Thesis (Ph. D.)--University of Washington, 1998. / Vita. Includes bibliographical references (leaves [205]-219).

Introdução: A ingestão de alimentos antioxidantes pode reduzir o estresse oxidativo e contribuir de forma direta no processo aterosclerótico através da redução do LDL oxidado. Objetivos: avaliar o papel da dieta rica em flavonoides no estresse oxidativo, na resposta inflamatória e no perfil lipídico de pacientes com doença cardiovascular submetidos a implante de stent coronariano. Métodos: trinta e três pacientes submetidos à angioplastia coronária com implante de stent foram randomizados no grupo dieta controle, com base nas recomendações do NCEP III e dieta antioxidante (AOX), rica em alimentos fontes de flavonoides, por 6 meses. As informações referentes à ingestão alimentar foram coletadas no início e término do seguimento, assim como, os níveis de estresse oxidativo (FRAP e sulfidril) e marcadores inflamatórios (Proteína C-reativa). Resultados: A orientação nutricional resultou numa redução da ingestão energética, de carboidratos e de lipídios no grupo dieta AOX, e um aumento na ingestão de flavonoides. Os marcadores de estresse oxidativo, FRAP e sulfidril e a proteína C-reativa não foram alterados no grupo dieta AOX, porém, os níveis de LDL-colesterol apresentaram redução significativa quando comparados com o grupo controle. Conclusão: os resultados sugerem que uma dieta rica em alimentos antioxidantes à base de flavonoides, não está associada com a redução do estresse oxidativo e do perfil inflamatório em pacientes submetidos à angioplastia coronariana com implante de stent, a despeito de uma melhora no perfil lipídico destes pacientes.

Made available in DSpace on 2016-03-28T12:39:39Z (GMT). No. of bitstreams: 2 vater_neto_ioc_mest_2009.pdf: 2942126 bytes, checksum: 50b2b2273e9c6f75bd2fa9a09c6548a3 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2016-01-13 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Todos os fármacos atualmente em uso para o tratamento da leishmaniose apresentam restrições, como toxicidade, graves efeitos colaterais, custo elevado, administração parenteral ou teratogenicidade. Desta forma, o desenvolvimento de fármacos mais eficazes e seletivos é de suma importância e a identificação de vias metabólicas exclusivas do parasito que possam ser usadas como alvo pode ser um ponto de partida interessante. Acredita-se que a leishmania não dependa da utilização do colesterol exógeno para sua sobrevivência, uma vez que sintetiza seus próprios esteróis. Porém, apesar disso, um percentual expressivo de colesterol é encontrado em suas membranas sendo, em alguns casos, o esterol majoritário indicando um papel biológico para essa molécula. O presente trabalho visa estudar a importância para a L. amazonensis da utilização do colesterol proveniente do soro, em diversas situações, avaliando o potencial desse sistema como um possível alvo farmacológico. A atividade dos inibidores da biossíntese do ergosterol (cetoconazol, miconazol, terbinafina e sinvastatina) foi avaliada, na presença de soro normal ou deslipidado. Foi observada que a privação das lipoproteínas do soro potencializa o efeito dos inibidores do ergosterol. Os promastigotas tratados com esses inibidores mostraram diferenças na sua composição lipídica, com acúmulo de colesterol nas células tratadas, principalmente, com cetoconazol e miconazol, indicando um possível mecanismo de compensação da leishmania, para suprir a inibição do ergosterol. Experimentos com LDL-I125, no qual tanto a leishmania tratada com cetoconazol, quanto a tratada com sinvastatina, que inibe o início da via de biossíntese de ergosterol, aumentaram a captação da LDL A suramina, um inibidor da captação de LDL, mostrou uma diminuição do conteúdo de colesterol da leishmania e, em associação com a sinvastatina, obteve um efeito sinérgico, mostrando que o conteúdo da LDL, principalmente colesterol, pode estar envolvido na manutenção da integridade da membrana da célula. Em adição, a resistência ao cetoconazol induzida in vitro foi estudada. Foi observada uma relação direta entre o aumento da expressão gênica da C14-desmetilase com o nível de resistência induzido em promastigotas de L. amazonensis, sugerindo que esse seja o principal mecanismo de resistência a essa classe de fármacos. De uma maneira geral, a análise dos resultados como um todo sugere que o colesterol desempenhe um importante papel na atividade dos inibidores da biossíntese do ergosterol e que o bloqueio da sua utilização pode ser um possível alvo farmacológico / All drugs currently in use for the treatment of lei shmaniasis present restrictions, such as toxicity, serious side effects, high cost, paren teral administration or teratogenicity. Thus, the development of more effective and selecti ve drugs is a priority and the identification of exclusive metabolic pathways of t he parasite that can be used as a target could be an interesting starting point. It i s believed that leishmania is not dependent on the use of exogenous cholesterol for s urvival, since it synthesizes its own sterols. But, nevertheless, a significant perce ntage of cholesterol is found in its membranes and, in some cases, as the major sterol, indicating a biological role for this molecule. This work aims to study the importance fo r L. amazonensis of the use of cholesterol from the serum in various situations, a ssessing the potential of this system as a possible drug target. The activity of the ergo sterol biosynthesis inhibitors (ketoconazole, miconazole, terbinafine and simvasta tin) was evaluated in the presence of normal or delipidated serum. It was observed tha t the deprivation of the serum lipoprotein potentiates the effect of inhibitors of ergosterol. The promastigotes treated with these inhibitors showed differences in their lipid composition, with accumulation of cholesterol in treated cells, mainl y with ketoconazole and miconazole, suggesting a compensation mechanism in leishmania, which may overcome ergosterol inhibition. Experiments with LDL-I 125 , indicated an increased uptake of LDL in leishmania treated with either ketoconazole or simv astatin, the latter inhibits an early step in the ergosterol biosynthectic pathway. Suram ine, an inhibitor of the uptake of LDL, showed a decrease in cholesterol content of th e leishmania and in combination with simvastatin, had a synergistic effect, showing that content of LDL, especially cholesterol, could be involved in maintaining the c ell membrane integrity. In addition, resistance to ketoconazole induced in vitro was studied. There was a direct relationship between increased gene expression of C 14-desmetilase and the level of resistance induced in promastigotes of L. amazonensis , suggesting that this is the main mechanism of resistance to this class of drugs. Tak en together, these results suggest that cholesterol plays an important role in the act ivity of ergosterol inhibitors biosynthesis and that the blocking of its use by le ishmania may be a possible drug target.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / With the intensive glycemic control and longer survival of type 1 diabetes mellitus (T1DM) patients, cardiovascular disease has been the main cause of mortality. Oxidized LDL is considered a critical factor in the atherosclerotic process and the aim of our study was evaluate the absorbance of different wavelengths of oxidized phospholipids and oxidation rate of LDL particles in vitro in T1DM. We studied 54 patients aged 29.1 12.11 years and with a disease duration of 14.6 8.43 years and 28 non-diabetic volunteers. The two groups had carried where they were measured lipid profile, glucose, uric acid, blood pressure, urinary albumin excretion and spectrophotometry analysis of the oxidation of LDL cholesterol before and 1, 3, 6 and 24 hours after addition of substance oxidant copper sulfate. The coefficients of oxidation (Cox) of LDL from both groups had similar reading at all times with a significant difference between the baseline and after 1 hour (p <0 .001) and between the time after 3 and 6 hours after addition of sulfate copper (p <0 .001) for both groups. In the multiple regression model, the result was the Cox model = 8.246 to 13.93 to 10.21 + -2.71 b c (R2 = 0.835), here "a", "b" and "c" represent the absorbance (205 nm , 232 nm and 280 nm, respectively). We conclude that in our sample the wavelengths 232 nm and 280 nm related to the reading of conjugated diene and protein faction of LDL, respectively, were more important in determining the oxidation rate of the particle. / Com a intensificação do controle glicêmico e maior sobrevida dos pacientes com diabetes mellitus tipo 1 (DM1), houve mudança progressiva das causas de mortalidade, com maior destaque para a doença cardiovascular (DCV). Em função da LDL oxidada ser considerada ponto fundamental na patogênese da doença aterosclerótica, o presente estudo objetivou avaliar as absorbâncias obtidas nos diferentes comprimentos de onda dos fosfolipídios oxidados e o coeficiente de oxidação da partícula de LDL in vitro em pacientes com diabetes mellitus tipo 1. Foram avaliados 54 pacientes com DM1 com idade de 29,1 12,11 e de duração de doença de 14,6 8,43 e 28 voluntários não diabéticos. Os pacientes e voluntários foram submetidos à avaliação clínica e laboratorial onde foram mensurados perfil lipídico, glicêmico, ácido úrico, níveis pressóricos, excreção urinária de albumina e análise espectofotométrica da oxidação do LDL colesterol antes e 1, 3, 6 e 24 horas após adição de substância oxidante- sulfato de cobre. Os coeficientes de oxidação (Cox) do LDL dos dois grupos apresentaram leitura semelhante em todos os momentos com diferença significativa entre o tempo basal e após 1h (p<0, 001) e entre o momento após 3 e 6 horas após adição de sulfato de cobre ( p< 0,001) para os grupos avaliados. No modelo de regressão múltipla, o resultado obtido foi o modelo Cox = 8,246 13,93a -2,71b + 10,21c (R2=0,835), onde a, b e c representam as absorbâncias (205 nm, 232 nm e 280 nm, respectivamente). Concluímos que em nossa amostra os comprimentos de onda 232 nm e 280 nm referentes à leitura dos dienos conjugados e a fração protéica da LDL, respectivamente apresentaram maior importância na determinação do coeficiente de oxidação da partícula.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / With the intensive glycemic control and longer survival of type 1 diabetes mellitus (T1DM) patients, cardiovascular disease has been the main cause of mortality. Oxidized LDL is considered a critical factor in the atherosclerotic process and the aim of our study was evaluate the absorbance of different wavelengths of oxidized phospholipids and oxidation rate of LDL particles in vitro in T1DM. We studied 54 patients aged 29.1 12.11 years and with a disease duration of 14.6 8.43 years and 28 non-diabetic volunteers. The two groups had carried where they were measured lipid profile, glucose, uric acid, blood pressure, urinary albumin excretion and spectrophotometry analysis of the oxidation of LDL cholesterol before and 1, 3, 6 and 24 hours after addition of substance oxidant copper sulfate. The coefficients of oxidation (Cox) of LDL from both groups had similar reading at all times with a significant difference between the baseline and after 1 hour (p <0 .001) and between the time after 3 and 6 hours after addition of sulfate copper (p <0 .001) for both groups. In the multiple regression model, the result was the Cox model = 8.246 to 13.93 to 10.21 + -2.71 b c (R2 = 0.835), here "a", "b" and "c" represent the absorbance (205 nm , 232 nm and 280 nm, respectively). We conclude that in our sample the wavelengths 232 nm and 280 nm related to the reading of conjugated diene and protein faction of LDL, respectively, were more important in determining the oxidation rate of the particle. / Com a intensificação do controle glicêmico e maior sobrevida dos pacientes com diabetes mellitus tipo 1 (DM1), houve mudança progressiva das causas de mortalidade, com maior destaque para a doença cardiovascular (DCV). Em função da LDL oxidada ser considerada ponto fundamental na patogênese da doença aterosclerótica, o presente estudo objetivou avaliar as absorbâncias obtidas nos diferentes comprimentos de onda dos fosfolipídios oxidados e o coeficiente de oxidação da partícula de LDL in vitro em pacientes com diabetes mellitus tipo 1. Foram avaliados 54 pacientes com DM1 com idade de 29,1 12,11 e de duração de doença de 14,6 8,43 e 28 voluntários não diabéticos. Os pacientes e voluntários foram submetidos à avaliação clínica e laboratorial onde foram mensurados perfil lipídico, glicêmico, ácido úrico, níveis pressóricos, excreção urinária de albumina e análise espectofotométrica da oxidação do LDL colesterol antes e 1, 3, 6 e 24 horas após adição de substância oxidante- sulfato de cobre. Os coeficientes de oxidação (Cox) do LDL dos dois grupos apresentaram leitura semelhante em todos os momentos com diferença significativa entre o tempo basal e após 1h (p<0, 001) e entre o momento após 3 e 6 horas após adição de sulfato de cobre ( p< 0,001) para os grupos avaliados. No modelo de regressão múltipla, o resultado obtido foi o modelo Cox = 8,246 13,93a -2,71b + 10,21c (R2=0,835), onde a, b e c representam as absorbâncias (205 nm, 232 nm e 280 nm, respectivamente). Concluímos que em nossa amostra os comprimentos de onda 232 nm e 280 nm referentes à leitura dos dienos conjugados e a fração protéica da LDL, respectivamente apresentaram maior importância na determinação do coeficiente de oxidação da partícula.

Introdução: A ingestão de alimentos antioxidantes pode reduzir o estresse oxidativo e contribuir de forma direta no processo aterosclerótico através da redução do LDL oxidado. Objetivos: avaliar o papel da dieta rica em flavonoides no estresse oxidativo, na resposta inflamatória e no perfil lipídico de pacientes com doença cardiovascular submetidos a implante de stent coronariano. Métodos: trinta e três pacientes submetidos à angioplastia coronária com implante de stent foram randomizados no grupo dieta controle, com base nas recomendações do NCEP III e dieta antioxidante (AOX), rica em alimentos fontes de flavonoides, por 6 meses. As informações referentes à ingestão alimentar foram coletadas no início e término do seguimento, assim como, os níveis de estresse oxidativo (FRAP e sulfidril) e marcadores inflamatórios (Proteína C-reativa). Resultados: A orientação nutricional resultou numa redução da ingestão energética, de carboidratos e de lipídios no grupo dieta AOX, e um aumento na ingestão de flavonoides. Os marcadores de estresse oxidativo, FRAP e sulfidril e a proteína C-reativa não foram alterados no grupo dieta AOX, porém, os níveis de LDL-colesterol apresentaram redução significativa quando comparados com o grupo controle. Conclusão: os resultados sugerem que uma dieta rica em alimentos antioxidantes à base de flavonoides, não está associada com a redução do estresse oxidativo e do perfil inflamatório em pacientes submetidos à angioplastia coronariana com implante de stent, a despeito de uma melhora no perfil lipídico destes pacientes.

Introdução: A ingestão de alimentos antioxidantes pode reduzir o estresse oxidativo e contribuir de forma direta no processo aterosclerótico através da redução do LDL oxidado. Objetivos: avaliar o papel da dieta rica em flavonoides no estresse oxidativo, na resposta inflamatória e no perfil lipídico de pacientes com doença cardiovascular submetidos a implante de stent coronariano. Métodos: trinta e três pacientes submetidos à angioplastia coronária com implante de stent foram randomizados no grupo dieta controle, com base nas recomendações do NCEP III e dieta antioxidante (AOX), rica em alimentos fontes de flavonoides, por 6 meses. As informações referentes à ingestão alimentar foram coletadas no início e término do seguimento, assim como, os níveis de estresse oxidativo (FRAP e sulfidril) e marcadores inflamatórios (Proteína C-reativa). Resultados: A orientação nutricional resultou numa redução da ingestão energética, de carboidratos e de lipídios no grupo dieta AOX, e um aumento na ingestão de flavonoides. Os marcadores de estresse oxidativo, FRAP e sulfidril e a proteína C-reativa não foram alterados no grupo dieta AOX, porém, os níveis de LDL-colesterol apresentaram redução significativa quando comparados com o grupo controle. Conclusão: os resultados sugerem que uma dieta rica em alimentos antioxidantes à base de flavonoides, não está associada com a redução do estresse oxidativo e do perfil inflamatório em pacientes submetidos à angioplastia coronariana com implante de stent, a despeito de uma melhora no perfil lipídico destes pacientes.

Arsenic exposure in humans has been implicated in the development of a myriad of non-cancerous and cancerous diseases. A reductionist approach to understanding this unusual phenomenon would suggest that arsenic-induced perturbation of a small number of fundamental biological processes could manifest as this diverse array of disease endpoints. Endocytosis is a fundamental cellular process involved in the internalization and transport of various extracellular molecules and membranous components. BEAS-2B, a human bronchial epithelial cell line, was used to characterize the effects of chronic arsenite exposure on endocytosis. Fluorophore-labeled bovine albumin, human transferrin, and human low-density lipoprotein (LDL) were the substrates utilized to measure endocytosis in BEAS-2B cells. The uptake of albumin in unexposed BEAS-2B cells is both dose-dependent and temperature sensitive. Chronic arsenite exposure in BEAS-2B cells increased the uptake of albumin by 3.4-fold after 8 hours of uptake relative to unexposed BEAS-2B cells. Pharmacological studies utilizing endocytosis inhibitors suggested that the uptake of albumin in both unexposed and arsenite-exposed BEAS-2B cells occurs through a combination of receptor-mediated endocytosis and macropinocytosis. Chronic arsenite exposure in BEAS-2B cells also increased the endocytic uptake of transferrin by 2.9-fold at 30 minutes and LDL by 1.3-fold at 2 hours relative to unexposed BEAS-2B cells. Together, the data suggests that chronic arsenite exposure can increase the rate of endocytosis. This novel finding could add mechanistic insight to the conundrum of arsenic-associated human diseases.

El texto completo de este trabajo no está disponible en el Repositorio Académico UPC por restricciones de la casa editorial donde ha sido publicado. / Aims: To determine the association between the thyroid hormones(FT3, FT4 and TSH) and the lipid profile markers(HDL-c, LDL-c and triglycerides) values in middle-aged women with no metabolic disorders and recurrent chronic symptomatology. Materials and Methods: We carried out an analytical cross-sectional study in euthyroid women with recurrent chronic symptoms of at least six months with no apparent diagnosis who attended the endocrinological gynaecology outpatient service of a private clinic in Lima-Peru during 2012–2014. Participants who met the eligibility criteria were evaluated according to their thyroid hormones(FT3, FT4 and TSH) and lipid profile markers(HDL-c, LDL-c and triglycerides) values. We elaborated univariate/multivariate linear regression models to evaluate the association between the thyroid markers and the lipid profile levels. The reported association measure was the beta coefficient(β) with its respective p-value. Results: We analyzed 211 participants, the average age was 44.9 ± 14.0(SD) years, the FT3 and FT4 mean levels were 3.2 ± 0.4 pg/mL and 1.2 ± 0.2 ng/dL respectively, while the TSH median was 2.8(IQR:1.9–4.0) μU/mL. The mean or median levels of LDL-c, HDL-c and triglycerides were of 137.5 ± 37.9 mg/dL, 54.0 ± 15.0 mg/dL and 118.5(IQR:79.5–169.5) mg/dL respectively. In the multivariate linear regression model between the FT3 and LDL-c levels, we found that for each increase in a FT3 unit, the LDL-c values decreased on average 30.85 mg/dL(p < 0.01). We found no statistically significant associations in the other multivariate models of linear regression, among the other thyroid hormones and lipid markers. Conclusion: We found an inverse association between the FT3 and LDL-c values in women with chronic gynaecological symptoms / Revisión por pares / Revisión por pares

Lipoproteins are macromolecular assemblies of lipids and proteins that are essential for the transportation of the water insoluble lipids in the circulation. The major lipoproteins, are low density lipoproteins (LDL) and high-density lipoproteins (HDL). LDL, also called the “bad cholesterol”, delivers cholesterol to peripheral tissues and is directly correlated with increased risk of cardiovascular disease, stroke and type II diabetes. HDL, on the other hand, is called the “good cholesterol” as it removes excess cholesterol from peripheral tissues for elimination by the liver in a process called reverse cholesterol transport (RCT). HDL is therefore, cardioprotective. The first and rate-limiting step in HDL biogenesis involves interaction of apolipoprotein A-I (apoA-I), the major protein of HDL, with the membrane transporter ABCA1 to promote cholesterol efflux to form nascent HDL. Food additives and sugar substitutes have been widely consumed in recent years. While the FDA deems sweeteners such as stevia, sucralose, acesulfame and erythritol and food dyes such as Sunset Yellow and Allura Red safe for human consumption, their direct effects on HDL biogenesis are unknown. In this study, we examined effects of the above-mentioned additives and sugar substitutes on HDL biogenesis using macrophage-derived cells, J774. We used a fluorescent analog, BODPIY-cholesterol, to label the cholesterol pool and to measured its efflux by fluorescence. HDL biogenesis was determined by analyzing efflux media using native PAGE followed by immunoblotting using antibodies to apoA-I. Lipids were determined using cholera toxin subunit B to detect the ganglioside GM1. We found that all sweeteners and food dyes exerted inhibitory effects on cholesterol efflux and HDL biogenesis to varying degrees under physiologically-relevant concentrations. Steviol, the metabolite of stevia, appeared to exert the largest inhibition. It reduced cholesterol efflux by > 50% and HDL biogenesis was reduced the most, as compared to the other sugar substitutes. Under control conditions nascent HDL particles varying from less than 7 to about 12 nm diameter produced. However, under most experimental conditions, additives appeared to have an impact on the larger particles (8-12 nm diameter) as they were either reduced substantially or absent). Interestingly, the sweetener Erythritol at low concentration (5mg/ml) was inhibitory but at higher concentration (15 mg/ml) appears to reverse this effect. Since ABCA1 is essential for optimal cholesterol efflux and HDL biogenesis, we hypothesized that their inhibition by food additives and sugar substitutes was due to a decreased level of ABCA1. Surprisingly, we found that ABCA1 level under all conditions were either similar or higher than control levels. Therefore, we suggest that the additives used in this study presumably led to mislocalization of ABCA1 and/or caused a conformational change of the transporter. This could result in decreased binding of apoA-I thus leading to reduced cholesterol efflux resulting in decreased HDL biogenesis. On the basis of this study we suggest that the FDA guidelines should be modified and sugar substitutes and foods containing artificial dyes should be consumed in moderation.