A toxoplasmose é uma infecção mundial que é transmitida por carne contendo cistos teciduais, água ou legumes crus contaminados com oocistos, contato com felinos, ou transmissão vertical. A toxoplasmose é usualmente assintomática, mas pode causar doença severa no feto quando transmitida durante fase aguda na mãe. O rastreamento da toxoplasmose congênita é normalmente executado durante o pré-natal, pela detecção de anticorpos IgM específico ou pela demonstração de aumento dos títulos de anticorpos IgG para T.gondii. Neste trabalho, 160 mães IgM positivas em rastreamento externo foram avaliadas para IgM, IgG, IgA e avidez dos anticorpos IgG em ensaios usando Uréia e NH4SCN como agente caotrópico, e extrato salino e uma proteína recombinante ROP2 como antígeno. A maioria das mães com resultado positivo de IgM eram negativas (124) quando retestadas, 16 negativas para todos os testes e somente 36 casos de IgM e IgG positivos. Nossa reação foi convalidada pelo Kit VIDAS Toxo IgG (Biomerieux), as 15 amostras aleatórias foram concordantes na maioria das amostras, incluindo as 3 de baixa avidez. A maioria das mães com IgG e IgM positivas confirmadas apresentaram índices intermediário e alto de avidez, e apenas 3 com índice baixo de avidez, que é sugestivo de infecção aguda. O uso de proteína recombinante Rop2 como antígeno resultou em muitos falsos negativos. O rastreamento de toxoplasmose congênita em áreas de alta prevalência induz uma baixa eficiência da sorologia, altos índices de pacientes tratados e baixa detecção. Ensaios de avidez são promissores, mas a sua padronização é obrigatória. / Toxoplasmosis is a worldwide infection transmitted by meat containing tissue cysts, water or crude vegetables contaminated with oocysts, contact with feline or vertical transmission. Toxoplasmosis is usually asymptomatic, but it can cause severe disease to the fetus during acute mother infection. The screening of congenital toxoplasmosis is usually been performed during prenatal, by detecting specific IgM antibodies or by demonstration of a significant increase specific IgG antibodies. In this work, 160 confirmed IgM positive mothers by external screening were evaluated for IgM, IgG, IgA, and avidity by several approaches using Urea and NH4SCN as chaotropic agents, and saline extract and a recombinant protein Rop2 as antigen. Most mother (124) were IgM negative when retested, 16 negative for all T.gondii tests and only 36 IgM and IgG positive. Our avidity reaction was convalidated by Kit VIDAS Toxo IgG (Biomerieux), 15 aleatory samples were concordant in most samples, including the 03 low avidity. Most of confirmed IgG and IgM positive mothers presented intermediary or high avidity indexes, only 3 presenting low avidity index, sugestive of acute infection. Use of recombinant proteins Rop 2 as antigen resulted in high false negative. Screening congenital toxoplasmosis in high prevalent areas by IgM serology showed low efficiency, higher treatment rates and low detection of acute infection. Avidity assays are promising markers of recent infection, but false negatives could be frequent.

Os objetivos do estudo consistiram em verificar o impacto da infecção congênita por CMV ao nascer e avaliar potenciais preditores prognósticos de anormalidades tardias em uma coorte de criança s com esta infecção. Métodos: Por meio de uma triagem neonatal, 66 de 11.957 crianças foram identificadas como portadoras de infecção congênita por CMV. Todas as crianças infectadas sintomáticas e assintomáticas foram avaliadas ao nascimento por meio de exame físico detalhado, avaliação auditiva, fundoscopia ocular, neurossonografia transfontanelar (NTF) realizada por neurorradiologista infantil e quando alterada, foram submetidas à ressonância magnética de encéfalo (RMc). Análise de regressão logística foi realizada para verificar a associação de potenciais fatores de risco para ocorrência de surdez neurossensorial relacionada ao CMV e/ou presença de achados anormais em NTF e/ou RMc. A análise da Curva ROC foi utilizada para avaliar a associação da carga do DNA do CMV expresso em log10, com a presença de sintomas ao nascer, achados anormais em NTF e/ou RMc e ocorrência de surdez neurosensorial. Resultados: Em 66 crianças infectadas, os sinais clínicos sugestivos de infecção congênita ao nascer foram observados em 8/66 (12,12%; IC95%: 5,74-23,03), sendo considerados sintomáticos. As 58 crianças restantes foram considerados assintomáticos. A surdez neurossensorial foi observada em 8/66 (12,12%; IC95%: 5,74-23,03%) das crianças. Destas, 4/58 (6,9%; IC95%: 2,23- 17,54%) e 4/8 (50%; IC95%: 17,44-82,55%) crianças eram assintomáticas e sintomáticas, respectivamente. Achados de NTF e/ou RMc sugestivas de infecção congênita foram observadas em 7 de 8 crianças sintomáticas (87,5%; IC95%: 46,67-99,34%). Dentre as 58 assintomáticas, 53 (92,4%) completaram todas as avaliações e destas 29/52 apresentaram alterações sugestivas de infecção congênita em NTF e/ou RMc (55,7%; IC95%: 41,41 - 69,27%). O achado mais comum foi a vasculopatia lenticuloestriada acompanhado ou não de cistos subpendimários (13/29: 43.3%). Outros achados anormais foram os cistos subpendimários como achado isolado (11/29: 37.9%), calcificação única ou periventricular com ou sem áreas de gliose (4/29: 13,8%) e ventriculomegalia (4/29: 13,8%). Análise de regressão logística mostrou que apenas a presença de sintomas clínicos ao nascer foi preditivo para a ocorrência de surdez neurossensorial. Achados de neuroimagens (NTF e/ou RMc) foram observados em 3 de 4 crianças assintomáticas (75%) enquanto 26 (54,2%) de 48 crianças sem surdez tinham avaliações normais de NTF e/ou RMc (p=0,42; RR:2,38: IC95%: 0,26-21,39). Nenhum dos outros fatores de risco foram independentemente associados com surdez. A presença de plaquetopenia e/ou níveis altos de gama glutamil transferase (?GT) foi associado com a presença de achados anormais em NTF e/ou RMc uma análise univariada. O poder discriminatório pela determinação do ponto de corte do valor da carga do DNA do CMV foi avaliada pela área abaixo da curva ROC (AUC) e não houve associação entre a carga viral e a ocorrência de surdez e/ou achados anormais de NTF e/ou RMc. Conclusões: Embora a triagem neonatal da infecção congênita por CMV permita identificar a maioria das crianças infectadas que são clinicamente assintomáticas ao nascer, uma proporção significante destas crianças poderá ser beneficiada por uma avaliação do sistema nervoso central através de NTF, uma vez que, achados anormais são muito frequentes. Embora não tenha sido possível determinar fatores independentemente preditivos de ocorrência de surdez neurossensorial, os achados de NTF podem ser potenciais fatores preditivos de anormalidades tardias em crianças assintomáticas. / The objectives of this study were to verify the impact of congenital cytomegalovirus (CMV) infection at birth and to evaluate potential prognostic predictors of late abnormalities in a cohort of children with this infection. Methods: By means of a CMV neonatal screening, 66 of 11.957 infants were identified as congenitally infected. Infants with and without clinical abnormalities detectable at birth underwent physical examination, cranial ultrasound performed by a paediatric radiologist and/or cranial magnetic resonance imaging, ocular fundoscopy, and hearing evaluation using evoked otoacoustic emissions and auditory brainstem response. Logistic regression analysis was carried out to verify the association between the risk factors for occurrence of hearing loss related to CMV and/ or abnormal cranial ultrasound findings. ROC curve was plotted using the log10 value of CMV DNA load to evaluate the association between viral load and clinical symptoms at birth, abnormal cranial ultrasound findings and hearing loss. Results: Of all 66 infected children, the clinical signs suggestive of congenital infection at birth were observed in 8/66 (12.12%; IC95%: 5.74- 23.03) symptomatic infants. Sensorineural hearing loss was observed in 8/66 (12,12%; IC95%: 5.74-23.03%) children. Of these, 4/58 (6,9%; IC95%: 2.23-17.54%) and 4/8 (50%; IC95%: 17,44-82.55%) children were asymptomatic and symptomatic, respectively. Cranial ultrasound findings suggestive of congenital infection were observed in 7 of the 8 symptomatic children (87.5%; IC95%: 46.67-99.34%). Among the 58 asymptomatic infants, 53 underwent complete evaluation and 29/52 had abnormal cranial ultrasound results (55,7%; IC95%: 41.41 - 69,27%). The most prevalent findings was lenticulostriate vasculopathy with subependymal pseudocysts present in 13 of the /29 (43.3%) infants with cranial ultrasound. Other abnormal findings were isolated subependymal pseudocysts (11/29: 37.9%); single or periventricular calcifications and/or gliosis (4/29: 13.8%); and ventriculomegaly (4/29: 13,8%). Logistic regression analysis showed that only the presence of clinical findings predicted the occurrence of hearing loss. Cranial ultrasound findings were observed in 3 of asymptomatic infants (75.0%) while 26 (54.2%) of 48 infants with no hearing loss had abnormal imaging features (p=0,42; RR:2,38: IC95%: 0,26-21,39). None of the other factors risk were independely associated with development of hearing loss. The presence of thrombocytopenia and/or high level of gamma-glutamyltranspeptidase (?GT) was associated with cranial ultrasound findings on univariated analysis. No discrimination power was achieved using the area under the ROC curve to verify the association between CMV DNA load in the urine of the infected children and the developing of hearing loss, presence of cranial ultrasound findings and clinical signs at birth. Conclusions: Although a neonatal screening of cCMV will identify the majority of infected infants who are clinically asymptomatic, a significant proportion of them could benefit from a central nervous system image evaluation, since abnormal findings are frequent. Althoug it was not possible to determine risk factors that are independently associated to development of sensorineural hearing loss, cranial ultrasound findings could be a potential prognostic markers of adverse outcomes of congenital CMV in asymptomatic infants.

A toxoplasmose é uma infecção mundial que é transmitida por carne contendo cistos teciduais, água ou legumes crus contaminados com oocistos, contato com felinos, ou transmissão vertical. A toxoplasmose é usualmente assintomática, mas pode causar doença severa no feto quando transmitida durante fase aguda na mãe. O rastreamento da toxoplasmose congênita é normalmente executado durante o pré-natal, pela detecção de anticorpos IgM específico ou pela demonstração de aumento dos títulos de anticorpos IgG para T.gondii. Neste trabalho, 160 mães IgM positivas em rastreamento externo foram avaliadas para IgM, IgG, IgA e avidez dos anticorpos IgG em ensaios usando Uréia e NH4SCN como agente caotrópico, e extrato salino e uma proteína recombinante ROP2 como antígeno. A maioria das mães com resultado positivo de IgM eram negativas (124) quando retestadas, 16 negativas para todos os testes e somente 36 casos de IgM e IgG positivos. Nossa reação foi convalidada pelo Kit VIDAS Toxo IgG (Biomerieux), as 15 amostras aleatórias foram concordantes na maioria das amostras, incluindo as 3 de baixa avidez. A maioria das mães com IgG e IgM positivas confirmadas apresentaram índices intermediário e alto de avidez, e apenas 3 com índice baixo de avidez, que é sugestivo de infecção aguda. O uso de proteína recombinante Rop2 como antígeno resultou em muitos falsos negativos. O rastreamento de toxoplasmose congênita em áreas de alta prevalência induz uma baixa eficiência da sorologia, altos índices de pacientes tratados e baixa detecção. Ensaios de avidez são promissores, mas a sua padronização é obrigatória. / Toxoplasmosis is a worldwide infection transmitted by meat containing tissue cysts, water or crude vegetables contaminated with oocysts, contact with feline or vertical transmission. Toxoplasmosis is usually asymptomatic, but it can cause severe disease to the fetus during acute mother infection. The screening of congenital toxoplasmosis is usually been performed during prenatal, by detecting specific IgM antibodies or by demonstration of a significant increase specific IgG antibodies. In this work, 160 confirmed IgM positive mothers by external screening were evaluated for IgM, IgG, IgA, and avidity by several approaches using Urea and NH4SCN as chaotropic agents, and saline extract and a recombinant protein Rop2 as antigen. Most mother (124) were IgM negative when retested, 16 negative for all T.gondii tests and only 36 IgM and IgG positive. Our avidity reaction was convalidated by Kit VIDAS Toxo IgG (Biomerieux), 15 aleatory samples were concordant in most samples, including the 03 low avidity. Most of confirmed IgG and IgM positive mothers presented intermediary or high avidity indexes, only 3 presenting low avidity index, sugestive of acute infection. Use of recombinant proteins Rop 2 as antigen resulted in high false negative. Screening congenital toxoplasmosis in high prevalent areas by IgM serology showed low efficiency, higher treatment rates and low detection of acute infection. Avidity assays are promising markers of recent infection, but false negatives could be frequent.

Os objetivos do estudo consistiram em verificar o impacto da infecção congênita por CMV ao nascer e avaliar potenciais preditores prognósticos de anormalidades tardias em uma coorte de criança s com esta infecção. Métodos: Por meio de uma triagem neonatal, 66 de 11.957 crianças foram identificadas como portadoras de infecção congênita por CMV. Todas as crianças infectadas sintomáticas e assintomáticas foram avaliadas ao nascimento por meio de exame físico detalhado, avaliação auditiva, fundoscopia ocular, neurossonografia transfontanelar (NTF) realizada por neurorradiologista infantil e quando alterada, foram submetidas à ressonância magnética de encéfalo (RMc). Análise de regressão logística foi realizada para verificar a associação de potenciais fatores de risco para ocorrência de surdez neurossensorial relacionada ao CMV e/ou presença de achados anormais em NTF e/ou RMc. A análise da Curva ROC foi utilizada para avaliar a associação da carga do DNA do CMV expresso em log10, com a presença de sintomas ao nascer, achados anormais em NTF e/ou RMc e ocorrência de surdez neurosensorial. Resultados: Em 66 crianças infectadas, os sinais clínicos sugestivos de infecção congênita ao nascer foram observados em 8/66 (12,12%; IC95%: 5,74-23,03), sendo considerados sintomáticos. As 58 crianças restantes foram considerados assintomáticos. A surdez neurossensorial foi observada em 8/66 (12,12%; IC95%: 5,74-23,03%) das crianças. Destas, 4/58 (6,9%; IC95%: 2,23- 17,54%) e 4/8 (50%; IC95%: 17,44-82,55%) crianças eram assintomáticas e sintomáticas, respectivamente. Achados de NTF e/ou RMc sugestivas de infecção congênita foram observadas em 7 de 8 crianças sintomáticas (87,5%; IC95%: 46,67-99,34%). Dentre as 58 assintomáticas, 53 (92,4%) completaram todas as avaliações e destas 29/52 apresentaram alterações sugestivas de infecção congênita em NTF e/ou RMc (55,7%; IC95%: 41,41 - 69,27%). O achado mais comum foi a vasculopatia lenticuloestriada acompanhado ou não de cistos subpendimários (13/29: 43.3%). Outros achados anormais foram os cistos subpendimários como achado isolado (11/29: 37.9%), calcificação única ou periventricular com ou sem áreas de gliose (4/29: 13,8%) e ventriculomegalia (4/29: 13,8%). Análise de regressão logística mostrou que apenas a presença de sintomas clínicos ao nascer foi preditivo para a ocorrência de surdez neurossensorial. Achados de neuroimagens (NTF e/ou RMc) foram observados em 3 de 4 crianças assintomáticas (75%) enquanto 26 (54,2%) de 48 crianças sem surdez tinham avaliações normais de NTF e/ou RMc (p=0,42; RR:2,38: IC95%: 0,26-21,39). Nenhum dos outros fatores de risco foram independentemente associados com surdez. A presença de plaquetopenia e/ou níveis altos de gama glutamil transferase (?GT) foi associado com a presença de achados anormais em NTF e/ou RMc uma análise univariada. O poder discriminatório pela determinação do ponto de corte do valor da carga do DNA do CMV foi avaliada pela área abaixo da curva ROC (AUC) e não houve associação entre a carga viral e a ocorrência de surdez e/ou achados anormais de NTF e/ou RMc. Conclusões: Embora a triagem neonatal da infecção congênita por CMV permita identificar a maioria das crianças infectadas que são clinicamente assintomáticas ao nascer, uma proporção significante destas crianças poderá ser beneficiada por uma avaliação do sistema nervoso central através de NTF, uma vez que, achados anormais são muito frequentes. Embora não tenha sido possível determinar fatores independentemente preditivos de ocorrência de surdez neurossensorial, os achados de NTF podem ser potenciais fatores preditivos de anormalidades tardias em crianças assintomáticas. / The objectives of this study were to verify the impact of congenital cytomegalovirus (CMV) infection at birth and to evaluate potential prognostic predictors of late abnormalities in a cohort of children with this infection. Methods: By means of a CMV neonatal screening, 66 of 11.957 infants were identified as congenitally infected. Infants with and without clinical abnormalities detectable at birth underwent physical examination, cranial ultrasound performed by a paediatric radiologist and/or cranial magnetic resonance imaging, ocular fundoscopy, and hearing evaluation using evoked otoacoustic emissions and auditory brainstem response. Logistic regression analysis was carried out to verify the association between the risk factors for occurrence of hearing loss related to CMV and/ or abnormal cranial ultrasound findings. ROC curve was plotted using the log10 value of CMV DNA load to evaluate the association between viral load and clinical symptoms at birth, abnormal cranial ultrasound findings and hearing loss. Results: Of all 66 infected children, the clinical signs suggestive of congenital infection at birth were observed in 8/66 (12.12%; IC95%: 5.74- 23.03) symptomatic infants. Sensorineural hearing loss was observed in 8/66 (12,12%; IC95%: 5.74-23.03%) children. Of these, 4/58 (6,9%; IC95%: 2.23-17.54%) and 4/8 (50%; IC95%: 17,44-82.55%) children were asymptomatic and symptomatic, respectively. Cranial ultrasound findings suggestive of congenital infection were observed in 7 of the 8 symptomatic children (87.5%; IC95%: 46.67-99.34%). Among the 58 asymptomatic infants, 53 underwent complete evaluation and 29/52 had abnormal cranial ultrasound results (55,7%; IC95%: 41.41 - 69,27%). The most prevalent findings was lenticulostriate vasculopathy with subependymal pseudocysts present in 13 of the /29 (43.3%) infants with cranial ultrasound. Other abnormal findings were isolated subependymal pseudocysts (11/29: 37.9%); single or periventricular calcifications and/or gliosis (4/29: 13.8%); and ventriculomegaly (4/29: 13,8%). Logistic regression analysis showed that only the presence of clinical findings predicted the occurrence of hearing loss. Cranial ultrasound findings were observed in 3 of asymptomatic infants (75.0%) while 26 (54.2%) of 48 infants with no hearing loss had abnormal imaging features (p=0,42; RR:2,38: IC95%: 0,26-21,39). None of the other factors risk were independely associated with development of hearing loss. The presence of thrombocytopenia and/or high level of gamma-glutamyltranspeptidase (?GT) was associated with cranial ultrasound findings on univariated analysis. No discrimination power was achieved using the area under the ROC curve to verify the association between CMV DNA load in the urine of the infected children and the developing of hearing loss, presence of cranial ultrasound findings and clinical signs at birth. Conclusions: Although a neonatal screening of cCMV will identify the majority of infected infants who are clinically asymptomatic, a significant proportion of them could benefit from a central nervous system image evaluation, since abnormal findings are frequent. Althoug it was not possible to determine risk factors that are independently associated to development of sensorineural hearing loss, cranial ultrasound findings could be a potential prognostic markers of adverse outcomes of congenital CMV in asymptomatic infants.

Infecção congênita é aquela transmitida da mãe ao feto antes do nascimento. A transmissão vertical pode ocorrer por via transplacentária ou por contato direto com o patógeno durante o parto. A fonte de infecção é o microrganismo presente no sangue da gestante durante a infecção primária ou crônica. Estima-se que as infecções perinatais representam 2% a 3% de todas anomalias congênitas e as mais comuns são representadas pela sigla TORCH, que inclui Toxoplasmose, Outras (como sífilis e varicela-zoster), Rubeóla, Citomegalovírus e Herpes. A maioria das infecções TORCH causa morbidade materna leve, assintomática, mas tem consequências fetais graves e, em geral, o tratamento da infecção materna não tem impacto sobre o resultado fetal. Por isso, o reconhecimento do contágio materno e o monitoramento fetal são de extrema importância na prevenção de doenças congênitas. O presente projeto visa o desenvolvimento de um produto multiparamétrico utilizando a tecnologia xMAP®, criada pela companhia norte-americana Luminex Corporation, para detecção simultânea de anticorpos da classe IgG anti-Toxoplasmose, anti-Rubéola e anti- Citomegalovírus em amostras de sangue coletado em papel de filtro. O produto, inédito no mercado nacional, tem o objetivo de atender à demanda específica da triagem pré-natal no país. Como objetivos específicos pode-se citar: a melhoria da eficiência dos programas de triagem pré-natal, graças à economia de tempo, amostras e reagentes; a contribuição financeira para o Brasil, uma vez que será produzido nacionalmente, gerando emprego e renda; a possibilidade de ampliar o mercado a partir do desenvolvimento futuro de novos produtos baseados na mesma metodologia. Para tanto, utilizaram-se antígenos específicos acoplados à microesferas de poliestireno e anticorpos de detecção conjugados à estreptavidina-ficoeritrina. Foram analisadas 1499 amostras de gestantes, coletadas em papel de filtro, cedidas e previamente triadas pela APAE-Goiânia, com o objetivo de comparar os resultados obtidos através da análise com o protótipo desenvolvido com aqueles já confirmados pelo laboratório utilizando a tradicional metodologia de ELISA. Os resultados de Concordância e Sensibilidade foram superiores a 78% para todos os parâmetros. Por outro lado, os valores de Especificidade foram mais baixos, principalmente para os parâmetros Rubéola e Citomegalovírus. Importante ressaltar o pequeno número de amostras com resultado negativo para Citomegalovírus e Rubéola disponível, o que refletiu diretamente no cálculo da Especificidade do produto / Congenital infections are transmitted from the mother to the fetus before birth. Vertical transmission can occur via placenta or by direct contact with the pathogen during childbirth. The source of infection is the microorganism present in the pregnant woman\'s blood during primary or chronic infection. It is estimated that perinatal infections are responsible for 2% to 3% of all congenital abnormalities and the most common are represented by the acronym TORCH, including Toxoplasmosis, Others (such as syphilis and varicella-zoster), Rubella, Cytomegalovirus (CMV) and Herpes. Most infections TORCH causes mild maternal morbidity, asymptomatic, but has serious fetal consequences fetal and, generally, maternal infection treatment has no impact on fetal outcome. Therefore, the recognition of maternal infection and fetal monitoring are extremely important in preventing birth defects. This project aims to develop a product using the multiplex xMAP® technology, created by US company Luminex Corporation, for simultaneous detection of IgG antibodies anti-toxoplasmosis, antirubella and anti-cytomegalovirus in blood samples collected in filter paper. The product, unprecedented in brazilian market, aims to meet the specific demand of prenatal screening in Brazil. The specific objectives are: improving the efficiency of prenatal screening programs, thanks to savings in time, samples and reagents; the financial contribution for Brazil, as it will be produced nationally, generating jobs and income; the possibility of expanding the market from the future development of new products based on the same methodology. For this purpose, were used specific antigens coupled to polystyrene beads and antibodies conjugated to streptavidin-phycoerythrin. Were analyzed 1499 samples of pregnant women, collected on filter paper, pre-screened by APAE-Goiânia, in order to compare the results obtained from the analysis with the prototype developed with those already confirmed by the laboratory using traditional ELISA methodology. The results of Concordance and Sensitivity were higher than 78% for all parameters. In contrast, the Specificity values were lower, especially for Rubella and Cytomegalovirus parameters. Importantly the small number of negative samples negative for Cytomegalovirus and Rubella provided by APAE-Goiânia, which is directly reflected in the product specificity value.

Infecção congênita é aquela transmitida da mãe ao feto antes do nascimento. A transmissão vertical pode ocorrer por via transplacentária ou por contato direto com o patógeno durante o parto. A fonte de infecção é o microrganismo presente no sangue da gestante durante a infecção primária ou crônica. Estima-se que as infecções perinatais representam 2% a 3% de todas anomalias congênitas e as mais comuns são representadas pela sigla TORCH, que inclui Toxoplasmose, Outras (como sífilis e varicela-zoster), Rubeóla, Citomegalovírus e Herpes. A maioria das infecções TORCH causa morbidade materna leve, assintomática, mas tem consequências fetais graves e, em geral, o tratamento da infecção materna não tem impacto sobre o resultado fetal. Por isso, o reconhecimento do contágio materno e o monitoramento fetal são de extrema importância na prevenção de doenças congênitas. O presente projeto visa o desenvolvimento de um produto multiparamétrico utilizando a tecnologia xMAP®, criada pela companhia norte-americana Luminex Corporation, para detecção simultânea de anticorpos da classe IgG anti-Toxoplasmose, anti-Rubéola e anti- Citomegalovírus em amostras de sangue coletado em papel de filtro. O produto, inédito no mercado nacional, tem o objetivo de atender à demanda específica da triagem pré-natal no país. Como objetivos específicos pode-se citar: a melhoria da eficiência dos programas de triagem pré-natal, graças à economia de tempo, amostras e reagentes; a contribuição financeira para o Brasil, uma vez que será produzido nacionalmente, gerando emprego e renda; a possibilidade de ampliar o mercado a partir do desenvolvimento futuro de novos produtos baseados na mesma metodologia. Para tanto, utilizaram-se antígenos específicos acoplados à microesferas de poliestireno e anticorpos de detecção conjugados à estreptavidina-ficoeritrina. Foram analisadas 1499 amostras de gestantes, coletadas em papel de filtro, cedidas e previamente triadas pela APAE-Goiânia, com o objetivo de comparar os resultados obtidos através da análise com o protótipo desenvolvido com aqueles já confirmados pelo laboratório utilizando a tradicional metodologia de ELISA. Os resultados de Concordância e Sensibilidade foram superiores a 78% para todos os parâmetros. Por outro lado, os valores de Especificidade foram mais baixos, principalmente para os parâmetros Rubéola e Citomegalovírus. Importante ressaltar o pequeno número de amostras com resultado negativo para Citomegalovírus e Rubéola disponível, o que refletiu diretamente no cálculo da Especificidade do produto / Congenital infections are transmitted from the mother to the fetus before birth. Vertical transmission can occur via placenta or by direct contact with the pathogen during childbirth. The source of infection is the microorganism present in the pregnant woman\'s blood during primary or chronic infection. It is estimated that perinatal infections are responsible for 2% to 3% of all congenital abnormalities and the most common are represented by the acronym TORCH, including Toxoplasmosis, Others (such as syphilis and varicella-zoster), Rubella, Cytomegalovirus (CMV) and Herpes. Most infections TORCH causes mild maternal morbidity, asymptomatic, but has serious fetal consequences fetal and, generally, maternal infection treatment has no impact on fetal outcome. Therefore, the recognition of maternal infection and fetal monitoring are extremely important in preventing birth defects. This project aims to develop a product using the multiplex xMAP® technology, created by US company Luminex Corporation, for simultaneous detection of IgG antibodies anti-toxoplasmosis, antirubella and anti-cytomegalovirus in blood samples collected in filter paper. The product, unprecedented in brazilian market, aims to meet the specific demand of prenatal screening in Brazil. The specific objectives are: improving the efficiency of prenatal screening programs, thanks to savings in time, samples and reagents; the financial contribution for Brazil, as it will be produced nationally, generating jobs and income; the possibility of expanding the market from the future development of new products based on the same methodology. For this purpose, were used specific antigens coupled to polystyrene beads and antibodies conjugated to streptavidin-phycoerythrin. Were analyzed 1499 samples of pregnant women, collected on filter paper, pre-screened by APAE-Goiânia, in order to compare the results obtained from the analysis with the prototype developed with those already confirmed by the laboratory using traditional ELISA methodology. The results of Concordance and Sensitivity were higher than 78% for all parameters. In contrast, the Specificity values were lower, especially for Rubella and Cytomegalovirus parameters. Importantly the small number of negative samples negative for Cytomegalovirus and Rubella provided by APAE-Goiânia, which is directly reflected in the product specificity value.

Submitted by Marlene Santos (marlene.bc.ufg@gmail.com) on 2016-09-08T19:21:08Z No. of bitstreams: 2 Dissertacão - Taynara Cristina Gomes - 2016.pdf: 2697158 bytes, checksum: efd1f7ed4fcc4ac2659d5cde95cc18fd (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-09-09T14:50:58Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertacão - Taynara Cristina Gomes - 2016.pdf: 2697158 bytes, checksum: efd1f7ed4fcc4ac2659d5cde95cc18fd (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-09T14:50:58Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertacão - Taynara Cristina Gomes - 2016.pdf: 2697158 bytes, checksum: efd1f7ed4fcc4ac2659d5cde95cc18fd (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-07-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / The congenital transmission is considered one of the main pathways of Trypanosoma cruzi infection. Retrospective studies of pregnant women population with Chagas disease (CD) allow the study of the epidemiological profile of this population which contributes to the knowledge of the congenital CD prevalence in Brazil. This study evaluated the triage of T. cruzi congenital infection in new-borns through the newborn screening aiming the precocious detection of congenital transmission as well as its retrospective analysis of the seroepidemiological profile of the infected pregnant women dwelling in Goias State in a period of three years (2013-2015). The retrospective study used the data base of the Association of Parents and Friends of Special Needs Individuals (APAE) of Goiania. The analysis showed that the prevalence of CD infected pregnant women from 0.24% to 0.17%, with a decrease throughout the years. Most of these pregnant women had ≥31 years old, which is in accordance with the success of Triatoma infestans vectorial transmission control and transfusional control programmes, improvement in dwellings and better efficacy in diagnostics and therapeutics. The prospective study used the IFI and ELISA techniques for serology and filter paper detection. A total of 967 samples of dry blood in filter paper were collected in three public health units in Goiania and Aparecida de Goiania. From these samples 19 (1.96%) which were collected in filter paper from newborns were from mothers who declared to have CD. Results showed that 8 (42%) from the 19 samples were reagent to IgG anti-T. cruzi in both technique used. Peripheral blood was collected in seven mothers and their respective children. The serum samples were analyzed and the results confirmed IgG positive serology anti-T. cruzi with rates and titulation similar between mother and their respective newborn. Also there was accordance between the serology and the filter paper results which validates this strategy in the newborn screening triage from children from chronically infected mother. This study highlights the importance of the prenatal and neonatal care that precociously identifies the T. cruzi infection and also of programmes of health education about CD to the pregnant women population. / A transmissão congênita é considerada uma das principais vias de infecção pelo Trypanosoma cruzi. Estudos retrospectivos da população de gestantes com doença de Chagas (DC) viabilizam o estudo do perfil epidemiológico desta população, contribuindo para conhecimento da prevalência da DC congênita no Brasil. Este estudo avaliou a triagem de infecção por T. cruzi em recém-nascidos através do teste do pezinho, visando o diagnóstico precoce da transmissão congênita, como também a análise restrospectiva do perfil soroepidemiológico de gestantes infectadas residentes no estado de Goiás em um período de três anos (2013-2015). Para o estudo retrospectivo foi utilizado a base de dados da Associação de Pais e Amigos dos Excepcionais (APAE) de Goiânia. As análises mostraram que a prevalência de gestantes com DC variou de 0,24% a 0,17%, apresentando um declínio com o decorrer dos anos. Foi também possível evidenciar que a maioria destas gestantes possuía idade ≥31 anos, dados que corroboram com o sucesso de programas de controle da transmissão vetorial pelo Triatoma infestans e transfusional, melhoria habitacional e melhor eficiência do diagnóstico e da terapêutica. Para o estudo prospectivo foram utilizados os métodos de IFI e ELISA para a sorologia tanto em papel filtro (PF) e soro. Um total de 967 amostras de sangue seco em papel filtro (PF) foi coletado em três unidades de saúde pública em Goiânia e Aparecida de Goiânia, destes, 19 (1,96%), amostras de sangue em PF de RN foram de mães que se autodeclararam com a doença de Chagas. Os resultados mostraram que oito (42%) destas 19 amostras foram reagentes para IgG anti-T. cruzi em ambas as técnicas. Foi coletado sangue periférico em sete mães com seus respectivos filhos. As amostras de soro foram analisadas e os resultados confirmaram sorologia IgG anti-T. cruzi com índices e titulações semelhantes entre mães e seus respectivos RN, havendo concordância entre os resultados obtidos pela sorologia e o PF, validando esta estratégia na triagem dos RN de mães cronicamente infectadas. Este estudo salienta a importância de um acompanhamento pré-natal e neonatal que identifique precocemente a infecção por T. cruzi e também programas de conscientização sobre a DC na população de gestantes.