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Derivação de células tronco pluripotentes induzidas a partir de pacientes com doenças mitocondriais como modelo de estudo da herança mitocondrial / Induced pluripotent stem cells derived from patients with mitochondrial diseases as a model for studying mitochondrial inheritance

Macabelli, Carolina Habermann 30 November 2015 (has links)
Submitted by Caroline Periotto (carol@ufscar.br) on 2016-09-12T14:10:40Z No. of bitstreams: 1 DissCHM.pdf: 2847929 bytes, checksum: db6163924f9983d42120de5673f3df0a (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-09-13T14:25:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DissCHM.pdf: 2847929 bytes, checksum: db6163924f9983d42120de5673f3df0a (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-09-13T14:25:18Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DissCHM.pdf: 2847929 bytes, checksum: db6163924f9983d42120de5673f3df0a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-13T14:25:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DissCHM.pdf: 2847929 bytes, checksum: db6163924f9983d42120de5673f3df0a (MD5) Previous issue date: 2015-11-30 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Mitochondrial dysfunctions caused by mutations in the mitochondrial DNA (mtDNA) represent an important group of human pathologies. However, it is not possible to predict with accuracy the risk of a woman with mutant mtDNA to transmit her pathology to her descendants. This is mainly due to out limited understanding of the molecular basis of mitochondrial inheritance. Since development of a technology that enabled derivation of induced pluripotent stem cells (iPSCs) from in vitro culture of somatic cells, iPSCs have become an interesting model to study mitochondrial inheritance. Derivation of iPSCs from patients with pathogenic mtDNA mutations has revealed that the mutant load decreases through in vitro culture of iPSCs, suggesting the existence of a specific mechanism that eliminates mutant mtDNA in the germ line. Thus, the aim of this work was to use iPSCs derived from patients with mitochondrial disorders to investigate the existence of a mechanism that eliminates mtDNA molecules with pathogenic mutations. In this way, we used heteroplasmic fibroblasts harboring a point mutation A3243G in mtDNA causing mitochondrial encephalomyopathy, lactic acidosis and stroke-like episodes (MELAS); heteroplasmic fibroblasts harboring a deletion in mtDNA causing Kearn-Sayre Syndrome (KSS) and homoplasmic fibroblasts containing only wild-type mtDNA (Control). The KSS lineage derivation resulted in iPSCs with low levels of mutant mtDNA (<0,1%), and the elimination of mutant molecules during the culture. The MELAS derivation resulted in iPSCs with high levels of mutant mtDNA (> 98%), and indication of mutant molecules elimination as well. However, unexpectedly, there was no reduction of mtDNA content in iPSCs compared to fibroblasts in all lineages. On contrary, mtDNA copy number increased in MELAS and KSS iPSCs, perhaps due to the high levels of mutations in the cells. No effect of Rapamycin (mitophagy inductor) treatment was detected on the yield of colony formation in MELAS iPSCs. Additionally, Rapamycin did not affect the mutation levels in MELAS iPSCS compared to untreated iPSCs. Finally, gene expression analysis of MELAS iPSCs provided evidences of an autophagic mechanism directed towards the mitochondrion. / Disfunções mitocondriais causadas por mutações no DNA mitocondrial (mtDNA) representam um importante grupo de patologias humanas. No entanto, não é possível predizer com acurácia o risco de uma mulher acometida por uma mutação no mtDNA transmitir a patologia para seus descendentes. Isso se deve, em parte, ao desconhecimento dos mecanismos moleculares que controlam a herança mitocondrial. Com o desenvolvimento de metodologias que possibilitam a derivação de células pluripotentes induzidas (iPSCs) a partir de células somáticas cultivadas in vitro, as iPSCs se tornaram um interessante modelo para o estudo da herança mitocondrial. A derivação de iPSCs de pacientes com mutações patogênicas no mtDNA tem revelado que a porcentagem de moléculas mutantes diminui ao longo do cultivo, sugerindo a existência na linhagem germinativa de mecanismos específicos para eliminação de mtDNAs mutantes. Portanto, o presente trabalho investigou em iPSCs derivadas de pacientes com desordens mitocondriais a existência de um mecanismo celular que elimina as moléculas de mtDNA com mutações patogênicas. Para tanto, foram utilizados fibroblastos heteroplásmicos portadores da mutação pontual A3243G no mtDNA causadora de encefalomiopatia mitocondrial, acidose lática e episódios tipo acidente vascular cerebral (MELAS); fibroblastos heteroplásmicos portadores de uma deleção de 4,9 kb no mtDNA causadora da Síndrome de Kearns-Sayre (KSS) e fibroblastos Controle, contendo apenas mtDNA selvagem. A derivação de linhagens portadoras de KSS resultou em iPSCs com baixos níveis de mtDNA mutante (< 0,1%), e na eliminação de moléculas mutantes ao longo do cultivo. A derivação de linhagens portadoras de MELAS resultou em iPSCs com alta taxa de mutação (> 98%), também com indícios de diminuição da quantidade de moléculas mutantes ao longo do cultivo. No entanto, ao contrário do esperado, não houve diminuição da quantidade de cópias de mtDNA nas iPSCs em relação aos fibroblastos em todas as linhagens (Controle, KSS e MELAS), sendo que as iPSCs de MELAS e KSS apresentaram um aumento significativo na quantidade de cópias de mtDNA, provavelmente devido a efeitos causados pela mutação no mtDNA. Ao analisar o efeito do tratamento com Rapamicina (indutor de mitofagia) durante a derivação de MELAS não observamos aumento na eficiência de formação de colônias, além de o tratamento não afetar a quantidade de mtDNA mutante, resultando em iPSCs com níveis de mutação similares aos encontrados nas iPSC MELAS não tratadas com o rapamicina. Por fim, resultados de expressão gênica das iPSCs do grupo MELAS revelaram indícios de mecanismos autofágicos direcionados a mitocôndria provavelmente devido ao efeitos causados pela a alta taxa da mutação. / 2013/13869-5
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Controle genético da resistência de Capsicum frutescens à Meloidogyne enterolobii / Genetic control of the resistance in Capsicum frutescens to Meloidogyne enterolobii

Diniz, Guilherme Matos Martins [UNESP] 27 October 2016 (has links)
Submitted by Guilherme Matos Martins Diniz null (guilhermedinizz@yahoo.com.br) on 2016-11-12T20:47:10Z No. of bitstreams: 1 Tese - Guilherme Matos Martins Diniz.pdf: 1713375 bytes, checksum: 4e35cf3867e761830ba22f92034a1e15 (MD5) / Rejected by Felipe Augusto Arakaki (arakaki@reitoria.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo a orientação abaixo: O arquivo submetido não contém o certificado de aprovação fornecido pela Seção de Pós-Graduação. . Corrija esta informação e realize uma nova submissão com o arquivo correto. Agradecemos a compreensão. on 2016-11-18T19:54:47Z (GMT) / Submitted by Guilherme Matos Martins Diniz null (guilhermedinizz@yahoo.com.br) on 2016-11-19T00:18:22Z No. of bitstreams: 1 TESE - Guilherme Matos Martins Diniz.pdf: 1878561 bytes, checksum: ae58a835b95bed9b80bdbc3c2fd5633a (MD5) / Approved for entry into archive by Felipe Augusto Arakaki (arakaki@reitoria.unesp.br) on 2016-11-22T16:25:43Z (GMT) No. of bitstreams: 1 diniz_gmm_dr_jabo.pdf: 1878561 bytes, checksum: ae58a835b95bed9b80bdbc3c2fd5633a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-11-22T16:25:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 diniz_gmm_dr_jabo.pdf: 1878561 bytes, checksum: ae58a835b95bed9b80bdbc3c2fd5633a (MD5) Previous issue date: 2016-10-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Os nematoides das galhas estão entre os patógenos que mais causam prejuízos em cultivos protegidos de pimentão, destacando-se as espécies Meloidogyne incognita, M. javanica e M. enterolobii. Este último já foi relatado em plantas de Capsicum spp., e vem causando problemas, pois a utilização de genótipos resistentes a outras espécies não é eficaz em seu controle. Estudos relacionados à resistência a esse patógeno, bem como a obtenção de fontes de resistência ainda são escassos, o que dificulta a adoção de programas de melhoramento genético, visando a esse fim. Sendo assim, o presente trabalho teve por objetivo estudar a herança da resistência à M. enterolobii em Capsicum frutescens. O trabalho foi desenvolvido na UNESP-FCAV, Câmpus de Jaboticabal-SP. Para o estudo da herança da resistência, foi realizado o cruzamento entre C. frutescens, resistente a M. enterolobii e uma linhagem de pimenta C24, C. chinense, suscetível a nematoide. A partir desse cruzamento, foram obtidas as gerações F1, F2, RC1 e RC2. Depois de obtidas todas as gerações necessárias para o estudo, as plantas foram inoculadas com 5.000 ovos e juvenis de segundo estádio de M. enterolobii no ato do transplantio. Após 60 dias da inoculação, realizou-se a avaliação da resistência das plantas ao nematoide, coletando-se as raízes e realizando-se os procedimentos de extração dos nematoides em laboratório. A avaliação da resistência das plantas aos nematoides foi realizada com base no fator de reprodução (FR), sendo consideradas FR ≥ 1, suscetíveis, e FR < 1, resistentes. Os dados foram avaliados pelo teste qui-quadrado e cinco metodologias de avaliação dos genes envolvidos no controle, além do teste de máxima verossimilhança para a verificação da presença de efeitos relacionados ao ambiente ou polígenes. A análise genética mostrou ausência de dominância e epistasia, indicando ação gênica somente aditiva. A dominância apresentada tendeu à suscetibilidade, indicando que a resistência é recessiva. O número de locos segregantes mostrou que apenas um gene estaria envolvido na herança da resistência à M. enterolobii. O valor de herdabilidade foi alto, evidenciando possibilidade de ganho seletivo sendo um caráter pouco afetado pelo ambiente. Todas as plantas da geração F1 foram suscetíveis, as gerações F2 e retrocruzamentos tiveram variações de sintomas do parasitismo. A hipótese de herança monogênica foi aceita, de acordo com os métodos estatísticos utilizados no estudo, até o limite de significância do qui-quadrado. O controle genético da resistência à M. enterolobii, em C. frutescens é monogênico recessivo. / Root-knot nematode are among the pathogens that cause most damage in pepper crops protected highlighting the species Meloidogyne incognita, M. javanica and M. enterolobii. The latter has been reported in plants Capsicum spp., and causes problems since the use of resistant genotypes other species is not effective as a control. Studies related to resistance to this pathogen as well as obtaining sources of resistance are still scarce, hindering the adoption of breeding programs for this purpose. Therefore, this study aimed to study the inheritance of resistance to M. enterolobii in Capsicum frutescens. The study was conducted at UNESP-FCAV in Jaboticabal-SP. To study the inheritance of resistance was the cross between C. frutescens, resistant M. enterolobii and C24 pepper strain, C. chinense, susceptible to the nematode. From this junction were obtained F1, F2, BC1 and BC2. After obtaining all generations necessary for the study, the plants were inoculated with 5.000 eggs and juveniles of second stage M. enterolobii in transplanting the act. After 60 days of inoculation was performed to evaluate the resistance of plants to nematode collecting the roots and carrying out the nematode extraction procedures in the laboratory. The evaluation of plant resistance to nematodes was performed based on the reproduction factor (RF) is considered FR ≥ 1, and RF susceptible <1 resistant. The data were analyzed by chi-square test five methods of assessing the genes involved in the control beyond the maximum likelihood test for the presence of related environmental effects or polygenes. Genetic analysis showed no dominance and epistasis indicating only additive gene action. The dominance presented tended susceptibility, indicating that resistance is recessive. The number of loci segregating showed that only one gene was involved in the inheritance of resistance to M. enterolobii. The heritability value was high showing possibility of selective gain being one character unaffected by the environment. All plants of F1 generation were susceptible, generations, F2 and backcross had variations of symptoms of parasitism. The hypothesis of monogenic inheritance was accepted, according to the statistical methods used in the study, up to the limit of significance of the chi-square. The genetic control of resistance to M. enterolobii in C. frutescens is monogenic recessive.
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A sucessão geracional na agricultura familiar num contexto de mercantilização e modernização: um estudo em duas comunidades do Sudoeste do Paraná

Kischener, Manoel Adir 27 February 2015 (has links)
O novo padrão de modernização da agricultura e a mercantilização que vigora na maior parte das regiões rurais do Brasil também se faz presente no Sudoeste do Paraná. Assim, estudar a estratégia de reprodução social da agricultura familiar e sua sucessão geracional pode refletir os mesmos fatores que a condicionam nessa nova ruralidade. Neste sentido, procura-se verificar quais são os fatores que interferem na sucessão geracional da agricultura familiar e perceber o quanto a modernização da agricultura a tornou mais complexa; para tanto, partiu-se de um estudo comparativo entre duas comunidades, que demandou entrevistas com 50 famílias rurais seguidas de sessões de grupo focal. Desse estudo, percebeu-se que os fatores que favorecem a permanência dos jovens no meio rural são, principalmente, a renda, os valores de comunidade e a inclusão dos projetos de vida dos filhos nas estratégias de reprodução social da família. / The new pattern of modernization of agriculture and the commodification in force in most rural areas of Brazil is also present in the Southwest of Paraná. So, study the strategy of social reproduction of family farming and its generational succession may reflect the same factors that condition this new rurality. In this sense, looking ascertain what are the factors affecting the generational succession of the family farm and see how the modernization of agriculture to become more complex; to this end, we started with a comparative study between two communities, which required interviews with 50 rural families followed by focus group sessions. From this study, it was noted that the factors that favor the permanence of young people in rural areas are mainly income, community values and the inclusion of life projects of the children in the family social reproduction strategies.
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Presságios literários e herança plástica: Emerson e Thoreau; Richard Serra, Waltercio Caldas e outros / Literary omens and visual inheritance: Emerson and Thoreau; Richard Serra, Waltercio Caldas and others

Marcelo Lins de Magalhães 27 March 2013 (has links)
Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / O presente estudo ambiciona examinar as escritas literárias de Ralph Waldo Emerson (1803-1882) e Henry David Thoreau (1817-1862) considerando-as como uma forma de presságio de arte na América, ou seja, como uma escrita literária que parece ter sido herdada no ambiente artístico das obras plásticas contemporâneas de Richard Serra (1939-) e Waltercio Caldas (1946-), entre outras. Tal herança endossa a noção de linguagem ordinária, compreendida como o ponto de acolhimento, ou de uma inquietação, que se faz presente nas circunstâncias da contemporaneidade. Por sua vez, o gesto de endereçamento que envolve estas escrituras expressa a marca de uma indecibilidade acerca da continuidade ou descontinuidade da existência de categorias como literatura, filosofia e artes. Assim, a problematização dessas remissões ganha vulto no presente estudo, por meio de uma abordagem em perspectiva comparada entre Thoreau, Emerson, Waltercio, Serra e outros. E deste modo, a questão que se estabelece nesse panorama diz respeito aos problemas do pensamento, que em âmbito plástico parecem se estender para uma tradição crítica no Novo Mundo / The following study aims to examine Ralph Waldo Emerson (1803-1882) and Henry David Thoreaus (1817-1862) literary writings considering them as a form of omen of art in America, in other words, as a literary writing that seems to have been inherited from the artistic environment of the contemporary art works by Richard Serra (1939-) and Waltercio Caldas (1946-), among others. Such heritage endorses the notion of ordinary language, understood as the point of reception, or the point of an uneasiness, that was present in the contemporary circumstances. In turn, the addressing gesture which involves these scriptures express the mark of an undecidability on the continuity or discontinuity of the existence of categories such as literature, philosophy and arts. Thus, the problematization of these remissions obtains prominence in this study, by means of a comparative approach among Thoureau, Emerson, Waltercio, Serra and others. In this way, the question that is established in this panorama concerns the thought problems, which in the plastic scope seem to be extended up to a criticism tradition in the New World
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Aspectos embriológicos de espécies do gênero Passiflora (Passifloraceae), com ênfase no potencial de herança organelar

Silvério, Adriano January 2009 (has links)
O presente trabalho analisou as etapas de formação de rudimentos seminais e grãos de pólen de Passiflora elegans e P. haematostigma. As espécies foram analisadas fazendo-se o uso de microscopia fotônica e microscopia eletrônica de varredura e transmissão. O gineceu apresenta um estigma com emergências estigmáticas, estilete sólido e ovário tricarpelar e unilocular. O ovário apresenta inúmeros rudimentos seminais que formam-se a partir de divisões periclinais da camada central. Os rudimentos são crassinucelados e os tegumentos têm origem dérmica. A célula arquesporial divide-se mitoticamente antes da meiose. A meiose resulta em uma tétrade linear, com ginósporo calazal viável. A ginogametogênese é do tipo Poligonum e, durante a diferenciação do ginófito, os estratos parietais do nucelo são parcialmente consumidos e a epiderme nucelar divide-se periclinalmente na porção apical. As antípodas são efêmeras e o ginófito maduro apresenta duas sinérgides com aparelho fibrilar desenvolvido, oosfera e núcleo secundário no pólo micropilar. O rudimento seminal é anátropo, arilado, bitegumentado e com micrópila em “zig-zag”. O androceu é constituído por cinco anteras tetrasporangiadas. Os estratos parietais desenvolvem-se do tipo Dicotiledôneo e as camadas médias são persistentes na antera madura de P. haematostigma. As células do tapete são poliplóides e colapsam liberando os conteúdos no interior do lóculo. A citocinese é do tipo simultânea e as tétrades são tetraédricas na maioria. O pólen é liberado na fase bicelular, apresenta número de colpos variável em P. elegans e seis colporos em P. haematostigma. A esporoderme não apresenta camada basal em P. elegans e é mais espessa do que em P. haematostigma. Plastídios e mitocôndrias são englobados durante a formação da célula generativa e persistem até a fase de pólen maduro. / The present work analyzed the different developmental stages of the ovule and of the pollen grain in Passiflora elegans and P. haematostigma. The species were analyzed using photonic microscopy and scanning and transmission electron microscopy. The gynoecium has a stigma with stigmatic outgrowths, solid style and tricarpelar and unilocular ovary. The ovary has several seminal rudiments that are originated from the periclinal divisions of the central layer. The ovule is crassinucelate and the dermal layer originates the integuments. The arquesporial cell divides mitotically before meiosis. The meiosis results into a linear tetrad and only the chalazal gynospore is viable. The gynogametogenesis is of the Poligonum type, the nucellus parietal layers are partially degraded during the gynophyte differentiation, and nuclear epidermis divides periclinally in the apical portion. The antipodal cells are ephemeral and the mature gynophyte has two synergids with a developed filiform apparatus, egg cell and secondary nuclei in the micropilar pole. The ovule is anatropous, arillate, bitegmic and with zig-zag micropile. The androecium is constituted of five tetrasporangiate anthers. The parietal layers develop like the Dicotiledoneous type and middle layers are persistent in the mature anther of P. haematostigma. The tapetal cells are polyploids and collapse releasing their contents to the locus. The cytokinesis is of the simultaneous type and most of the tetrads are tetrahedral. The pollen is released during the bicellular stage, has a variable number of colpus in P. elegans and six colporus in P. haematostigma. The sporoderm does not have a basal layer in P. elegans and is thicker than in P. haematostigma. Plastids and mitochondria are enclosed during the generative cell formation and persist until the mature pollen stage.
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Ověření dědičnosti barev okrasného kapra koi s využitím metod genomových manipulací / The assessment of colour inheritance in ornamental koi carp with the use of genome manipulation methods

ŠTĚCH, Luděk January 2009 (has links)
The goal of this thesis was to assess colour inheritance in Showa tricolour variety of koi carp (black basis, white and red signs). Fish of the same colouration were pair-mated. Colouration of fingerlings was assessed in one day age. Colouration was observed in two forms, like melanin pigmentation and non-melanin pigmentation (black- pigmented and gold -pigmented fingerlings). In the tests, gynogenesis was employed, transmissing only mother`s genome to offspring. Gynogenesis was practiced in RIFCH USB in Vodnany. Gynogenetic offspring was further photographically documented to assess colouration of fingerlings and relationship between both variants of colouration. Fry from propagation was bred in ponds to the size stage of advanced fry (Kr; 90-day old, size 5- 6 cm). In this size, fingerlings were caught from breeding ponds, counted and further documented to check phenotype segregation.
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A view from Family Law and Inheritance Law, concerning the right of residence of the surviving spouse or survivor is the case of the cohabitation / Una mirada desde el Derecho de Familia y Sucesorio, a propósito del derecho de habitación del cónyuge supérstite o si fuere el caso del sobreviviente de la unión de hecho

Aguilar Llanos, Benjamín 12 April 2018 (has links)
This article focuses on the family estate and the natural fact as death does not end the legal relationships that have led to the heritage that formed the family heritage, this transcends the subject. Therefore, the law regulates the transfer of the rights goods and obligations of the deceased in favor of the person that are his successors. In conclusion, death generates legal consequences. / El presente artículo versa sobre el patrimonio familiar y como un hecho natural como la muerte no culmina las relaciones jurídicas que han dado lugar al patrimonio que formó, sino que ésta trasciende al sujeto, y por ello el Derecho regula la transmisión de los bienes derechos y obligaciones de la persona fallecida a favor de los que resulten sus sucesores. Es decir, la muerte genera consecuencias jurídicas.
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The assignment of the right to participate in the heritage / La llamada cesión de derecho a participar en patrimonio hereditario

Lohmann Villena, Guillermo 25 September 2017 (has links)
Article 1209 of the Peruvian Civil Code regulates the situation in which the sole heiror any of them decides to transfer all or partof its estate to a third party, including rights and obligations. This is commonly known asan assignment of inheritance.In this article, the author presents a complete analysis on how the assignment of inheritance operates in certain situations, emphasizing in issues related to the liability of the assignee against creditors and the role of the transferor, as well as the necessary formalities for the transference. / El artículo 1209 del Código Civil regula el supuesto en que el heredero único o algunode los herederos de un patrimonio decidentransferir todo o parte de su patrimonio a untercero, incluyendo derechos y obligaciones. Esto, comúnmente, se conoce como cesión deherencia.En el presente artículo, el autor nos presenta un completo análisis respecto a cómo opera la cesión de herencia en determinados supues- tos, haciendo hincapié en los temas referentes a la responsabilidad del cesionarios frente a los acreedores y el rol del cedente, así como las formalidades que se debe seguir para llevar a cabo dicha cesión.
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Transferência de citoplasma submetido ao estresse oxidativo como modelo para o estudo da herança de doenças mitocondriais / Transplantation of cytoplasm subjected to oxidative stress as a model for study of mitochondrial disease inheritance

Thiago Simões Machado 30 September 2014 (has links)
Patologias causadas por mutações no DNA mitocondrial (mtDNA) constituem um importante grupo de doenças genéticas em humanos. Todavia, devido ao desconhecimento dos mecanismos que governam a herança mitocondrial, não existem métodos eficientes que permitam prever ou intervir na herança destas patologias. Estudos recentes indicam que mutações no mtDNA são seletivamente eliminadas na linhagem germinativa. O presente projeto investigou se o embrião é capaz de eliminar mitocôndrias disfuncionais durante o desenvolvimento pré-implantação. Para tanto, zigotos de camundongo foram tratados com clorometil-X-rosamina (MitoTracker Red CMXRos) e fotossensibilizados por 0, 2,5, 5, 10, 20 e 60 s. Houve diminuição da taxa de blastocisto, com bloqueio total do desenvolvimento quando a fotossensibilização foi realizada por período igual ou superior a 20 s. A fotossensibilização também resultou em disfunção mitocondrial, como indicado por diminuição do potencial de membrana mitocondrial. No entanto, a transferência de citoplasma de zigotos NZB/BINJ (NZB) fotossensibilizados por 20 s não afetou o desenvolvimento de embriões C57BL/6 (B6). A quantidade de mtDNA NZB também não diferiu entre os zigotos B6, independente de terem recebido citoplasma exposto ou não à fotossensibilização (30,6% ± 1,73 vs. 30,8% ± 1,73). Porém, a quantidade de mtDNA NZB foi menor (P = 0,008) nos blastocistos que receberam citoplasma fotossensibilizado (31,4% ± 1,43 vs. 24,7% ± 1,43). Como a quantidade total de mtDNA não diferiu entre os grupos, estes resultados sugerem que as mitocôndrias disfuncionais introduzidas foram destruídas. A análise de autofagossomos indicou, no entanto, que as mitocôndrias NZB não foram eliminadas por mitofagia. Diferente do esperado, o cultivo na presença de rapamicina reverteu o efeito causado pela introdução de citoplasma fotossensibilizado, resultando em níveis semelhantes de mtDNA NZB em comparação com os blastocistos que receberam citoplasma não fotossensibilizado. Concluiu-se que o embrião de camundongo é capaz de destruir mitocôndrias disfuncionais durante o desenvolvimento à blastocisto. Novos estudos deverão fornecer evidências adicionais e esclarecer os mecanismos moleculares que fundamentam esses achados. / Pathologies caused by mutations in mitochondrial DNA (mtDNA) represent an important group of genetic diseases in humans. Nonetheless, due to our limited understanding of the molecular mechanisms of mitochondrial inheritance there are no efficient methods to predict or intervene in the inheritance of these diseases. Recent studies indicate that mutations in mtDNA are selectively eliminated in the germline. This project investigated the ability of the embryo to target and eliminate dysfunctional mitochondria during early development. To test that, mouse zygotes were treated with chloromethyl-X-rosamina (MitoTracker Red CMXRos) and photosensitized for 0, 2.5, 5, 10, 20 and 60 s. There was a decrease in the rate of blastocyst development and a developmental arrest when the photosensitization was performed for a period equal to or greater than 20 s. Photosensitization also resulted in mitochondrial dysfunction, as indicated by a decreased of mitochondrial membrane potential. However, cytoplasmic transfer from NZB/BINJ (NZB) zygotes photosensitized for 20 s resulted in no effect on development of C57BL/6 (B6) embryos. The amount of NZB mtDNA introduced also did not differ between B6 zygotes, regardless of whether they received or not photosensitized cytoplasm (30.6% ± 1.73 vs. 30.8 ± 1.73%). On the other hand, the amount of NZB mtDNA was lower (P = 0.008) in the blastocysts receiving photosensitized cytoplasm (31.4% ± 24.7% ± 1.43 vs. 1.43). Since the total amount of mtDNA was not different between the groups, these results suggest that dysfunctional mitochondria introduced by cytoplasmic transfer were destroyed. Analysis of autophagosomes indicated, however, that the NZB mitochondria were not eliminated by mitophagy. Different than expected, culture in the presence of rapamycin reversed the effect caused by introduction of photosensitized cytoplasm, resulting in similar levels of NZB mtDNA compared to blastocysts receiving cytoplasm not photosensitized. It was concluded that the mouse embryo may destroy dysfunctional mitochondria during development into blastocysts. Further studies should provide additional evidence and elucidate the molecular mechanisms underlying these findings.
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Aspectos embriológicos de espécies do gênero Passiflora (Passifloraceae), com ênfase no potencial de herança organelar

Silvério, Adriano January 2009 (has links)
O presente trabalho analisou as etapas de formação de rudimentos seminais e grãos de pólen de Passiflora elegans e P. haematostigma. As espécies foram analisadas fazendo-se o uso de microscopia fotônica e microscopia eletrônica de varredura e transmissão. O gineceu apresenta um estigma com emergências estigmáticas, estilete sólido e ovário tricarpelar e unilocular. O ovário apresenta inúmeros rudimentos seminais que formam-se a partir de divisões periclinais da camada central. Os rudimentos são crassinucelados e os tegumentos têm origem dérmica. A célula arquesporial divide-se mitoticamente antes da meiose. A meiose resulta em uma tétrade linear, com ginósporo calazal viável. A ginogametogênese é do tipo Poligonum e, durante a diferenciação do ginófito, os estratos parietais do nucelo são parcialmente consumidos e a epiderme nucelar divide-se periclinalmente na porção apical. As antípodas são efêmeras e o ginófito maduro apresenta duas sinérgides com aparelho fibrilar desenvolvido, oosfera e núcleo secundário no pólo micropilar. O rudimento seminal é anátropo, arilado, bitegumentado e com micrópila em “zig-zag”. O androceu é constituído por cinco anteras tetrasporangiadas. Os estratos parietais desenvolvem-se do tipo Dicotiledôneo e as camadas médias são persistentes na antera madura de P. haematostigma. As células do tapete são poliplóides e colapsam liberando os conteúdos no interior do lóculo. A citocinese é do tipo simultânea e as tétrades são tetraédricas na maioria. O pólen é liberado na fase bicelular, apresenta número de colpos variável em P. elegans e seis colporos em P. haematostigma. A esporoderme não apresenta camada basal em P. elegans e é mais espessa do que em P. haematostigma. Plastídios e mitocôndrias são englobados durante a formação da célula generativa e persistem até a fase de pólen maduro. / The present work analyzed the different developmental stages of the ovule and of the pollen grain in Passiflora elegans and P. haematostigma. The species were analyzed using photonic microscopy and scanning and transmission electron microscopy. The gynoecium has a stigma with stigmatic outgrowths, solid style and tricarpelar and unilocular ovary. The ovary has several seminal rudiments that are originated from the periclinal divisions of the central layer. The ovule is crassinucelate and the dermal layer originates the integuments. The arquesporial cell divides mitotically before meiosis. The meiosis results into a linear tetrad and only the chalazal gynospore is viable. The gynogametogenesis is of the Poligonum type, the nucellus parietal layers are partially degraded during the gynophyte differentiation, and nuclear epidermis divides periclinally in the apical portion. The antipodal cells are ephemeral and the mature gynophyte has two synergids with a developed filiform apparatus, egg cell and secondary nuclei in the micropilar pole. The ovule is anatropous, arillate, bitegmic and with zig-zag micropile. The androecium is constituted of five tetrasporangiate anthers. The parietal layers develop like the Dicotiledoneous type and middle layers are persistent in the mature anther of P. haematostigma. The tapetal cells are polyploids and collapse releasing their contents to the locus. The cytokinesis is of the simultaneous type and most of the tetrads are tetrahedral. The pollen is released during the bicellular stage, has a variable number of colpus in P. elegans and six colporus in P. haematostigma. The sporoderm does not have a basal layer in P. elegans and is thicker than in P. haematostigma. Plastids and mitochondria are enclosed during the generative cell formation and persist until the mature pollen stage.

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