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INTRODUÇÃO: A tuberculose é um problema grave de saúde pública, acometendo indivíduos em todas as faixas etárias e em todos os estratos socioeconômicos. Apesar de estarem sob grande risco de adoecimento, as crianças carecem de meios diagnósticos sensíveis e específicos. Neste estudo avaliou-se em crianças a acurácia de um teste baseado na dosagem de interferon-gama liberado por linfócitos após estímulo com antígenos específicos do Mycobacterium tuberculosis (QuantiFERON-TB Gold In Tube® [Cellestis, Carnegie, Austrália] ).MÉTODO: Foram incluídas no estudo 184 crianças não infectadas e 11 crianças com infecção pelo Mycobacterium tuberculosis. Todas as crianças receberam previamente o BCG. Foram excluídas crianças com comprometimento do sistema imunológico. Obteve-se amostra de sangue de cada criança, e o material foi processado conforme as instruções do laboratório fabricante. O desempenho do teste foi avaliado pela construção de uma curva de características operacionais (ROC). RESULTADOS: Do total de 184 crianças sem infecção pela micobatéria, 74 (40,2%) eram do sexo feminino, e 130 (70,6%) tinham menos de quatro anos de idade. A idade média neste grupo foi de 35 meses. Seis (3,2%) crianças apresentaram resultado indeterminado do teste, uma criança (0,5%) apresentou um resultado positivo e 177 (96,2%) apresentaram resultado negativo. No grupo de 11 crianças infectadas, sete (63,0%) eram meninas, e a idade média era de 58,5 meses. Duas (18,0%) crianças neste grupo apresentaram resultado negativo do teste. A curva ROC obtida evidenciou uma área sob a curva de 0,876 (I. C 95% - 0,82 a 0,92; p<0,001), refletindo o desempenho preditivo elevado do teste. A sensibilidade do teste foi de 81,8% (IC 95% - 48,2% a 97,2%) e a especificidade de 98,8% (IC 95% - 96,0 a 99,8%), o valor preditivo positivo foi de 81,8% (IC 95%: 46,3% a 97,4%) e o valor preditivo negativo foi de 98,9% (IC 95%: 96,0% a 99,8%). CONCLUSÕES: Neste estudo o teste mostrou ter uma boa acurácia no diagnóstico da infecção pelo Mycobaterium tuberculosis em crianças previamente vacinadas com o BCG, e sua utilização rotineira pode contribuir para a melhor avaliação de crianças expostas a um doente bacilífero e na tomada de decisões sobre a introdução de quimioprofilaxia ou tratamento. / BACKGROUND: Tuberculosis is a major public health problem, affecting people from all ages and diverse socioeconomic incomes. Despite the high risk that children have to develop the disease, accurate methods for diagnosis are not yet available. In this study the accuracy of an interferon-gamma release assay (QuantiFERON-TB Gold In Tube® [Cellestis, Carnegie, Australia]) was evaluated for the diagnosis of Mycobacterium tuberculosis infection in children. METHODS: 195 children were evaluated, 184 children without mycobacterial infection, and 11 children infected by the Mycobacterium tuberculosis. All the children had been previously vaccinated with BCG. Immunocompromised children were excluded from the study. A blood sample was obtained from each child, and it was processed according the manufacturer´s instructions. The performance of the assay was evaluated by a receiver operating characteristic (ROC) curve. RESULTS: In the group of 184 noninfected children, 74 (40.2%) were female and 130 (70.6%) were younger than four years old. The mean age in this group was 35 months. Six children (3.2%) had indeterminate test result, one child (0.5%) had a positive test result, and 177 (96.2%) children had negative test results. In the group of 11 infected children, seven (63.0%) were female, and the mean age in this group was 58.5 months. Two children (18.0%) in this group had a negative test result. The ROC curve determined an area under the curve of 0.876 (95% CI 0.82 to 0.92; p< 0.001), disclosing a high positive predictive value for the test. The assay sensibility was 81.8% (95% CI, 48.2% to 97.2%) and the assay specificity was 98.8% (95% CI, 96.0% to 99.8%), the positive predictive value was 81.8% (95% CI: 46.3% to 97.4%) and the negative predictive value was 98.9% (95% CI: 96.0% to 99.8%). CONCLUSIONS: In this study, the accuracy of the assay was high for the diagnosis of Mycobacterium tuberculosis infection in children previously vaccinated with BCG. The use of this assay for the routine evaluation of children exposed to the disease may help physicians to decide on whether to start chemoprophylaxis or tuberculosis treatment.

INTRODUÇÃO: A tuberculose é um problema grave de saúde pública, acometendo indivíduos em todas as faixas etárias e em todos os estratos socioeconômicos. Apesar de estarem sob grande risco de adoecimento, as crianças carecem de meios diagnósticos sensíveis e específicos. Neste estudo avaliou-se em crianças a acurácia de um teste baseado na dosagem de interferon-gama liberado por linfócitos após estímulo com antígenos específicos do Mycobacterium tuberculosis (QuantiFERON-TB Gold In Tube® [Cellestis, Carnegie, Austrália] ).MÉTODO: Foram incluídas no estudo 184 crianças não infectadas e 11 crianças com infecção pelo Mycobacterium tuberculosis. Todas as crianças receberam previamente o BCG. Foram excluídas crianças com comprometimento do sistema imunológico. Obteve-se amostra de sangue de cada criança, e o material foi processado conforme as instruções do laboratório fabricante. O desempenho do teste foi avaliado pela construção de uma curva de características operacionais (ROC). RESULTADOS: Do total de 184 crianças sem infecção pela micobatéria, 74 (40,2%) eram do sexo feminino, e 130 (70,6%) tinham menos de quatro anos de idade. A idade média neste grupo foi de 35 meses. Seis (3,2%) crianças apresentaram resultado indeterminado do teste, uma criança (0,5%) apresentou um resultado positivo e 177 (96,2%) apresentaram resultado negativo. No grupo de 11 crianças infectadas, sete (63,0%) eram meninas, e a idade média era de 58,5 meses. Duas (18,0%) crianças neste grupo apresentaram resultado negativo do teste. A curva ROC obtida evidenciou uma área sob a curva de 0,876 (I. C 95% - 0,82 a 0,92; p<0,001), refletindo o desempenho preditivo elevado do teste. A sensibilidade do teste foi de 81,8% (IC 95% - 48,2% a 97,2%) e a especificidade de 98,8% (IC 95% - 96,0 a 99,8%), o valor preditivo positivo foi de 81,8% (IC 95%: 46,3% a 97,4%) e o valor preditivo negativo foi de 98,9% (IC 95%: 96,0% a 99,8%). CONCLUSÕES: Neste estudo o teste mostrou ter uma boa acurácia no diagnóstico da infecção pelo Mycobaterium tuberculosis em crianças previamente vacinadas com o BCG, e sua utilização rotineira pode contribuir para a melhor avaliação de crianças expostas a um doente bacilífero e na tomada de decisões sobre a introdução de quimioprofilaxia ou tratamento. / BACKGROUND: Tuberculosis is a major public health problem, affecting people from all ages and diverse socioeconomic incomes. Despite the high risk that children have to develop the disease, accurate methods for diagnosis are not yet available. In this study the accuracy of an interferon-gamma release assay (QuantiFERON-TB Gold In Tube® [Cellestis, Carnegie, Australia]) was evaluated for the diagnosis of Mycobacterium tuberculosis infection in children. METHODS: 195 children were evaluated, 184 children without mycobacterial infection, and 11 children infected by the Mycobacterium tuberculosis. All the children had been previously vaccinated with BCG. Immunocompromised children were excluded from the study. A blood sample was obtained from each child, and it was processed according the manufacturer´s instructions. The performance of the assay was evaluated by a receiver operating characteristic (ROC) curve. RESULTS: In the group of 184 noninfected children, 74 (40.2%) were female and 130 (70.6%) were younger than four years old. The mean age in this group was 35 months. Six children (3.2%) had indeterminate test result, one child (0.5%) had a positive test result, and 177 (96.2%) children had negative test results. In the group of 11 infected children, seven (63.0%) were female, and the mean age in this group was 58.5 months. Two children (18.0%) in this group had a negative test result. The ROC curve determined an area under the curve of 0.876 (95% CI 0.82 to 0.92; p< 0.001), disclosing a high positive predictive value for the test. The assay sensibility was 81.8% (95% CI, 48.2% to 97.2%) and the assay specificity was 98.8% (95% CI, 96.0% to 99.8%), the positive predictive value was 81.8% (95% CI: 46.3% to 97.4%) and the negative predictive value was 98.9% (95% CI: 96.0% to 99.8%). CONCLUSIONS: In this study, the accuracy of the assay was high for the diagnosis of Mycobacterium tuberculosis infection in children previously vaccinated with BCG. The use of this assay for the routine evaluation of children exposed to the disease may help physicians to decide on whether to start chemoprophylaxis or tuberculosis treatment.

Diss. (sammanfattning) Stockholm : Karol. inst., 2005. / Härtill 5 uppsatser.

O estabelecimento de uma resposta TH1 com a produção de IL-12, IFN-gama e de óxido nítrico é crucial no controle do Trypanosoma cruzi, o qual pode colonizar o SNC de crianças e pacientes imunossuprimidos. A inflamação exacerbada em decorrência da persistência de um estímulo antigênico gera o acúmulo de substâncias potencialmente citotóxicas, como mediadores pró-inflamatórios e radicais livres. A partir da infecção de camundongos imunodeficientes (IL-12p40KO) com T. cruzi Sylvio X10/4, avaliamos os danos causados à medula espinal com enfoque na inflamação e neurodegeneração. Além da desmielinização, alta reatividade glial e morte de neurônios no ponto mais tardio da doença, constatamos uma baixa produção de mediadores inflamatórios nas primeiras semanas após a infecção, acompanhada pela proliferação ascendente do parasita no tecido nervoso. Acreditamos que um atraso na produção de IFN-gama seja responsável pela ativação tardia ou ineficiente dos fagócitos da medula espinal, favorecendo a disseminação descontrolada do protozoário e subsequentes danos teciduais. / The establishment of a TH1 response with IL-12, IFN-gamma and nitric oxide production is crucial for controlling the proliferation of Trypanosoma cruzi, which may colonize the CNS of children and immunosuppressed hosts. The exacerbated inflammation due to the persistence of an antigenic stimulus results on the accumulation of potentially cytotoxic substances, such as pro-inflammatory mediators and free radicals. By the infection of immunodeficient mice (IL-12p40KO) with T. cruzi Sylvio X10/4 parasites we evaluated the spinal cord damages, focusing on the inflammation and neurodegeneration. Besides demyelization, high glial reactivity and neuron death at the latest stage of the disease, we noticed low production of inflammatory mediators during the first weeks of the infection, accompanied by an ascendant parasite proliferation in the nervous tissue. We believe that a delay on IFN-gamma production is responsible for the late or inefficient phagocyte activation in the spinal cord, contributing to the uncontrolled protozoan proliferation and subsequent tissue injury.

A tuberculose permanece como um dos maiores problemas de saúde pública mundial. O diagnóstico precoce e o tratamento rápido e eficiente dos indivíduos com tuberculose pulmonar ativa são medidas essenciais para a redução da morbidade, mortalidade e da incidência da tuberculose no mundo. As limitações encontradas nos métodos microbiológicos tradicionais, fizeram com que metodologias alternativas fossem desenvolvidas para melhorar o diagnóstico e o prognóstico da tuberculose humana. Neste trabalho verificamos o desempenho diagnóstico do Western blotting para pesquisa de anticorpos IgG anti - Mycobacterium tuberculosis, a utilização do teste QuantiFERON® - TB Gold e a detecção de moléculas de adesão celular (ICAM-1 e selectinas) como marcadores de prognóstico. Foram acompanhados até o final do tratamento 31 pacientes com tuberculose pulmonar diagnosticados por critérios clínicos e laboratoriais. Como controles, selecionamos população de indivíduos sadios, doadores de banco de sangue e indivíduos com outras pneumopatias. Os resultados mostraram que o Western blotting apresentou sensibilidade de 94% e especificidade de 96% no diagnóstico da tuberculose pulmonar, atendendo os requisitos da OMS para testes sorológicos. O QuantiFERON® - TB Gold apresentou sensibilidade de 83% e especificidade de 100%, após ajuste do limiar de reatividade. Os resultados das moléculas de adesão celular sugerem potencial para serem utilizadas como marcadores de prognóstico da doença. Ao associarmos os resultados do Western blotting ou do QuantiFERON® - TB Gold com a baciloscopia obtivemos sensibilidade superior a 95%; e quando associados à cultura a sensibilidade encontrada foi de 100%. O Western blotting mostrou ser uma ferramenta útil como auxiliar no diagnóstico da tuberculose pulmonar mesmo em pacientes com baciloscopia negativa. / Tuberculosis remains a major public-health problem. Rapid diagnosis and prompt treatment is the cornerstone to reduce morbidity, mortality and incidence of tuberculosis in the world. Alternative methods have been developed to overcome the limitations presented by conventional microbiological methods and to improve the diagnosis and prognosis of tuberculosis. In this study we verified the diagnostic performance of Western blotting for IgG anti-M.tuberculosis antibodies detection, QuantiFERON® - TB Gold and circulating adhesion molecules (ICAM-1 and Selectins) as prognosis markers. Thirty-one patients were followed-up during the treatment. Active pulmonary tuberculosis was diagnosed by clinical and laboratorial criteria. As group control healthy individuals, blood donors and patients with other lung diseases were included. Western blotting results showed a high performance with sensitivity of 94% and specificity of 96% for the diagnosis of pulmonary tuberculosis, attending WHO requirements for serological tests. After adjusting the threshold, QuantiFERON® - TB Gold showed sensitivity of 83% and specificity of 100%. The results of adhesion molecules suggested potential to use the test as prognosis markers. Combining Western blotting or QuantiFERON® - TB Gold with acid-fast bacilli (AFB) smear results, the overall sensitivity increase to more than 95%, and when combined with culture the overall sensitivity was 100%. Together, these findings, suggest that Western blotting could be a very useful supplementary tool for pulmonary tuberculosis, especially in patients with AFB smear negative.

A tuberculose permanece como um dos maiores problemas de saúde pública mundial. O diagnóstico precoce e o tratamento rápido e eficiente dos indivíduos com tuberculose pulmonar ativa são medidas essenciais para a redução da morbidade, mortalidade e da incidência da tuberculose no mundo. As limitações encontradas nos métodos microbiológicos tradicionais, fizeram com que metodologias alternativas fossem desenvolvidas para melhorar o diagnóstico e o prognóstico da tuberculose humana. Neste trabalho verificamos o desempenho diagnóstico do Western blotting para pesquisa de anticorpos IgG anti - Mycobacterium tuberculosis, a utilização do teste QuantiFERON® - TB Gold e a detecção de moléculas de adesão celular (ICAM-1 e selectinas) como marcadores de prognóstico. Foram acompanhados até o final do tratamento 31 pacientes com tuberculose pulmonar diagnosticados por critérios clínicos e laboratoriais. Como controles, selecionamos população de indivíduos sadios, doadores de banco de sangue e indivíduos com outras pneumopatias. Os resultados mostraram que o Western blotting apresentou sensibilidade de 94% e especificidade de 96% no diagnóstico da tuberculose pulmonar, atendendo os requisitos da OMS para testes sorológicos. O QuantiFERON® - TB Gold apresentou sensibilidade de 83% e especificidade de 100%, após ajuste do limiar de reatividade. Os resultados das moléculas de adesão celular sugerem potencial para serem utilizadas como marcadores de prognóstico da doença. Ao associarmos os resultados do Western blotting ou do QuantiFERON® - TB Gold com a baciloscopia obtivemos sensibilidade superior a 95%; e quando associados à cultura a sensibilidade encontrada foi de 100%. O Western blotting mostrou ser uma ferramenta útil como auxiliar no diagnóstico da tuberculose pulmonar mesmo em pacientes com baciloscopia negativa. / Tuberculosis remains a major public-health problem. Rapid diagnosis and prompt treatment is the cornerstone to reduce morbidity, mortality and incidence of tuberculosis in the world. Alternative methods have been developed to overcome the limitations presented by conventional microbiological methods and to improve the diagnosis and prognosis of tuberculosis. In this study we verified the diagnostic performance of Western blotting for IgG anti-M.tuberculosis antibodies detection, QuantiFERON® - TB Gold and circulating adhesion molecules (ICAM-1 and Selectins) as prognosis markers. Thirty-one patients were followed-up during the treatment. Active pulmonary tuberculosis was diagnosed by clinical and laboratorial criteria. As group control healthy individuals, blood donors and patients with other lung diseases were included. Western blotting results showed a high performance with sensitivity of 94% and specificity of 96% for the diagnosis of pulmonary tuberculosis, attending WHO requirements for serological tests. After adjusting the threshold, QuantiFERON® - TB Gold showed sensitivity of 83% and specificity of 100%. The results of adhesion molecules suggested potential to use the test as prognosis markers. Combining Western blotting or QuantiFERON® - TB Gold with acid-fast bacilli (AFB) smear results, the overall sensitivity increase to more than 95%, and when combined with culture the overall sensitivity was 100%. Together, these findings, suggest that Western blotting could be a very useful supplementary tool for pulmonary tuberculosis, especially in patients with AFB smear negative.

Throughout history, human populations have continuously been challenged by new and emerging infectious diseases. For the past 26 years, sub-Saharan Africa and other countries around the world have been dealing with a pandemic caused by a relatively new pathogen called the human immunodeficiency virus (HIV). Although antiretroviral (ARV) therapies effectively reduce morbidity and mortality rates, the long term use in those who have access to treatment inevitably leads to drug-related toxicity and resistance. Even with a strong commitment from governments to expand and finance prevention and treatment programs, transmission rates continue to outpace the benefits of these efforts. Therefore to effectively eradicate the disease, research is focusing on the design of protective and therapeutic vaccines. The first major step in designing these alternative therapies is to define correlates of immune protection. / The research presented in this thesis focuses on characterizing the quantitative and qualitative features of T cell immune responses in individuals who spontaneously control viral replication and exhibit a benign course of disease while remaining off ARV therapy. A comprehensive analysis of HIV-specific IFN-gamma secreting immune responses revealed that neither the breadth nor the magnitude of responses directed against the entire HIV proteome accurately predicts the viral load or rate of CD4 decline. Subsequent analyses showed that the preferential targeting of Gag was associated with reduced rates of CD4 decline and was later confirmed in a cohort of individuals in primary infection whereby the relative breadth and magnitude of Gag p24 was inversely correlated with viral load set point. / The maintenance of polyfunctional immune responses in HIV-infected subjects with a benign course of disease prompted us to develop a method that could comprehensively assess the breadth, magnitude and specificity of three functionally distinct subsets of HIV-specific lymphocytes (single IFN-gamma, single IL-2 and dual IFN-gamma/IL-2 secretors). Survey of immune responses in chronically infected individuals revealed that only the breadth and magnitude of dual IFN-gamma/IL-2 secreting lymphocytes correlated with reduced viral loads and increased CD4 counts suggesting that secretion of IFN-gamma alone was a poor correlate of protection. We also showed that the contribution of polyfunctional lymphocytes to the total response was greater for epitopes restricted by major histocompatibility complex (MHC) class I alleles associated with slow disease progression compared to those restricted by alleles associated with rapid or neutral rates of HIV disease progression. / Taken together, this work supports the view that immune monitoring of infected and vaccinated individuals should include methodologies capable of detecting both IFN-gamma and IL-2 secretion from responding T lymphocytes. The studies presented here have furthered our understanding of what constitutes protection from disease progression emphasizing that both specificity and polyfunctionality are features of effective control of viral replication.

Diss. (sammanfattning) Linköping : Linköpings universitet, 2007. / Härtill 4 uppsatser.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:00Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-12-19Bitstream added on 2014-06-13T21:05:33Z : No. of bitstreams: 1 rivasgutierrez_jc_dr_arafo.pdf: 816322 bytes, checksum: ec255883d6c0c6ef8ebbe4d64cd79b98 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Os macrófagos constituem uma população celular do sistema imune. Estas células podem ser ativadas por uma variedade de estímulos e suas principais funções incluem a fagocitose de partículas estranhas, apresentação de antígenos, produção de citocinas e compostos intermediários do nitrogênio (NO) e do oxigênio (H202). Os cimentos endodônticos são capazes de promover uma estimulação do sistema imune. Neste estudo, foram analisados os níveis de quantificação das citocinas, além do mediador óxido nítrico, como uma medida de estimulação de macrófagos peritoneais de camundongos. Através de análise estatística dos dados, foram observados os níveis de citotoxicidade dos macrófagos de camundongos estimulados pelos diferentes cimentos endodônticos, meio RPMI-1640 (grupo controle -) e LPS (grupo controle +). Os diferentes cimentos testados apresentaram concentrações com diferentes citotoxicidades: Sealapex 35ug/ml, Polímero de Mamona 8,75 ug/ml, do Epiphany 17,5 ug/ml, do Epiphany + Primer 17,5 ug/ml, do Primer 35 ug/ml, do EndoRez 17,5 ug/ml e do AH Plus 70 ug/ml. Após a adequação das concentrações viáveis dos cimentos testados conclui-se que o material que mais estimulou a liberação de NO foi Primer, seguido do Endorez, AH Plus, Ephiphany, Sealapex, Epiphany + Primer. O Polímero de Mamona foi o que estimulou a uma menor produção de NO. Em relação à produção de TNF-alfa o material que estimulou maior produção foi o Primer, seguido de Epiphany, AH Plus, Epiphany + Primer, Sealapex e Polímero de Mamona. O EndoRez não foi capaz de estimular a produção de TNF-alfa. Nenhum dos cimentos testados induziu à liberação de IFN-y, sugerindo que outro mediadores tais como IL-1 e IL-12 possam estar envolvidos na liberação de NO observada no presente estudo. / It was evaluated the citotoxicity of the sealers, Sealapex, Polímero de Mamona, Epiphany, EndoRez and AH Plus in relation to the release of Nitric Oxide, Tumor Necrotic Factor-Alpha and Interferon Gamma in murine cells culture. After the ideal concentration was found, according to MTT test, it was conduded that the sealers with higher release were Polímero de Mamona, EndoRez, Epiphany + Primer, Epiphany, Primer do Epiphany = Sealapex and AH Plus. All sealers reached lower levels of citotoxicity than control.