Made available in DSpace on 2015-05-14T13:00:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 5040357 bytes, checksum: d112d16462e653eb7f528351d768dc3f (MD5) Previous issue date: 2014-02-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Cissampelos sympodialis Eichl (Menispermaceae) is a plant commonly found in semi-arid regions of Brazil. Its roots and leaves are used in folk medicine to treat arthritis, rheumatism and respiratory disorders. Studies have shown its anti-inflammatory, immunomodulatory and anti-asthmatic effects. The aim of this study was: 1) to evaluate the effect of administration, intranasally (i.n.) of the leave extract (AFL) and its alkaloids warifteine (WAR), methylwarifteine (MWA) and milonine (MIL) in the lungs of BALB/c mice sensitized and challenged with ovalbumin (OVA) and 2) to analyze the effects of alkaloids on inflammatory cells and their molecules related to inflammation. The parameters evaluated in vivo were: the cell migration into bronchoalveolar lavage (BAL), histopathological changes in the lung tissue and analysis of IgE levels on the serum. In vitro assays, were evaluated the phosphorylation of JNK kinase enzyme and expression of COX-2 on cultured macrophage and mast cells. The results showed that the AFL and the alkaloids were able to inhibit the migration of inflammatory cells, mainly eosinophils to the lung. However the AFL and milonine induced neutrophil migration to the lung. Treatment with the extract and the alkaloids inhibited the production of mucus by goblet cells present in the bronchial epithelium and the migration of TCD4+ and TCD8+ into the lung tissue, except warfteine that increased the TCD8+ subpopulation,. Only the AFL treatment was able to decrease serum IgE concentration and, among the alkaloids, MWA was able to inhibit the production of interleukin-13 (IL-13) by cells from the BAL. In vitro tests showed that the alkaloids presented no toxicity for macrophage and mast cells at all concentrations tested 0.1, 1.0 and 10 μM. However, only milonine was able to inhibit degranulation of mast cells via inhibition of histamine release. The inhibition of JNK phosphorylation was observed with MWA and MIL independent of COX-2 activation. These results indicate that the extract, when administered intranasally, has antiasthmatic effect by decreasing the eosinophil migration into the lung and the mucus production and, MWA is one of the important compounds present into the extract due to decreasing the JNK phosphorylation. In addition, these data provide additional information to produce an herbal plant for the treatment of intranasal airway inflammatory disorders and the MWA may be the molecular marker for the quality and effect of the herbal medicine. / Cissampelos sympodialis Eichl. (Menispermaceae) é uma planta comumente encontrada em regiões semiáridas do Brasil. Suas raízes e folhas são usadas na medicina popular no tratamento de artrite, reumatismo e doenças respiratórias. Estudos têm demonstrado seu efeito anti-inflamatório, antiasmático e imunomodulador. Os objetivos do presente trabalho foram: 1) avaliar o efeito da administração, por instilação nasal (i.n.), do extrato das folhas de Cissampelos sympodialis (AFL) e de seus alcaloides warifteina (WAR), metilwarifteina (MWA) e milonina (MIL) em pulmões de camundongos BALB/c sensibilizados e desafiados com ovalbumina (OVA) e 2) analisar o efeito destes alcaloides sobre células inflamatórias e suas moléculas relacionadas com a inflamação. Os parâmetros avaliados in vivo foram: padrão de migração de células no lavado bronco alveolar (BAL), alterações histopatológicas no tecido pulmonar e análise dos níveis de IgE no soro. Nas análises in vitro, em cultura de macrófagos e mastócitos, foram avaliados a fosforilação das enzimas JNK quinase e a expressão da COX-2. Os resultados demonstraram que o AFL e os alcaloides foram capazes de inibir a migração das células da inflamação, em especial, os eosinófilos no pulmão. Entretanto, o AFL e a milonina induziram aumento no número de neutrófilos no pulmão. Os tratamentos com o extrato e os alcaloides inibiram a produção de muco pelas células caliciformes presentes no epitélio brônquico e a migração de linfócitos T CD4+ e TCD8+ da cavidade pulmonar, com exceção da warifteina que aumentou a subpopulação T CD8+. Apenas o tratamento com AFL foi capaz de diminuir a concentração de IgE sérica e, entre os alcaloides, somente a MWA foi capaz de inibir a produção da interleucina-13 (IL-13) pelas células do BAL. Nos ensaios in vitro, observou-se que os alcaloides não apresentaram toxicidade para mastócitos e macrófagos em todas as concentrações testadas 0.1, 1.0 e 10 μM. Entretanto, apenas a milonina foi capaz de inibir degranulação de mastócitos via inibição da liberação da histamina. A inibição da fosforilação da JNK foi observada com a MWA e a MIL independentes da expressão da enzima COX-2. Estes resultados indicam que o extrato, quando administrado por instilação nasal, apresenta efeito antiasmático principalmente pela diminuição da migração de eosinófilos para o pulmão e pela produção de muco e que a MWA é um dos compostos presentes no extrato importante para o efeito antiasmático da planta devido á diminuição da fosforilação da JNK. Em adição, estes dados fornecem informações para a produção de um fitoterápico da planta para o tratamento intranasal de doenças inflamatórias das vias aéreas e a MWA pode ser o marcador molecular de qualidade e efeito do fitoterápico.

Submitted by Cristhiane Guerra (cristhiane.guerra@gmail.com) on 2017-02-03T15:37:52Z No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 4718514 bytes, checksum: 73b76bdede325ded91073c36318f98f2 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-03T15:37:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 4718514 bytes, checksum: 73b76bdede325ded91073c36318f98f2 (MD5) Previous issue date: 2016-02-17 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The synthetic alkaloid 2-methoxy-4-(7-methoxy-1,2,3,4- tetrahydroisoquinolin-1-yl) phenol encoded as MHTP, has a 93.45% yield and it had no genotoxic effect with low acute toxicity in preclinical analyses, with LD50 higher than 1000 mg / kg. The MHTP presented vasorelaxant and anti-inflammatory effects in acute inflammation models by orally administration. The aim of this study was to evaluate the immunomodulatory effect of MHTP, administered intranasally (in) in experimental allergic pulmonary inflammation induced by ovalbumin (OVA) by means of allergic (measurement of serum IgE) and inflammatory parameters (cell migration and production of cytokines, the fluid broncoalveolar- washed BAL, mucus production and histopathological pulmonary remodeling). Female BALB / c mice were sensitized with OVA at days 0 and 12 of the experimental protocol and on days 19 and 22 were treated via i.n. MHTP with the doses of 2.5 and 5 mg / kg or dexamethasone (2 mg/kg). After each treatment was aerosol challenged with OVA for 30 minutes daily; 24 hours after the last challenge, it was collected biological material for evaluation of allergic lung inflammation characteristic on allergic asthma. Treatment with MHTP at dose of 2.5 mg/kg decreased (p<0,05) the migration of total lymphocytes, (p<0,0001) the lymphocytes CD4+ and production of the cytokines IL-13, IL-4, IL-17 and IL-10. The dose of 5 mg/kg, in turn, decreased (p <0,05) the production of OVA-specific IgE and migration of lymphocytes CD3+; (p<0,0001) migration of leukocytes, total lymphocytes CD4+, macrophages and (p<0,001) eosinophils; (p<0,0001) the percentage of granulocytes; the production of the cytokines IL-13, IL-4, IL-17 and IL- 10. In addition, MHTP reduced inflammatory histopathological parameters such as hyperplasia and hypertrophy of goblet cells and mucus overproduction. The results infer that the immunomodulatory mechanism of MHTP is related to regulation of Th2 profile that is responsible for generating and maintaining allergic pulmonary inflammation process characteristic of allergic asthma. / O alcaloide sintético 2-methoxy-4-(7-methoxy-1,2,3,4- tetrahydroisoquinolin-1-yl) phenol, codificado como MHTP, possui rendimento de 93,45%, não apresentou efeito genotóxico com baixa toxicidade aguda pré clínica e DL50 maior que 1.000 mg/kg. O MHTP apresentou efeito vasorelaxante e antiinflamatorio em modelo de inflamação aguda, administrado por via oral. O objetivo do presente trabalho foi avaliar o efeito imunomodulador do MHTP, administrado por instilação nasal (i.n.), na inflamação pulmonar alérgica experimental induzida por ovalbumina (OVA), por meio dos parâmetros alérgico (quantificação de IgE sérica), inflamatório (migração celular, produção de citocinas, no fluido do lavado broncoalveolar- BAL) e morfológico (produção de muco e histologia pulmonar geral). Camundongos fêmeas BALB/c foram sensibilizados com OVA nos dias 0 e 12 do protocolo experimental e nos dias 19 a 22 foram tratados por via i.n. com MHTP nas doses 2,5 ou 5 mg/kg ou Dexametasona (2 mg/kg). Após cada tratamento, foi realizado os desafios por aerossol com OVA, durante 30 minutos diários; 24 horas após o último desafio, foi coletado o material biológico necessário para avaliação da inflamação pulmonar alérgica, característica da asma alérgica. O tratamento com MHTP na dose de 2,5 mg/kg diminuiu (p<0,05) a migração de linfócitos totais, (p<0,0001) linfócitos CD4+ e a produção das citocinas IL-13, IL-4, IL-17 e IL-10. A dose de 5 mg/kg, por sua vez, diminuiu (p<0,05) a produção de IgE-OVA específica e migração de linfócitos CD3+; (p<0,0001) migração de leucócitos totais, linfócitos CD4+, macrófagos e (p<0,001) eosinófilos; (p<0,0001) o percentual de granulócitos e a produção das citocinas IL-13, IL-4, IL-17 e IL-10. Além disso, MHTP reduziu os parâmetros inflamatórios histopatológicos e morfológicos e a hiperprodução de muco. Os resultados obtidos inferem que o mecanismo imunomodulador do MHTP está relacionado à regulação do perfil Th2, que é responsável por gerar e manter o processo inflamatório alérgico pulmonar, característico da asma alérgica.