Made available in DSpace on 2016-06-02T20:19:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DissKNZP.pdf: 677602 bytes, checksum: 59039575fd71635cad1a3e82cbf16266 (MD5) Previous issue date: 2004-02-19 / Universidade Federal de Sao Carlos / O presente estudo teve como objetivo detectar possíveis alterações na função extensora do joelho e relacionar com possíveis alterações no aspecto macroscópico da cartilagem articular e na citologia do líquido sinovial de indivíduos com ruptura completa do ligamento cruzado anterior (LCA). Foram avaliados catorze indivíduos com diagnóstico de lesão unilateral do LCA combinada ou isolada. A mensuração da função muscular foi realizada por meio de avaliação isocinética concêntrica para extensão e flexão do joelho nas velocidades de 60 e 180°/s. Para analisar as variáveis pico de torque (PT) do quadríceps e relação entre PT de isquiotibiais e quadríceps (relação I/Q) foram feitas cinco contrações voluntárias máximas em cada membro, sendo que a escolha do membro inicial foi aleatória. Utilizou-se uma escala histológica para avaliar alterações macroscópicas da superfície articular (escala modificada de Mankin), via artroscópica. O liquido colhido foi processado em cito centrífuga em 1500 rpm, processado a seco e corado por Giemsa. Posteriormente foi realizada morfometria para as células inflamatórias mono e polimorfonucleares. O teste T de Student foi utilizado para comparar os resultados do PT do quadríceps e relação I/Q dos membros inferiores envolvidos e não envolvidos. O método estatístico índice de correlação de Pearson foi utilizado para correlacionar as variáveis pico de torque, tempo de lesão, número de células inflamatórias e volume de líquido sinovial puncionado. Os resultados mostraram que num período de 5 a 168 meses após a ruptura ligamentar podem ser observados diferentes graus de artrose na superfície articular, desde cartilagem articular normal até exposição de osso subcondral; presença de células inflamatórias no líquido sinovial, com predomínio de células MNC (286 a 2083 MNC/ml e 0 a 22 PMN/ml); aumento do volume do líquido sinovial puncionado (de 0 a 12 ml). Foi observada diminuição do pico de torque concêntrico do quadríceps, e desequilíbrio da relação isquiotibiais/quadríceps do joelho lesado e do membro contralateral. Não foi encontrada correlação significativa entre o déficit de pico de torque do quadríceps e as variáveis: tempo pós-ruptura do LCA e volume de LS puncionado, assim como entre a quantidade de LS puncionado e o número de células inflamatórias/ml. Também não foi observada uma relação direta entre o grau de artrose articular e as variáveis tempo pós-ruptura do LCA e déficit de pico de torque do quadríceps. A partir dos resultados obtidos neste estudo podemos concluir que num período de 5 a 168 meses após a ruptura do LCA o joelho sofre alterações funcionais, entretanto sem apresentar correlação direta com as mudanças morfológicas, como grau de artrose, volume de líquido sinovial e células inflamatórias.

Diversos experimentos em humanos e equinos discutem a eficácia do uso intra-articular do ácido hialurônico (AH). Pouco se sabe a respeito de seu potencial pró ou anti-inflamatório, bem como sobre a eficácia das moléculas de AH de diferentes pesos moleculares. O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos anti-inflamatórios, anabólicos e antioxidantes da aplicação intra-articular de AH em sinovite aguda induzida por lipopolissacarídeo (LPS) em equinos. Foram utilizadas 24 articulações metacarpofalangeanas hígidas de 12 equinos jovens, avaliadas por exame físico, radiográfico e ultrassonográfico. As articulações foram divididas aleatoriamente em três grupos de oito, sendo o grupo controle tratado com triancinolona (TA) (10 mg), o grupo AH de baixo peso molecular (AH-BPM), e o grupo AH de alto peso molecular (AH-APM). Inicialmente, foram aplicados 0,25 ng de LPS por via intra-articular (momento 0). Após uma hora (momento 1), coletou-se líquido sinovial (LS) para contagem celular e imediatamente após realizado o tratamento com TA, AH-BPM ou AH-APM. Posteriormente, LS foi coletado nos momentos 8, 24 e 48 horas para contagem celular, avaliação do burst oxidativo, quantificação de prostaglandina E2 (PGE2), condroitim sulfato (CS), AH e mensuração do peso molecular do AH. Exame físico dos animais, incluindo mensuração da circunferência articular e avaliação de claudicação por meio do equipamento Lameness Locator® foi realizado em todos os momentos. As frequências cardíaca e respiratória dos animais aumentaram em todos os grupos às 8 horas (P<0,05), sendo menor no grupo TA. Em relação à circunferência articular o grupo AH-BPM apresentou maior aumento às 24 e 48 horas em relação aos outros grupos (p<0,05). O grau de claudicação do grupo AHAPM foi maior que o do grupo TA às 8 e 24 horas, mas similar ao grupo AH-BPM. O grupo TA apresentou maior quantidade de células nucleadas no LS do que o grupo AH-BPM as 24 e 28 horas e do que o grupo AH-APM às 48 horas. A concentração de PGE2 foi menor no grupo TA em relação ao grupo AH-APM às 8 horas, e a ambos os grupos que receberam AH às 48 horas (p<0,05). O grupo AH-APM mostrou maior concentração de AH às 8 horas do que os outros grupos, contudo às 48 horas o grupo TA mostrou maior concentração de AH do que os outros grupos (p<0,05). Também às 48 horas o grupo TA foi o que apresentou a menor porcentagem de AH de alto peso molecular (p<0,05). A maior concentração de CS no LS às 24 e 48 horas ocorreu no grupo TA, também observou-se o grupo TA foi o único em que a concentração de CS aumentou as 8 horas em relação aos valores basais. O grupo AH-APM foi o que apresentou menor concentração de CS às 8 horas (p<0,05). O grupo tratado com AHBPM apresentou maior intensidade de fluorescência nos momentos 24 e 48 horas (p<0,05). Apesar da triancinolona possuir efeito superior ao ácido hialurônico no controle da inflamação, ela possui efeito catabólico sobre a cartilagem articular, demonstrado pelo aumento da concentração de CS, além de quebra da molécula de AH no líquido sinovial. O AH-APM é mais indicado para terapia intra-articular em equinos uma vez que demonstrou menor efeito catabólico e oxidativo do que o AH-BPM / Several experiments have compared the efficacy of intra-articular usage of yaluronic acid (HA) within horses. Little is known about the effectiveness of different subtypes of HA in terms of its pro- and anti-inflammatory potential. The goal of this study was to investigate the anti-inflammatory, anabolic and antioxidant effects of intra-articular application of HA in acute synovitis induced by lipopolysaccharide (LPS) in horses. 24 metacarpophalangeal joints of 12 young horses without musculoskeletal alterations were subjected to lameness examination (Lameness Locator®), radiography and ultrasound. These joints were divided into three groups: a positive control group treated with triamcinolone acetonide (TA) (10mg) and 2 experimental groups treated with either hyaluronic acid of low molecular weight (HALMW) or hyaluronic acid of high molecular weight (HA- HWM). Initially, all joints were injected with 0.25ng of LPS. After an hour, synovial fluid (SF) was collected for cell counting. TA, HA- HWM or HA- LMW treatments were then applied to the joints. After treatment applications, SF was collected at 3 different time points (8, 24 and 48 hours) for cell counts, oxidative burst evaluation, prostaglandin E2 (PGE2) quantification, chondroitin sulfate (CS), HA and molecular weight measurements. Physical examinations, circumference measurements and lameness evaluations were carried out at each time point. The heart and respiratory rate of the animals increased in all groups at 8 hours (p <0.05), that increase was lower in the TA group. Regarding the circumference of the joint the HA-LMW group showed a greater increase at 24 and 48 hours compared to the other groups (p <0.05). The lameness of the HA-HMW group was higher than the TA group at 8 and 24 hours, but similar to the HALMW group. The TA group had a higher nucleated cells count in the SF compared to the HALMW group at 24 hours and 28 hours, and higher than the HA-HMW group at 48 hours. The PGE2 concentration was lower in the TA group in relation to the HA-HMW group at 8 hours, and lower than both groups that received HA at 48 hours (p <0.05). The HA-HMW group showed higher HA concentration at 8 hours than the other groups at 48 hours. However, the TA group showed higher HA concentration than the other groups (p <0.05). Also, at 48 hours the TA group was the one with the lowest percentage of high molecular weight HA (p <0.05). The highest concentration of CS in SF at 24 and 48 hours occurred in the TA group, and it was also observed in the TA group was the only one in which the concentration of CS increased at eight hours compared to baseline. The HA-HMW group showed the lowest concentration of CS at 8 hours (p <0.05). The group treated with HA-LMW showed higher fluorescence intensity at 24 and 48 hours (p <0.05). Although triamcinolone have an superior effect of hyaluronic acid in controlling inflammation, it has catabolic effects on cartilage, shown by increased concentration of CS, and breakage of the HA molecule in synovial fluid. The HA-HMW is recommended for intra-articular therapy in equine joints since it showed less oxidative and catabolic effects

Submitted by Claudia Rocha (claudia.rocha@udesc.br) on 2018-03-16T13:14:40Z No. of bitstreams: 1 PGCA17MA216.pdf: 232822581 bytes, checksum: 9911f8238f092048e18a79d4eff872c2 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-03-16T13:14:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PGCA17MA216.pdf: 232822581 bytes, checksum: 9911f8238f092048e18a79d4eff872c2 (MD5) Previous issue date: 2017-03-09 / PROMOP / Studies of the frequency of dental diseases in horses are still poorly discussed and scarce in traction horses, as well as studies comparing odontological changes in horses under different types of management and also on the effect of dental treatment on the clinical, hematological evaluation And analysis of the synovial fluid of the temporomandibular joint. General clinical examination, specific dentistry and the collection of synovial fluid from the temporomandibular joint were performed. The clinical examination consisted of the evaluation of vital parameters, weight and body condition. Blood samples were collected for hemogram, total protein concentration and plasma fibrinogen. For the dental evaluation the horses were fasted for eight hours and at the time of the dental procedure sedated using 1% detomidine intravenously. The oral cavity of each horse was evaluated for the diagnosis of different diseases, followed by the treatment of dental conditions. Harvest and analysis of synovial fluid was performed taking into account cellularity, pH, protein and density. Included in the study were 115 adult, male and female horses, of indefinite race and without previous dental treatment for at least 5 years. The development of the research carried out in 4 phases, 70 animals were used to evaluate the frequency of diseases of the oral cavity of horses performing traction function. For the evaluation of the influence of the type of management on the frequency of diseases of the oral cavity, 69 equines were divided into three groups of 23 animals, being extensive, semi-extensive and intensive management. To evaluate the effect of dental treatment on the clinical and hematological parameters, 62 horses were used and 33 animals were used to evaluate the synovial fluid. The evaluations were divided in the moments immediately before the dental treatment, 30 days later; 60 days after and 90 days after dental treatment. The statistical analysis of the data was performed using descriptive analysis and Chi-square test for nominal variables and analysis of variance (ANOVA) and Tukey for comparison between means and groups (P <0.05). The frequency of dental changes in horses that perform a traction function in the city of Lages-SC is significant, especially the sharp enamel points, diastema and buccal ulcers. Pulp exposure of the incisor teeth occurred more frequently in geriatric horses as well as the frequency of ramps and dorsal curvature was higher in females. Regarding management, it was concluded that enamel sharp points are present in all animals regardless of the type of management, and the diastemas in incisors, cheek teeth, and incisors are prevalent in extensive management. The dorsal curvature of the incisors was greater in the semi-extensive management and the excessive transverse ridges in the intensive management. It was observed according to the data obtained in the present study that mild, moderate and severe affections as well as dental treatment do not interfere in the clinical and hematological parameters and present little influence on the synovial fluid of the temporomandibular joint of horses / Trabalhos referentes à frequência de enfermidades odontológicas em equinos ainda são pouco discutidos e escassos naqueles submetidos à função de tração, bem como estudos comparando as alterações odontológicas em equinos sob diferentes tipos de manejo e também a respeito do efeito do tratamento odontológico na avaliação clínica, hematológica e da análise do líquido sinovial da articulação temporomandibular. Foi realizado o exame clínico geral, odontológico específico e a colheita do líquido sinovial da articulação temporomandibular. O exame clínico consistiu da avaliação dos parâmetros vitais, peso e condição corporal. Foram colhidas amostras de sangue para a realização do hemograma, concentração de proteína total e fibrinogênio plasmático. Para a avaliação odontológica os equinos foram mantidos em jejum por oito horas e no momento do procedimento odontológico sedados utilizando-se detomidina 1% por via intravenosa. A cavidade oral de cada equino foi avaliada para o diagnóstico das diferentes enfermidades, seguindo-se o tratamento das afecções dentárias. A colheita e análise do líquido sinovial foi realizada levando em conta a celularidade, pH, proteína e densidade. Foram incluídos na pesquisa 115 equinos, adultos, de ambos os sexos, de raça indefinida e sem tratamento odontológico prévio por no mínimo 5 anos. O desenvolvimento da pesquisa procedeu em 4 fases, para a avaliação da frequência de enfermidades da cavidade oral de equinos que realizam função de tração foram utilizados 70 animais. Para a avaliação da influência do tipo de manejo na frequência de enfermidades da cavidade oral foram utilizados 69 equinos divididos em três grupos de 23 animais, sendo manejo extensivo, semiextensivo e intensivo. Para avaliação do efeito do tratamento odontológico nos parâmetros clínicos e hematológicos foram utilizados 62 equinos e para a avaliação do líquido sinovial foram utilizados 33 animais. As avaliações foram divididas nos momentos imediatamente antes do tratamento dentário, 30 dias após; 60 dias após e 90 dias após o tratamento odontológico. A análise estatística dos dados foi realizada utilizando-se análise descritiva e o teste Quiquadrado para variáveis nominais e a análise de variância (ANOVA) e Tukey para comparação entre médias e grupos (P<0,05). A frequência de alterações dentárias em equinos que realizam função de tração na cidade de Lages-SC é significativa, destacando-se as pontas de esmalte, diastemas e úlceras nas mucosas. A exposição pulpar dos dentes incisivos ocorreu em maior frequência em equinos geriátricos bem como a frequência de rampas e curvatura dorsal foi maior em fêmeas. Em relação ao manejo conclui-se que as pontas de esmalte estão presentes em todos os animais independentemente do tipo de manejo, sendo que os diastemas em incisivos, pré-molares e molares, e incisivos são prevalentes no manejo extensivo. A curvatura dorsal dos incisivos foi maior no manejo semiextensivo e as cristas transversais excessivas no manejo intensivo. Foi observado de acordo com os dados obtidos no presente trabalho que as afecções leves, moderadas e severas bem como o tratamento odontológico não interferem nos parâmetros clínicos e hematológicos e apresentam pouca influência no líquido sinovial da articulação temporomandibular de equinos

Orientador: Flávia de Resende Eugênio / Banca: Alexandre Lima de Andrade / Banca: Veronica Jorge Babo-Terra / Resumo: Este estudo teve por objetivo descrever a evolução das alterações locomotoras, citológicas e radiográficas, na tentativa de se elucidar o mecanismo pelo qual se desenvolve a artrite na leishmaniose experimental em cães. Formas pro-mastigotas de L. chagasi foram inoculadas nas articulações escápuloumeral e fêmoro-tibial de 14 cães. Os animais foram submetidos a avaliações clínicas diárias por 30 dias, bem como análises radiográfica, citológica e físico-química do líqüido sinovial. As alterações clínicas mais encontradas foram: claudicação, dor, restrição de movimentos e aumento de temperatura local. No liquido sinovial, houve aumento gradativo de leucócitos, predominando mononucleares e, posteriormente, polimorfonucleares. Aumento de proteínas, diminuição do pH (de alcalino tendendo a acido), bem como da viscosidade, e qualidade do coagulo ruim foram observados ao longo do estudo. Estatisticamente, a articulação femoro-tibial apresentou maiores alterações quando comparada à escápuloumeral. Em 64% dos animais, observouse a presença do parasita na articulação e não foram encontradas alterações radiográficas ósseas, no período estudado. O confronto dos valores físicos, químicos e achados citológicos do liquido sinovial, permitiu subsidio importante para afirmar que há ocorrência de artrite infecciosa, porém sem caráter proliferativo ou sequer degenerativo, no período estudado. / Abstract: The aim of this study was to describe the evolution of the locomotor and cytological articular alterations, trying to unveil the mechanism through which the arthritis develops in the experimental leishmaniasis in dogs. Pro-amastigotes forms of L. chagasi were inoculated in the humeral-scapular and the femoral-tibial articulations of 14 dogs. The animals were submitted to daily clinical evaluations for a thirty-day period, as well as cytological and physiochemical analysis of the synovial fluid The most frequent clinical alterations were: limping articular volume increase, pain and local temperature increase. In the synovial fluid, there was a gradual increase of leukocytes, predominating mononuclear cells and, later, polymorphonuclear ones. Protein increase, decrease of the pH (from alkaline towards neutral), as well as viscosity, and coagulation test of bad quality were observed along the study. Statistically, the femoro-tibial articulation presented greater alterations when compared to the humeral-scapular one. In 64% of the animals, the parasite presence was observed in the articulation and no osseous radiographic alterations were found in the period of the study. The comparison of the physical and chemical values and the cytological findings in the synovial fluid supplied important information to state that there are occurrences of septic arthritis, in the initial phase, however without prolipherative or degenerative characteristics, in the period of the study. / Mestre

Resumo: A leishmaniose visceral pode ser incluída como uma das causas de poliartrite inflamatória em cães, entretanto, são escassas e contraditórias as informações sobre as lesões osteoarticulares associadas a esta enfermidade. Partindo-se da hipótese de que cães infectados por Leishmania chagasi apresentam distúrbios locomotores, investigou-se a freqüência, distribuição e caracterização dos achados radiográficos e do líquido sinovial das articulações do cotovelo, cárpica, joelho e társica, de 100 cães com o diagnóstico parasitológico e sorológico positivo para leishmaniose visceral. Radiograficamente observou-se a presença de lesões osteoarticulares em 83% dos cães, tais como, irregularidade do trabeculado ósseo (28,62%), esclerose subcondral (20,77%), osteólise (18,12%), edema (12,93%), colapso articular (12,71%), osteólise e proliferação óssea associada (3,98%), proliferação óssea (2,65%), aumento de opacidade medular e fratura patológica (0,11%) respectivamente, sendo as articulações társicas (75%) e cárpicas (54%) as mais acometidas. A avaliação citológica foi realizada em 603 de 800 articulações estudadas, onde 199 apresentaram formas amastigotas de Leishmania sp., enquanto 405 tinham ausência do parasito e 196 estavam contaminadas com sangue ou com material insuficiente para análise. A maioria das amostras de líquido sinovial apresentou alteração na contagem diferencial das células, sendo, o aumento do número de células mononucleares ativadas e neutrófilos o achado mais comumente encontrado. Os resultados obtidos permitiram concluir que cães com leishmaniose visceral apresentam lesões articulares com distribuição difusa, com maior acometimento das articulações distais e ausência de sinais radiográficos patognomônicos, e que se faz necessária a avaliação do líquido sinovial para auxiliar no diagnóstico diferencial... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Visceral leishmaniasis can be included as a cause of dog inflammatory polyarthritis, however there is few and contraditory informations about osteoarticular lesions associated with this disease. Based from the hypothesis that dogs infected by Leishmania chagasi present locomotor disturbances, the frequency, distribution and characterization of radiographic findings and synovial fluid of elbow, carpus, knee and tarsus articulations from 100 dogs with positive parasitologic and serologic diagnosis for visceral leishmaniasis were studied. The presence of osteoarticular lesions were radiographically observed in 83 per cent of the dogs, and characterized by trabecular bone irregularity (28.62%), subchondral sclerosis (20.77%), osteolysis (18.12%), edema (12.93%), articular collapse (12.71%), association of osteolysis and bone proliferation (3.98%), periosteal proliferative reaction (2.65%), increased medullar opacity and pathologic fracture (0.11%). The most affected articulations were the tarsus (75%) and carpus (54%). The citologic assessment was realized on 603 of 800 studied articulations, whith 199 presenting amastigote forms of Leishmania sp.,while 405 had no parasites and 196 were contaminated with blood or had insufficient sample. The most of synovial fluid samples showed a change differential cell counting alterations, with high number of activated mononuclear cells and neutrophils being the common findings. The results allowed to conclude that dogs affected by visceral leishmaniasis presented lesions joint with diffuse distribution, with more distal articulations involvement and absence of pathognomonic radiographic signs, and that is needed to asses the synovial fluid to assist in differential diagnosis of arthropathy in areas endemic for canine visceral leishmaniasis. / Orientador: Paulo César Ciarlini / Coorientador: Luciana Del Rio Pinoti Ciarlini / Banca: Maria Jaqueline Mamprim / Banca: Mary Marcondes / Mestre

A cartilagem articular é um tecido avascular, com baixa celularidade, composta principalmente de colágeno extracelular e proteoglicanos, com uma capacidade limitada de regeneração. Nos últimos anos, diversas abordagens clínicas e de pesquisa têm sido adotadas para reparar danos na cartilagem articular, como transplante de condrócitos, enxerto de periósteo, células-tronco mesenquimais e tecidos derivados dessas células. O isolamento de células-tronco mesenquimais foi relatado a partir de diferentes tecidos, incluindo medula óssea, tecido adiposo, sangue do cordão umbilical, sangue periférico e saco vitelino em equinos. As células-tronco mesenquimais derivadas de líquido e membrana sinoviais foram obtidas em humanos, cães, suínos e caprinos e são fontes promissoras para regeneração articular, já que são tecido-específicas e de fácil obtenção e cultivo. O objetivo deste trabalho foi estabelecer e caracterizar a linhagens de células obtidas de membrana e líquido sinoviais equinos. Os fragmentos foram obtidos por meio de artroscopias e cultivados em meios de cultura DMEM-H e MEM para obtenção das linhagens. Para análise da morfologia celular foi realizada a fotodocumentação das garrafas em microscopia invertida. A expressão de marcadores de células-tronco (CD45RO, OCT3/4, NANOG, CD105, CD90, CD34, CD117, CD133, TRA-1-81, VEGF-R1 e Ly6a), marcadores inflamatórios (COX-2, TNF-R1-r, CD11, CD1a e MCP-1) e marcadores envolvidos na checagem e progressão do ciclo celular (Caspase-3 fosforilada, HSP-47, P21, Ki67, Ciclina D1 e P53) mostraram diferencialmente expressos, sugerindo que podemos considerá-las uma possível fonte de células-tronco mesenquimais. Devido ao grande impacto que patologias na articulação têm sobre o desempenho atlético em cavalos, os resultados demonstrados neste trabalho será uma base para conduzir outros experimentos na avaliação das aplicações terapêuticas dessas células. / The articular cartilage is an avascular tissue with low cellularity composed of extracellular collagen and proteoglicans. It has a limited capacity of regeneration. Condrocyte transplantation, mesenchymal stem cells and tissues derived from these cells has been used by several researches to repair damage to the articular cartilage. The isolation of mesenchymal stem cells has been reported from different tissues such as bone marrow, adipose tissue, blood, umbilical cord, and yolk sac. The mesenchymal stem cells from synovial fluid and synovial membrane were obtained from humans, dogs, pigs and goats. These cells are tissue specific and easy to obtain and cultivate. The objective of this research is to obtain and characterize cells from equine synovial fluid and synovial membrane. The samples were obtained by arthroscopy and cultivated in the DMEM-H and MEM media. Cell morphology analyses were made by photodocumentation in inverted microscopy. The expression of stem cell markers (CD45RO, OCT3/4, NANOG, CD105, CD90, CD34, CD117, CD133, TRA-1-81, VEGF-R1 and Ly6a), inflammation markers (COX-2, TNF-R1-r, CD11, CD1a and MCP-1) and markers involved in checking and cell cycle progression (Caspase-3, HSP-47, P21, Ki67, Ciclina D1 and P53) showed differentially expressed. Mesenchymal stem cells from synovial membrane and synovial fluid provide promise for cell-based therapies for articular cartilage repair. These results may lead other experiments to use these cells to new therapeutic applications.

Memoria para optar al Titulo Profesional de Médico Veterinario / La osteoartritis es la enfermedad articular más común en la especie equina, que provoca dolor y disminución de la movilidad articular, cuya consecuencia es la disminución del desempeño deportivo. La osteoartritis se caracteriza por la destrucción del cartílago articular, que se manifiesta por úlceras focales y fragmentación. El óxido nítrico (NO) participaría como un importante mediador biológico en la patología articular, que podría alterar la homeostasis del cartílago conduciendo a su destrucción. El NO es un radical libre, gaseoso, sintetizado a partir del aminoácido L-arginina, por una familia de isoenzimas conocidas como óxido nítrico sintasas (NOS). Se ha descrito que el NO participaría en una amplia variedad de procesos biológicos, siendo oxidado en el medio biológico a nitrito y nitrato, los que se han utilizado como marcadores de su biosíntesis. En las articulaciones diartrodiales los condrocitos son la principal fuente de NO. Para desarrollar el presente trabajo, se obtuvo líquido sinovial de 110 articulaciones metacarpofalángicas de equinos mestizos de matadero, cuya selección se realizó de acuerdo al aspecto macroscópico (normal o alterado) del cartílago articular y de la membrana sinovial, generándose cuatro grupos de articulaciones: NN = cartílago y membrana normales (n = 47); NA = cartílago normal y membrana alterada (n= 25); AN = cartílago alterado y membrana normal (n = 23); AA = cartílago y membrana alterados (n = 15). Se determinaron las concentraciones de proteína y de nitrito por los métodos de Lowry y de Griess, respectivamente. Además, se determinó la edad de los animales por cronometría dentaria. Se aplicó análisis de varianza y una posterior prueba de Tukey para observar diferencias entre grupos articulares. El promedio de edad de los equinos fue de 5.3  3.6 años en el grupo NN, 4.4  3.1 años en el grupo NA, 9.9  4.2 años en el grupo AN y 10.7  3.8 años en el grupo AA. Los grupos NN y NA presentaron una edad significativamente menor (p = 0.001) que los grupos AN y AA. La concentación de proteína en el líquido sinovial fue de 15.2  6.3 mg/mL en las articulaciones NN, 13.4  8.4 mg/mL en las articulaciones NA, 14.4  7.4 mg/mL en las articulaciones AN y 10.8  5.4 mg/mL en las articulaciones AA. No se encontró diferencias significativas (p  0.05) de concentración de proteínas entre los grupos. La concentración de nitrito en el líquido sinovial fue de 29.4  27.9 M en las articulaciones NN, 44.4  32.6 M en las articulaciones NA, 32.6  27 M en las articulaciones AN y 26.3  26.1M en las articulaciones AA. No se encontró diferencias significativas (p  0.05) en la concentración de nitritos entre los grupos de articulaciones. Estos datos sugieren que las articulaciones normales (NN) especialmente en su cartílago son más frecuentes en equinos jóvenes, presentando una leve tendencia a tener un promedio de concentración de proteínas mayor y nitritos detectables en baja concentración, pero si la membrana sinovial se encuentra alterada (AN) se produce un aumento del promedio de los nitritos probablemente por la estimulación de la membrana sinovial al cartílago articular a través de citoquinas. Las articulaciones con mayor alteración (AA) fueron aquellas pertenecientes al grupo de mayor edad promedio y que presentó menor concentración promedio de proteínas y de nitritos, lo que se explicaría por la destrucción tanto de la membrana como del cartílago y por ende, menor cantidad y funcionalidad de los sinoviocitos y condrocitos

Dada sua natureza cursorial, a espécie equina depende da livre movimentação para o desempenho de atividades diárias e para sobrevivência. Esta habilidade natural para o movimento é explorada em alto grau durante a prática esportiva, razão da existência de grande parte dos criatórios e centros de treinamento. Enfermidades articulares, como a osteoartrite e a osteocondrose, que reduzam ou causem prejuízo permanente à mobilidade e ao desempenho atlético são um desafio terapêutico. Os hemoderivados autólogos surgiram como opções acessíveis e seguras para o tratamento destas afecções articulares e apesar de amplamente difundido, seu emprego acontece a despeito de lacunas no conhecimento dos métodos ideais de preparação e administração, bem como dos mecanismos de ação destes produtos derivados do sangue. As propriedades antioxidantes do plasma processado autólogo demonstradas in vitro, em estudo utilizando células de líquido sinovial equino previamente estimuladas, motivaram a realização deste estudo com o objetivo de verificar os efeitos deste hemoderivado, in vivo, em articulações de equinos com osteoartrite ou osteocondrose. Tais propriedades despertaram também o interesse em verificar a ocorrência de eventos relacionados ao estresse oxidativo nestas enfermidades, o que justificaria seu emprego na clínica ortopédica. Para tal fim, líquido sinovial foi obtido antes da abordagem cirúrgica de articulações acometidas pela osteoartrite ou osteocondrose, para análise do perfil oxidante/antioxidante, físico, celular, molecular e inflamatório. Após o término da artroscopia, um grupo de animais recebeu injeção intra-articular do plasma processado autólogo e outro grupo não recebeu nenhuma medicação intra-articular, servindo como controle. Quarenta e oito horas após a cirurgia, nova amostra de líquido sinovial foi coletada, e as mesmas análises foram realizadas. As análises físicas e a contagem de células totais foram realizadas imediatamente após as coletas. O sobrenadante resultante da centrifugação do líquido sinovial foi congelado a -80º C para análises posteriores. Elas consistiram nas dosagens da catalase, superóxido dismutase, glutationa peroxidase, capacidade antioxidante total, vitamina E, proteína carbonil, condroitim sulfato, ácido hialurônico, prostaglandina E2, proteína total e ureia. Em relação à caracterização das enfermidades, as articulações acometidas por osteoartrite apresentaram maiores concentrações de catalase e de vitamina E, refletindo maior ativação dos sistemas de defesa antioxidante enzimáticos e não enzimáticos nesta enfermidade. A osteoartrite apresentou, ainda, natureza mais inflamatória, quando comparada à osteocondrose, com concentrações mais elevadas de prostaglandina E2 e proteína total, além de maiores contagens de células totais no líquido sinovial das articulações afetadas. No entanto, a osteocondrose apresentou caráter mais destrutivo em relação aos componentes da matriz extracelular e do líquido sinovial, com concentrações superiores de condroitim sulfato e ácido hialurônico, respectivamente, no líquido sinovial destas articulações. Os resultados demonstraram a ocorrência de estresse oxidativo no período pós-operatório através da ativação das defesas antioxidantes enzimáticas, com aumento da concentração de catalase. O tratamento com o plasma processado autólogo levou a aumento das concentrações de vitamina E no líquido sinovial, incrementando o sistema de defesa antioxidante não enzimático. Não foram observados efeitos do tratamento sobre o metabolismo da cartilagem articular ou biomarcadores inflamatórios. Pode-se inferir que o plasma processado autólogo apresenta potencial terapêutico no combate ao estresse oxidativo. / As a cursorial animal, the horse relies on soundness to fully accomplish daily life activities and survival. Horses natural ability for movement justifies breeding and training investments, and is explored to its maximum during athletic activities. Articular disorders, such as osteoarthritis and osteochondrosis, with their potential to reduce physical performance, are a therapeutic challenge. Autologous haemoderivates have appeared as safe and accessible options for the management of these conditions, but their widespread use has outpaced scientific evidence regarding mechanisms of action and ideal methods for preparation and administration. The antioxidant properties of autologous processed plasma, previously demonstrated in vitro on stimulated equine synovial fluid cells, posed a question on whether these effects would occur in vivo. Therefore, the present study aimed to verify autologous processed plasma´s effects in osteoarthritic and osteochondritic joints, when administered at the end of the arthroscopic procedure, with particular emphasis on possible antioxidant attributes. The study also aimed to detect evidences of oxidative stress in these disorders, what could further justify its use. For this purpose, synovial fluid was obtained immediately before the beginning of the surgery, and analyzed to yield an oxidant/ antioxidant, physical, cellular, molecular and inflammatory profile of osteoarthritis and osteochondrosis. After the end of the procedure, one group of horses received the intraarticular medication and another group of untreated horses served as controls. Forty-eight hours after surgery synovial fluid was retrieved from operated joints, and a second analysis was performed. Physical and cellular analyses were conducted immediately after sample collection and the supernatant was stored at -80º C for further evaluations. These consisted in catalase, superoxide dismutase, glutathione peroxidase, total antioxidant capacity, vitamin E, protein carbonyl groups, chondroitin sulphate, hyaluronic acid, prostaglandin E2, total protein and urea determinations. Osteoarthritic joints revealed greater activation of antioxidant defense systems, enzymatic and non-enzymatic, with greater activity of catalase, and greater concentrations of vitamin E, respectively, when compared to osteochondritic joints. Additionally, these joints had higher total nucleated cell counts and prostaglandin E2 and total protein concentrations, revealing a more inflammatory profile when compared to that of osteochondritic joints. Nonetheless, in osteochondritic joints synovial fluid and matrix components degradation was more pronounced, as there were higher concentrations of chondroitin sulphate and hyaluronic acid in synovial fluid obtained from these joints. Results also showed the occurrence of oxidative stress, 48 hours after the arthroscopic procedure, through higher catalase activity in synovial fluid, reflecting activation of antioxidant defenses. Treatment with autologous processed plasma increased vitamin E concentrations, incrementing non-enzymatic antioxidant defenses. No effects were observed on metabolic or inflammatory biomarkers. It was possible to infer that autologous processed plasma has the therapeutic potential to lessen oxidative stress effects on articular components in the postoperative period.

Na espécie equina, as enfermidades osteoarticulares causam prejuízo econômico e impacto negativo no desempenho atlético, devido aos danos causados na cartilagem articular. A regeneração da cartilagem hialina e a manutenção da integridade das estruturas que a compõe norteiam a busca do tratamento ideal. Neste contexto, este estudo foi delineado com o objetivo de investigar a presença de células-tronco mesenquimais (CTMs) no líquido sinovial (LS) e na membrana sinovial (MS) de equinos com articulações hígidas, com osteocondrite dissecante (OCD) e com osteoartrite (OA) e compará-las, visando estabelecer qual fonte celular possui melhor característica fenotípica e capacidade de diferenciação celular, mais especificamente, aquela que seja superior em relação à capacidade condrogênica. Foram utilizados equinos machos e fêmeas de diferentes idades, totalizando 97 articulações. O LS e MS foram coletados durante artroscopia e as células foram cultivadas, e avaliadas por citometria de fluxo com os anticorpos CD44, CD90, CD105, CD34; e por imunocitoquímica com os anticorpos nanog, oct4, PGP 9.5, lisozima, vimentina e citoqueratina. Adicionalmente, o potencial de diferenciação das células foi avaliado para as linhagens condrogênica, osteogênica e adipogênica. Foi realizado teste de tumorigenicidade em camundongos Balb-Cnu/nu, para comprovar aplicabilidade clínica, e posteriormente, as CTMs provenientes de LS de articulações hígidas foram aplicadas em articulações de equinos. A identidade das células foi comprovada durante o cultivo demonstrando características de adesão ao plástico e morfologia fibroblastóide. A média percentual das populações positivas para CD90 foi de 64,9% (LS-H), 48,3% (LS-OCD), 48,1% (LS-OA), 66,6% (MS-H), 40,2% (MS-OCD) e 40,3% (MS-OA). A porcentagem de células positivas para CD44 foi de 1,18% (LS-H), 3,98% (LS-OCD), 14,2% (LS-OA), 1,9% (MS-H), 2,17% (MS-OCD) 8,56% (MS-OA). Não foi observada expressão dos anticorpos CD34 e CD105. Na análise imunocitoquímica foi detectada expressão positiva para os anticorpos: lisozima, PGP 9.5, PCNA e vimentina, e negativa para nanog, oct4 e citoqueratina. A multipotência (osteogênica, condrogênica e adipogênica) das células foi confirmada através da coloração Alizarin Red para detecção de matriz de cálcio, Oil Red O para detecção de gotículas de gordura e azul de toluidina, alcian blue e hematoxilina eosina para detecção de matriz de proteoglicanos. Com relação aos resultados do teste tumorigênico, nenhum órgão dos camundongos foi afetado, assegurando a aplicabilidade das células estudadas. Ainda, as articulações de equinos tratadas, não apresentaram quaisquer sinais de reação inflamatória após aplicação de células alogênicas. Por fim, concluímos que, a fenotipagem positiva de CD44 e CD90 somada à capacidade de diferenciação nas linhagens osteogênica e condrogênica confirma a presença de CTMs nas populações celulares obtidas de LS e MS de equinos. Também foi observado que as células de LS provenientes de articulações hígidas, são as de melhor utilização clínica, uma vez que apresentaram maior expressão de CD90 e demonstraram melhor capacidade de diferenciação celular em relação às células derivadas de articulações enfermas. Além disso, possuem método mais fácil de colheita em relação à colheita de MS, visando futura terapia celular na rotina clínica / In the equine species, osteoarticular diseases cause significant economic losses and negative impact on equine athletic performance. The hyaline cartilage regeneration and the maintenance of integrity of its components guide the search for the ideal treatment. In this scenario, this study aimed to investigate the presence of mesenchymal stem cell (MSCs) in the synovial fluid (SF) and in the synovial membrane (SM) of healthy equine joints, osteoarthritic (OA) and osteochondritic joints (OCD), comparing their potential as cellular sources, according to their differentiation ability, in particular with superior chondrogenic potential and the phenotypic characteristics of the MSCs. Ninety-seven equine joints from males and females of different ages were used to harvest cells. SF and SM were obtained during arthroscopy and the cells SF and SM were cultured and assessed for CD90, CD44, CD105 and CD34 markers by flow cytometry, and nanog, oct4, PGP 9.5, lyzozyme, vimentin and cytokeratin were assessed by immunocytochemistry. Additionally, cells were evaluated in vitro for their osteogenic, adipogenic and chondrogenic differentiation potential. The tumorigenicity test was carried in Balb-C nu/nu mice, to verify the safety of cell sources and, later, mesenchymal stem cells harvested from healthy equine joints were injected into equine joints. The identity of these cells was confirmed during cell growth, through properties of plastic adhesion and fibroblastoid morphology. The mean percentage of CD90 positive cells was 64.9% (SF-H), 48.3% (SF-OCD), 48.1% (SF-OA), 66.6% (SM-H), 40.2% (SM- OCD) and 40.3% (SM-OA). The percentage of CD44 positive cells was 1.18 % (SF-H), 3.98% (SF-OCD), 14.2% (SF-OA), 1.9% (SM-H), 2.17% (SM-OCD) and 8.56% (SM-OA). The expression of CD34 and CD105 antibodies was not observed. Through immunocytochemical analysis, expression for lysozyme, PGP9.5, PCNA e vimentin antibodies was detected and negative expression for nanog, oct4 e cytokeratin was observed. The multipotent capacity of mesenchymal stromal cells for lineage differentiation (osteogenic, chondrogenoic and adipogenic) was confirmed with different staining techniques: Alizarin Red enabled detection of the calcium matrix, Oil Red O enabled the detection of fat droplets and Toluidin Blue, Alcian Blue and haematoxylin eosin enabled detection of proteoglycan matrix. Results of tumorigenic tests in mice showed no compromise of any internal organ, assuring applicability of the studied cells. Furthermore, equine joints treated with MSC harvested from healthy joints did not show any signs of an inflammatory reaction after injection of the allogeneic cells. The presence of cells with positive CD44 and CD90 phenotypes and with the ability to differentiate into osteogenic and chondrogenic lineages confirms the presence of MSCs in equine SF and SM. Cells obtained from healthy SF were more suitable for clinical application, for they presented higher CD90 expression and demonstrated greater differentiation capabilities, when compared to that of cells retrieved from compromised joints. In addition to that, SF derived cells are easier to obtain when compared to SM cells, aiming their future application clinical

O cavalo tem sido há milhares de anos um dos animais de maior utilidade para o homem, tanto no trabalho quanto no esporte. A integridade de sua estrutura física é determinante para a qualidade de seu desempenho, sendo alvo importante das estratégias terapêuticas e preventivas da atualidade. Diversos estudos têm esclarecido parte da cascata de eventos que ocorre em ambiente intra-articular, revelando os principais mediadores nocivos e ampliando as opções para tratamentos mais eficientes. Experimentos utilizando a citometria de fluxo foram capazes de demonstrar que a adição de plasma às células de líquido sinovial (LS) previamente inflamadas diminui a produção de espécies reativas de oxigênio durante o burst oxidativo, conferindo capacidade antioxidante a este hemoderivado. Pouco se sabe, no entanto, sobre seu potencial pró ou anti-inflamatório, pois não existem relatos na literatura investigando tal atividade. Assim, desenvolvemos este estudo com o objetivo de acompanhar os efeitos exercidos pelo plasma autólogo condicionado (ACP) sobre os tecidos articulares, reportando as alterações clínicas e no LS das articulações metacarpofalangeanas hígidas que receberam este tratamento. Foram administrados 4 ml de ACP em 10 articulações metacarpofalangeanas de equinos saudáveis, enquanto as articulações contralaterais receberam 4 ml de solução fisiológica, como controle. LS foi coletado antes de cada aplicação e nos momentos 3, 6, 24, 48 e 168 horas após. Foi realizada avaliação física diária, e as amostras coletadas foram submetidas imediatamente a análise física (volume, cor, aspecto e viscosidade), teste da qualidade do precipitado de mucina, contagem total e diferencial das células nucleadas. O sobrenadante foi congelado para dosagem posterior de ureia, proteína total, ácido hialurônico (AH), condroitim sulfato (CS), prostaglandina E2 (PGE2) e das citocinas fator de necrose tumoral alfa (TNF-&#945;), interleucina 1 beta (IL-1&#946;) e antagonista do receptor de IL-1 (IL-1ra). A avaliação física dos animais detectou presença de claudicação nas articulações metacarpofalangeanas tratadas com ACP nos momentos 24 e 48 horas após sua administração. A análise física do LS das mesmas articulações revelou maior contaminação das amostras com sangue às 6 horas e maior contagem de células nucleadas às 3, 6, 24 e 48 horas, com predomínio de leucócitos polimorfonucleares. Ainda, o ACP induziu maiores concentrações de proteína total e PGE2 às 3 e 6 horas, e maior concentração de CS às 24 horas. Houve também tendência ao aumento de TNF-&#945; às 24 horas. Às 168 horas, todavia, nenhuma alteração foi observada em quaisquer dos itens avaliados. Não ocorreram alterações nos demais aspectos físicos do LS nem na qualidade do precipitado de mucina, tampouco nas concentrações de ureia e AH. Estes resultados indicam que em articulações hígidas o ACP possui ação pró-inflamatória transitória, com maiores concentrações de PGE2 induzindo o catabolismo dos PGs da matriz, aumentando particularmente o CS. / History has connected human and equine species, for work and pleasure purposes and in both scenarios, horses\' physical integrity is of paramount importance for adequate performance. Soundness has been the target of many studies in orthopedic therapeutics and preventive equine medicine. Several of these studies have thrown light on the sequence of deleterious intra-articular events that take place after an insult, revealing key mediators of joint destruction and widening treatment options. Experiments evaluating the effects of plasma on reactive oxygen species production by chemically stimulated synovial fluid (SF) cells revealed a potent antioxidant effect. Little is known, however about plasma´s anti or pro inflammatory activities, still an unexplored property of plasma. This study was to designed to observe the effects of autologous conditioned plasma (ACP) on articular components, reporting findings of serial SF analysis and clinical evaluations, before and after its administration in healthy metacarpophalangeal joints. Four mililiters of ACP were injected in 10 healthy metacarpophalangeal joints, and the contralateral joints were injected with 4 ml of saline, serving as controls. SF was obtained for analysis before, and then 3, 6, 24, 48 and 168 hours after treatment injection. Horses were subjected to daily clinical evaluations and synovial fluid samples were immediately analyzed for color, viscosity, volume, aspect, quality of mucin clot and total and differential nucleated cell counts. The supernatant was frozen and stored for posterior dosages of urea, total protein, hyaluronic acid (HA), chondroitin sulphate (CS), prostaglandin E2 (PGE2), tumor necrosis factor alpha (TNF-&#945;), interleukin 1 beta (IL- 1&#946;), and interleukin 1 receptor antagonist (IL-1ra). Physical evaluation of ACP treated subjects detected mild lameness at 24 and 48 hours observation points. SF analysis of ACP treated joints revealed blood contamination and higher total nucleated cell counts at 3, 6, 24 and 48 hours, with predominance of polymorphonuclear cells. ACP treatment has also induced higher protein concentrations and PGE2 levels at 3 and 6 hours and higher CS levels at 24 hours in synovial fluid analysis. At 24 hours, TNF&#945; concentrations were higher, although not significantly. At 168 hours post ACP treatment, however, no change was observed in any parameter of synovial fluid analysis. No alterations were detected in the remaining items evaluated, nor in the quality of the mucin clot, urea concentration or HA. These results indicate that, when injected into healthy joints, ACP elicits a transient inflammatory response, characterized by higher PGE2 concentrations, matrix catabolism, with particular increase in CS.