O carcinoma de células renais (CCR) representa 3% das neoplasias humanas e aproximadamente 90% das neoplasias renais e entre os tumores urológicos. O CCR é bastante resistente à radioterapia convencional. Entretanto, com o aparecimento de novas técnicas/equipamentos é possivel a aplicação de doses com precisão presevando-se os tecidos adjacentes. Para a verificação da expressão proteica em diferentes tecidos e fluidos corporais, foi utilizado o estudo proteômico sob diferentes condições e / ou tempos. A espectrometria de massa permite a identificação e quantificação de milhares de proteínas e peptídeos em fluidos biológicos ou células lisadas, sendo assim uma ferramenta poderosa para identificação de potenciais biomarcadores de doenças. A finalidade deste trabalho foi analisar o perfil proteico das células de adenocarcinoma renal (786-0) após a radiação com doses que variaram de 2 a 10 Gy. Os dados foram tratados com o programa One-way ANOVA seguida do de Bonferroni. Pelo ensaio de clonogenicidade definiou-se a dose de 8 Gy como a ideal estudos. A extração das proteínas citoplasmáticas foi realizada com o kit de extração do proteoma subcelular PE e a quantificação das proteínas feita pelo método de Lowry. A integridade das proteínas foi analisada por SDS-PAGE e a solução proteica foi verificada em LTQ Orbitrap. Os resultados gerados foram analisados pelo servidor MASCOT para a busca de peptídeos. A análise por espectrometria de massa foi possível identificar 44 proteínas nas amostras não irradiadas - e 87 das amostras irradiadas. Nas amostras não irradiadas a distribuição dos grupos funcionais foi de síntese proteica 46,66%; Metabolismo energético 16,66%; Migração e proliferação 16,66%; Antioxidantes 3,33%. No grupo irradiado síntese proteica 35,89%; Metabolismo energético 20,51%; Migração e proliferação 20,51%; Antioxidantes 5,12%; Chaperonas moleculares 5,12% e Endopeptidases 5,12%. Em seguida, analisou-se o espetro de as sequências com escores acima de 40. Nas amostras irradiadas encontrou-se: ENO1 (47 kDa); A VIM (53 kDa)/ HEL113; PSMA1; TRAJ56; hCG; Cofilina-1 (19 kDa); HIST1H4H; PKM2; ANXA1; HSPB1/ HSP27. Deste grupo, entendemos que a subunidade alfa do proteassoma - tipo 1 (PSMA1), que possui uma atividade molecular de endopeptidase, seja um alvo interessante para estudos posteriores. / Renal cell carcinoma (CRC) represents 3% of human neoplasms and approximately 90% of renal neoplasms and among urological tumors. The RCC is quite resistant to conventional radiotherapy. This technique allows the dose of radiation, in a single fraction, to be accurately applied to the tumor and the tissues adjacent to it, most of the time, are spared. The protein expression analysis in different tissues and body fluids was realized according the proteomics study under different conditions and / or times. Mass spectrometry allows the identification and quantification of thousands of proteins and peptides in a biological fluid or lysed cells, and is analyzed on a platform to identify differences in the expression of proteins associated with the proliferation of cancer cells and to establish potential biomarkers predictive of answer. The aim of this work was to analyze the protein profile of human renal cancer 786-0 cells after radiation, evaluated according the mitotic potential of irradiated cells in GammaCell performed at doses of 2 to 10 Gy. The irradiated cell colonies were stained and counted, and the multiple comparisons were analyzed by One-way ANOVA followed by the Bonferroni post-test. The dose of 8 Gy was defined as ideal for cell irradiation, the cytoplasmic proteins were extracted by the subcellular proteome PE kit and quantified by the Lowry method. For protein integrity analysis, SDS-PAGE was performed. The protein solution was analyzed in LTQ Orbitrap. The generated result was analyzed by the MASCOT server for search of peptides. Mass spectrometric analysis identified 44 proteins in non-irradiated samples - and 87 in irradiated samples. In non-irradiated samples the distribution of functional groups was protein synthesis 46.66%; Energy metabolism 16.66%; Migration and proliferation 16.66%; Antioxidants 3.33%. In the irradiated group protein synthesis 35.89%; Energy metabolism 20.51%; Migration and proliferation 20.51%; Antioxidants 5.12%; Molecular chaperones 5.12% and Endopeptidases 5.12%. Then, the spectrum of the sequences above 40 was analyzed. In the irradiated samples we found: ENO1 (47 kDa); VIM (53 kDa) / HEL113; PSMA1; TRAJ56; hCG; Cophylline-1 (19 kDa); HIST1H4H; PKM2; ANXA1; HSPB1 / HSP27. From this group, we identified the alpha subunit of the proteome type 1 (PSMA1) that has an endopeptidase This group, understood as a proteasome - type 1 (PSMA1) alpha subunit, has an endopeptidase molecular molecule and is an interesting target for further studies.

Die Akutfolgen ionisierender Strahlung wurden in zahlreichen Studien gut untersucht, ein Zusammenhang zwischen Hochdosisbestrahlung und deterministischen Spätschäden wurde vielfach belegt. Über die Langzeitfolgen niedrig dosierter ionisierender Strahlung hingegen ist bislang weniger bekannt, obwohl epidemiologische Studien auf ein erhöhtes Risiko strahlenassoziierter Spätfolgen hinweisen, sogar bei sehr geringen Dosen. Ionisierende Strahlung bedingt dosis- und zeitabhängigen Veränderungen in zahlreichen Geweben. Mittlere bis hohe Strahlendosen führen unter anderem zur strahleninduzierten koronaren Herzkrankheit mit ihren vielfältigen Folgeerkrankungen. Die vorliegende Studie beschäftigt sich mit den inflammatorischen, thrombotischen und fibrotischen Spätfolgen des murinen ApoE-/- -Herzens 3 bzw. 6 Monate nach Niedrig-Dosis-Bestrahlung. Dazu wurde die Expression ausgewählter Markerproteine an gefroren Herzschnitten und Plasmaproben mittels Immunfluoreszenzanalyse bzw. ELISA quantifiziert. Es konnte gezeigt werden, dass bereits sehr niedrige Bestrahlungsdosen (0,025 – 0,5 Gy) zu kompensatorischen Langzeiteffekten wie beispielsweise einer erhöhte Kapillardichte und Änderungen von Kollagen-IV und Thy-1-Expression führen. Dabei finden sich sowohl pro- als auch antiinflammatorische Effekte. Aus den Erkenntnissen multipler inflammatorischer und thrombotischer Veränderungen nach Niedrigdosisbestrahlung ließen sich möglicherweise wichtige Rationalen der anti-inflammatorischen Strahlentherapie ableiten. Darüber hinaus könnte anhand systemischer Plasmamarker die individuelle Evaluation strahlenassoziierter Spätfolgen und Einleitung adäquater Interventionsstrategien ermöglicht werden. Ob die hier gezeigten Effekte nur in Patienten mit besonderem Risikoprofil, wie erhöhten Cholesterin-Spiegeln, oder auch metabolisch gesunden relevant sind, bleibt weiteren Untersuchungen vorbehalten.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-10-13T15:08:09Z No. of bitstreams: 1 marceloluizdutravicente.pdf: 2312980 bytes, checksum: b37c60d826b1535e34d7681e6ff5daee (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2016-10-22T12:57:22Z (GMT) No. of bitstreams: 1 marceloluizdutravicente.pdf: 2312980 bytes, checksum: b37c60d826b1535e34d7681e6ff5daee (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-22T12:57:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 marceloluizdutravicente.pdf: 2312980 bytes, checksum: b37c60d826b1535e34d7681e6ff5daee (MD5) Previous issue date: 2008-03-07 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Estudos prévios têm mostrado que a agenesia calosa causada por irradiação ionizante prénatal promove alterações na expressão de lateralidade cerebral. Sugere-se que fatores genéticos possam estar envolvidos na expressão de lateralidade cerebral. A intenção deste trabalho foi estudar, em camundongos, as correlações entre expressões de lateralidade cerebral no teste de preferência de patas, que avaliou o comportamento lateralizado motor e no teste de campo aberto, que avaliou o comportamento lateralizado sensório-motor, quando avaliado o comportamento em sua periferia. No teste campo aberto, os animais foram divididos em subgrupos: aqueles que foram expostos a um fator sonoro contínuo estressante de 105 decibéis a 3000 Hz e os que não foram expostos. Foi testado um número total de 49 machos não irradiados e 51 fêmeas não irradiadas, 34 machos irradiados e 39 fêmeas irradiadas. Os instrumentos estatísticos utilizados foram análise de regressão com o coeficiente de Pearson e ANOVA. Os resultados mostraram índice de significância nas correlações lateralidade direcional da preferência de patas x lateralidade direcional do campo aberto e lateralidade direcional da preferência de patas x índice de lateralidade do campo aberto, em machos não irradiados sem som e em fêmeas não irradiadas com som. A modificação nos índices de lateralidade nos animais irradiados dos respectivos grupos sugere a participação da ontogênese calosa no estabelecimento da lateralidade como expressão conjunta. Além disto, a presença de índices de significância nos grupos não irradiados citados sugere a participação de fatores genéticos e/ou epigenéticos no estabelecimento da lateralidade como expressão conjunta. / Previous studies showed that callosal agenesis by exposition to prenatal ionizing irradiation leads to changes in the cerebral lateralized behavior. Other studies suggest genetic factors as involved in the establisment of cerebral lateralization. The intention this work was to study, in mice, the correlations between the establisment of the cerebral lateralization on the paw preference test, that objectives the study of motor laterality, and on the open-field test, that objetives the study of sensoriomotor lateralization on the periphery. In the open-field test the animals were subdivided in subgroups: that were exposed a stressing continuous sound factor of 105 dB and 3000 Hz and that weren’t exposed. It were tested 49 nonirradiated males, 51 nonirradiated females, 34 irradiated males, 39 irradiated females. The statistical tool used were the regression analysis with the Pearson Coefficient and the ANOVA. The results showed significance in correlations of directional laterality of the paw preference x directional laterality of the open-field, and in directional laterality of the paw preference x lateralisation index of the open-field. This was expressed in the nonirradiated males without sound and nonirradiated females with sound. The changes on the laterality index in the irradiated mice on the respective groups suggest the role of the callosal ontogenesis on the establisment of laterality as a dual expression. On the other hand, the presence of significance index on the above cited nonirradiated grouos suggest the role of genetic and/or epigenetic factors on the laterality establishment as a dual expression.

Les microARN sont des petits ARN (22 nucléotides en moyenne) non codants connus pour réguler l'expression des gènes au niveau post-transcriptionnel. Ils jouent un rôle dans de nombreux processus cellulaires, notamment dans la peau. La nature et la fonction précise des microRNAs contrôlant la différenciation épidermique restent à clarifier. De même; leur rôle dans la réponse à l'irradiation ionisante du kératinocyte n'a jamais été étudié. Nous avons donc entrepris une analyse d'expression du miRnome par la technique de TLDA dans ces deux contexts. Pour la différentiation épidermique, ces travaux de thèse ont permis de mettre en évidence une induction globale de l'expression des microARN au cours de la différentiation précoce des kératinocytes. Plusieurs microARN significativement modulés ont été caractérisés. Parmi eux, MiR-132 a été validé in vivo sur coupe de peau. Au cours des étapes tardives de la différentiation, miR-23b est induit. Nous avons montré qu'il agit en régulant TGIF1, répresseur de la voie TGF-β et active la phosphorylation de SMAD2, facteur de transcription nécesssaire à la différenciation terminale. Nous avonss également observé que les microARN répondent de façon globale aux rayons γ, mais que la nature de cette réponse dépend de l'état de différenciation des cellules. Cette réponse globale n'est pas corrélée à des modifications d'expression de protéine de la voie de synthèse des microRNAs comme AGO2 et DICERI. Nous avons montré que, dans les cellules proliférantes, l'induction de micro ARN réprimés par les rayons γ affecte la viabilité des cellules après irradiation. Ainsi, ces travaux de thèse contribuent à une meilleure compréhnesion du rôle des microRNA dans la régulation de la différenciation épidermique et la réponse des kératinocytes au stress génotoxique. / MicroRNA are small non-coding RNA (22 nucleotides in mean) known to regulate gene expression at the post-translational level. They play a role in many cellular processes, especially in skin. However, their exact role during epidermal differenciation remains to be clarified. Moreover, their role in the response of keratinocytes to ionizing irradiation has never been studied. Therefore, we settled up a miRnome expression analysis by TDLA technique in both situations. In epidermis differenciation, we observed a global induction of microRNA expression during the early steps of keratinocytes differenciation. Several significantly modulated microRNA have been characterized. Among them, miR-132 was validated in vivo on skin sections. During the late steps of differentiation, miR-23b is induced. We showed that miR-23b is able to regulate TGIF1, repressor of TGF-β pathway and to induce SMAD2 phosphorylation, a key transcription factor in terminal differentiation. In keratinocytes exposed to ionizing irradiation, we observed that microRNA display a global response to γ-rays that is higly dependent to the differentiation state of irradiated cells. This global response is not correleted to expression modifications of proteins from the microRNA synthesis pathway such as AGO2 and DICERI. We finally found that in proliferative keratinocytes the induction of irradiation-repressed microRNA impact cell viability after irradiation. Taken together, those results contribute to a better understanding of the microRNA function in the regulation of epidermal differentiation and in the response of keratinocytes to genotoxic stress

Die Akutfolgen ionisierender Strahlung wurden in zahlreichen Studien gut untersucht, ein Zusammenhang zwischen Hochdosisbestrahlung und deterministischen Spätschäden wurde vielfach belegt. Über die Langzeitfolgen niedrig dosierter ionisierender Strahlung hingegen ist bislang weniger bekannt, obwohl epidemiologische Studien auf ein erhöhtes Risiko strahlenassoziierter Spätfolgen hinweisen, sogar bei sehr geringen Dosen. Ionisierende Strahlung bedingt dosis- und zeitabhängigen Veränderungen in zahlreichen Geweben. Mittlere bis hohe Strahlendosen führen unter anderem zur strahleninduzierten koronaren Herzkrankheit mit ihren vielfältigen Folgeerkrankungen. Die vorliegende Studie beschäftigt sich mit den inflammatorischen, thrombotischen und fibrotischen Spätfolgen des murinen ApoE-/- -Herzens 3 bzw. 6 Monate nach Niedrig-Dosis-Bestrahlung. Dazu wurde die Expression ausgewählter Markerproteine an gefroren Herzschnitten und Plasmaproben mittels Immunfluoreszenzanalyse bzw. ELISA quantifiziert. Es konnte gezeigt werden, dass bereits sehr niedrige Bestrahlungsdosen (0,025 – 0,5 Gy) zu kompensatorischen Langzeiteffekten wie beispielsweise einer erhöhte Kapillardichte und Änderungen von Kollagen-IV und Thy-1-Expression führen. Dabei finden sich sowohl pro- als auch antiinflammatorische Effekte. Aus den Erkenntnissen multipler inflammatorischer und thrombotischer Veränderungen nach Niedrigdosisbestrahlung ließen sich möglicherweise wichtige Rationalen der anti-inflammatorischen Strahlentherapie ableiten. Darüber hinaus könnte anhand systemischer Plasmamarker die individuelle Evaluation strahlenassoziierter Spätfolgen und Einleitung adäquater Interventionsstrategien ermöglicht werden. Ob die hier gezeigten Effekte nur in Patienten mit besonderem Risikoprofil, wie erhöhten Cholesterin-Spiegeln, oder auch metabolisch gesunden relevant sind, bleibt weiteren Untersuchungen vorbehalten.

Submitted by Geraldo Henrique Martins Vieira (ghmv01@gmail.com) on 2018-07-12T00:31:16Z No. of bitstreams: 1 FINAL DOUTORADO 05072018 - Com ficha catalográfica 1.pdf: 2325445 bytes, checksum: 2445b13dd935fbff7327e11915a11a09 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Lucia de Grava Kempinas (algkempinas@fca.unesp.br) on 2018-07-12T12:31:26Z (GMT) No. of bitstreams: 1 vieira_ghm_dr_botfca.pdf: 2933387 bytes, checksum: 2a083c6095e1a59c182c064b51813574 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-12T12:31:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 vieira_ghm_dr_botfca.pdf: 2933387 bytes, checksum: 2a083c6095e1a59c182c064b51813574 (MD5) Previous issue date: 2018-05-24 / Este trabalho, objetiva estudar a atemoia, cultivar ‘Thompson’, em três diferentes tratamentos de pós-colheita: uso de ácidos orgânicos, atmosfera modificada ativa e irradiação ionizante (60Co). Os frutos foram selecionados e armazenados em câmara fria nas condições de 15 ± 0,2ºC e 90 ± 2% de UR. Para cada experimento houve três repetições e dois frutos por repetição. Foram seis tratamentos realizados, sendo dois ácidos orgânicos (ascórbico e cítrico); nas concentrações de 1%, 2% e 3% cada tratamento submerso em sua solução de ácido orgânico por 10 minutos e posteriormente seca à sombra. Na atmosfera modificada ativa, foram quatro tratamentos, sendo eles: T0 - 21% de O2, 0,03% CO2 e 78% de N2 (ambiente);T1 - 4% de O2, 5% CO2 e 91% de N2, T2 - 4% de O2, 6% CO2 e 90% de N2, T3 - 4% de O2, 7% CO2 e 89% de N2 e T4 - 4% de O2, 8% CO2 e 88% de N2. No experimento de irradiação ionizante (60Co), foram utilizados os tratamentos T0= Sem irradiação (controle), T1=0,2kGy, T2=0,4kGy, T3=0,6kGy, T4=0,8kGy, T5=1,0kGy e T6= 1,2kGy. Em todos os comparativos de todos os experimentos as amostras foram analisadas a cada três dias até dezoito dias de armazenamento. No tratamento controle os frutos foram lavados em água corrente e posteriormente imersos em solução clorada a 150 mg L-1, por 10 minutos e posteriormente secos à temperatura ambiente; exceção feita ao tratamento controle de irradiação ionizante, o qual não recebeu este tratamento. Em todos os tratamentos, foram realizadas as análises: cromatologia de casca e polpa, perda de massa fresca, sólidos solúveis (SS), acidez titulável (AT), pH, ácido ascórbico (AA), açucares redutores, taxa respiratória, atividade específica da polifenoloxidase (PPO) e peroxidase (POD), atividade antioxidante total e compostos fenólicos totais. Os experimentos foram conduzidos em delineamento inteiramente casualizado (D.I.C.), em esquema fatorial (tratamento x armazenamento), compostos pelos tratamentos dos diferentes experimentos e oito tempos de armazenamento. Os resultados foram submetidos à análise de variância e as médias comparadas pelo teste de Tukey ao nível de 5% de probabilidade e fez-se regressão, para as análises no período de armazenamento. Os resultados demonstraram pico respiratório, na atemoia, no sexto dia para ácido cítrico a 1% e 3% e para atmosfera modificada ativa com 4% de O2 e 8% de CO2 no 9° dia para a dose 1,2kGy.