--independentes tipo 1 e timo-independentes tipo 2 em crianças com asma brônquica moderada e grave. Foram coletadas amostras de sangue pré e pós-imunização com vacina Pneumo23® e saliva de 50 crianças, com idades entre 4 e 12 anos. Foram determinados os níveis séricos de IgG, IgA, IgM, IgE e subclasses de IgG (IgG2, IgG3 e IgG4) por nefelometria. A lgA secretória determinada nas salivas, os anticorpos IgG anti-toxóide tetânico, os anticorpos IgG e IgM anti-LPS 0111 e os níveis séricos anticorpos IgG pré e pós-vacinais anti-S. pneumoniae foram determinados por ensaio imunoenzimático. Foram avaliados os níveis séricos de IgE específicos para Dermatophagoides pteronyssinus, e o teste cutâneo para os alérgenos Dermatophagoides pteronyssinus, Dermatophagoides farinae e Blomia tropicalis. Foram observados níveis elevados de IgG total e das subclasses IgG2 e IgG3. Níveis altos IgG4 foram observados em 52% dos pacientes asmáticos, e deficiência de IgG4 apenas 8%. Os níveis séricos totais de IgM foram elevados em 24% dos pacientes, apenas um paciente apresentou resultado inferior ao valor de normalidade. Foi detectada deficiência de IgA sérica associada a deficiência de IgA secretória em 1 paciente. Foram detectados elevados níveis totais de IgE sérica e de anticorpos IgE anti-D. pteronyssinus (classes 4, 5 e 6). Testes cutâneos positivos Dermatophagoides pteronyssinus, Dermatophagoides farinae e Blomia tropicalis foram observados em 73% dos pacientes. Foram observados níveis séricos adequados de anti-toxóide tetânico em 76% das amostras e níveis normais de anticorpos IgG e IgM anti-LPS 0111, sendo que apenas 6% das crianças apresentaram níveis elevados IgM, e 4% de IgG anti-LPS 0111. Apesar da maioria dos pacientes apresentarem resposta de anticorpos anti-pneumococo, foram encontrados 2 pacientes deficiência de resposta de anticorpos para polissacarídeos. Em conclusão, foram identificadas imunodeficiências bem caracterizadas em 3 crianças asmáticas, que poderiam claramente levar a infecções, o que prioriza a importância da avaliação imunidade humoral. / Asthma is considered to be one of the most important chronic diseases childhood, with respect to its high incidence, and the increasing morbidity observed the last years. Several abnormalities have been described in patients with asthma, including hipogammaglobulinemia and IgG subclass deficiencies. The aim was to evaluate the humoral immunity represented by total seric immunoglobulin levels, IgG subclasses and salivary IgA levels and the specific immunity represented by response to thymus-dependent, thymus-independent type 1 and thymus-independent type 2 antigens in children with persistent moderate and severe bronchial asthma. Blood samples before and after immunization with Pneumo23® and saliva were collected from 50 asthmatic children (4-12 years old). IgG, IgA, IgM, IgE and IgG subclasses were analyzed by nephelometry. Secretory IgA, anti-tetanus IgG levels, anti-¬LPS 0111 IgG and IgM levels, and pre and post-immunization anti-pneumococcal IgG antibodies were measured by immunoenzymatic assay. Anti-Dermatophagoides pteronyssinus IgE levels and Prick tests with Dermatophagoides pteronyssinus, Dermatophagoides farinae, Blomia tropicalis were also evaluated. Elevated levels were observed of total IgG, IgG2 and IgG3 subclasses. High IgG4 levels were detected 52% of the asthmatic patients, and IgG4 deficiency in 8%. High seric total IgM levels were founded in 24% of the patients, and only one presented IgM level bellow normal age-matched controls. Seric IgA deficiency associated with secretory IgA deficiency founded in one patient. Elevated seric IgE levels and anti-D. pteronyssinus IgE antibodies (classes 4, 5 and 6) were detected. Positive prick test to Dermatophagoides pteronyssinus, Dermatophagoides farinae and Blomia tropicalis were observed in 73% of the patients. An adequate anti-tetanus toxoid antibody response was observed 76% of the samples and normal anti-LPS 0111 IgG and IgM levels, although 6% of children presented high anti-LPS 0111 IgM levels, and 4% presented high anti-LPS 0111 IgG levels. Although most of the patients showed a good anti-pneumococcal response, two patients presented anti-polysaccharide antibody deficiency. In conclusion, well-characterized immunodeficiencies were identified in three asthmatic children, which could clearly lead to infections, emphasizing the importance evaluating the humoral immunity.

O diagnóstico sorológico da cisticercose vem se destacando como uma fonte alternativa seguramente eficaz ao estudo da doença. Com a proposta de acessibilidade, devido primordialmente a relação custo, os testes ELISA são promissores à pesquisa sorológica de campo. O problema iminente está na utilização de extratos antigênicos capazes de gerar ao teste, parâmetros compatíveis para a pesquisa de anticorpos na população de baixa prevalência. Nesse contexto, o presente trabalho objetivou a avaliação de um teste ELISA com alto valor preditivo positivo (VPP) para a pesquisa de anticorpos anti-cisticercos de Taenia solium em inquéritos sorológicos na população geral. Os antígenos ensaiados foram proteína 18/14 kDa de líquido vesicular de T. crassiceps (18/14-Tcra), liquido vesicular de T. crassiceps (LV-Tcra) e total de cisticercos de T. solium (T-Tso), respectivamente estes constituíram os testes ELISA-18/14, ELISA-Tcra e ELISA-Tso. Foram ensaiadas 610 amostras de soro de indivíduos supostamente saudáveis e 20 amostras de soro de indivíduos com neurocisticercose confirmados por critérios clínicos e laboratoriais. Após os ensaios, o teste ELISA-18/14 apresentou sensibilidade e especificidade de 100% e mesmo em diferentes prováveis prevalências (0,1; 0,5; 1,0 e 5,0%) o VPP e o valor preditivo negativo (VPN) foram fixados também em 100%. A repetitividade das leituras do teste expressa em coeficiente de variação apresentou-se entre 16 e 18%. O teste ELISA-Tcra não demonstrou o mesmo desempenho, a especificidade foi calculada em 96,3% e o VPP variou entre 2,6 a 59,3% para prevalências de 0,1 a 5,0%; quanto à sensibilidade e VPN houve similaridade entre os resultados. O ELISATso apresentou resultados ainda menos expressivos, a especificidade foi calculada em 95,7% e o VPP variou entre 2,3 a 55% para as prevalências de 0,1 a 5,0%; essa redução na especificidade se dá pelo aumento do número de resultados falso-positivos no teste em conseqüência da expressão de proteínas de alto peso molecular. Através dos parâmetros avaliados fica notório o desempenho promissor do teste ELISA-18/14 na pesquisa de anticorpos anti-cisticercos de Taenia solium em inquéritos sorológicos da população geral. / The serum diagnosis of cyticercosis has been highlighted as an efficient alternative source in the study of the disease. With an accessability proposal , due to the expense, the ELISA´s tests are promising to the serum´s field research. This problem makes necessary the use of antigens extracts able to give the test, trusted and compatible parameters to the research of antibodies in the population of low prevalence. In this context, this current work stablished the evaluation of the ELISA´s test with a high predictive value positive(PPV) to the anti-cysticerci of Taenia solium antibodies research in a serum inquiry of the general population. The antigens tested were the 18/14 kDa protein of the vesicular liquid of T. crassiceps (18/14-Tcra), the vesicular liquid of T. crassiceps (LV-Tcra) and the total of T.solium (T-Tso). That constituted in the ELISA 18/14, ELISATcra and ELISA-Tso test respectively. There were 610 sample of serum were tested of healthy people and 20 samples of serum with confirmed neurocysticercosis by clinical and laboratorial criterias. After these tests, the ELISA´s test showed sensibility and specificity in 100% of the cases, even in different prevalences (0,1; 0,5; 1,0 and 5,0%) the VPP and the predictive value negative (VPN) were also fixed in 100%. The repetition of the test expressed in variation coefficient occurred between 16 and 18% of the cases. The ELISATcra didn´t show the same development, the specificity were calculation in 96,3% and the VPP wanted between 2,6 and 59,3% to the prevalences of 0,1 to 5,0%; there were similarities of the results of sensibility and VPP. The ELISA-Tso showed less important results the specificity was calculated in 95,7% and the VPP between 2,3 and 55,0% to the prevalences of 0,1 to 5,0%, this reduction of specificity is due to the increase of the number of false-positive results in the test because of the expression of proteins of high molecular weight. Through these parameters it´s clear the promising development of the ELISA-18/14 test, as been arbitrary in the studies of serology inquiry in the general population.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:41Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-15Bitstream added on 2014-06-13T20:43:38Z : No. of bitstreams: 1 alegranci_p_dr_arafcf.pdf: 707044 bytes, checksum: e6d30cd26abce772eacd24b870674935 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / esporotricose é uma micose subcutânea causada pelo fungo dimórfico Sporothrix schenckii, apresentando em geral, lesões cutâneas com proliferação via vasos linfáticos especialmente em pacientes imunocomprometidos, o que pode levar a doença sistêmica. Os macrófagos têm um papel importante na resposta imune inata contra diversos patógenos e dependendo do estimulo recebido podem ser polarizados em M1 e M2, os quais apresentam propriedades distintas, sendo que os primeiros possuem atividades proinflamatórias e o segundo anti-inflamatória. Desta forma, o objetivo do trabalho foi verificar a participação das populações de macrófagos M1 e M2 através da avaliação das citocinas IL-12, IL-23, IL-10 e TGF-β, da produção de NO e da atividade da enzima arginase, juntamente com a avaliação fenotípica dessas populações durante todo período experimental. Os resultados revelaram que as células do exsudato peritoneal dos camundongos dos grupos infectados quando desafiadas ex vivo com o exoantígeno e o extrato lipídico foram capazes de levar a produção de IL-12, IL-10 e TGF- β durante todo o período experimental. A produção de IL-23 ocorreu na 2ª e 4ª semana mediante o desafio com o exoantígeno e em todo período experimental com o EL. A fenotipagem revelou a presença de macrófagos tanto M1 quanto M2 durante todo o período experimental, com aumento da expressão do receptor CD206 (M2) no período tardio da infecção, o que explica a produção dos mediadores tanto inflamatórios (IL-12 e IL-23) quanto anti-inflamatórios (IL-10 e TGF- β) encontrados durante toda a cinética. Além das citocinas também foi observada a produção de óxido nítrico e a atividade da enzima arginase. Desta forma os resultados encontrados evidenciam a participação dos macrófagos M1 e M2 durante a esporotricose, uma vez que os M1... / Sporotrichosis is a subcutaneous mycosis caused by the dimorphic fungus, Sporothrix schenckii, generally presenting skin lesions with spread via lymphatic vessels, especially in immunocompromised patients, what can lead to systemic disease. Macrophages play an important role in innate immune response against various pathogens and, depending on the eliciting signals, macrophage can be polarized in M1 and M2, which presents distinct proprieties, so macrophage activation can be either proinflammatory or antiinflammatory. Thereby, the aim of this study was to evaluate the role of macrophage populations M1 and M2, through the evaluation of IL-12, IL-23, IL-10 and TGF-β, NO production and activity of the enzyme arginase, along with phenotypic evaluation of these populations throughout the experimental period. The results showed that peritoneal exudate cells of infected mice groups, when challenged ex vivo with exoantigen and lipid extract, were able to lead to production of IL-12, IL- 10 and TGF-β throughout the experimental period. The production of IL-23 occurred in the 2nd and 4th week through the challenge with exoantigen and throughout the experimental period with the lipid extract. Phenotyping revealed the presence of both macrophages, M1 and M2, throughout the experimental period, with increased expression of the receptor CD206 (M2) in the late infection period, which could explain the production of proinflammatory (IL-12 and IL-23) and anti-inflammatory (IL-10 and TGF-β) mediators found throughout the kinetic, and the nitric oxide production and activity of the arginase enzyme. M1 macrophages are important during sporotrichosis, they have microbicidal activity and are responsible for releasing inflammatory mediators in an attempt to eliminate the fungus Sporothrix schenckii, while the M2 found during... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Iracilda Zeppone Carlos / Banca: Carlos Alberto de Oliveira / Banca: Alexandre Batista Duarte / Banca: José Carlos Rebuglio Vellosa / Banca: José Maurício Sforcin / Resumo: esporotricose é uma micose subcutânea causada pelo fungo dimórfico Sporothrix schenckii, apresentando em geral, lesões cutâneas com proliferação via vasos linfáticos especialmente em pacientes imunocomprometidos, o que pode levar a doença sistêmica. Os macrófagos têm um papel importante na resposta imune inata contra diversos patógenos e dependendo do estimulo recebido podem ser polarizados em M1 e M2, os quais apresentam propriedades distintas, sendo que os primeiros possuem atividades proinflamatórias e o segundo anti-inflamatória. Desta forma, o objetivo do trabalho foi verificar a participação das populações de macrófagos M1 e M2 através da avaliação das citocinas IL-12, IL-23, IL-10 e TGF-β, da produção de NO e da atividade da enzima arginase, juntamente com a avaliação fenotípica dessas populações durante todo período experimental. Os resultados revelaram que as células do exsudato peritoneal dos camundongos dos grupos infectados quando desafiadas ex vivo com o exoantígeno e o extrato lipídico foram capazes de levar a produção de IL-12, IL-10 e TGF- β durante todo o período experimental. A produção de IL-23 ocorreu na 2ª e 4ª semana mediante o desafio com o exoantígeno e em todo período experimental com o EL. A fenotipagem revelou a presença de macrófagos tanto M1 quanto M2 durante todo o período experimental, com aumento da expressão do receptor CD206 (M2) no período tardio da infecção, o que explica a produção dos mediadores tanto inflamatórios (IL-12 e IL-23) quanto anti-inflamatórios (IL-10 e TGF- β) encontrados durante toda a cinética. Além das citocinas também foi observada a produção de óxido nítrico e a atividade da enzima arginase. Desta forma os resultados encontrados evidenciam a participação dos macrófagos M1 e M2 durante a esporotricose, uma vez que os M1... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Sporotrichosis is a subcutaneous mycosis caused by the dimorphic fungus, Sporothrix schenckii, generally presenting skin lesions with spread via lymphatic vessels, especially in immunocompromised patients, what can lead to systemic disease. Macrophages play an important role in innate immune response against various pathogens and, depending on the eliciting signals, macrophage can be polarized in M1 and M2, which presents distinct proprieties, so macrophage activation can be either proinflammatory or antiinflammatory. Thereby, the aim of this study was to evaluate the role of macrophage populations M1 and M2, through the evaluation of IL-12, IL-23, IL-10 and TGF-β, NO production and activity of the enzyme arginase, along with phenotypic evaluation of these populations throughout the experimental period. The results showed that peritoneal exudate cells of infected mice groups, when challenged ex vivo with exoantigen and lipid extract, were able to lead to production of IL-12, IL- 10 and TGF-β throughout the experimental period. The production of IL-23 occurred in the 2nd and 4th week through the challenge with exoantigen and throughout the experimental period with the lipid extract. Phenotyping revealed the presence of both macrophages, M1 and M2, throughout the experimental period, with increased expression of the receptor CD206 (M2) in the late infection period, which could explain the production of proinflammatory (IL-12 and IL-23) and anti-inflammatory (IL-10 and TGF-β) mediators found throughout the kinetic, and the nitric oxide production and activity of the arginase enzyme. M1 macrophages are important during sporotrichosis, they have microbicidal activity and are responsible for releasing inflammatory mediators in an attempt to eliminate the fungus Sporothrix schenckii, while the M2 found during... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

O diagnóstico sorológico da cisticercose vem se destacando como uma fonte alternativa seguramente eficaz ao estudo da doença. Com a proposta de acessibilidade, devido primordialmente a relação custo, os testes ELISA são promissores à pesquisa sorológica de campo. O problema iminente está na utilização de extratos antigênicos capazes de gerar ao teste, parâmetros compatíveis para a pesquisa de anticorpos na população de baixa prevalência. Nesse contexto, o presente trabalho objetivou a avaliação de um teste ELISA com alto valor preditivo positivo (VPP) para a pesquisa de anticorpos anti-cisticercos de Taenia solium em inquéritos sorológicos na população geral. Os antígenos ensaiados foram proteína 18/14 kDa de líquido vesicular de T. crassiceps (18/14-Tcra), liquido vesicular de T. crassiceps (LV-Tcra) e total de cisticercos de T. solium (T-Tso), respectivamente estes constituíram os testes ELISA-18/14, ELISA-Tcra e ELISA-Tso. Foram ensaiadas 610 amostras de soro de indivíduos supostamente saudáveis e 20 amostras de soro de indivíduos com neurocisticercose confirmados por critérios clínicos e laboratoriais. Após os ensaios, o teste ELISA-18/14 apresentou sensibilidade e especificidade de 100% e mesmo em diferentes prováveis prevalências (0,1; 0,5; 1,0 e 5,0%) o VPP e o valor preditivo negativo (VPN) foram fixados também em 100%. A repetitividade das leituras do teste expressa em coeficiente de variação apresentou-se entre 16 e 18%. O teste ELISA-Tcra não demonstrou o mesmo desempenho, a especificidade foi calculada em 96,3% e o VPP variou entre 2,6 a 59,3% para prevalências de 0,1 a 5,0%; quanto à sensibilidade e VPN houve similaridade entre os resultados. O ELISATso apresentou resultados ainda menos expressivos, a especificidade foi calculada em 95,7% e o VPP variou entre 2,3 a 55% para as prevalências de 0,1 a 5,0%; essa redução na especificidade se dá pelo aumento do número de resultados falso-positivos no teste em conseqüência da expressão de proteínas de alto peso molecular. Através dos parâmetros avaliados fica notório o desempenho promissor do teste ELISA-18/14 na pesquisa de anticorpos anti-cisticercos de Taenia solium em inquéritos sorológicos da população geral. / The serum diagnosis of cyticercosis has been highlighted as an efficient alternative source in the study of the disease. With an accessability proposal , due to the expense, the ELISA´s tests are promising to the serum´s field research. This problem makes necessary the use of antigens extracts able to give the test, trusted and compatible parameters to the research of antibodies in the population of low prevalence. In this context, this current work stablished the evaluation of the ELISA´s test with a high predictive value positive(PPV) to the anti-cysticerci of Taenia solium antibodies research in a serum inquiry of the general population. The antigens tested were the 18/14 kDa protein of the vesicular liquid of T. crassiceps (18/14-Tcra), the vesicular liquid of T. crassiceps (LV-Tcra) and the total of T.solium (T-Tso). That constituted in the ELISA 18/14, ELISATcra and ELISA-Tso test respectively. There were 610 sample of serum were tested of healthy people and 20 samples of serum with confirmed neurocysticercosis by clinical and laboratorial criterias. After these tests, the ELISA´s test showed sensibility and specificity in 100% of the cases, even in different prevalences (0,1; 0,5; 1,0 and 5,0%) the VPP and the predictive value negative (VPN) were also fixed in 100%. The repetition of the test expressed in variation coefficient occurred between 16 and 18% of the cases. The ELISATcra didn´t show the same development, the specificity were calculation in 96,3% and the VPP wanted between 2,6 and 59,3% to the prevalences of 0,1 to 5,0%; there were similarities of the results of sensibility and VPP. The ELISA-Tso showed less important results the specificity was calculated in 95,7% and the VPP between 2,3 and 55,0% to the prevalences of 0,1 to 5,0%, this reduction of specificity is due to the increase of the number of false-positive results in the test because of the expression of proteins of high molecular weight. Through these parameters it´s clear the promising development of the ELISA-18/14 test, as been arbitrary in the studies of serology inquiry in the general population.

O objetivo deste trabalho foi avaliar a infecção pelo vírus da hepatite C (HCV) em indivíduos de Londrina e regiões circunvizinhas. Amostras de doadores de sangue e de indivíduos infectados pelo vírus da imunodeficiência humana (HIV) foram analisadas pela metodologia de enzimaimunoensaio de micropartículas (MEIA), obtendo-se a freqüência de positividade para anticorpos anti-HCV de 0,8% e de 20,2%, respectivamente. Um conjunto de 185 amostras soropositivas para anti-HCV pelo MEIA foi submetido a outros testes laboratoriais, para avaliação da correlação entre os diferentes métodos empregados. Apenas 79% destas amostras apresentaram resultado reagente em um segundo teste imunoenzimático (ELISA) empregado, sendo que a maior proporção de resultados discordantes ocorreu entre doadores de sangue. O mesmo ocorreu na pesquisa do RNA viral, onde 111 (67%) das 166 amostras analisadas apresentaram resultado positivo, sendo que a positividade foi maior entre indivíduos HIV soropositivos e pacientes com hepatite crônica do que entre os doadores de sangue. Quinze amostras foram submetidas ao immunoblot (IB), tendo-se obtido resultados positivos neste teste apenas nas amostras reagentes nos dois métodos imunoenzimáticos utilizados. Também pudemos verificar um grande número de amostras com resultado indeterminado no IB, inclusive entre amostras que eram negativas no segundo teste sorológico. Embora a amostragem fosse pequena, com apenas 61 amostras analisadas, a genotipagem do HCV revelou que os genótipos circulantes em nossa região são o tipo 1 (77,1%), seguido do tipo 3 (21,3%) e o tipo 2 (1,6%). Finalmente, avaliamos alguns fatores de risco associados à infecção pelo HCV, sendo que o principal fator de risco encontrado em indivíduos co-infectados pelo HIV/HCV foi o uso de drogas injetáveis, e em indivíduos sem infecção pelo HIV foi a transfusão sangüínea. O presente estudo contribuiu para a avaliação do perfil da infecção pelo HCV em indivíduos da nossa população, permitindo inclusive verificar a distribuição dos genótipos do HCV nesta região. / The objective of this work was to evaluate hepatitis C virus (HCV) infection in individuals of Londrina, Paraná State, Brazil, and adjacent areas. Samples of blood donors and individuals infected with Human Immunodeficiency virus (HIV) were analyzed by microparticle enzyme immunoassay (MEIA). Anti-HCV antibody frequency was 0.8% in blood donors, and 20.2% in HIV patients. A group of 185 anti-HCV positive samples by MEIA was submitted to other laboratorial tests, in order to access the correlation among different methods used. Only 79% of samples were reactive by a second antibody-screening test (enzime-linked immunosorbent assay - ELISA), and a great proportion of discordant results was verified among blood donors. The same happened at HCV-RNA detection by polymerase chain reaction (PCR), where 111/166 (67%) of samples showed positive results, which was greater among HIV positive individuals and patients with chronic hepatitis than among blood donors. Only 15 samples were submitted to immunoblot (IB): positive results were obtained only at samples which were also reactive by the two antibody-screening tests used. We could also verify a great number of anti-HCV indeterminate results by IB, which also happened among samples tested negative by the second serologic assay. Although the small number of samples used in genotype determination of HCV, only 61, our data revealed that the circulating genotypes in our region are type 1 (77.1%), followed by type 3 (21.3%) and type 2 (1.6%). Finally, we evaluated some risk factors associated to HCV infection, and we found that intravenous drug use was the most common risk factor among patients HIV/HCV co-infected, while blood transfusion was the most important risk factor in the group without HIV infection. The present study contributed to the evaluation of HCV infection in our population, so that the distribution of HCV genotypes in the region could be accessed.

Introdução: A síndrome de Wiskott-Aldrich (SWA) é uma imunodeficiência primária rara ligada ao X caracterizada pela presença de eczema, trombocitopenia com ou sem microplaquetas e infecções recorrentes. Mais de 300 tipos de mutações associadas com o gene WAS foram descritas, incluindo oito hotspots. A diversidade destas mutações pode levar ao aparecimento de grande variabilidade nas apresentações clínicas, o que dificulta a previsão da evolução da doença baseada apenas nas manifestações iniciais. Além disso, há escassez de informações sobre a população brasileira. Objetivos: Descrever as características clínicas e genéticas de pacientes brasileiros com diagnóstico clínico de SWA. Resultados: Dezoito pacientes foram avaliados. Dezessete pacientes apresentaram os primeiros sintomas no primeiro ano de idade. Idade média para o início dos sintomas foi de 4,5 meses e média de tempo para o diagnóstico foi de 31,2 meses. Três pacientes (16,3%) foram diagnosticados após 10 anos de início dos sintomas. Dezessete pacientes (94,5%) apresentaram eczema. Os níveis plaquetários variaram entre 1.000 e 65.000/mm3 e nove pacientes (50%) apresentaram microtrombocitopenia. Dois pacientes (11,1%) apresentaram macroplaquetas. Dezesseis pacientes (88,9%) tiveram eventos hemorrágicos ao longo de suas vidas, especialmente sangramentos intestinais, urinários e petéquias. Em relação às manifestações infecciosas, otite média aguda foi a infecção mais frequente, relatada por 13 pacientes (72,2%), seguido por infecções cutâneas (66,7%). Três pacientes(16,6%) apresentaram manifestações autoimunes, incluindo nefropatia por IgA, trombose isquêmica e vasculite. A maioria dos pacientes (55,5%) não apresentou alterações nos níveis IgG. Níveis elevados de IgA só foram observados em 4 pacientes (23,5%). Redução dos níveis IgM foi observada em 7 pacientes (38,9%). Os pacientes foram classificados de acordo com um escore clínico previamente descrito. A maioria apresentou pontuações de 3 (33,3%) e 4 (27,8%). Quatro pacientes (22,2%) foram classificados com pontuação 5 devido às manifestações autoimunes ou neoplasias. Em relação à análise genética, foram encontradas mutações em 10 pacientes (55,5%). Apenas três das mutações encontradas neste estudo foram descritas previamente. Conclusão: As características clínicas dos pacientes brasileiros foram semelhantes às características observadas em outras populações, porém a análise genética revelou mutações ainda não descritas. / Introduction: Wiskott-Aldrich syndrome (WAS) is a rare X-linked primary immunodeficiency characterized by eczema, thrombocytopenia with or no small sized platelets and recurrent infections. More than 300 types of mutations associated with the WAS gene have been described, including eight hotspots. The diversity of these mutations can lead to the appearance of great variation in the clinical presentations, which makes it difficult to predict the evolution of the disease based only on the initial manifestations. Furthermore, there is paucity of information on WAS from the Brazilian population. Objectives: To describe the clinical and genetic characteristics of Brazilian patients with clinical diagnose of WAS. Results: Eighteen patients were evaluated. Seventeen patients presented first symptoms within first year of age. Mean age for initiating symptoms was 4,5 months and mean time for diagnosis was 31,2 months. Three patients (16.6%) were diagnosed after 10 years of initiating symptoms. Seventeen patients (94.5%) had eczema. The platelet levels ranged from 1,000 to 65,000/mm3 and nine patients (50%) presented microthrombocytopenia. Two patients (11.1%) had macroplatelets. Sixteen patients (88.9%) had hemorrhagic events throughout their lives, especially intestinal, urinary and petechial bleedings. In relation to infectious manifestations, acute media otitis was the most frequent infection, reported by 13 patients (72.2%), followed by skin infections (66.7%). Three patients (16.6%) had autoimmune manifestations including IgA nephropathy,ischemic stroke and vasculitis. Most patients (55.5%) did not present alterations in IgG levels. Twelve patients (70.6%) did not present alterations in IgA levels and elevated levels of IgA were only observed in 4 patients (23.5%). Reduction of IgM levels was observed in 7 patients (38.9%). Patients were classified according to a previously described clinical score. Most patients presented scores of 3 (33.3%) and 4 (27.8%). Four patients (22.2%) were classified with score 5 due to autoimmune or neoplastic manifestations. Regarding genetic analysis, mutations were found in 10 patients (55.5%). Only three of mutations found in this study were previously described. Conclusion: Clinical characteristics of Brazilian patients were similar to medical features observed in other populations, however genetic analysis showed undescribed mutations yet

As gastroenterites ainda são um importante problema de saúde pública nos países em desenvolvimento e as Escherichia colí são as principais causas de diarréias. Adultos brasileiros apresentam anticorpos reativos com E. colí enteropatogênica (EPEC), que apresenta muitas semelhanças com E. colí enterohemorágica (EHEC) e pode ser responsável por complicações como a síndrome hemolítica urêmica e a colite hemorrágica. Ambas as bactérias apresentam um mecanismo patogênico comum: a formação da lesão \"attaching and effacing\" nos microvilus dos enterócitos, mediadas por fatores de virulência, como Intimina, Tir e as Esps. Os lipopolissacarídeos (LPS) são componentes da membrana externa das bactérias gram-negativas, incluindo E. colí. A infecção por EHEC 0157 resulta na produção de anticorpos séricos antiLPS 0157, que geralmente são indicativos de infecção recente. Neste trabalho, nós investigamos a presença de anticorpos séricos IgG e IgM anti-EHEC 0157:H7, EHEC 0111:H- e EPEC 0111:H- em adultos brasileiros, da Grande São Paulo. Amostras de soro foram coletadas de 200 adultos saudáveis, doadores de sangue, e um pool foi formado com 100 amostras. Anticorpos foram determinados em 100 amostras individuais por ELlSA com bactérias íntegras e anti-LPS para a determinação de anticorpos específicos anti-LPS 0111 e 0157 com o \"pool\" de soro como controle, em relação às concentrações de IgG e IgM totais determinadas simultaneamente. Os resultados foram submetidos a análise estatística. O repertório de anticorpos IgG e IgM para as três bactérias foi investigado por \"immunoblotting\" (18). A presença de anticorpos anti-bacterianos e anti-LPS foi confirmada. Existe uma correlação positiva entre os anticorpos reativos com as três bactérias, e entre os anticorpos anti-bactéria e anti-LPS. As concentrações de IgM anti-LPSs foi mais alta que IgG, o que está de acordo com o mecanismo imune esperado para um antígeno timo-independente. As concentrações de anti-LPS 0157 foram altas, apesar da baixa freqüência da bactéria 0157 em nosso meio. Os ensaios de 18 mostraram anticorpos reativos com bandas antigênicas sugestivas de fatores de virulência. A origem destes em nossa população poderia ser o contato com bactérias da microbiota ou do ambiente, de animais ou alimentos. Alternativamente, nossa população pode estar exposta à EHEC mais freqüentemente do que imaginado até agora. / Gastroenteritis is still an important public health problem in developing countries and Escherichia coli are frequent agents of diarrhea. Brazilian adults present antibodies reactive with the principal virulence factors of enteropathogenic E. coli (EPEC), which have many genetic and antigenic similarities with enterohemorrhagic E. coli (EHEC), that may be responsible for complications following diarrhea, as haemolytic uremic syndrome (HUS) and hemorrhagic colitis (HC). Both bacteria present a common pathogenic mechanism, with the formation of “attaching and effacing" lesion in microvilis’ enterocytes, mediated by virulence factors codified by the patogenicity island LEE, as Intimin, Tir e Esps. Lipopolysaccharides (LPS) are components of outer membrane and important virulence factors of Gram-negative bacteria including E. coli. The infection with EHEC O157 results in the production of serum antibodies to the O157 LPS antigens, and usually they are indicators of recent infection. In this work we investigated IgG and IgM serum antibodies reactive with EHEC O157:H7, EHEC O111:H- and EPEC O111:H- antigens in healthy Brazilian adults, living in São Paulo. Serum samples were collected from 200 healthy adults (blood donors) and a pool was formed with 100 samples. The antibody levels were determined by ELISA for 100 individual serum samples by means of a whole cell ELISA with the three bacteria and an anti-LPS ELISA for the determination of the concentrations of specific antibodies anti-LPS O111 and O157, using the serum pool as control, in relation to the total IgG and IgM concentrations determined simultaneously. The results were submitted to statistical analysis. The repertoire of IgG and IgM antibodies to the three bacteria was investigated by immunoblotting (IB). The presence of anti-bacterial and anti-LPS seric antibodies was confirmed. There is a positive correlation between the titers of antibodies reactive with the three bacteria and between anti-bacteria and anti-LPS antibodies. The concentrations of IgM anti-LPSs were significantly higher than IgG, which is in accordance with the immune mechanism expected to a thymus-independent antigen. Surprisingly the concentrations of anti-LPS O157 were high taking into account the low frequency of O157 bacteria isolation in our country. The IB assays showed the presence of antibodies, mainly IgG, reactive with many antigenic bands suggestive of virulence factors. The origin of anti-EHEC antibodies in our population could be the contact with microbiota or environment bacteria, and animal or human E. coli strains, pathogenic or not. Alternatively, our people may be exposed to EHEC more frequently than previously thought.