No description available.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:12Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2003Bitstream added on 2014-06-13T19:05:30Z : No. of bitstreams: 1 monreal_acd_dr_botfmvz.pdf: 1335046 bytes, checksum: 3c69eade80331bf5cd53339d7c048bf3 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Os caprinos foram os primeiros animais a serem domesticados pelo homen. Desses animais produz-se carne, leite, seus derivados, pele e pêlos. O fotoperíodo artificial tem sido utilizado apenas na sincronização de estros em caprinos. Atualmente, os caprinos ganharam importância mundial pela produção de animais transgênicos produzidos por FIV (fertilização“in vitro”). As concentrações plasmáticas de progesterona, cortisol e melatonina, durante a superestimulação ovariana na estação reprodutiva e anestro estacional ainda não foram avaliadas, bem como a influência do fotoperíodo artificial na melhora da produção de oócitos. Sendo assim, os objetivos deste estudo foram avaliar se o fotoperíodo artificial empregado em cabras (120 luxes/45 dias/20 h), melhora a produção e desenvolvimento dos oócitos caprinos no período de estação reprodutiva e anestro estacional, verificar as concentrações plasmáticas de progesterona, cortisol e melatonina durante a superestimulação ovariana e quatro dias após o processo cirúrgico para colheita dos oócitos por laparotomia. Foram utilizadas 31 cabras Alpinas, distribuídas em cinco grupos, avaliando o fotoperíodo natural e artificial, sêmen fresco e congelado e heparina (200μg/mL) na capacitação espermática. Foram obtidos 720 oócitos e sete blastocistos (cinco do G3- fotoperíodo natural e dois no G2 –fotoperíodo artificial, ambos durante o anestro estacional)... . / Goats were the first animals to be domesticated by man. From these animals meat, milk, its byproducts, skin and fur are obtained. Artificial photoperiod has been used only in the synchronization of estrus in goats. Currently, goats have gained world-wide importance for the production of transgenic animals obtained by IVF (in-vitro fertilization). Plasmatic concentrations of progesterone, cortisol and melatonin, during ovarian superstimulation in the reproductive season and seasonal anestrus, or the influence of artificial photoperiod in the improvement of the production of oocytes have not yet been evaluated. Thus, the objectives of this study were to evaluate if the artificial photoperiod used in goats (120 lux/45 days/20 h), improves the production and development of goat oocytes in the reproductive seasonal period and anestrus, to verify the plasmatic concentrations of progesterone, cortisol and melatonin during ovarian superstimulation and four days after the surgical process for removal of oocytes for laparotomy. 31 Alpine goats were used, distributed into five groups, evaluating natural photoperiod and artificial, fresh and frozen semen and heparin (200æg/mL) in sperm qualification. 720 oocytes and seven blastocysts were obtained (five from the natural G3- photoperiod and two in the G2 artificial photoperiod, both during seasonal anestrus). There was no statistical difference among the groups. The plasmatic concentrations of progesterone varied during ovarian superstimulation (p<0,05) during the whole period studied, in the season and in the anestrus season. There were statistical differences in the plasmatic concentrations of cortisol (p<0,05), in the reproductive season and in the anestrus season, however the G2 (artificial photoperiod) presented intermediate hormone concentrations of cortisol between the control group and the G3 (natural photoperiod + surgery)... (Complete abstract, click electronic address below).

Este experimento teve como objetivo principal o estudo da propagação vegetativa de mudas de Ocotea porosa e Ocotea odorífera através da micropropagação. O isolamento e a transferência para as demais etapas in vitro foram feitas em câmara de fluxo laminar e os explantes foram mantidos em sala de incubação, com temperatura de 25±2°C, fotoperíodo de 16 horas e luminosidade de 2000 lux. 0 meio de cultura utilizado foi o de MURASHIGE e SKOOG (MS). Segmentos nodais de imbuia e sassafrás com aproximadamente 2 cm de comprimento, obtidos de mudas de 2 anos de idade foram desinfestados em soluções de hipoclorito de sódio (5% de cloro livre) cujas concentrações variaram de 5 a 15% e cultivados em meio MS. A oxidação dos explantes foi controlada utilizando-se solução de ácido ascórbico com concentrações de 0,05 e 0,1 g/l e adição de 0,01 g/l de polivinilpirrolidone ao meio de cultura. Após 4 semanas, as brotações obtidas foram transferidas para meio de multiplicação, onde foram testadas diversas concentrações de BAP e AIB e suas interações em meio MS. Para a obtenção do alongamento das brotações utilizou-se meio MS com BAP (1,62 e 3,23 uM) . Na fase de enraizamento foram testados o meio MS e o meio MS/2 (com metade da concentração de sais) com diferentes concentrações de AIB (2,46 e 4,90 uM) . O melhor tratamento para a assepsia dos explantes de imbuia (73,3% de sobrevivência) foi o que utilizou hipoclorito de sódio a 10% durante 10 minutos, para o sassafrás (72% de sobrevivência) o melhor tratamento foi o que utilizou hipoclorito de sódio 15% por 10 minutos. O controle da oxidação foi obtido utilizando-se 0,1 g/l de ácido ascórbico e adicionando-se polivinilpirrolidone ao meio de cultura para ambas as espécies. A maior taxa de multiplicação obtida para a imbuia foi com a adição de 3,23 uM de BAP e para o sassafrás com a adição de 9,69 uM de BAP. 0 melhor tratamento para o alongamento das brotações de imbuia foi o que utilizou BAP a 1,62 uM; as brotações de sassafrás não tiveram nenhum incremento em sua altura em todos os tratamentos testados. 0 meio MS/2 proporcionou maior índice de enraizamento para a Ocotea porosa, sendo a concentração de 2,46 uM de AIB em meio MS/2 o melhor tratamento, com 64% de enraizamento das brotações. A Ocotea pretiosa não formou nenhuma raiz em quaisquer tratamentos.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-02-19Bitstream added on 2014-06-13T18:58:54Z : No. of bitstreams: 1 gottardi_fp_me_jabo.pdf: 551122 bytes, checksum: 296df34d2ff79346b4bafb7a4da03dc9 (MD5) / Facta / Butirolactona I (Bl-I) pode ser utilizada em sistemas PIV de embriões para bloquear a meiose durante o transporte de oócitos obtidos de OPU. O objetivo deste estudo foi verificar a concentração de BL-I eficaz durante o transporte de oócito bovinos. Oócitos (n=4581) foram pré-maturados em criotubos contendo meio com 10 ou 100μM de Bl-I, acrescido ou não de HEPES (20mM), no período de 5 horas em estufa portátil Minitub e transferidos para incubadora com atmosfera e temperatura controlada, permanecendo por mais 19 horas. Em seguida foram maturados a 38,5ºC em atmosfera de 5% de CO2 durante 20 horas, fecundados e os zigotos cultivados. Foram avaliadas a maturação nuclear e a maturação citoplasmática após pré-MIV e MIV (24h.-controles e 20h.-tratados). A fertilização foi avaliada após 18 h. da inseminação. Os embriões foram analisados quanto ao seu desenvolvimento e qualidade. Os dados foram avaliados por ANOVA (p<o,o5). A maioria dos oócitos tratados permaneceu em GV e após MIV houve a reversão do bloqueio, mas a eficiência foi menor com 10 μM de Bl-I. A maturação citoplasmática foi beneficiada de acordo a distribuição das mitocôndrias, no entanto, quanto à distribuição dos grânulos corticais apenas o bloqueio realizado com 100 μM Bl-I permitiu uma maturação. A taxa de fecundação foi prejudicada pelo tempo de transporte, mesmo nos oócitos tratados. A ocorrência de polispermia foi correlacionada à porcentagem de oócitos com grânulos corticais imaturos. O desenvolvimento embrionário sofreu um atraso pela utilização de 100μM de Bl-I, porém boa porcentagem de blastocistos de qualidade foi atingida. Assim, o bloqueio com 100μM de Bl-I possui efeitos benéficos na PIV de embriões de oócitos transportados por longo tempo. / Butirolactone-I (Bl-I), can be used in systems for in vitro production (IVP) of embryos to block meiosis during the transport of oocytes from OPU. The objective of this study is to assess the concentration of BL-I more efficient during the transport of bovine oocytes. Oocytes (n = 4581) were prematured in criotubes containing medium with 10 or 100 μM of Bl-I with or without HEPES (20mM) in a portable incubator at 38,5°C without CO2 equilibration in the first 5 h, being later transferred to a incubator at 38.5°C and 5% CO2 in humidified air during the 19 hours remaining. Following were matured, fertilized and the zygotes cultured at 38.5°C and 5% CO2. Were evaluated the nuclear maturation and the cytoplasmic maturation after pre-IVM and after IVM (24h. controls and 20 h. treatments). Fertilization was assessed 18 hours after insemination. The embryos development and quality were analyzed. The data were evaluated by ANOVA (P< 0, 05). Most remained in GV oocytes treated and after IVM was the reversal of the blockage, but the efficiency was lower with 10 μM of Bl-I. The cytoplasmic maturation during the time of meiosis blockage was benefited from the distribution agreement and potential of mitochondria, however, about the distribution of cortical granules only blocking conducted with 100μM Bl-I had a complete maturation. The rate of fertilization was damage by the time of transport, and the meiosis blockage with Bl-I did not improve the percentage of fertilized oocytes. The occurrence of polispermia was correlated with the percentage of oocytes with immature cortical granules. The embryo developmentb was delayed by the use of 100μM of Bl-I, but a good percentage of blastocysts of good quality reached. So, the use of 100μM of Bl-I has beneficial effects on the IPV of embryos from oocytes transported at a long time.

Orientador : Gilson Hélio Toniollo / Resumo: Os caprinos foram os primeiros animais a serem domesticados pelo homen. Desses animais produz-se carne, leite, seus derivados, pele e pêlos. O fotoperíodo artificial tem sido utilizado apenas na sincronização de estros em caprinos. Atualmente, os caprinos ganharam importância mundial pela produção de animais transgênicos produzidos por FIV (fertilização"in vitro"). As concentrações plasmáticas de progesterona, cortisol e melatonina, durante a superestimulação ovariana na estação reprodutiva e anestro estacional ainda não foram avaliadas, bem como a influência do fotoperíodo artificial na melhora da produção de oócitos. Sendo assim, os objetivos deste estudo foram avaliar se o fotoperíodo artificial empregado em cabras (120 luxes/45 dias/20 h), melhora a produção e desenvolvimento dos oócitos caprinos no período de estação reprodutiva e anestro estacional, verificar as concentrações plasmáticas de progesterona, cortisol e melatonina durante a superestimulação ovariana e quatro dias após o processo cirúrgico para colheita dos oócitos por laparotomia. Foram utilizadas 31 cabras Alpinas, distribuídas em cinco grupos, avaliando o fotoperíodo natural e artificial, sêmen fresco e congelado e heparina (200μg/mL) na capacitação espermática. Foram obtidos 720 oócitos e sete blastocistos (cinco do G3- fotoperíodo natural e dois no G2 -fotoperíodo artificial, ambos durante o anestro estacional)... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo). / Abstract: Goats were the first animals to be domesticated by man. From these animals meat, milk, its byproducts, skin and fur are obtained. Artificial photoperiod has been used only in the synchronization of estrus in goats. Currently, goats have gained world-wide importance for the production of transgenic animals obtained by IVF ("in-vitro" fertilization). Plasmatic concentrations of progesterone, cortisol and melatonin, during ovarian superstimulation in the reproductive season and seasonal anestrus, or the influence of artificial photoperiod in the improvement of the production of oocytes have not yet been evaluated. Thus, the objectives of this study were to evaluate if the artificial photoperiod used in goats (120 lux/45 days/20 h), improves the production and development of goat oocytes in the reproductive seasonal period and anestrus, to verify the plasmatic concentrations of progesterone, cortisol and melatonin during ovarian superstimulation and four days after the surgical process for removal of oocytes for laparotomy. 31 Alpine goats were used, distributed into five groups, evaluating natural photoperiod and artificial, fresh and frozen semen and heparin (200æg/mL) in sperm qualification. 720 oocytes and seven blastocysts were obtained (five from the natural G3- photoperiod and two in the G2 artificial photoperiod, both during seasonal anestrus). There was no statistical difference among the groups. The plasmatic concentrations of progesterone varied during ovarian superstimulation (p<0,05) during the whole period studied, in the season and in the anestrus season. There were statistical differences in the plasmatic concentrations of cortisol (p<0,05), in the reproductive season and in the anestrus season, however the G2 (artificial photoperiod) presented intermediate hormone concentrations of cortisol between the control group and the G3 (natural photoperiod + surgery)... (Complete abstract, click electronic address below). / Doutor

The rate of glucose stimulated in vitro (pro)insulin synthesis in islets of Langerhans isolated from fed male rats was determined. Increases in the glucose concentration of the incubation medium, over the physiological range (2 to 20 mM), stimulated the rates of both (pro)insulin and total protein synthesis during a two hour incubation. This stimulation was preferential for (pro)insulin synthesis and had a sigmoidal dose response curve with a concentration threshold of between 2.5 mM and 5.0 mM and a maximal rate at 20 mM glucose. Inhibition of islet RNA synthesis by.;ctinomycin D depressedthe rate of total protein synthesis within 30 minutes of the application of a 20 mM glucose stimulus. A specific inhibition of (pro)insulin synthesis by actinomycin D, that occured 60 minutes after the application of a 20 mM glucose stimulus, was thought to reflect the inhibition of glucose stimulated preproinsulin mRNA synthesis. The effect of glucose on islet preproinsulin mRNA content during in vitro incubations was also determined. To achieve this a dot blot hybridization assay for preproinsulin mRNA was 3 2 developed which used a P-labeled cloned human insulin gene as the hybridization probe. The assay proved to be sensitive enough to detect preproinsulin mRNA in as few as fifty islets. Incubation of islets, for 2 hours, at 2.5 mM glucose had no effect on islet preproinsulin mRNA content but incubation at 20 mM glucose increased islet preproinsulin mRNA content. Actinomycin D had no effect on this pattern of glucose stimulation and it is suggested that the degradation of preproinsulin mRNA is in some way dependent on RNA synthesis and that its inhibition by glucose plays an important role in the regulation of islet preproinsulin mRNA content.

Recovery of DNA synthesis in UV-irradiated E. coli. E. coli undergoing the SOS response to DNA damage (e.g. UV-irradiation) displays transient inhibition of DNA synthesis. The mechanism of the inhibition and of the recovery of DNA synthesis following UV-irradition was analysed in several mutants defective in repair or in the regulation of the RecA-LexA dependent SOS response. The results indicated that inhibition is not an inducible function and is probably due to the direct effect of lesions in the template blocking replisome movement. In contrast, recovery of DNA synthesis after UV required protein synthesis and was clearly shown to be an SOS function under RecA control. In addition, analyses involving a recA200 (temperature sensitive RecA) and recA constitutive mutants demonstrated that RecA protein was directly required for recovery in addition to its regulatory role. These experiments however also suggested that an inducible Irr (inducible replisome reactivation) factor under RecA control was also required for post UV-recovery. In vitro mutagenesis. In this part of my study attempts were also made to establish an vitro system for untargeted mutagenesis based upon a plasmid replication system. This involved establishing optimum conditions for extracting plasmid DNA (replicated vitro) and a highly efficient transformation system, in order to analyse directly mutagenic events.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:48:27Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo108_1.pdf: 4169269 bytes, checksum: 9354efde9da59d04b618272d45cf1bdc (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A esquistossomose é uma doença debilitante e endêmica, distribuída em 74 países, causada por parasitas do gênero Schistosoma, onde existem cinco espécies de interesse médico, apenas o Schistosoma mansoni é endêmico no Brasil. Existem aproximadamente 207 milhões de pessoas infectadas pela esquistossomose no mundo, no Brasil estima-se sete milhões de portadores de esquistossomose mansônica e é considerada uma endemia em franca expansão atingindo aproximadamente 19 estados brasileiros. O praziquantel é o único fármaco para o tratamento de todas as esquistossomoses no mundo. O objetivo do nosso trabalho foi a busca de novos compostos biologicamente ativos para o combate da esquistossomose, através da síntese de derivados imidazolidínicos e avaliação da atividade esquistossomicida. Os derivados imidazolidínicos das séries 5-benzilideno-3-benzil-4-tioxo-imidazolidin-2-ona e 5-arilazo-4-tioxo-imidazolidin-2-ona foram avaliados in vitro frente a vermes adultos de Schistosoma mansoni (Cepa BH). Todos derivados avaliados in vitro apresentaram atividade esquistossomicida, sendo que os compostos LPSF/PT05, PT10 e PT11 provocaram mortalidade de 100% em 24 horas nas concentrações de 320 e 200 &#61549;M e o LPSF/PT09 mortalidade de 100% em 48 horas também na maior concentração 320 M. O LPSF/PT05 e LPSF/PT10 foram analisado em microscopia eletrônica de varredura. Os derivados também foram avaliados quanto a citotoxicidade e viabilidade celular, apresentando uma toxicidade inferior ao praziquantel e uma baixa mortalidade celular (apoptose e necrose) em relação ao padrão. Na dosagem de citocinas (IL-10 e IFN-&#61543;) nenhum dos compostos apresentou indução dessas proteínas, porém todos os compostos analisados apresentaram uma indução no óxido nítrico estatisticamente significativo

A maturação in vitro de oócitos (MIV) é uma importante tecnologia reprodutiva a qual gera oócitos maduros capazes de suportar o desenvolvimento embrionário pré-implantacional e sua completa evolução à termo. Muitos fatores levam ao processo de maturação do oócito, e o AMH (hormônio anti-Mülleriano) tem demonstrado possuir um importante efeito nesta etapa. Neste trabalho nós demonstramos a influência da suplementação de AMH na maturação de complexos cumulus-oócito (COCs). Nossos resultados demonstram que não houve efeito na produção de embriões para COCS grau I. Entretanto, pudemos encontrar diferenças significativas entre os COCs graus II e III maturados na presença de 150ng/ml de AMH. Aqui também demonstramos que não houve diferença significativa na expressão relativa de mRNA para os genes AMHRII e FSHR no oócito, e na expressão relativa de mRNA para os genes AMH, AMHRII e FSHR nas células da granulosa. Nossos resultados corroboram com as importantes funções do AMH na produção de embriões, sugerem que a suplementação do meio de maturação de oócitos com AMH pode ajudar a melhorar a produção de blastocistos. / The in vitro oocyte maturation (MIV) is an important reproductive technology that generates mature oocytes able to support the preimplantation embryonic development and their fully evolution to term. Many factors lead to oocyte maturation process, and the AMH (AntiMüllerian hormone) have demonstrated important effects in the oocyte development. Here, we report the influence of AMH supplementation in the cumulus-oocyte complex (COCs) maturation. We found that AMH had no effect on embryo production of COCs grade I. On the other hand, significant differences between the COCs grade II and COCs grade III matured in AMH 150ng/ml were verified. We have also demonstrated that there were no significant difference in mRNA expression of the genes AMHRII and FSHR in the oocyte, and in mRNA of the genes AMH, AMHRII and FSHR in the granulosa cells. Taken together, the results corroborate the important roles for AMH on embryo production, and suggest that AMH supplementation could achieve successful outcome in the production of blastocysts.

Class of 2013 Abstract / Specific Aims: To elucidate the effect of the use of three different inlet configurations, percent ethanol in formulation, and propellant used on the percent respirable drug and MMAD of aerosolized particles from MDIs that contained beclomethasone dipropionate (BDP). Methods: The inlet configurations assessed in this study were the United States Pharmacopeia (USP) throat, the Alberta idealized mouth-throat replica (biological throat), and a large volume spacer (globe). ACI analyses were conducted on four different MDI formulations with regards to each of the three inlet configurations in quadruplicate. The two hydrofluoroalkane propellants assessed were HFA-134 and HFA-227. All four solution formulations contained 0.3% (w/w) beclomethasone dipropionate (BDP), two of which contained 8% (w/w) ethanol (one each with HFA-134a and HFA-227) and two contained 20% (w/w) ethanol (one each with HFA-134a and HFA-227). All experiments were conducted at a flow rate of 28.3L/min using an actuator with an orifice diameter of 0.29mm and a 50μL metered-valve. After each ACI test, the drug collected on each stage of the impactor was rinsed with known volumes of diluent and quantified by high performance liquid chromatography (HPLC). The MMAD was determined by using DistFit to lognormally fit the ACI data. The resiprable fraction was calculated as the mass of the drug collected on stages 3 through filter of the ACI divided by the total mass of the drug aerosolized. The two-sided student's t-test was the statistical test utilized, with an a priori alpha-value of 0.05. Main Results: The USP and biological throats had significantly lower percent respirable drug compared to the globe regardless of concentration of ethanol or propellant (p<0.05). The MMADs were significantly lower for configurations with the USP and biological throats as compared to the globe (p<0.05). The only formulation with a significant percent respirable drug difference between the USP and biological throats regarding was the 20% ethanol/HFA-227 formulation (20.9+/-0.15 and 16.8+/-1.3 respectively, p=0.005), with the USP throat having the significantly greater percent respirable drug. The USP throat had significantly larger MMADs compared to the biological throat regardless of formulation (p<0.05). For both propellants, the 8% ethanol formulation had significantly greater percent respirable drug compared to the 20% formulation for all three inlets (p<0.05). The 20% ethanol formulations had significantly higher MMADs compared to the 8% ethanol formulations in both the USP throat and globe and with both propellants (p<0.05). Only the 20% ethanol formulations demonstrated a significant difference when varying propellant while keeping all else constant, with the HFA-134a formulations having higher percent respirable drug with all inlets as compared to HFA-227 (p<0.05). When propellant used was varied with all else kept constant, the HFA-227 formulations had significantly higher MMADs compared to the HFA-134a formulations (p<0.05). Conclusion: It was found that significant differences in percent respirable drug and particle size (MMAD) resulting from varying inlet configurations was a function of formulation parameters, most notably, ethanol concentration. The differences may be attributed to factors that increased the time necessary for the evaporation of atomized particles prior to deposition in the impactor, the initial atomized droplet diameter, and/or the likelihood of particle impaction with regards to the mouth-throat inlet utilized. Further assessment is needed to evaluate the correlation of this data with in vivo analyses.