Como a imunoproteção na Paracoccidioidomicose (PCM) é principalmente mediada por células T, investigamos o impacto da deficiência de CD28, molécula co-estimulatória de linfócitos T, na gravidade da infecção primária e secundária pelo Paracoccidioides brasiliensis. Quando comparados a camundongos C57Bl/6 normais (WT), camundongos CD28-deficientes (CD28KO) apresentaram infecção mais grave associada à produção diminuída de anticorpos e citocinas. Além disso, a pré-imunização de animais deficientes e normais resultou em imunoproteção equivalente. Inesperadamente, a sobrevida de animais CD28KO foi significativamente maior que a dos WT, apesar da sua elevada carga fúngica tecidual. Em conclusão, nosso trabalho mostrou que a deficiência de CD28 resulta em PCM mais grave, porém não letal, associada a resposta imune deficiente. Além disso, verificamos que carga fúngica elevada, na ausência da imunidade adaptativa efetora, não ocasiona diminuição de sobrevida, revelando que a resposta imune na PCM pode tanto proteger como ser deletéria aos hospedeiros. / As immunoprotection in Paracoccidioidomycosis (PCM) is mainly mediated by T cells, and CD28 is a costimulatory molecule for T lymphocytes, we investigated the influence of CD28 deficiency in primary and secondary PCM. Compared with normal C57BL/6 mice, CD28-deficient (CD28KO) mice developed a more severe infection associated with impaired antibody and cytokine production. In addition, CD28KO and WT mice previously immunized by the s.c. route developed equivalent immunoprotection when challenged by the pulmonary route. Interestingly, CD28KO mice presented increased mean survival time despite their elevated fungal loads in the lungs. In conclusion, our work showed, for the first time, that CD28-deficiency results in more severe, but not overwhelming, PCM. Furthermore, in the absence of effector adaptative immunity, elevated fungal loads do not cause lethal infections, revealing the protective and deleterious effects of immune responses to Paracoccidioides brasiliensis infected hosts.

Como a imunoproteção na Paracoccidioidomicose (PCM) é principalmente mediada por células T, investigamos o impacto da deficiência de CD28, molécula co-estimulatória de linfócitos T, na gravidade da infecção primária e secundária pelo Paracoccidioides brasiliensis. Quando comparados a camundongos C57Bl/6 normais (WT), camundongos CD28-deficientes (CD28KO) apresentaram infecção mais grave associada à produção diminuída de anticorpos e citocinas. Além disso, a pré-imunização de animais deficientes e normais resultou em imunoproteção equivalente. Inesperadamente, a sobrevida de animais CD28KO foi significativamente maior que a dos WT, apesar da sua elevada carga fúngica tecidual. Em conclusão, nosso trabalho mostrou que a deficiência de CD28 resulta em PCM mais grave, porém não letal, associada a resposta imune deficiente. Além disso, verificamos que carga fúngica elevada, na ausência da imunidade adaptativa efetora, não ocasiona diminuição de sobrevida, revelando que a resposta imune na PCM pode tanto proteger como ser deletéria aos hospedeiros. / As immunoprotection in Paracoccidioidomycosis (PCM) is mainly mediated by T cells, and CD28 is a costimulatory molecule for T lymphocytes, we investigated the influence of CD28 deficiency in primary and secondary PCM. Compared with normal C57BL/6 mice, CD28-deficient (CD28KO) mice developed a more severe infection associated with impaired antibody and cytokine production. In addition, CD28KO and WT mice previously immunized by the s.c. route developed equivalent immunoprotection when challenged by the pulmonary route. Interestingly, CD28KO mice presented increased mean survival time despite their elevated fungal loads in the lungs. In conclusion, our work showed, for the first time, that CD28-deficiency results in more severe, but not overwhelming, PCM. Furthermore, in the absence of effector adaptative immunity, elevated fungal loads do not cause lethal infections, revealing the protective and deleterious effects of immune responses to Paracoccidioides brasiliensis infected hosts.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:38:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_samuel_felix.pdf: 602038 bytes, checksum: eceae88e84666382061d981461317748 (MD5) Previous issue date: 2009-11-27 / Leptospirosis is a disease caused by pathogenic spirochetes of the Leptospira genus. It is the most widespread zoonosis in the world, representing a veterinarian and public health problem especially in developing countries. From a veterinarian point of view, leptospirosis is important both as a medical problem, mainly in dogs, which can suffer the ailment as well as transmit it, and as an economic problem, mainly in cattle and pigs, where it causes direct production and reproductive losses. Vaccination of these animals is largely applied, however protection is limited. Conventional vaccines confer protection restricted to the sorovars present in the preparation and fail to protect against renal infection, allowing seemingly healthy animals to shed bacteria, and produce short term protection requiring frequent revaccination. The vaccines are also available for humans, but are used only in a few countries such as Cuba and China. The goal of this work was to test the immune protective potential of recombinant Leptospira interrogans proteins produced in Escherichia coli, using the hamster model. Twenty recombinant vaccine candidates were produced and inoculated in hamsters in two doses, fourteen days apart. Two weeks after the second dose all animals were challenged with 100 leptospires (~2xLD50). After the challenge, animals were observed daily for disease. Of all the proteins tested, seven protected animals to some extent, ranging from 16.7% to 50%. Two proteins presented promising results, and were recommended for further studies, as potential leptospira subunit vaccine candidates. / A leptospirose é uma doença causada por espiroquetas do gênero Leptospira. Ela é a zoonose mais difundida no mundo, sendo um problema de saúde pública e veterinária, principalmente em países em desenvolvimento. Na área de veterinária, a leptospirose é preocupante do ponto de vista clínico e econômico, devido ao risco à saúde pública, perdas reprodutivas e óbitos. A vacinação animal é amplamente realizada como medida de prevenção da enfermidade. Entretanto, a proteção conferida pelas vacinas convencionais é limitada aos sorovares nelas presentes, não evitando o estado portador, mantendo assim o potencial transmissor desses animais, para humanos e outros animais. Por outro lado, vacinas para humanos estão disponíveis e empregadas em alguns países como a China e Cuba. O objetivo deste trabalho foi avaliar, em modelo animal, proteínas recombinantes de Leptospira interrogans quanto ao seu potencial imunoprotetor. Para tanto, vinte proteínas foram expressas em Escherichia coli e, após a adsorção em hidróxido de alumínio, foram administradas em hamsters através da via intramuscular, em duas doses, com intervalo de 14 dias. Duas semanas após a segunda dose realizou-se o desafio dos animais com 100 leptospiras (~2xDL50). Após o desafio, os animais foram observados diariamente para o aparecimento de sinais clínicos da enfermidade e óbitos, e após 24 dias procedeu-se a eutanásia e necropsia dos animais sobreviventes. Como resultado da avaliação realizada, sete proteínas conferiram proteção ao modelo animal que variou de 16,7% a 50%. Das proteínas que apresentaram maiores níveis de proteção, duas foram indicadas como possíveis candidatas à vacina recombinante contra leptospirose.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:37:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_samuel_felix.pdf: 483417 bytes, checksum: 782ad0a9939b35b83a255622221d018c (MD5) Previous issue date: 2013-02-01 / Leptospirosis is a disease caused by pathogenic spirochetes of the Leptospira genus. This zoonosis of worldwide distribution causes veterinarian and public health issues, especially in underdeveloped and developing countries with tropical and subtropical climates. In veterinary medicine, leptospirosis is important both as a clinical problem, causing illness in domestic animals, and an economic problem, causing productive and reproductive losses in commercial herds. Vaccination of these animals is applied, however protection conferred by these conventional vaccines is limited, and the carrier status is not always avoided. Recombinant outer membrane proteins seem to be the most promising antigens to replace the traditional bacterins (whole cell inactivated preparations), but thus far none of the tested proteins have turned satisfactory results. The goal of this study was to assess recombinant antigens and vaccine preparations, regarding their capability of producing protective immunity in hamsters, against lethal leptospirosis. Moreover, heterologous protection was sought, and assessed. The prevalence anti-Leptospira antibodies in stray dogs from the city of Pelotas was assessed using serogroups Icterohaemorrhagie and Canicola antigens. Several experiments were conducted to assess the protective potential of previously described leptospiral proteins. Twenty seven proteins were used to immunize hamsters which were then challenged with virulent Leptospira. Furthermore, leading vaccine candidates, LipL32 and LigB, were assessed regarding their protective potential when co-administered with traditional bacterins in previously established heterologous challenge experiments. A total of 28.96% of the animals tested were seropositive for the disease in the prevalence assay. Of the 27 antigens tried, two were shown to have some protective potential. Although no protection was demonstrated in the coadministration experiment, leptospiral bacterins seem to have some immunestimulating activity. / A leptospirose é uma doença causada por espiroquetas do gênero Leptospira. É uma zoonose de ampla distribuição geográfica, sendo um problema de saúde pública e veterinária, principalmente em países subdesenvolvidos e em desenvolvimento de clima tropical e subtropical. Em medicina veterinária, a leptospirose é uma doença importante tanto para a clínica quanto para a produção, devido ao risco à saúde pública, perdas reprodutivas e óbitos. A vacinação animal é realizada como medida de prevenção da enfermidade, entretanto, a proteção conferida pelas vacinas comerciais é limitada e não evita a condição de portador. Os antígenos protéicos da membrana externa parecem ser a melhor alternativa para substituir as vacinas atualmente disponíveis, porém, após diversos estudos, nenhum apresentou resultados satisfatórios. O objetivo deste trabalho foi avaliar antígenos recombinantes e preparações vacinais, capazes de conferir proteção de amplo espectro, em hamsters, contra leptospirose letal. A prevalência da leptospirose em cães da cidade de Pelotas foi aferida em um ensaio de diagnóstico sorológico usando como antígeno cepas dos sorogrupos Icterohaemorrhagie e Canicola. Em uma série de experimentos de prospecção de alvos, grupos de hamsters foram vacinados com diferentes proteínas recombinantes e posteriormente desafiados com cepa virulenta de Leptospira sp. Após o desenvolvimento de modelo para avaliação de proteção contra desafios heterólogos, as proteínas rLipL32 e rLigBNI foram avaliadas quando coadministradas com bacterinas (preparações de células inteiras inativadas por calor) em hamsters, sofrendo posterior desafio com quatro cepas de sorogrupos diferentes. Uma soroprevalência de 28,96% foi encontrada nos ensaios de prevalência. Duas de 27 proteínas recombinantes triadas foram identificadas como possíveis imunógenos. Apesar da falta de proteção demonstrada no experimento de coadministração de proteína e bacterina contra desafio homólogo ou heterólogo, a bacterina parece ter ação imunoestimulante.