Elicitation is one of the methods used for increasing the production of secondary metabolites in vitro cultures. The aim of this work is to evaluate the effect of abiotic elicitor methylviologen (paraquat) on the production of flavonoids in callus and suspension cultures of Fagopyrum esculentum Moench., variety Pyra. The cultures were cultivated in Murashige and Skoog nutrient medium with addition of 2,4-D in concentration of 1 mg/l as a growth regulator. Elicitor was added as a solution in three different concentrations (c1 = 2.1929 · 10-4 mol/l, c2 = 2.1929 · 10-3 mol/l and c3 = 2.1929 · 10-2 mol/l). The effect of elicitation on rutin production was monitored in six time intervals: 6, 12, 24, 48, 72 and 168 hours. The rutin content was determined by HPLC analysis. No rutin was produced in callus and suspension cultures without the presence of elicitor. Even after the elicitation, there was no statistically significant increase in the production of rutin. The maximum rutin content was detected in the suspension culture after 12 hours of elicitor treatment in c2 concentration, the content was 0.1 mg/g DW. The release of rutin into the nutrient medium was also not observed.

Plants are an important source of secondary metabolites, which are a valuable natural substance used in many fields. One way to increase their production is by the elicitation method. In this paper the effect of abiotic elicitor methylviologene in three different concentrations was studied on the rutin production in callus and suspension culture of Fagopyrum esculentum Moench variety Spačinki. The cultivation was carried out on Murashige and Skoog nutrient medium with the addition of a 1 mg/l 2,4- dichlorophenoxyacetic acid as growth regulator. Samples were taken at regular time intervals after 6, 12, 24, 48, 72 and 168 hours of elicitation. The rutin content was analyzed by HPLC. The maximum rutin production (0.3 mg/g DW) was recorded in the callus culture after 48 hours of methylviologene treatment at a concentration of 2.1929.10-4 mol/l. No increase in rutin content after methylviologene elicitation was observed in the suspension culture. The study also included monitoring of the rutin release into nutrient medium, but this was not demonstrated.

Elicitation is one of possible methods for increasing the secondary metabolites production in plant cell cultures. This paper explores the potential effect of methylviologene on isoflavonoids production in Genista tinctoria L. suspension and callus cultures. Schenk and Hildebrandt nutrient medium was used with the addition of growth regulators 2,4- D in concentration of 5 mg/L and kinetin of 1 mg /L of medium. Elicitor was added in the form of ethanol solution at concentration of 2.19·10-2 mol l-1 , 2.19·10-3 mol l-1 , 2.19·10-4 mol l-1 . Samples were taken after 6, 12, 24, 48, 72 and 168 hours of elicitor exposure. Control samples were collected at 6, 24, 72 and 168 hours. The isoflavonoid content in suspension and callus cultures and in nutrient medium was evaluated by high performance liquid chromatography. The biggest increase of isoflavonoid content in callus culture was reached in daidzein content after 48 hours elicitor treatment in concentration of 2.19·10-3 mol l-1 (8.5 mg/g DW) and 2.19·10-4 mol l-1 (1.6 mg/g DW). The production of genistin, genistein and formononetin was slightly increased or zero compared to controls. Biochanin A was almost absent in the samples. The highest level of isoflavonoids was measured in the suspension culture after 48 hours elicitor application in the...

Orientador : Prof. Dr. João Carlos Bespalhok Filho / Co-orientador : Profª. Drª. Giovana Bomfim de Alcantara / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Agronomia. Defesa: Curitiba, 23/02/2016 / Inclui referências : f. 24-30-51-53-62-63 / Área de concentração: Produção vegetal / Resumo: A cana-de-açúcar foi trazida para o Brasil para quebrar o monopólio de produção de açúcar do Oriente Médio e, desde então, passou a ser uma cultura de grande importância econômica para o país. Atualmente o Brasil é o maior produtor de cana e de açúcar do mundo. Isto é devido ao somatório de variáveis favoráveis como: o clima adequado para a produção, o desenvolvimento de cultivares elite e o manejo da cultura. O desenvolvimento de cultivares de excelência é um ponto chave na produção. A cultivar RB966928 foi desenvolvida pela RIDESA e lançada no mercado em 2010. Ela possui boa brotação em cana planta e cana soca, resistência às principais doenças e excelente adaptabilidade fenotípica. O censo varietal realizado pela RIDESA em 2015 mostrou que a cultivar RB966928 foi a mais plantada nos estados de São Paulo e Mato Grosso do Sul. Aliado ao uso de boas cultivares está o uso de mudas de qualidade, que ajudam a reduzir perdas, uniformizam a plantação e elevam a fitossanidade. Neste contexto a micropropagação tem um importante papel na produção de mudas, já que é possível produzir mudas de excelência em espaço e tempo reduzidos, além de garantir um alto grau de fitossanitarismo. Desta forma é importante desenvolver e otimizar protocolos de micropropagação para a produção massal de mudas. O objetivo deste trabalho foi desenvolver um protocolo de micropropagação para a cultivar de cana-de-açúcar RB966928. Para a brotação de meristemas foram testados dois tratamentos: meio de cultura MS com O mg L-1 de cinetina e O mg L-1 de BAP e meio de cultura MS com 0,1 mg L-1 de cinetina e 0,2 mg L-1 de BAP. Para a multiplicação avaliou-se as concentrações de O; 0,2; 0,5 e 1 mg L-1 de BAP em meio MS. Para a multiplicação em biorreator de imersão temporária avaliou-se as frequências de imersão de 1 vez ao dia, 4 vezes ao dia e 8 vezes ao dia e os tempos de imersão de 5, 10 e 25 minutos. Para o enraizamento utilizou-se os meios de cultura MS, MS com redução dos sais pela metade, MS com 0,5 mg L-1 de AIB e MS com 70 g L-1 de sacarose. Para a aclimatização variou-se a presença e ausência de urna cobertura com saco plástico para o crescimento das plantas e os locais de acondicionamento: sala de crescimento e casa de vegetação. Foi testado, também, a influência de concentrações de sacarose no enraizamento da cultivar RB966928 in vitro. Foram realizados cinco tratamentos com as seguintes concentrações de sacarose O; 20; 40; 60 e 80 g L-1 o A maior porcentagem de meristemas brotados foi obtida utilizando meio de cultura suplementado com citocininas. As concentrações crescentes de BAP elevaram as taxas de brotações adventícias, porém as concentrações mais altas reduziram o crescimento da parte aérea, assim a melhor dosagem para multiplicação da cultivar foi a de 0,2 mg L-1 de BAP. No biorreator a melhor frequência de imersão foi de 4 vezes ao dia e o tempo de 5 minutos de imersão. Para o enraizamento as plantas suplementadas com 70 g L-1 de sacarose apresentaram maior crescimento de raízes e na aclimatização as plantas podem ser mantidas sem a cobertura do saco plástico e em casa de vegetação sem grandes prejuízos. O aumento crescente nas concentrações de sacarose elevou o comprimento da parte aérea, raízes, número de raízes, peso seco e fresco. A concentração de 60 g L-1 de sacarose foi a que apresentou os melhores resultados. Desta forma foi possível desenvolver um protocolo de micropropagação para a cultivar de cana-de-açúcar RB966928. Palavras-chave: Saccharum spp., biorreator de imersão temporária, meristema, sacarose. / Abstract: The sugarcane was brought to Brazil to break the sugar production monopoly in lhe Middle East and since then the sugarcane has become a very important crop for the economic in the country. Currently Brazil is the largest producer of sugarcane and sugar in the world. This is due to the sum of favorable variables such as climate for the production, development of elite cultivars and crop management. The development of excellent cultivars is a key point for producing. The cultivar RB966928 was developed by RIDESA released on the market in 2010. lt has good plant cane and ratoon cane sprouting, resistance to major diseases and great phenotypic adaptability. The varietal census conducted by RIDESA in 2015 showed that RB966928 was the most planted cultivar in the states of São Paulo and Mato Grosso do Sul. Coupled with the use of good cultivars is the use of quality seedlings, which assist to reduce losses, standardize planting and increase plant health. In this context micropropagation has an important role in the production of seedlings since it is possible to produce seedlings of excellence on reduced space and time in addition to ensuring a bigh levei of plant health. Thus it is important to optimize micropropagation protocols for mass production of seedlings. The objective of tbis study was to develop a micropropagation protocol for sugarcane cultivar RB966928. For regeneration meristems two treatments were tested: culture media MS with O mg L-1 kinetin and O mg L-1 BAP and culture media MS with 0.1 mg L-1 kinetin and 0.2 mg L-1 BAP. For multiplication were tested concentrations ofO, 0.2, 0.5 e l mg L-1 BAP in culture media MS. For multiplication in temporary immersion bioreactor the following aspects were evaluated: lhe immersion of l time a day, 4 times a day or 8 times a day and dipping frequency of 5, 10 and 25 minutes. For rooting it was compared the MS culture media, MS with salts reducing by half, MS with 0.5 mg L-1 de AIB and MS with 70 g L-1 sucrose. For acclimatization it was varied the presence and absence of a plastic cover for the growth of plants and acclimatization site: growth chamber and greenhouse. It was tested also the influence of sucrose concentration in growth ofRB966928 in vitro. Five treatments were performed with the sucrose leveis of O, 20, 40, 60 and 80 g L-1 o The highest percentage of regenerated meristems was obtained using culture media supplernented with cytokinins. Increasing doses of BAP raise the adventitious shoots rates, however the higher concentrations reduced the shoot increase, thus the better dosage for multiplication of cultivar was 0.2 mg L-1 BAP. ln bioreactor the best immersion frequency was 4 times a day and immersion time of 5 minutes. For rooting plants supplernented with 70 g L-1 sucrose showed greater growth of root and acclimatization plants can keep without plastic cover and in greenhouse with no major losses. The increase in sucrose doses increased the length of shoots, roots, number of roots, dry and fresh weight.. The levei of 60 g L-1 sucrose showed the best results. Therefore was possible develop a micropropagation protocol for sugarcane cultivar RB966928. Keywords: Saccharum spp, temporary immersion bioreactor, meristem, sucrose.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-03-02Bitstream added on 2014-06-13T19:45:12Z : No. of bitstreams: 1 perini_ap_dr_jabo.pdf: 421844 bytes, checksum: 8711bc62b0ce38924a7b61b38ef31cf7 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Foram estudadas modificações feitas no tempo de maturação in vitro de oócitos bovinos, incubação dos espermatozóides e separação dos mesmos por gradiente de densidade de PercollTM, bem como a associação dessas técnicas antes da fecundação para que se consiga desviar a proporção sexual dos embriões para fêmeas. O controle de qualidade foi feito em cada etapa dos procedimentos avaliando-se os parâmetros de motilidade, vigor e concentração dos espermatozóides, bem como taxa de clivagem e produção in vitro dos embriões. A proporção sexual foi avaliada pela técnica da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) e por transferências de embriões em receptoras. Pela técnica da PCR concluiu-se que a incubação dos espermatozóides em meio FIV sem heparina por 12 horas, desviou 59% o sexo dos embriões para fêmeas, a diminuição do tempo de maturação não desviou e essas duas técnicas associadas a centrifugação em gradiente não aumentaram o desvio da proporção sexual, porém o gradiente de sexagem foi eficaz em sexar 64% dos espermatozóides para fêmeas. Obteve-se uma taxa média de prenhez de 36,73% e uma proporção de fêmeas de 88,88% com embriões produzidos a partir da associação da redução no tempo de maturação dos oócitos ao gradiente de sexagem / Were studied modifications made at the time of in vitro maturation of oocytes, sperm incubation and separation thereof by density gradient PercollTM as well as the combination of these techniques prior to fertilization to be able to divert the sex ratio of embryos females. Quality control was done at each stage of the procedures by evaluating the parameters of motility, vigor and concentration of spermatozoa and rate of cleavage and in vitro production of embryos. The sex ratio was assessed by means of Polymerase Chain Reaction (PCR) and embryo transfer into recipients. By the technique of PCR it was found that incubation of spermatozoa in IVF medium without heparin for 12 hours, 59% deviated sex of embryos for females, the reduction time of maturation is not shifted and associated with these two techniques do not increase the deviation of the sex ratio by gradient centrifugation, but the gradient was effective in sexing 64% of sperm to females. We obtained a mean pregnancy rate of 36.73% and a ratio of 88.88% of females with embryos produced from the combination of the reduction in the time of oocyte maturation to the gradient of sexing

Orientador: Ana Maria Aparecida Guaraldo / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-10T21:54:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Britto_MariaHelenaSeabraSoaresde_D.pdf: 1915996 bytes, checksum: 263b368c6fc66874e6b4cc046dda0817 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: O gênero Cryptosporidium compreende atualmente 16 espécies, que já foram encontradas parasitando mais de 150 espécies animais, incluindo o homem, no qual já foram referidas infecções causadas por sete delas. O Cryptosporidium parvum é o mais estudado porque é responsabilizado pelo caráter zoonótico da infecção. A espécie responsável pelo caráter antroponótico da criptosporidiose é o Cryptosporidium hominis. Embora já tenha sido descoberto há cem anos e mesmo com o avanço da genômica e biologia molecular, ainda existem muitas dúvidas sobre sua taxonomia, biologia e relação com seus variados hospedeiros. Dados na literatura apontam para a necessidade urgente da definição de modelos experimentais para cultivo de linhagens do parasito ¿in vivo¿ e ¿in vitro¿. As pesquisas ¿in vivo¿ esbarram na dificuldade da utilização de grande número de animais certificados do ponto de vista genético e sanitário e mantidos em ambientes controlados. Por outro lado, os métodos de cultivo ¿in vitro¿ têm-se mostrado de difícil reprodutibilidade, pois a grande variabilidade de linhagens celulares, com diferentes origens, cultivadas em diferentes meios, em condições ambientais diversas, tornam bastante controversos os resultados obtidos nessa área. Neste trabalho apresentamos o cultivo de uma cepa de origem humana de Cryptosporidium sp, de um único paciente portador de HIV/aids, com criptosporidiose, denominada de MMC/Uni, mantida pela infecção por tubagem intra-gástrica de 105 oocistos em camundongos neonatos livres de patógenos específicos (SPF) de linhagens, heterogênicas e isogênicas imunocompetentes e imunodeficientes , mantidos durante todo o experimento em isolador de PVC flexível. Oocistos da cepa MMC/Uni de Cryptosporidium sp foram purificados mediante gradiente de sacarose. Após excistação, foram cultivados em monocamadas da linhagem celular MDBK (Madin-Darby Bovine Kidney). A presença de merontes foi constatada após 90 horas de cultivo. A cepa MMC/Uni de Cryptosporidium sp, de origem humana, permaneceu infectante após 16 meses, sob refrigeração a 4°C, em solução de Dicromato de Potássio a 2,5% e manteve a infectividade de camundongos após 10 meses de congelamento em DMSO a - 70ºC / Abstract: Cryptosporidium covers actually 16 species, that have been found infecting more then 150 animal species, including humans, in wich have already been reported infections caused by seven of them. Cryptosporidium parvum is the most studied, due to be responsible by the zoonotic character of the infection. The specie responsible by the anthroponotic character of the criptosporidiosis is Cryptosporidium hominis. Although it has been discovered a hundred years ago, and even with the advances in genomics and molecular biology, still persists many doubts about its taxonomy, biology and the relations with its many different hosts. Data in literature point toward the urgent need in the definition of experimental models to cultivate strains of the parasite ¿in vivo¿ and ¿in vitro¿. The research ¿in vivo¿ faces the difficulty in the use of a great number of certificated animals, in the point of genetic and sanitary view, kept in controlled environment. In the other hand, ¿in vitro¿ culture methods have shown to be of difficult reproductibility, for the great variability of the cellular strains, with different origins, kept in different breeding media, in diverse environmental conditions, turn out of great controversy the results found in this area. Here we present a strain of Cryptosporidium sp, from human origin, taken from an unique HIV/aids patient with criptosporidiosis, named as MMC/Uni, kept by a intragastric tubage infection of 105 oocysts in Specific Pathogen-Free (SPF) neonates from outbred and inbred immunocompetent or immunodeficient mice strains, kept during the entire experiment in an isolator of flexible PVC. Oocists of MMC/Uni strain of Cryptosporidium sp were purified by sucrose gradient. After excistation, they were cultivated in MDBK (Madin-Darby Bovine Kidney) cells monolayers. The presence of meronts was observed after 90 hours of cultivation. The strain MMC/Uni of Cryptosporidium sp, from human origin, remained infectant after 16 months, under refrigeration at 4°C, in a 2.5% solution of Potassium Dichromate, and maintened infectiveness in mouse, after 10 months of freezing in DMSO at -70ºC / Doutorado / Doutor em Parasitologia

Orientador: Cínthia Pereira Machado Tabchoury / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-22T12:40:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ratti_Alhethea_M.pdf: 1121819 bytes, checksum: a54970b6cf563d718f1c4c3457974651 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Considerando que dentifrícios de alta concentração de flúor (F) têm sido recomendados para reversão de lesões cariosas radiculares e que inexiste um modelo in vitro de ciclagens de pH que mostre efeito dose-resposta desses dentifrícios em dentina radicular, o objetivo do presente estudo foi desenvolver um modelo de ciclagens de pH para avaliação do potencial anticárie de dentifrício de alta concentração de F na inibição à desmineralização de dentina radicular. Foi realizado um estudo in vitro de ciclagens de pH por meio de dois experimentos. As unidades experimentais foram blocos de dentina bovina hígida, selecionados a partir dos valores de dureza de superfície. O regime de ciclagens de pH teve duração de 10 dias, e os blocos dentais foram mantidos diariamente por 6 h na solução desmineralizante e aproximadamente 18 h na solução remineralizante a 37?C. No primeiro experimento, para validação do modelo quanto ao efeito dose resposta ao F, soluções fluoretadas nas concentrações de 0, 50, 150, 450 e 1350 ?g F/mL foram utilizadas, simulando a diluição de dentifrícios fluoretados de baixa, alta e concentração convencional de F na saliva durante a escovação. Duas vezes por dia, antes e após a imersão na solução desmineralizante, os blocos dentais foram mantidos sob agitação por 5 min em temperatura ambiente nas soluções de tratamento descritas acima. O potencial anticárie do dentifrício de alta concentração de F foi avaliado em um segundo experimento, usando o modelo testado nas mesmas condições anteriormente descritas. Blocos dentais foram aleatoriamente divididos em 4 grupos de tratamento: dentifrício não fluoretado (DNF; controle negativo) e dentifrícios fluoretados comerciais contendo 500, 1100 e 5000 ?g de F/g. Todos os dentifrícios apresentavam a mesma formulação (NaF e sílica) e foram utilizados 2 vezes por dia na forma de suspensão na proporção 1:3 (dentifrício/água purificada). No primeiro experimento, as médias e desvios-padrão dos valores de área de lesão (?S; kg/mm2 x ?m; n=15) para os grupos tratados com água purificada e soluções contendo 50, 150, 450 e 1350 ?g F/mL foram respectivamente 1320,6± 298,6a; 1022,8 ± 317,7b; 748,9± 240,9b; 466,8 ± 246,3c e 163,1 ± 117,1d kg/mm2 x ?m. Quanto à concentração de F total na dentina (F total; ?g F/cm2; n=8), foram observados valores crescentes quanto maior a concentração de F nas soluções de tratamento (17,7 ± 3,6a; 27,3 ± 3,4ab; 33,1 ± 5,7bc; 41,3 ± 8,0cd e 52,6 ± 15,2d ?g F/cm2). No segundo experimento, as médias dos valores de ?S (n=12) para os grupos tratados com DNF, 500, 1100 e 5000 ?g F/g foram respectivamente 1328,1 ± 450,9a; 761,6 ± 308,8b; 705,6 ± 243,9b e 234,2 ± 198,0c kg/mm2 x ?m. Quanto à análise de F total na dentina no 2o experimento (n=8), as médias foram 10,2 ± 2,0a; 29,4 ± 6,4b; 34,3 ± 7,5b e 49,1 ± 7,3c ?g F/cm2. Conclui-se que o modelo in vitro de ciclagens de pH desenvolvido utilizando dentina radicular bovina apresentou efeito dose-resposta ao F e também foi capaz de avaliar o potencial anticárie de dentifrício de alta concentração de F / Abstract: Considering high-F toothpaste have been recommended for reversal of root caries lesions and the lack of an in vitro model of pH-cycling showing dose-response effect for high-fluoride (F) toothpastes in root dentin, the objective of this study was to develop a pH cycling model for assessing the potential of high-F toothpaste on the inhibition of root dentin demineralization. An in vitro study using a pH-cycling regimen was conducted in two experiments. The experimental units were blocks of bovine dentin, which were selected from the surface hardness values. The pH-cycling regimen lasted for 10 days, and the dentin blocks were kept for 6 h in a demineralizing solution and approximately 18 h in a remineralizing solution at 37°C each day. In the first experiment, F solutions at the concentrations of 0, 50, 150, 450 and 1350 ?g F/mL were used to validate the model with regard to the dose-response effect to fluoride. Twice daily, before and after the immersion in the demineralizing solution, the dental blocks were kept under agitation for 5 min at room temperature in treatment solutions described above. The anti-caries potential of a high-F dentifrice was evaluated in a second experiment, using the model tested under the same conditions previously described. Dentin blocks were randomly divided into 4 treatment groups: non-fluoride toothpaste (negative control) and fluoride toothpastes containing 500, 1100 and 5000 ?g F/g. All toothpastes had the same formulation (NaF and silica) and were used twice daily as a suspension in the ratio 1:3 (dentifrice/purified water). In the first experiment, the mean values of lesion area (?S; kg/mm2 x ?m; n=15) for the groups treated with purified water and solutions containing 50, 150, 450 and 1350 mg F / mL were respectively 1320.6 ± 298.6a; 1022.8 ± 317.7b, 748.9 ± 240.9b, 466.8 ± 246.3c and 163.1 ± 117.1d kg/mm2 x ?m. For total F concentration in dentin (?g F/cm2; n=8), higher values were observed as the concentration of F in treatment solutions increased (17.4 ± 3.6a; 27.3 ± 3.4ab; 33.1 ± 5.7bc; 41.3 ± 8.0cd and 52.6 ± 15.2d ?g F/cm2). In the second experiment, the mean values of ?S (n=12) for the groups treated with non-fluoride toothpaste, 500, 1100 and 5000 ?g F/g were respectively 1328.1 ± 450.9a; 761.6 ± 308.8b; 705.6 ± 243.9b and 234.2 ± 198.0c. In the analysis of total F present in dentin (n=8) in the second experiment, the mean values were 10.2 ± 2.0a; 29.4 ± 6.4b; 34.3 ± 7.5b and 49.1 ± 7.3c. We conclude that the in vitro model developed using pH-cycling in bovine root dentine showed a dose-response effect for fluoride and was also able to assess the anticaries potential of high-fluoride toothpastes / Mestrado / Cariologia / Mestra em Odontologia

Orientadores: Mauro Antônio de Arruda Nóbilo, Flávio Domingues das Neves / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-20T14:19:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 SilvaNeto_JoaoPauloda_D.pdf: 20811970 bytes, checksum: 8ae74338d9cd1c1d9de8b33947c0f2c0 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: A conexão entre implante e pilar está diretamente relacionada com o infiltrado bacteriano e a presença de células inflamatórias que levam à perda óssea ao redor da microfenda formada por esta interface. Entretanto, ainda não há consenso quanto aos resultados dos testes in vitro e as metodologias aplicadas para a avaliação da microinfiltração nesta interface. O objetivo neste estudo foi: 1) avaliar, por meio de uma revisão sistemática, a influência das metodologias nos resultados dos estudos in vitro de microinfiltração na interface implante-pilar (I-P); 2) Avaliar, experimentalmente a microinfiltração bacteriana na interface I-P em implantes cone Morse inoculados com diferentes volumes de suspensão bacteriana. Para a revisão sistemática, foi realizada uma procura nas bases de dados MEDLINE, EMBASE e Cochrane, por estudos in vitro avaliando a microinfiltração na interface I-P publicados no período entre 1990 e agosto de 2011. Após a aplicação dos critérios de inclusão e exclusão, os artigos selecionados foram arranjados em tabelas e submetidos a análise descritiva. Para o ensaio de microinfiltração bacteriana foram selecionados implantes e pilares cone Morse, que por sua vez foram divididos em 2 grupos em função do tipo de pilar: parafuso passante (PP) e corpo sólido (CS). Posteriormente, os grupos foram subdivididos em 4 subgrupos, em função do volume de suspensão bacteriana inoculado nos implante (n=6): PP1: 0,1'mi'L; PP3: 0,3'mi'L; PP5: 0,5'mi'L; PP7: 0,7'mi'L; CS1: 0,1'mi'L; CS3: 0,3'mi'L; CS5: 0,5'mi'L e CS7: 0,7'mi'L. Uma suspensão bacteriana de Escherichia coli ATCC 35218 foi inoculada no interior dos implantes com volume de acordo com o respectivo grupo, sendo os componentes apertados segundo recomendações do fabricante. Após a inoculação os espécimes foram imersos em solução nutritiva bacteriana estéril para avaliação de um possível extravasamento do inoculo (grupo controle). Posteriormente, os conjuntos foram incubados em uma nova solução até o recobrimento da junção para avaliação microbiológica. A microinfiltração foi avaliada pela alteração na claridade da solução a cada 24 horas durante 7 dias. Ao final deste período os conjuntos foram reabertos para avaliação da viabilidade bacteriana. A revisão mostrou alta variabilidade de resultados e de tipos de ensaio de microinfiltração entre os estudos, apresentando alguns pontos críticos como volume bacteriano inoculado; concentração bacteriana; método de inoculação; períodos de acompanhamento e verificação de viabilidade bacteriana. No ensaio todos os espécimes inoculados com 0,7'mi'L e uma amostra de CS5 apresentaram turbidez no grupo controle após as primeiras 24 horas sendo excluídas do estudo. Durante os sete dias de acompanhamento nenhum espécime apresentou indicativo de microinfiltração bacteriana. E após este período, a viabilidade bacteriana foi confirmada em todos os espécimes avaliados. Dentro das limitações deste estudo pode se concluir que a falta de padronização entre os estudos in vitro dificulta comparações e pode explicar algumas divergências entre seus resultados. Não foi observada microinfiltração na interface I-P em implantes com conexão do tipo Morse e o volume de 0,7'mi'L excedeu a capacidade máxima do sistema avaliado / Abstract: The connection between implant and abutment is directly related to bacterial infiltration and it has been correlated with the presence of bacterial infiltration and inflammatory cells that can lead to bone loss around the marginal bone crest. However, there is no consensus to the in vitro tests results and methodologies for the assessment of microleakage at this interface. The aims of this study were to evaluate: 1) the influence of methodological aspects in variations on the results of in vitro microleakage studies of the implant-abutment (I-A) interface; 2) the bacterial microleakage in the I-A interface of Morse tapered implants inoculated with different volumes. For the review, MEDLINE, EMBASE and Cochrane Library database were consulted for in vitro studies published between 1990 and August 2011. For those studies that met the inclusion and exclusion criteria, data were arranged in tables and subjected to descriptive analysis. In the bacterial microleakage test, Morse tapered implants and abutments were selected and assigned into two groups depending on the abutment type: passing screw abutment (PS) and solid abutment (S), and then further subdivided into four subgroups depending on the volume of inoculation in the inner part of the implant (n=6): PS1: 0.1'mi'L; PS3: 0.3'mi'L; PS5:0.5'mi'L; PS7: 0.7'mi'L; S1: 0.1'mi'L; S3: 0.3'mi'L; S5: 0.5'mi'L e S7: 0.7'mi'L. For the control group, the presence of external contamination was assessed. A bacterial suspension was inoculated in the implants and incubated for microbiological analysis. The microleakage was evaluated every 24 hours during 7 days. After this period, the implants were disassembled for confirmation of the bacterial viability. All the specimens inoculated with 0.7 'mi'L and one sample of S5 presented turbidity in the control group after the first 24 hours and were excluded of the study. During the seven days, none of the specimens presented positive results for microleakage and the bacterial viability was confirmed in all evaluated specimens. Within the limitations of this study, it can be concluded that a lack of standardization hinders comparisons among studies and can give an explanation of some divergences among them; during the seven days, none of the specimens presented positive results for microleakage and the bacterial viability was confirmed in all evaluated specimens; the volumes 0.1, 0.3, and 0.5?L did not present bacterial microleakage in the IA interface. The volume of 0.7'mi'L is excessive and lead to false results of microleakage / Doutorado / Protese Dental / Doutor em Clínica Odontológica

A Thesis submitted to The University of Arizona College of Medicine - Phoenix in partial fulfillment of the requirements for the Degree of Doctor of Medicine. / Background Infertility, or impaired fecundity, affects 11.8% of women between the ages of 15 and 44, which translates to 7.3 million women. The use of assisted reproductive techniques has doubled over the past decade, with 148,055 cycles performed during 2008 resulting in 46,326 live births and the delivery of 61,426 infants. Acupuncture has been used in China to treat numerous and disparate medical conditions for thousands of years. Many anecdotal reports and non-randomized studies have claimed that acupuncture improves fertility, but the number of high-quality randomized controlled clinical trials and cohorts is much thinner. Objectives To determine whether the use of acupuncture results in higher pregnancy rates in patients undergoing in vitro fertilization compared with placebo acupuncture or no treatment. Search strategy All randomized controlled trials and prospective cohort reports of acupuncture and assisted reproductive technology were obtained through a systematic search of Medline and the MeSH database (1996 to February 2011). Selection criteria Prospective, randomized controlled trials comparing acupuncture treatment versus no treatment, placebo acupuncture, sham acupuncture at non-acupoints, and sham acupuncture at non-fertility-related acupoints during IVF treatment with or without intracytoplasmic sperm injection (ICSI). Inclusion criteria: - primary or secondary subfertility - undergoing IVF with or without ICSI - timing of acupuncture for before and after embryo transfer Exclusion criteria: - frozen embryo transfer - acupuncture used as adjunct to analgesia - electroacupuncture - donor oocytes - non-randomized trials, case-controls, case studies - studies included in the 2009 Cochrane review Data collection and analysis Thirteen randomized controlled trials were identified that involved acupuncture and in vitro fertilization with embryo transfer. Trials were analyzed for the following methodological details and quality criteria: study characteristics (randomization, blinding, power analysis, intention-to-treat analysis), patient characteristics (demographics, inclusion and exclusion criteria), interventions (IVF stimulation protocols, timing of acupuncture or control, acupoints chosen), and outcomes (ongoing pregnancy rates, live birth rates). Main results Only one of the trials demonstrated a result that achieved statistical significance. So 2009 showed that placebo acupuncture resulted in significantly higher overall birth rate when compared to true acupuncture. Even with adequate power, none of the other trials showed a difference that achieved statistical significance in pregnancy rate or live birth rates between acupuncture and control groups. Conclusions Acupuncture does not improve IVF outcomes and should not be offered routinely as an adjunct to fertility treatment. The evidence from the current literature suggests a positive effect of sham and placebo acupuncture on IVF outcomes, and therefore merits further study with adequately powered RCTs.

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