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Mémoire numérisé par la Direction des bibliothèques de l'Université de Montréal.

Sepse induz exagerada produção de mediadores inflamatórios, como o óxido nítrico (NO), e causa alterações cardiovasculares, neuroendócrinas e de temperatura corporal (Tc). Na fase tardia da sepse existe liberação basal de vasopressina (AVP), apesar da hipotensão persistente. Uma hipótese para isso seria a inibição da síntese de AVP pelo aumento da produção de NO. Nosso objetivo foi investigar a possível participação do NO, produzido centralmente pelas isoformas de NO sintase (NOS), na expressão de AVP e ocitocina (OT), na resposta cardiovascular e de Tc durante sepse experimental. Ratos Wistar receberam injeção i.c.v. de L-NAME, inibidor não seletivo de NOS (250g/L), ou de aminoguanidina (AG,250g/L), inibidor seletivo da isoforma induzida (NOSi). Outro grupo recebeu inibidor da guanilato ciclase solúvel (ODQ,0,25g/L). Grupos controles receberam veículos (salina ou DMSO1%). Trinta minutos após as injeções, foi induzido sepse por ligadura e perfuração cecal (CLP) ou operação fictícia. Os animais foram divididos em 4 grupos: 1) avaliação da sobrevida, 2) determinação da Tc, 3) aferição da pressão arterial (PAM) e frequência cardíaca (FC) e 4) avaliação de parâmetros hidroeletrolíticos e secreção de AVP e OT. A CLP promoveu alta mortalidade, aumentou NO progressivamente, diminuiu PAM e aumentou FC. A concentração plasmática de AVP (AVPp) aumentou na fase inicial da sepse e por seu efeito antipirético pode ter contribuído para a hipotermia observada. A razão de expressão para ambos os hormônios diminuiu nos núcleos supraóticos (SON) e paraventriculares (PVN). Na fase tardia AVPp estava basal e sua expressão nos SON e PVN mais diminuída do que na fase inicial. A expressão de OT diminuiu somente no SON. O pré-tratamento com L-NAME aumentou a sobrevida, reduziu a produção de NO até 20h, aumentou PAM e Tc, e manteve a FC semelhante ao grupo veículo. AVPp aumentou simultaneamente à diminuição da razão de expressão em ambos os núcleos. Na fase tardia, o grupo L-NAME apresentou NO aumentado e expressão de AVP diminuída, aparentemente contribuindo para AVPp basal e hipotensão. O L-NAME diminuiu a razão de expressão de OT na fase inicial, mas aumentou na fase tardia. A inibição de NOSi pela AG aumentou ainda mais a sobrevida e Tc. Apesar de não bloquear a produção de NO a AG aumentou a expressão de AVP e OT e manteve AVPp constante e acima da basal. Injeção i.c.v de AG aumentou PAM somente na fase inicial da sepse. O pré-tratamento com ODQ foi o mais eficiente em aumentar a sobrevida e Tc após CLP. Entretanto, não alterou o aumento progressivo de NO, e ainda diminuiu a expressão de AVP e OT. A AVPp basal após ODQ contribuiu para a hipotensão observada durante todo o período. Esses resultados mostram que aumento central de NO após CLP inibe a expressão de AVP e OT independente de GMPc no SON e parcialmente dependente no PVN. A inibição da expressão de AVP na fase tardia da sepse resulta em concentração basal do hormônio contribuindo para a hipotensão. Em nossos experimentos o controle da temperatura corporal teve maior contribuição no aumento da sobrevida durante sepse polimicrobiana do que a regulação neuroendócrina e/ou cardiovascular. / Sepsis induces massive production of inflammatory mediators, such as nitric oxide (NO), and causes cardiovascular, neuroendocrine and body temperature (Tb) alterations. In the late phase of sepsis there is a basal vasopressin (AVP) release despite the persisting hypotension. One reason could be the inhibition of AVP synthesis by the increase in NO production. Our aim was to investigate the possible involvement of NO, produced centrally by NO synthase (NOS) isoforms, on AVP and oxytocin (OT) expression, cardiovascular response and Tb during experimental sepsis. Male Wistar rats received an i.c.v. injection of the non-selective NOS inhibitor L-NAME (250g/L), or of aminoguanidine (AG,250g/L), a selective inhibitor of its inducible isoform (iNOS). Another group received soluble guanylate cyclase inhibitor (ODQ,0.25µg/L). Control groups received vehicles (saline or DMSO1%). Thirty minutes after the injections, sepsis was induced by cecal ligation and puncture (CLP), or the rats were sham operated. The animals were divided into 4 groups for: 1) assessment of survival, 2) determination of Tb, 3) measurement of blood pressure (MAP) and heart rate (HR), and 4) evaluation of hydroelectrolytic parameters and AVP and OT secretion. The CLP promoted high mortality and progressive increase in NO levels. It also decreased MAP and increased HR. The AVP plasma concentration (AVPp) increased in the early phase of sepsis and its antipyretic effect may have contributed to the observed hypothermia. The expression ratio of both hormones was reduced in the supraoptic (SON) and paraventricular (PVN) nuclei. In the late phase, AVPp was basal and its expression decreased in both nuclei more than in the initial phase. The OT expression decreased only in the SON. L-NAME pretreatment increased the survival and reduced the NO production until 20h. MAP and Tb were increased, while HR remained similar to that observed in the vehicle control group. AVPp increased simultaneously to the decrease of its expression ratio in both nuclei. In the late phase, the L-NAME group showed NO levels increased and decreased AVP expression, apparently contributing to basal AVPp and hypotension. The L-NAME decreased OT expression ratio in the initial phase, but increased in the late phase. Inhibition of iNOS by AG further increased the survival and Tb. Even though AG did not block NO production, it increased AVP and OT expression and kept AVPp constant and above the baseline. AG pretreatment increased MAP only in the initial phase of sepsis. The ODQ pretreatment was more efficient to increase survival and Tb after CLP. However it neither altered the progressive NO increase nor the decrease in AVP and OT expression ratio. The basal AVPp after ODQ contributed to hypotension observed during the studied period. These results show that the increased central NO levels observed after CLP inhibit cGMP-independent hormone expression in the SON and partially dependent in the PVN. Inhibition of AVP expression, in the late phase of sepsis, results in basal concentrations of this hormone further contributing to hypotension. In our experiments the control of body temperature during polymicrobial sepsis had greater contribution in survival than the neuroendocrine and/or cardiovascular regulation.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / O aumento de doenças cardiovasculares possui como fator primordial e, mais comum, o aumento da pressão arterial (PA). Esta, pode gerar complicações em outros órgãos e acarretar diversas patologias, podendo levar a morte. A hipertensão é uma síndrome multifatorial, cuja maior incidência ocorre em indivíduos obesos, sedentários e consumidores em excesso de bebidas alcoólicas e sal. O corpo carotídeo (CC) é um órgão quimiorreceptor localizado na bifurcação da artéria carótida, formado de estruturas básicas chamadas glomus. Cada glomus carotídeo é constituído de células tipo 1 envoltas por células tipo 2 ou sustentaculares. Este trabalho teve como objetivo analisar as alterações morfofuncionais que ocorrem no CC, causada por hipertensão arterial induzida pelo L-NAME, um inibidor da enzima óxido nítrico sintase. Para isso, o estudo utilizou 20 ratos Wistar divididos em dois grupos: controle (C) e L-NAME (LN). Após a administração de 40mg/kg/dia de L-NAME por 45 dias, o CC foi coletado. Observou-se aumento significativo da pressão arterial a partir da segunda semana de administração de L-NAME. Análise quantitativa mostrou uma redução no número de núcleos do glomus carotídeo e o aumento na área total do órgão no grupo LN. Não foi encontrado diferença significativa no número de núcleos totais do corpo carotídeo entre os grupos. Na análise morfológica do grupo LN, observamos a formação de vacúolos nas células tipo 1 do glomus, bem como uma redução do número total de núcleos das células de cada glomus carotídeo. A análise qualitativa sugeriu um aumento no número de fibras colágenas e fibras do sistema elástico na matriz extracelular e grânulos no grupo LN. Imunomarcações com anticorpo anti VEGF e NF-kB e nNOS mostram-se aumentadas e dispersas por todo CC no grupo LN em relação ao grupo C. Além disso, marcações para Substância-P também foram observadas em maior quantidade nas células tipo 1 do grupo LN. Quanto à marcação para PGP 9.5, houve a redução desta marcação caracterizada dentro do glomus carotídeo grupo LN comparado ao grupo C. O estudo sugere que o corpo carotídeo, em resposta à hipertensão induzida pela inibição da enzima óxido nítrico sintase, gera mudanças morfofisiológicas semelhantes as encontradas em hipóxia. / The increased cardiovascular disease as the key features and, more common, increasing blood pressure (BP). This can cause complications in other organs and cause various diseases and may lead to death. Hypertension is a multifactorial syndrome, whose incidence is higher in obese, sedentary and consumers in excess alcohol and salt. The carotid body (CC) is a chemoreceptor organ located in bifurcation carotid artery, consisting of basic structures called carotid glomus. Each is made up of carotid glomus type 1 cells surrounded by sustentacular or type 2 cells. This study aimed to analyze the morphological and functional changes that occur in CC, caused by hypertension induced by L-NAME, an inhibitor of nitric oxide synthase. For that, the study used 20 rats divided into two groups: control (C) and L-NAME (LN). After administration of 40mg/kg/day L-NAME for 45 days, the CC was collected. We observed significantly increased blood pressure starting at second week of administration of L-NAME. Quantitative analysis showed a reduction in the number of cells in the carotid glomus and an increase in the total area of the body in the LN group. No significant difference was found in the nuclei total number in carotid body between the groups. In the morphological analysis of the LN group, we observed the formation of vacuoles in type 1 glomus cells, as well as a reduction in the total number of nuclei of cells from each carotid glomus. The qualitative analysis suggested an increase in collagen and elastic system fibers in the extracellular matrix and cytoplasmic granules in LN group. Immunostainings with anti-VEGF and NFkappa- B and nNOS show was increase and dispersed in the LN group than in group C. In addition, appointments for P substance were also obeservado in greater amounts in type 1 cells of the LN group. The marking for PGP 9.5, there was a reduction of this marking characterized in carotid glomus LN group compared with group C. The study suggests that the carotid body, in response to hypertension induced by inhibition of nitric oxide synthase, produces morphophysiological changes similar to those found in hypoxia.

Sepse induz exagerada produção de mediadores inflamatórios, como o óxido nítrico (NO), e causa alterações cardiovasculares, neuroendócrinas e de temperatura corporal (Tc). Na fase tardia da sepse existe liberação basal de vasopressina (AVP), apesar da hipotensão persistente. Uma hipótese para isso seria a inibição da síntese de AVP pelo aumento da produção de NO. Nosso objetivo foi investigar a possível participação do NO, produzido centralmente pelas isoformas de NO sintase (NOS), na expressão de AVP e ocitocina (OT), na resposta cardiovascular e de Tc durante sepse experimental. Ratos Wistar receberam injeção i.c.v. de L-NAME, inibidor não seletivo de NOS (250g/L), ou de aminoguanidina (AG,250g/L), inibidor seletivo da isoforma induzida (NOSi). Outro grupo recebeu inibidor da guanilato ciclase solúvel (ODQ,0,25g/L). Grupos controles receberam veículos (salina ou DMSO1%). Trinta minutos após as injeções, foi induzido sepse por ligadura e perfuração cecal (CLP) ou operação fictícia. Os animais foram divididos em 4 grupos: 1) avaliação da sobrevida, 2) determinação da Tc, 3) aferição da pressão arterial (PAM) e frequência cardíaca (FC) e 4) avaliação de parâmetros hidroeletrolíticos e secreção de AVP e OT. A CLP promoveu alta mortalidade, aumentou NO progressivamente, diminuiu PAM e aumentou FC. A concentração plasmática de AVP (AVPp) aumentou na fase inicial da sepse e por seu efeito antipirético pode ter contribuído para a hipotermia observada. A razão de expressão para ambos os hormônios diminuiu nos núcleos supraóticos (SON) e paraventriculares (PVN). Na fase tardia AVPp estava basal e sua expressão nos SON e PVN mais diminuída do que na fase inicial. A expressão de OT diminuiu somente no SON. O pré-tratamento com L-NAME aumentou a sobrevida, reduziu a produção de NO até 20h, aumentou PAM e Tc, e manteve a FC semelhante ao grupo veículo. AVPp aumentou simultaneamente à diminuição da razão de expressão em ambos os núcleos. Na fase tardia, o grupo L-NAME apresentou NO aumentado e expressão de AVP diminuída, aparentemente contribuindo para AVPp basal e hipotensão. O L-NAME diminuiu a razão de expressão de OT na fase inicial, mas aumentou na fase tardia. A inibição de NOSi pela AG aumentou ainda mais a sobrevida e Tc. Apesar de não bloquear a produção de NO a AG aumentou a expressão de AVP e OT e manteve AVPp constante e acima da basal. Injeção i.c.v de AG aumentou PAM somente na fase inicial da sepse. O pré-tratamento com ODQ foi o mais eficiente em aumentar a sobrevida e Tc após CLP. Entretanto, não alterou o aumento progressivo de NO, e ainda diminuiu a expressão de AVP e OT. A AVPp basal após ODQ contribuiu para a hipotensão observada durante todo o período. Esses resultados mostram que aumento central de NO após CLP inibe a expressão de AVP e OT independente de GMPc no SON e parcialmente dependente no PVN. A inibição da expressão de AVP na fase tardia da sepse resulta em concentração basal do hormônio contribuindo para a hipotensão. Em nossos experimentos o controle da temperatura corporal teve maior contribuição no aumento da sobrevida durante sepse polimicrobiana do que a regulação neuroendócrina e/ou cardiovascular. / Sepsis induces massive production of inflammatory mediators, such as nitric oxide (NO), and causes cardiovascular, neuroendocrine and body temperature (Tb) alterations. In the late phase of sepsis there is a basal vasopressin (AVP) release despite the persisting hypotension. One reason could be the inhibition of AVP synthesis by the increase in NO production. Our aim was to investigate the possible involvement of NO, produced centrally by NO synthase (NOS) isoforms, on AVP and oxytocin (OT) expression, cardiovascular response and Tb during experimental sepsis. Male Wistar rats received an i.c.v. injection of the non-selective NOS inhibitor L-NAME (250g/L), or of aminoguanidine (AG,250g/L), a selective inhibitor of its inducible isoform (iNOS). Another group received soluble guanylate cyclase inhibitor (ODQ,0.25µg/L). Control groups received vehicles (saline or DMSO1%). Thirty minutes after the injections, sepsis was induced by cecal ligation and puncture (CLP), or the rats were sham operated. The animals were divided into 4 groups for: 1) assessment of survival, 2) determination of Tb, 3) measurement of blood pressure (MAP) and heart rate (HR), and 4) evaluation of hydroelectrolytic parameters and AVP and OT secretion. The CLP promoted high mortality and progressive increase in NO levels. It also decreased MAP and increased HR. The AVP plasma concentration (AVPp) increased in the early phase of sepsis and its antipyretic effect may have contributed to the observed hypothermia. The expression ratio of both hormones was reduced in the supraoptic (SON) and paraventricular (PVN) nuclei. In the late phase, AVPp was basal and its expression decreased in both nuclei more than in the initial phase. The OT expression decreased only in the SON. L-NAME pretreatment increased the survival and reduced the NO production until 20h. MAP and Tb were increased, while HR remained similar to that observed in the vehicle control group. AVPp increased simultaneously to the decrease of its expression ratio in both nuclei. In the late phase, the L-NAME group showed NO levels increased and decreased AVP expression, apparently contributing to basal AVPp and hypotension. The L-NAME decreased OT expression ratio in the initial phase, but increased in the late phase. Inhibition of iNOS by AG further increased the survival and Tb. Even though AG did not block NO production, it increased AVP and OT expression and kept AVPp constant and above the baseline. AG pretreatment increased MAP only in the initial phase of sepsis. The ODQ pretreatment was more efficient to increase survival and Tb after CLP. However it neither altered the progressive NO increase nor the decrease in AVP and OT expression ratio. The basal AVPp after ODQ contributed to hypotension observed during the studied period. These results show that the increased central NO levels observed after CLP inhibit cGMP-independent hormone expression in the SON and partially dependent in the PVN. Inhibition of AVP expression, in the late phase of sepsis, results in basal concentrations of this hormone further contributing to hypotension. In our experiments the control of body temperature during polymicrobial sepsis had greater contribution in survival than the neuroendocrine and/or cardiovascular regulation.

Submitted by Marcos Anselmo (marcos.anselmo@unipampa.edu.br) on 2016-09-21T17:52:14Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Ana Paula Gai Fuão.pdf: 1243240 bytes, checksum: d40fbf45a1852ec6eebfa3e33bb9bcc3 (MD5) / Approved for entry into archive by Marcos Anselmo (marcos.anselmo@unipampa.edu.br) on 2016-09-21T17:53:51Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Ana Paula Gai Fuão.pdf: 1243240 bytes, checksum: d40fbf45a1852ec6eebfa3e33bb9bcc3 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-21T17:53:51Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Ana Paula Gai Fuão.pdf: 1243240 bytes, checksum: d40fbf45a1852ec6eebfa3e33bb9bcc3 (MD5) Previous issue date: 2014-08-21 / A hipertensão arterial sistêmica é fundamentada como uma condição clínica multifatorial caracterizada por níveis elevados e sustentados de pressão arterial. A progressão da doença está intimamente ligada com alterações estruturais e funcionais cardíacas e vasculares além de promover danos em alguns órgãos alvo, como os rins, cérebro, além das alterações metabólicas, que produzem um aumento sensível nos riscos de doenças cardiovasculares. De acordo com a Sociedade Brasileira de Cardiologia a hipertensão arterial sistêmica apresenta uma alta prevalência e baixas taxas de controle, tornando-a um dos mais importantes problemas de saúde pública no Brasil. O uso de plantas medicinais para fins terapêuticos é bastante antigo e muitas vezes seu uso é absolutamente empírico, sem nenhum estudo científico que embase essa prática. A Blepharocalyx salicifolius, conhecida como Murta, apresenta várias utilidades terapêuticas baseadas no conhecimento popular, entre elas o uso como digestivo, antibacteriano, antiespasmódico e anti-hipertensivo, entre outros. No presente trabalho foi avaliado o efeito hipotensor do extrato aquoso da B. salicifolius em ratos normotensos, e analisado, através do uso do L-NAME, da losartan e do hexametônio, qual seria seu possível mecanismo de ação. A avaliação dos efeitos hemodinâmicos foi realizada em ratos wistar normotensos, anestesiados com uretana (1,4 mg/Kg i.p.) e via canulação da artéria carótida (para a verificação da PAS, PAD e FC) e da veia jugular (para administração do extrato e drogas). O primeiro protocolo foi realizado para verificação do efeito do extrato sobre os parâmetros hemodinâmicos, utilizando uma curva dose-crescente do extrato (10, 25, 50, 75 e 100 mg/Kg) via intravenosa individualmente (cada grupo contendo 6 animais). O extrato aquoso foi administrado após 30 minutos de estabilização no equipamento, e permaneceram por 60 min. O segundo protocolo foi para avaliar alguns dos possíveis mecanismos envolvidos na resposta hipotensora. Foram utilizados: um inibidor da óxido nítrico sintase - L-NAME (L-NG-nitroarginina metil ester) (30 mg/kg); um antagonista do receptor AT1 - Losartan, (10 mg/Kg), e um bloqueador ganglionar, Hexamêtonio (20mg/Kg). As drogas foram administradas após a estabilização, sendo feito uma nova estabilização para a administração do extrato (concentração 7,5 mg/Kg; volume de 200 μL) e registros realizados por 60 min. O extrato aquoso da B. salicifolius mostrou-se um potente hipotensor, reduzindo a pressão arterial de forma dose-independente, já que as quedas foram semelhantes indiferentemente da dose usada, sem provocar alterações na frequência cardíaca. Na avaliação dos possíveis mecanismos de ação foi observado que o bloqueio do receptor AT1 e administrado o extrato aquoso não houve modificação na hipotensão provocada pelo Losartan bem como após o bloqueio ganglionar com o hexametônio. Já quando induzida a hipertensão por L-NAME, o extrato aquoso causou queda de pressão arterial, sugerindo que a via do óxido nítrico não estaria envolvida. Estes resultados evidenciam pela primeira vez que o efeito hipotensor da administração aguda do extrato aquoso de Blepharocalyx salicifolius, possa ser via bloqueio dos receptores de angiotensina II tipo I e pela possível diminuição da resposta autonômica simpática. / Hypertension is finds as a multifactorial clinical condition characterized by high and sustained levels of blood pressure. Disease progression are intimately linked with structural and functional cardiac and vascular changes, promoting some damage in target organs such as the kidneys, brain, in addition to metabolic changes that produce a significant increase in the risk of cardiovascular diseases. According to the Brazilian Society of Cardiology, hypertension has a high prevalence and low control rates, making it one of the most important public health problems in Brazil. The use of medicinal plants for therapeutic purposes is quite old and often its use is completely empirical, no scientific study that basement this practice. Blepharocalyx salicifolius, known as Murta, has several therapeutic utilities based on popular knowledge, including use as digestive, antibacterial, antispasmodic and antihypertensive, among others. The present study evaluated the hypotensive effect of aqueous extract of B. salicifolius in normotensive rats and analyzed with L-NAME, the losartan and hexamethonium, which would be its possible mechanism of action. The evaluation of the hemodynamic effects was perform in normotensive Wistar rats, anesthetized with urethane (1.4 mg / kg i.p.) and cannulated in the carotid artery (for verification of SBP, DBP and HR) and the jugular vein (for administration of the extract and drugs). The first protocol was performed to verify the effect of the extract on the hemodynamic parameters using a dose increasing curve of the extract (10, 25, 50, 75 and 100 mg/kg) intravenously individually (each group containing six animals). The administration of the aqueous extract was after 30 minutes of stabilization in the equipment, and they remained for 60 min. The second protocol was to evaluate some of the possible mechanisms involved in the hypotensive response. Were used: an inhibitor of nitric oxide synthase - L-NAME (L-NG-L-nitroarginine methyl ester) (30 mg / kg); AT1 receptor antagonist - losartan (10 mg / kg), and a ganglionic blocker - hexamethonium (20mg/kg). Drug administration was performed after stabilization, performing a new stabilization for the administration of the extract and records kept for 60 min. The aqueous extract of B. salicifolius proved a potent hypotensive effect, reducing blood pressure in a dose-independent way since the declines were similar regardless of the dose used, and without effect on heart rate. In evaluation of the possible mechanism of action it was observed, when the AT1 receptor were blockade and the extract was administrated, that there was no change in blood pressure caused by losartan as after ganglionic blockage. When hypertension was induced by L-NAME, the extract caused arterial pressure low, suggesting that the nitric oxide pathway could not be involved. These results show for the first time that the hypotensive effect of acute administration of Blepharocalyx salicifolius aqueous extract may be by blockade of angiotensin II type 1 receptors and the possible reduction in sympathetic autonomic response.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / O aumento de doenças cardiovasculares possui como fator primordial e, mais comum, o aumento da pressão arterial (PA). Esta, pode gerar complicações em outros órgãos e acarretar diversas patologias, podendo levar a morte. A hipertensão é uma síndrome multifatorial, cuja maior incidência ocorre em indivíduos obesos, sedentários e consumidores em excesso de bebidas alcoólicas e sal. O corpo carotídeo (CC) é um órgão quimiorreceptor localizado na bifurcação da artéria carótida, formado de estruturas básicas chamadas glomus. Cada glomus carotídeo é constituído de células tipo 1 envoltas por células tipo 2 ou sustentaculares. Este trabalho teve como objetivo analisar as alterações morfofuncionais que ocorrem no CC, causada por hipertensão arterial induzida pelo L-NAME, um inibidor da enzima óxido nítrico sintase. Para isso, o estudo utilizou 20 ratos Wistar divididos em dois grupos: controle (C) e L-NAME (LN). Após a administração de 40mg/kg/dia de L-NAME por 45 dias, o CC foi coletado. Observou-se aumento significativo da pressão arterial a partir da segunda semana de administração de L-NAME. Análise quantitativa mostrou uma redução no número de núcleos do glomus carotídeo e o aumento na área total do órgão no grupo LN. Não foi encontrado diferença significativa no número de núcleos totais do corpo carotídeo entre os grupos. Na análise morfológica do grupo LN, observamos a formação de vacúolos nas células tipo 1 do glomus, bem como uma redução do número total de núcleos das células de cada glomus carotídeo. A análise qualitativa sugeriu um aumento no número de fibras colágenas e fibras do sistema elástico na matriz extracelular e grânulos no grupo LN. Imunomarcações com anticorpo anti VEGF e NF-kB e nNOS mostram-se aumentadas e dispersas por todo CC no grupo LN em relação ao grupo C. Além disso, marcações para Substância-P também foram observadas em maior quantidade nas células tipo 1 do grupo LN. Quanto à marcação para PGP 9.5, houve a redução desta marcação caracterizada dentro do glomus carotídeo grupo LN comparado ao grupo C. O estudo sugere que o corpo carotídeo, em resposta à hipertensão induzida pela inibição da enzima óxido nítrico sintase, gera mudanças morfofisiológicas semelhantes as encontradas em hipóxia. / The increased cardiovascular disease as the key features and, more common, increasing blood pressure (BP). This can cause complications in other organs and cause various diseases and may lead to death. Hypertension is a multifactorial syndrome, whose incidence is higher in obese, sedentary and consumers in excess alcohol and salt. The carotid body (CC) is a chemoreceptor organ located in bifurcation carotid artery, consisting of basic structures called carotid glomus. Each is made up of carotid glomus type 1 cells surrounded by sustentacular or type 2 cells. This study aimed to analyze the morphological and functional changes that occur in CC, caused by hypertension induced by L-NAME, an inhibitor of nitric oxide synthase. For that, the study used 20 rats divided into two groups: control (C) and L-NAME (LN). After administration of 40mg/kg/day L-NAME for 45 days, the CC was collected. We observed significantly increased blood pressure starting at second week of administration of L-NAME. Quantitative analysis showed a reduction in the number of cells in the carotid glomus and an increase in the total area of the body in the LN group. No significant difference was found in the nuclei total number in carotid body between the groups. In the morphological analysis of the LN group, we observed the formation of vacuoles in type 1 glomus cells, as well as a reduction in the total number of nuclei of cells from each carotid glomus. The qualitative analysis suggested an increase in collagen and elastic system fibers in the extracellular matrix and cytoplasmic granules in LN group. Immunostainings with anti-VEGF and NFkappa- B and nNOS show was increase and dispersed in the LN group than in group C. In addition, appointments for P substance were also obeservado in greater amounts in type 1 cells of the LN group. The marking for PGP 9.5, there was a reduction of this marking characterized in carotid glomus LN group compared with group C. The study suggests that the carotid body, in response to hypertension induced by inhibition of nitric oxide synthase, produces morphophysiological changes similar to those found in hypoxia.

Orientador: José Eduardo Tanus dos Santos / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-18T18:14:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pinheiro_LucasCezar_M.pdf: 747256 bytes, checksum: f428f4ab7d72c88d9b72424fba5da404 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: O óxido nítrico (NO) regula diversos sistemas orgânicos. Disfunções na produção ou disponibilidade de NO podem comprometer sua atuação fisiológica. Além da produção de NO pelas óxido nítrico sintetases, outras vias de produção de NO são relatadas, entre elas a conversão de nitrito a NO. O nitrito é o produto inicial da oxidação do NO, sendo posteriormente oxidado a nitrato. Sabe-se que estas três moléculas formam um ciclo dentro do organismo. A conversão de nitrito a NO pode ocorrer de forma enzimática ou não enzimática. Como forma não enzimática, o nitrito é convertido a NO pela reação com H+. Esta reação ocorre principalmente no estômago, todavia não se sabe se este NO formado tem efeito na pressão arterial sistêmica ou atua apenas localmente. A fim de verificar a influência do pH gástrico no efeito hipotensor do nitrito de sódio, utilizamos animais tratados agudamente com LNAME e normotensos canulados acordados pré-tratados com omeprazol e, posteriormente, com nitrito de sódio 15mg/kg e 45mg/kg. Foi verificado que o nitrito de sódio reduz a pressão arterial média dos animais significativamente e de maneira dependente da dose. O pré-tratamento com omeprazol reduziu o efeito hipotensor do nitrito de sódio significativamente. Após, foram quantificados os níveis de nitrito e nitrato. Foi observado aumento em ambos após o tratamento com nitrito de sódio. A partir destes resultados podemos sugerir que o omeprazol atenua o efeito hipotensor do nitrito de sódio em ratos normotensos e hipertensos / Abstract: Many body systems are regulated by nitric oxide (NO). Dysfunctions in the production or availability of NO may impair it physiological roles. However, other routes of NO production are reported in addition to NO production by nitric oxide synthases, including the conversion of nitrite to NO. Nitrite is the initial product of oxidation of NO and is further oxidized to nitrate. It is known that these three molecules form a cycle within the body. The conversion of nitrite to NO can occur enzymatic or nonenzymatic. Non-enzymatic nitrite is converted to NO by reacting with H+. This reaction occurs mainly in the stomach, however it is unclear whether this NO affects blood pressure or simply acts locally. To study the influence of gastric pH on the hypotensive effect of sodium nitrite, we used hypertensive or normotensive cannulated animals pretreated with omeprazole and with sodium nitrite 15 mg/kg and 45 mg/kg. We found that sodium nitrite reduces mean arterial pressure of animals in a dose-dependent manner. Pretreatment with omeprazole reduced the hypotensive effect of sodium nitrite significantly. Thereafter, we quantified the levels of nitrite and nitrate. We found increase in both species after treatment with sodium nitrite. These results suggest that omeprazole attenuates the hypotensive effect of sodium nitrite in normotensive and hypertensive rats / Mestrado / Farmacologia / Mestre em Farmacologia

Mémoire numérisé par la Direction des bibliothèques de l'Université de Montréal.

A capacitação é um pré-requisito fisiológico importante para que a célula espermática fertilize o oócito. O óxido nítrico (NO) é sintetizado in vivo durante a conversão da L-arginina em L-citrulina por reações oxidativas catalisadas pela enzima óxido nítrico sintase (NOS) desempenhando um papel importante na regulação da motilidade e na capacitação dos espermatozoides. Estudos indicam que o NO é capaz de regular a concentração da AMP cíclico e, por conseguinte, através da atividade da adenil ciclase, estimular a capacitação espermática em várias espécies. O objetivo deste estudo foi avaliar a função do NO na capacitação de espermatozoides equinos criopreservados. Três ejaculados foram colhidos de três garanhões (n=9). O sêmen foi diluído em meio Botu-Crio&reg; na concentração final de 200×106 células/mL, envasado em palhetas de 0,5 mL e criopreservado usando um sistema automatizado. Para cada análise, foram descongeladas quatro palhetas da mesma partida e do mesmo garanhão em banho-maria a 37oC/30 s. e em seguida, o sêmen foi submetido à centrifugação em meio FIV. Posteriormente, o sêmen foi incubado neste mesmo meio na presença de L-arginina, com ou sem inibidor da enzima óxido nítrico sintase o (L-NAME), e com ou sem o removedor de NO (azul de metileno) nos tratamentos: 1) C= (FIV); 2) A= L-arginina (10 mM); 3) L = L-NAME (1 mM); 4) M = azul de metileno (100 mM); 5) AL = L-arginina (10 mM) + L-NAME (1 mM); 6) AM = L-arginina (10 mM) + azul de metileno (100 mM). As amostras foram incubadas a 38oC e 5 % de CO2. Após a incubação realizou-se a análise computadorizada da motilidade do espermatozoide e as análises por citometria de fluxo. Para a análise computadorizada da motilidade espermática foram avaliados os tempos de incubação de 0, 60, 120 e 300 min. e para as análises por citometria de fluxo os tempos de 60, 120 e 300 min. Para avaliar a integridade das membranas plasmática e acrossomal usou-se a associação FITC-PSA e IP. Para a detecção da fosforilação do aminoácido tirosina, usou-se o anticorpo antifosfotirosina conjugado a uma fluoresceína (DAF-2). A fim de dosar a quantidade de NO produzido pelo espermatozoide equino criopreservado foi utilizada a sonda DAF e para avaliar a peroxidação lipídica da membrana espermática utilizou a sonda C11-BODIPY. A sonda H33342 foi usada com a finalidade de evitar que partículas do mesmo tamanho e granulosidade da célula espermática fossem incluídas na contagem das análises por citometria de fluxo. Os dados foram analisados por meio da ANOVA e a comparação das médias, dentro de cada tempo, pelo teste de Tukey, com o nível de significância de 5 %, usando o software SAS. A remoção do NO do meio de cultura inibiu a motilidade das células espermáticas em todos os tempos de incubação. A motilidade total e motilidade progressiva foram reduzidas nos grupos M e AM. Os espermatozoides incubados com o removedor do NO apresentaram maior porcentagem de células com membrana plasmática e acrossomal íntegras nos 60 e 120 minutos de incubação (p<0,05). A reação acrossomal foi induzida nos tratamentos que receberam L-arginina (A; AL). Dentro de cada tratamento, a quantidade de NO produzido pelo espermatozoide, a fosforilação do aminoácido tirosina e a peroxidação lipídica não apresentaram diferenças entre os tempos (p>0,05). Foi verificada uma redução destas variáveis nos grupos M e AM (p<0,05). Contudo, a dose de 1 mM de L-NAME, não foi suficiente para inibir a NOS em espermatozoides criopreservados de equinos. A remoção do NO mantém a integridade das membranas plasmática e acrossomal, entretanto inibe totalmente a motilidade espermática, sugerindo um papel benéfico do NO endógeno na manutenção da motilidade dos espermatozoides equinos criopreservados. / Capacitation is an essential physiological prerequisite in order to sperm cell fertilize the oocyte. Nitric oxide (NO) is synthesized in vivo during the conversion of L-arginine in L-citruline by oxidative reactions catalyzed by nitric oxide synthase enzyme (NOS) and plays an important role in regulation of motility and in sperm capacitation. Studies indicated that NO is capable of regulating cAMP concentration and, therefore, by adenylyl cyclase, stimulate sperm capacitation in several species. The aim of this study was to evaluate the function of nitric oxide in cryopreserved equine sperm capacitation.Three ejaculates from three stallions were collected (n=9). Semen samples were diluted with Botu-Crio&reg; extender to a final concentration of 200×106 sperms/mL, and then packaged in 0.5mL straws and cryopreserved using an automated freezing system. For each analysis, four straws from the same batch and the same stallion were thawed in a water bath at 37oC/30 s. washed by centrifugation in FIV medium. Thereafter, samples were incubated in FIV medium in the presence of L-arginine, with or without the inhibitor of nitric oxide sinthase (L-NAME), and with or without the scavenger of NO (Methylene blue) in the following treatments: 1) C = Control (FIV); 2) A = L-arginine 10 mM; 3) L = L-NAME 1mM; 4) M = Methylene blue 100 mM; 5) AL = L-arginine (10 mM) + L-NAME (1 mM); 6) AM = L-argine (10 mM) + Methylene blue (100 mM). The treatments were incubated at 38oC and CO2 at 5 %. After incubation, the computer-assisted sperm motility (CASA) and flow cytometry analyses were performed. For CASA analysis, the incubation times of 0, 60, 120 e 300 min. were evaluated and for flow cytometry analyses times 60, 120 e 300 min. were evaluated. Plasma and acrosomal membranes integrity were evaluated by FITC-PSA and PI association. In order to detect amino acid tyrosine phosphorylation, we used the anti-phosphotyrosine antibody conjugated to a fluorescein (DAF-2). In order to quantify the amount of nitric oxide produced by cryopreserved equine sperm, the fluorescent probe DAF was used, and to evaluate the lipid peroxidation of sperm membrane we used the probe BODIPY-C11. The probe H33342 was used in order to prevent that particles of the same size and granularity of sperm cell were included in the counting of flow cytometry analyses. Data were analyzed by ANOVA and comparison of means within each time by the Tukey test, at a significance level of 5%, using SAS software. Removing NO from the culture medium inhibited the motility of sperm cells at all incubation times. Total and progressive motilities were reduced in both groups, M and AM. Sperms incubated with the scavenger of NO had the highest percentage of cells with intact plasma and acrosomal membranes at 60 and 120 minutes of incubation (p <0.05). Acrosomal reaction was induced in treatments with L-arginine (A, AL). Within each treatment, the amount of NO produced by sperms, the level of amino acid tyrosine phosphorylation and lipid peroxidation had no differences between the times used (p> 0.05). A reduction of these variables in groups M and AM (p <0.05) was observed. However, a dose of 1 mM L-NAME was not sufficient to inhibit NOS in cryopreserved equine sperm. Removal of NO maintains plasma and acrosomal membranes integrity, however completely inhibits sperm motility, suggesting a beneficial role of endogenous NO in the maintenance of motility of cryopreserved equine spermatozoa.