Made available in DSpace on 2015-05-14T13:00:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 5040357 bytes, checksum: d112d16462e653eb7f528351d768dc3f (MD5) Previous issue date: 2014-02-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Cissampelos sympodialis Eichl (Menispermaceae) is a plant commonly found in semi-arid regions of Brazil. Its roots and leaves are used in folk medicine to treat arthritis, rheumatism and respiratory disorders. Studies have shown its anti-inflammatory, immunomodulatory and anti-asthmatic effects. The aim of this study was: 1) to evaluate the effect of administration, intranasally (i.n.) of the leave extract (AFL) and its alkaloids warifteine (WAR), methylwarifteine (MWA) and milonine (MIL) in the lungs of BALB/c mice sensitized and challenged with ovalbumin (OVA) and 2) to analyze the effects of alkaloids on inflammatory cells and their molecules related to inflammation. The parameters evaluated in vivo were: the cell migration into bronchoalveolar lavage (BAL), histopathological changes in the lung tissue and analysis of IgE levels on the serum. In vitro assays, were evaluated the phosphorylation of JNK kinase enzyme and expression of COX-2 on cultured macrophage and mast cells. The results showed that the AFL and the alkaloids were able to inhibit the migration of inflammatory cells, mainly eosinophils to the lung. However the AFL and milonine induced neutrophil migration to the lung. Treatment with the extract and the alkaloids inhibited the production of mucus by goblet cells present in the bronchial epithelium and the migration of TCD4+ and TCD8+ into the lung tissue, except warfteine that increased the TCD8+ subpopulation,. Only the AFL treatment was able to decrease serum IgE concentration and, among the alkaloids, MWA was able to inhibit the production of interleukin-13 (IL-13) by cells from the BAL. In vitro tests showed that the alkaloids presented no toxicity for macrophage and mast cells at all concentrations tested 0.1, 1.0 and 10 μM. However, only milonine was able to inhibit degranulation of mast cells via inhibition of histamine release. The inhibition of JNK phosphorylation was observed with MWA and MIL independent of COX-2 activation. These results indicate that the extract, when administered intranasally, has antiasthmatic effect by decreasing the eosinophil migration into the lung and the mucus production and, MWA is one of the important compounds present into the extract due to decreasing the JNK phosphorylation. In addition, these data provide additional information to produce an herbal plant for the treatment of intranasal airway inflammatory disorders and the MWA may be the molecular marker for the quality and effect of the herbal medicine. / Cissampelos sympodialis Eichl. (Menispermaceae) é uma planta comumente encontrada em regiões semiáridas do Brasil. Suas raízes e folhas são usadas na medicina popular no tratamento de artrite, reumatismo e doenças respiratórias. Estudos têm demonstrado seu efeito anti-inflamatório, antiasmático e imunomodulador. Os objetivos do presente trabalho foram: 1) avaliar o efeito da administração, por instilação nasal (i.n.), do extrato das folhas de Cissampelos sympodialis (AFL) e de seus alcaloides warifteina (WAR), metilwarifteina (MWA) e milonina (MIL) em pulmões de camundongos BALB/c sensibilizados e desafiados com ovalbumina (OVA) e 2) analisar o efeito destes alcaloides sobre células inflamatórias e suas moléculas relacionadas com a inflamação. Os parâmetros avaliados in vivo foram: padrão de migração de células no lavado bronco alveolar (BAL), alterações histopatológicas no tecido pulmonar e análise dos níveis de IgE no soro. Nas análises in vitro, em cultura de macrófagos e mastócitos, foram avaliados a fosforilação das enzimas JNK quinase e a expressão da COX-2. Os resultados demonstraram que o AFL e os alcaloides foram capazes de inibir a migração das células da inflamação, em especial, os eosinófilos no pulmão. Entretanto, o AFL e a milonina induziram aumento no número de neutrófilos no pulmão. Os tratamentos com o extrato e os alcaloides inibiram a produção de muco pelas células caliciformes presentes no epitélio brônquico e a migração de linfócitos T CD4+ e TCD8+ da cavidade pulmonar, com exceção da warifteina que aumentou a subpopulação T CD8+. Apenas o tratamento com AFL foi capaz de diminuir a concentração de IgE sérica e, entre os alcaloides, somente a MWA foi capaz de inibir a produção da interleucina-13 (IL-13) pelas células do BAL. Nos ensaios in vitro, observou-se que os alcaloides não apresentaram toxicidade para mastócitos e macrófagos em todas as concentrações testadas 0.1, 1.0 e 10 μM. Entretanto, apenas a milonina foi capaz de inibir degranulação de mastócitos via inibição da liberação da histamina. A inibição da fosforilação da JNK foi observada com a MWA e a MIL independentes da expressão da enzima COX-2. Estes resultados indicam que o extrato, quando administrado por instilação nasal, apresenta efeito antiasmático principalmente pela diminuição da migração de eosinófilos para o pulmão e pela produção de muco e que a MWA é um dos compostos presentes no extrato importante para o efeito antiasmático da planta devido á diminuição da fosforilação da JNK. Em adição, estes dados fornecem informações para a produção de um fitoterápico da planta para o tratamento intranasal de doenças inflamatórias das vias aéreas e a MWA pode ser o marcador molecular de qualidade e efeito do fitoterápico.

A malária mata mais de um milhão de pessoas por ano, sendo uma das doenças infecciosas mais relevantes e um grande problema de saúde pública. Além disso, o surgimento de cepas resistentes aos quimioterápicos utilizados faz necessário o estudo de novos alvos para tratamentos contra esta doença. No nosso laboratório foi demonstrada a biossíntese de isoprenóides, em P. falciparum pela via MEP. Sabe-se que substâncias inibidoras da biossíntese de isoprenóides, dentre essas os terpenos, apresentam atividade antimalárica. Levando em consideração o anterior, nós avaliamos o potencial antimalárico do álcool perilico (POH) em P. falciparum e P. berghei. Nossos resultados demonstraram que o POH teve efeito inibitório contra o crescimento do P. falciparum in vitro, nas cepas 3D7 e K1 com uma IC50 de 4,8 ± 0,5 &mu;M, e 10,41±2,33 &mu;M, respectivamente. Além disso, o POH não teve efeito tóxico na linhagem celular Vero. Ainda, Comprovamos que o POH inibiu a farnesilação de proteinas entre 20 e 37 KDa de P. falciparum. Por outro lado, os experimentos in vivo não mostraram eficácia do tratamento do POH contra PbGFP em camundongos Balb/c. Em contraste, foi demostrada a eficácia do POH na de malária cerebral experimental (MCE), , indicando uma redução na taxa de incidência da MCE no grupo tratado com POH, comparado o não tratado ( P<0,05). Além disso, o POH reduziu a inflamação no cérebro dos animais tratados, uma vez que teve uma redução significativa na adesão de leucócitos aos vasos cerebrais (P<0.001), como também, o numero de hemorragias foi menor comparados com os animais não tratados. (P<0.0001). Portanto, os resultados obtidos nesta pesquisa abrem novas alternativas no estudo do mecanismo de ação do POH como um terpeno com grande potencial para tratar MC. / Malaria kills over one million people a year worldwide, and is one of the most important infectious diseases and a major public health problem. Furthermore, the emergence of resistant strains to chemotherapeutic agents used, make it necessary to study new targets for treatments against this disease. In our laboratory we have demonstrated the isoprenoids biosynthesis in P. falciparum, by the MEP pathway. It is known that the substances that inhibit isoprenoid biosynthesis, among these terpenes, have antimalarial activity in vitro and in vivo. Considering this, we evaluate the antimalarial potential of PA (POH) in P. falciparum and P. berghei. Our results showed that the POH had inhibitory effect against the growth of strains 3D7 and K1 of P. falciparum in vitro, with an IC50 of 4.8 &mu;M ± 0.5, and 10.41 ± 2.33 &mu;M, respectively. Furthermore, the POH had no toxic effect on cell line Vero. Moreover, the POH proved that inhibited proteins farnesylation from 20 to 37 kDa of P.falciparum. On the other hand, in vivo experiments did not show efficacy on treatment against POH PbGFP in BALB/c mice. In contrast, the effectiveness of POH in the experimental cerebral malaria (MCE) was demonstrated, indicating a reduction in the incidence rate of MCE in the group treated with POH, compared with of untreated animals (P <0.05). In addition, the POH reduced inflammation in the brain of treated animals, since it had a significant reduction in leukocyte adhesion to cerebral vessels (P <0.001), as also the number of bleeding was lower compared to untreated animals (P<0.0001). Therefore, the results obtained in this work provide new alternatives to study the POH\'s mechanism of action as a terpene with great potential to treat MC.

A malária mata mais de um milhão de pessoas por ano, sendo uma das doenças infecciosas mais relevantes e um grande problema de saúde pública. Além disso, o surgimento de cepas resistentes aos quimioterápicos utilizados faz necessário o estudo de novos alvos para tratamentos contra esta doença. No nosso laboratório foi demonstrada a biossíntese de isoprenóides, em P. falciparum pela via MEP. Sabe-se que substâncias inibidoras da biossíntese de isoprenóides, dentre essas os terpenos, apresentam atividade antimalárica. Levando em consideração o anterior, nós avaliamos o potencial antimalárico do álcool perilico (POH) em P. falciparum e P. berghei. Nossos resultados demonstraram que o POH teve efeito inibitório contra o crescimento do P. falciparum in vitro, nas cepas 3D7 e K1 com uma IC50 de 4,8 ± 0,5 &mu;M, e 10,41±2,33 &mu;M, respectivamente. Além disso, o POH não teve efeito tóxico na linhagem celular Vero. Ainda, Comprovamos que o POH inibiu a farnesilação de proteinas entre 20 e 37 KDa de P. falciparum. Por outro lado, os experimentos in vivo não mostraram eficácia do tratamento do POH contra PbGFP em camundongos Balb/c. Em contraste, foi demostrada a eficácia do POH na de malária cerebral experimental (MCE), , indicando uma redução na taxa de incidência da MCE no grupo tratado com POH, comparado o não tratado ( P<0,05). Além disso, o POH reduziu a inflamação no cérebro dos animais tratados, uma vez que teve uma redução significativa na adesão de leucócitos aos vasos cerebrais (P<0.001), como também, o numero de hemorragias foi menor comparados com os animais não tratados. (P<0.0001). Portanto, os resultados obtidos nesta pesquisa abrem novas alternativas no estudo do mecanismo de ação do POH como um terpeno com grande potencial para tratar MC. / Malaria kills over one million people a year worldwide, and is one of the most important infectious diseases and a major public health problem. Furthermore, the emergence of resistant strains to chemotherapeutic agents used, make it necessary to study new targets for treatments against this disease. In our laboratory we have demonstrated the isoprenoids biosynthesis in P. falciparum, by the MEP pathway. It is known that the substances that inhibit isoprenoid biosynthesis, among these terpenes, have antimalarial activity in vitro and in vivo. Considering this, we evaluate the antimalarial potential of PA (POH) in P. falciparum and P. berghei. Our results showed that the POH had inhibitory effect against the growth of strains 3D7 and K1 of P. falciparum in vitro, with an IC50 of 4.8 &mu;M ± 0.5, and 10.41 ± 2.33 &mu;M, respectively. Furthermore, the POH had no toxic effect on cell line Vero. Moreover, the POH proved that inhibited proteins farnesylation from 20 to 37 kDa of P.falciparum. On the other hand, in vivo experiments did not show efficacy on treatment against POH PbGFP in BALB/c mice. In contrast, the effectiveness of POH in the experimental cerebral malaria (MCE) was demonstrated, indicating a reduction in the incidence rate of MCE in the group treated with POH, compared with of untreated animals (P <0.05). In addition, the POH reduced inflammation in the brain of treated animals, since it had a significant reduction in leukocyte adhesion to cerebral vessels (P <0.001), as also the number of bleeding was lower compared to untreated animals (P<0.0001). Therefore, the results obtained in this work provide new alternatives to study the POH\'s mechanism of action as a terpene with great potential to treat MC.