As doenças cardiovasculares ainda são as principais causas de mortalidade e morbidade em todo o mundo. E a aterosclerose é uma das principais precursoras de vários desfechos clínicos como isquemias e infarto do miocárdio. As placas ateroscleróticas se desenvolvem preferencialmente em regiões de bifurcação ou curvatura dos vasos, onde o shear stress (SS) encontra-se diminuído ou perturbado. A expressão de proteínas pró-aterogênicas em regiões de baixo SS e ateroprotetoras em regiões de SS alto foram relatadas na literatura, porém o mecanismo completo carece de elucidação. Este trabalho teve por objetivo integrar proteômica e metabolômica para um melhor entendimento das alterações moleculares que acontecem nas células endoteliais em situações de alto e baixo SS, que podem resultar no desenvolvimento de lesões e placas ateroscleróticas. Para esta finalidade, células endoteliais foram submetidas a alto e baixo SS em sistema cone plate, seguido de análise proteômica e metabolômica por espectrometria de massas. Nossos dados demonstraram que o metabolismo de lipídio e metabolismo de modificações pós-traducionais de proteínas (N-glicosilações) estavam diminuídos em baixo SS. Em relação ao metabolismo de lipídio, foi identificada diminuição na concentração de ácidos graxos e na expressão de enzimas e proteínas transportadoras de lipídios em células sob baixo SS. O receptor de LDL, proteína importante para a homeostase do colesterol, foi identificado em menor concentração na membrana, bem como com alteração no seu perfil de glicosilação em células após baixo SS. As células submetidas a baixo SS e, portanto, aquelas com perfil pró-aterogênico, quando tratadas com estatina para o aumento da expressão de LDLR, aproximaram seu fenótipo ao de células submetidas a alto SS, adquirindo parte de um fenótipo ateroprotetor, com recuperação dos níveis de aminoácidos, lipídios, açúcares e ácidos carboxílicos. Os dados deste trabalho sugerem que o metabolismo de lipídios é um processo importante na manutenção do perfil ateroprotetor de células submetidas a alto SS. Além disso, as evidências demonstraram que estatinas apresentam uma atividade protetora, não apenas sistêmica, com diminuição do LDL circulante, mas também no microambiente vascular, contribuindo para o bom funcionamento das células endoteliais / Cardiovascular diseases are the main cause of the mortality and morbidity worldwide. Atherosclerotic plaque development is closely associated to the hemodynamic forces applied to endothelial cells (EC). Among these, shear stress (SS) plays a key role in disease development since changes in flow intensity and direction could stimulate an atheroprone or atheroprotective phenotype. EC under low and/or oscillatory SS (LSS) have upregulation of inflammatory proteins, adhesion and cellular permeability molecules. On the contrary, cells under high/laminar SS (HSS) increase their expression of protective and anti-inflammatory factors. The mechanism behind the SS regulating an atheroprotective phenotype is not completely elucidated. Here we used proteomics and metabolomics to better understand the changes suffered by endothelial cells under LSS and HSS that promote the atheroprone and atheroprotective profile and how these modifications can be connected to atherosclerosis development. Our data showed that lipid metabolism and post translational modification protein metabolism were downregulated in cells under LSS. About lipid metabolism, we found the LDLR, one important protein in cholesterol homeostasis, showed significant alterations both at the quantitative expression level, as well as regarding post-translational modifications. Under LSS, LDLR was seem at lower concentrations and with a different glycosylation profile. Finally, modulating LDLR with atorvastatin led to the recapitulation of an HSS metabolic phenotype in EC under LSS. The phenotype was recovery based on increasing of amino acids, lipids, sugars and carboxylic acids. Altogether, our data suggest lipid metabolism is important in atheroprotective phenotype of endothelial cells under HSS. Statins showed benefits not only systemic, decreasing cholesterol level in blood, but also in vascular environment, contributing for protector phenotype of endothelial cells

Bakgrund: Kolesterol är en viktig byggsten i våra celler. Kolesterol stabiliserar cellmembranen och används bland annat till syntesen av östrogen, testosteron, kortisol och vitamin D samt för att bilda gallsyror. Kolesterol syntetiseras i levern men tas även upp via kosten. Kolesterol transporteras i blodet med hjälp av olika lipoproteiner som t. ex. low-density lipoprotein (LDL) och high-density lipoprotein (HDL).Höga värden av LDL och låga värden av HDL är kopplade till en ökad risk att drabbas av ateroskleros som i sin tur ökar risken att drabbas av hjärt-och kärlsjukdomar som t. ex. hjärtinfarkt. Syfte: Syftet med arbetet var att studera hur plasmakoncentrationen av LDL och HDL förändras vid olika dieter i kombination med statiner eller utan statiner samt se hur koncentrationerna förändras vid  läkemdelsbehandling med statiner som monoterapi eller i kombination med ezetimib. Metod: Detta arbete är en litteraturstudie baserad på sju olika randomiserade kontrollerade studier sökta från databasen PubMed. I tre av studierna utvärderas kostens roll att sänka kolesterolet. I två studier behandlades patienter med atorvastatin som monoterapi eller med kombination av ezetimib. Två studier utvärderade om simvastatin ska tas på morgon eller kväll samt om simvastatin skall tas i kombination med LCHF-kost jämfört med simvastatin plus ezetimib i kombination med LCHF-kost. Resultat: Resultaten visar att viktreducering och kostomläggning har stor betydelse vid förhöjdanivåer av LDL samt vid låga nivåer av HDL. Resultaten visar även att statiner i kombination med ezetimib har störst effekt att sänka nivåerna av LDL och öka HDL-nivåerna. Av resultaten framgår också att kontrollerad frisättning av simvastatin har likvärdig effekt oavsett om de adminstreras morgon eller kväll. Slutsats: Denna litteraturstudie har visat att viktreducering och kost är ett bra och säkert tillvägagångssätt att få positiva effekter på HDL- och LDL-koncentrationerna. Statiner är förstahandspreparat vid blodfettsrubbningar och vid förhöjda kolesterolvärden och har en god effekt på kolesterol-nivåerna. För bästa resultat bör kost med låg andel kolhydrater kombineras med statiner och ezetimib. / Background: Cholesterol is an important part in our cells. Cholesterol stabilize cell membranes and is needed for the synthesis of estrogen, testosterone, cortisol, vitamin D and in the formation of bile acid. Cholesterol is synthesized in the liver but the body also absorbs cholesterol from the diet. The transport of cholesterol in the blood is taken care of by LDL and HDL. When the levels of LDL are increased and HDL are decreased there is an increased risk of developing atherosclerosis and cardiovascular diseases which are the main cause of death in the western countries.  Purpose: One of three different purposes of this presented study was to evaluate if the levels of low-density lipoprotein (LDL) and high-density lipoprotein (HDL) were changed when following different diets. The second purpose was to study the change in levels of LDL and HDL change after treatment with statins as monotherapy or in combination with ezetimibe. The third part of this study was to see how LDL and HDL were changed when different diets were combined with statins.  Method: This work was a literature study based on seven different randomized controlled trials that were found in the database PubMed. Three of the studies evaluated the role of the different diets when aiming at reducing the cholesterol levels. In two of the studies patients were either treated with atorvastatin as monotherapy or with atorvastatin plus ezetimib. The last two studies evaluated the use of simvastatin in combination with LCHF-diet as compared to the use of simvastatin plus ezetimib which were used in combination with a LCHF-diet. Results: The results showed that weight reduction and the choice of a specific diet are important factors when aiming at a decrease in levels of LDL and an increase in levels of HDL. Moreover, results obtained also suggested that statins, when used in combination with ezetimibe, gave the largest effect and was found to decrease levels of LDL and increase levels of  HDL. According to the results, it may be concluded that the controlled release of simvastatin has an equivalent effect on these levels regardless if administered in the morning or in the evening. Conclusion: The results obtained in this work suggest that weight reduction and eating according to a diet that consists of a low proportion of carbohydrates may be a good and safe approach to reduce the levels of  LDL and increase the levels of  HDL. Statins can be considered to be the first alternative to treat dyslipidemia and should be used at elevated levels of cholesterol. To achieve the best result, an analysis of the selected literature in this work, suggest that a low-carbohydrate diet should be combined with the use of statins and ezetimibe.

Submitted by Samira Ramos (samira.ramos@unifenas.br) on 2019-02-26T18:07:29Z No. of bitstreams: 1 Tese_Ariane_Borges.pdf: 1192468 bytes, checksum: 14a5f0b78794c95edf17ef4ee983572f (MD5) / Made available in DSpace on 2019-02-26T18:07:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_Ariane_Borges.pdf: 1192468 bytes, checksum: 14a5f0b78794c95edf17ef4ee983572f (MD5) Previous issue date: 2018-06-29 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais - FAPEMIG / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Variations in lipids and lipoproteins are considered a risk factor for cardiovascular diseases, such as atherosclerosis. This study evaluated the effect of genetic and alimentary dyslipidemia on testicular morphofunctional characteristics and whether its relation with the cardiovascular diseases developed by hyperlipidic diets in genetically modified mice, absent LDL receptor (Ldlr-/-) and wild type mice. In addition to evaluating the replacement of testosterone in the protection of the cardiovascular system of Ldlr-/- mice fed or not with a hyperlipidic diet. In the first study, Ldlr-/- mice were selected, divided into four groups (n = 10): S: animals fed standard diet (Nuvital®) for rodents and without testosterone application; ST: animals fed standard diet (Nuvital®) for rodents and with testosterone application (0.01 ml per week); HL: animals fed a hyperlipid diet (20% total fat, 1.25% cholesterol and 0.5% cholic acid) and without testosterone application; HLT: animals fed a hyperlipid diet (20% total fat, 1.25% cholesterol and 0.5% colic) and with testosterone application (0.01 ml per week). In the analysis of the lipid profile, the mice that received hyperlipidic diets (HL and HLT) presented severe mixed dyslipidemia with increased serum levels of total cholesterol, LDL, VLDL and triglycerides, when compared to the mice of the S and ST groups. However, the HLT group showed an increase in serum HDL levels when compared to the mice in the HL group. The mice from the S and ST groups had increased serum HDL levels in relation to the other groups studied. In the second study, it was observed that the dyslipidemia generated by the LDL receptor deficiency (Ldlr-/-) has a positive relation with the increase in the production of vascular superoxide anions, increased expression of CD40 and FasL in the testis. Genetic deletion of the LDL receptor (Ldlr-/-) in mice associated with a hyperlipidic diet increased both systemic and testicular damage. In conclusion, the metabolic disorders of the lipids generated by the deletion of the LDL gene induced testicular dysfunction, by mechanisms involving oxidative stress, inflammation and apoptosis, impairing spermatogenesis and testicular steroidogenesis. It is also suggested that testosterone may indirectly cause hypertrophy of cardiomyocytes / As variações nos lipídeos e lipoproteínas são consideradas um fator de risco para doenças cardiovasculares, como a aterosclerose. Este estudo avaliou o efeito da dislipidemia genética e alimentar nas características morfofuncionais testiculares e se sua relação com as doenças cardiovasculares desenvolvidas por dietas hiperlipídicas em camundongos geneticamente modificados, ausente do receptor do LDL (Ldlr-/-) e em camundongos selvagens (wild type). Além de avaliar a reposição da testosterona na proteção do sistema cardiovascular de camundongos Ldlr-/- alimentados ou não com dieta hiperlipídica. No primeiro trabalho, foram selecionados camundongos Ldlr-/-, divididos em quatro grupos (n=10): S: animais alimentados com dieta padrão (Nuvital®) para roedores e sem aplicação de testosterona; ST: animais alimentados com dieta padrão (Nuvital®) para roedores e com aplicação de testosterona (0,01ml por semana); HL: animais alimentados com dieta hiperlipídica (20% de gordura total, 1,25% de colesterol e 0,5% de ácido cólico) e sem aplicação de testosterona; HLT: animais alimentados com dieta hiperlipídica (20% de gordura total, 1,25% de colesterol e 0,5% de ácido cólico) e com aplicação de testosterona (0,01ml por semana). Na análise do perfil lipídico, os camundongos que receberam dietas hiperlipídicas (HL e HLT) apresentaram dislipidemia mista severa com aumento dos níveis séricos do colesterol total, LDL, VLDL e triglicérides, quando comparados com os camundongos dos grupos S e ST. Contudo os camundongos dos grupos HLT apresentaram aumento nos níveis séricos de HDL quando comparados com os camundongos do grupo HL. Os camundongos do grupo S e ST apresentaram níveis séricos de HDL aumentados em relação aos demais grupos estudados. No segundo trabalho, observou-se que a dislipidemia gerada pela deficiência do receptor de LDL (Ldlr-/-) tem uma relação positiva com o aumento da produção de ânions de superóxido vascular, aumento da expressão de CD40 e FasL no testículo. A deleção genética do receptor de LDL (Ldlr-/-) em camundongos associados a uma dieta hiperlipídica aumentou o dano sistêmico e testicular. Em conclusão, os distúrbios metabólicos dos lipídeos gerados pela deleção do gene LDL induziram a disfunção testicular, por mecanismos envolvendo estresse oxidativo, inflamação e apoptose, prejudicando a espermatogênese e a esteroidogênese testicular. Sugere-se também que a testosterona possa causar indiretamente a hipertrofia de cardiomiócitos.

Alta concentração de lipoproteína modificada de baixa densidade (LDL) é um dos fatores que aumentam o risco de doenças cardíacas. As concentrações mais elevadas de LDL modificada estão associadas à aterosclerose nas veias de sangue. A técnica de Z- scan (ZS) foi utilizada para investigar a resposta óptica não-linear da lipoproteína modificada de baixa densidade (moLDL). As características estruturais do mLDL foram estudadas por espalhamento dinâmico de luz. Nesta pesquisa, os experimentos foram realizados em amostras de LDL de 24 pacientes com diabetes e gengivite (grupo 1) e 24 pacientes com diabetes e periodontite (grupo 2). Os experimentos foram repetidos após 6 meses sem qualquer tratamento para o grupo 2 e com um tratamento periodontal para o grupo 1. Os resultados mostram que a amplitude da curva Z-scan no grupo 1 é menor que a do grupo 2. Após 6 meses de tratamento periodontal a amplitude é maior do que antes, depois a concentração de LDL modificado é reduzida nos pacientes tratados. Portanto, o risco cardiovascular para aterosclerose é diminuído após o tratamento periodontal. Além disso, os resultados do espalhamento dinâmico de luz mostram que não há nenhuma mudança estrutural significativa no moLDL entre os dois grupos antes e após 6 meses. / High-concentration of modified low-density lipoprotein (LDL) is one of the factors that increases the risk of heart disease. The higher concentrations of modified LDL are associated with the atherosclerosis in the bloodstream. The Z-scan (ZS) technique was used to investigate the nonlinear optical response of modified low-density lipoprotein (moLDL). The structural characteristics of moLDL were studied by dynamic light scattering. In this work, the experiments were carried out in LDL solution from 24 patients with diabetes and gingivitis (group 1) and 24 patients with diabetes and periodontitis (group 2). The experiments had been repeated after 6 months without any treatment for group 1 and with a periodontal treatment for group 2. The results show that the amplitude of Z-scan curve in group 2 is lower than that of group 1. After 6 months of periodontal treatment the amplitude is getting higher than before, then the concentration of modified LDL is reduced in the patients treated. Therefore, the cardiovascular risk for atherosclerosis is decreased after the periodontal treatment. Also, dynamic light scattering results show that there is not a significant structural change in moLDL between the two groups before and after 6 months.

Entre 5,3 e 12% das mulheres com endometriose apresentam a forma mais severa da doença, com comprometimento profundo do intestino, cujo principal tratamento é cirúrgico, porém com alta taxa de complicações: recorrência das lesões, fístulas, hemorragias, infecção, suboclusão intestinal e disfunção vesical e/ou intestinal. O tratamento medicamentoso visa inibir o crescimento dos focos por meio do bloqueio ovariano, com boa redução da dor, mas sem diminuição dos nódulos endometrióticos, e maiores efeitos colaterais pela longa duração do tratamento. Atualmente, drogas podem ser acopladas a nanopartículas que tenham afinidade com tecidos doentes, de forma a serem entregues diretamente aos mesmos, sem efeitos sistêmicos significativos e com eficácia superior no controle das lesões. Há evidências de que células em alta divisão apresentam maior captação de LDL que células normais, para síntese de membrana. Em diversos tipos de câncer, doenças reumatológicas, aterosclerose, mieloma múltiplo e na cardiomiopatia diabética, a necessidade significativamente maior de LDL permitiu bons resultados terapêuticos acoplando-se um quimioterápico à LDE (nanoemulsão artificial semelhante à LDL e que se liga ao mesmo receptor). Na endometriose, assim como no câncer, há fatores de crescimento e citocinas associados à multiplicação celular, e também há superexpressão dos receptores de LDL nas lesões de endometriose. Além disso, mulheres com endometriose intestinal apresentam níveis plasmáticos menores de LDL que o grupo sadio. Este estudo avaliou a captação da emulsão de LDE marcada radioativamente pelos receptores na superfície do foco endometriótico, para posteriormente testar a capacidade da LDE de interiorização celular. Tratou-se de um estudo-piloto comparativo entre três grupos: endometriose intestinal e não-intestinal, e sem endometriose. Antes do tratamento cirúrgico, foi determinado o perfil lipídico das pacientes e foi injetada a LDE marcada. Foi dosada a radioatividade das amostras de tecidos coletados (endometriose intestinal e não-intestinal, peritôneosadio e endométrio tópico). Na comparação entre os grupos, não houve diferença significativa nos parâmetros (p > 0,01), possivelmente devido à amostra pequena. Mas o grupo com endometriose intestinal tendeu a apresentar um IMC mais baixo que os demais, com maior sintomatologia álgica e níveis mais altos de LDL. A captação de LDE no peritôneosadio foi maior no grupo com endometriose não intestinal. O endométrio tópico e os focos de endometriose intestinal captaram mais LDE que os de não-intestinal, sugerindo maior divisão celular e menos fibrose. A comparação da captação da LDE por local mostrou uma tendência a captação decrescente entre endométrio tópico, peritôneo sadio e lesão de endometriose. Como os focos de endometriose (intestinal ou não) captaram de maneira significativa a LDE, conclui-se que há consumo aumentado de LDL nas lesões de endometriose, assim como no câncer e nas doenças inflamatórias. Não houve diferença dos níveis de colesterol plasmático na captação da LDE, comprovando a entrega direta da nanoemulsão aos tecidos em alta divisão celular, independente das lipoproteínas séricas. Estes resultados abrem caminho para novos estudos de avaliação da nanotecnologia como opção terapêutica às cirurgias radicais, com menores complicações e sem efeitos colaterais sistêmicos / Between 5.3% and 12% of women with endometriosis present the most severe form of disease, with deep intestinal involvement, mainly treated by surgery, which has a high rate of complications: recurrence of lesions, fistulas, hemorrhage, infection, intestinal subocclusion and bladder and / or bowel dysfunction. Drug treatment aims to inhibit foci growth by means of ovarian blockage, with good reduction of pain, but with no effect on endometriotic nodules, and frequent side effects due to the long duration of treatment. Currently, drugs can be coupled to nanoparticles that have affinity with compromised tissues, in order to be delivered directly to them, without significant systemic effects and with superior efficacy in the control of lesions. There are evidences that cells in high division have higher uptake of LDL than normal cells, for membrane synthesis. In several types of cancer, rheumatic diseases, atherosclerosis, multiple myeloma and in diabetic cardiomyopathy, the significantly greater need for LDL allowed good therapeutic results by coupling a chemotherapeutic to LDE (an artificial nanoemulsion similar to LDL that binds to the same receptor). In endometriosis, as well as in cancer, there are growth factors and cytokines associated with cell multiplication, and there is also overexpression of LDL receptors in endometriosis lesions. In addition, women with intestinal endometriosis have higher plasma LDL levels than healthy ones. This study evaluated the uptake of radioactively labeled LDE emulsion by receptors on the surface of endometriotic foci, to later test the LDE capacity of cellular interiorization. It was a comparative pilot study between three groups: patients with intestinal and non-intestinal endometriosis, and without endometriosis. Before surgical treatment, the lipid profile of patients was determined and labeled LDE nanoemulsion was injected. The radioactivity of the collected tissue samples (intestinal and non-intestinal endometriosis, healthy peritoneum and topical endometrium) was measured. In the comparison between groups, there was no significant difference in parameters (p > 0.01), possibly due to the small sample. But the group with intestinal endometriosis tended to present a lower BMI than others, with greater pain symptomatology and higher levels of LDL. LDE uptake in healthy peritoneum was higher in the non-intestinal endometriosis group. The topical endometrium and foci of intestinal endometriosis uptaked more LDE than non-intestinal ones, suggesting greater cell division and less fibrosis. Comparison of LDE uptake per site showed a tendency toward decreasing uptake between topical endometrium, healthy peritoneum and endometriosis lesion. As endometriosis foci (intestinal or not) have uptaked LDE on a significant level, the conclusion might be that there is an increased consumption of LDL by endometriosis lesions, as well as in cancer and inflammatory diseases. There was no difference between plasma cholesterol levels and LDE uptake, demonstrating the direct delivery of the nanoemulsion to tissues in high cell division, independent of serum lipoproteins. These results open the way for new studies evaluating nanotechnology as a therapeutic option for radical surgeries, with lower complications and no systemic side effects

Em trabalhos anteriores, mostrou-se que uma nanoemulsão lipídica denomi-nada LDE após injeção endovenosa, em pacientes com carcinoma mamário e outros tumores sólidos concentra-se nos tecidos neoplásicos e pode direcionar especificamente agentes quimioterápicos ao tumor. Estudos clínicos mostraram que a LDE diminui acentuadamente os efeitos tóxicos desses agentes e em estudos com animais de experimentação não reduz seus efeitos antitumorais. No presente estudo, testamos a hipótese de a LDE injetada por via locorregional poderia concentrar-se no tumor de mama e nos linfonodos axilares da mama comprometida, visando futuras aplica-ções do sistema na quimioterapia neoadjuvante desse tumor. Três técnicas de injeção da LDE foram testadas em pacientes com carcinoma de mama avançado com tratamento cirúrgico pré-programado. A LDE marcada com colesterol radioativo foi injetada 12 horas antes da cirurgia, nas pacientes divididas em três grupos: Grupo 1 (G1, n=4): LDE injetada no parênquima mamário, a 5 cm da lesão ; Grupo 2 (G2, n=4): LDE injetada na região peri-tumoral; e Grupo 3 (G3 n=6): LDE injetada em região intratumoral. Este grupo foi subdividido em 2: em 2 pacientes realizaram cirurgia 2hs após a injeção da LDE e nas outras 4, 12hs após a injeção da LDE. Quantificou-se a capta-ção da LDE nos fragmentos de tecido tumoral e mamário normal e do linfonodo axilar retirados durante a cirurgia por contagem de radioatividade após extração lipídica dos tecidos. Os resultados evidenciaram que, em G1, houve maior captação da LDE em tecido normal, sugerindo se tratar de metodologia ina-dequada. Em G2, a captação da LDE foi quatro vezes maior no tecido tumo-ral do que no tecido normal, próximo, portanto, dos valores encontrados em estudos anteriores que utilizaram a injeção da LDE por via hematológica. Em G3, o valor médio de captação da LDE foi 53 vezes maior no tecido tumoral (>75%), com mínima captação pelo tecido mamário normal (<8%). A injeção intratumoral da LDE mostrou-se, portanto, metodologia ainda superior à inje-ção da LDE por via endovenosa para a utilização efetiva dessa nanoemulsão como terapia-alvo em tumores primários de mama. / In previous work had showed that a lipidic nanoemulsion called LDE after intravenous injection in patients with breast carcinoma and others solid tumors focuses in the neoplasic tissue and can target especially chemotherapist agents to the tumors. Clinical studies showed that LDE decreases the toxic effects of those agents and in studies with experimental animals don\'t reduce yours antitumoral effects. In the present study, we had test the hypothesis of the LDE injected by locoregional could focuses in the breast tumor and in the axillary lymph node of the compromised breast, targeting future applications of the system in the neoadjuvant chemotherapy of this tumor. Three techniques of injection of the LDE had test in patients with advanced breast carcinoma with sirurgic treatment pre-programmed. The LDE marked with radioactive cholesterol was injected 12 hours before the surgery, in patients divided in three groups: Group 1 (G1, n=4): LDE injected in the breast parenchyma, about 5 cm of the lesion; Group 2 (G2, n=4): LDE injected in the peritumoral region; and Group 3 (G3, n=6): LDE injected in the intratumoral region. This group was subdivided in 2: in 2 patients had realized surgery 2 hs after the injection of LDE and in the others 4 patients 12hs after the injection of LDE. It had quantified the capture of LDE in the fragments of the tumoral and breast tissue and of the axillary lymph node withdrawn during the surgery by counting of radioactive after lipidic extraction of this tissue. The results showed that, in G1, there was greater capture of LDE in normal tissue, suggesting it is an inappropriate methodology. In G2, the capture of LDE was four times higher in the tumoral tissue than in the normal tissue, closer, therefore, of the values found in previous studies that used the injection of LDE by hematology. In G3, the medium value of capture of LDE was 53 times higher in the tumoral tissue (> 75%), with minimum capture by the normal breast tissue (< 8%). The intratumoral injection of LDE showed, therefore, methodology still higher than the intravenous injection of LDE by intravenous for the effective use of this nanoemulsion as therapy target in primary tumors of breast.

Estudos anteriores em nosso laboratório demonstraram que pacientes portadores de DAC apresentam diferenças no metabolismo do CL e CE de uma nanoemulsão artificial rica em colesterol (LDE), nos quais o CL apresentou maior remoção plasmática e depósito arterial. Dando continuidade a esta linha de pesquisa, neste trabalho foram avaliadas a cinética plasmática, representada pela taxa fracional de remoção (TFR), e a captação do 3H-colesterol livre (3H - CL) e 14C - colesterol esterificado (14C - CE) da LDE por segmentos arteriais e por órgãos de coelhos normais (n=17) e coelhos submetidos à indução de aterosclerose por dieta rica em colesterol (1%) (n=13). Além disso, avaliou-se a captação in vitro do 3H CL e do 14C CE da LDE por células endoteliais aórticas de coelhos. Por último, foi avaliada a influência da inibição da enzima lecitina-colesterol aciltransferase (LCAT), e indiretamente, a esterificação do CL em ratos normais (n=9) e tratados com diazepam (n=9). Em coelhos que receberam dieta normal, não houve diferença entre a remoção plasmática do 3H - CL e do 14C - CE. Em coelhos que desenvolveram hiperlipidemia e aterosclerose através de dieta rica em colesterol, o 3H - CL foi removido mais rapidamente da circulação do que o 14C - CE (p<0,05), entretanto houve maior captação de 14C - CE do que de 3H - CL no arco aórtico (p<0,05). Em ambos os grupos, os principais órgãos captadores de colesterol da LDE foram fígado, pulmão, adrenais e baço (p<0,05). Tanto a TRF quanto a captação hepática de 3H - CL e 14C - CE foram menores no grupo que recebeu a dieta rica em colesterol. Em células endoteliais aórticas de coelhos, a captação de 3H - CL foi maior que a de 14C CE independente da massa de LDE incubada (p<0,01). Em ratos, não houve diferença entre a captação das duas formas de colesterol da LDE pela aorta no grupo controle, entretanto, quando a atividade da LCAT foi diminuída pelo tratamento com diazepam, a captação arterial de 3H - CL foi maior do que a de 14C - CE (p< 0,01). A hiperlipidemia e distúrbios no processo de estabilização do colesterol, favorecem a dissociação entre o CL e o CE das lipoproteínas, e podem elevar o risco de desenvolvimento da aterosclerose, assim como agravar o processo de aterogênese. / I n previously studies, it was shown that free cholesterol (FC) and cholesterol ester (CE) of a cholesterol-rich nanoemulsion (LDE) behaves differently in patients with coronary artery disease (CAD). The FC plasma clearance and arterial deposition is greater than CE. In the present study we evaluate the plasma kinetics, estimated by the fractional clearance rate (FCR), and the tissue uptake of 3H-free cholesterol (3H FC) and of 14C cholesterol ester (14C - CE) of LDE by arterial segments and organs of rabbits with (n=13) and without atherosclerosis (n=17). Furthermore, it was evaluated the in vitro uptake of 3H FC and 14C - CE by rabbit aortic endothelial cells. Finally, it was evaluated the inhibition of the enzyme lecithin-cholesterol acyltransferase (LCAT), and indirectly, the FC esterification in rats non-treated (n=9) and treated with diazepam (n=9). In rabbits without atherosclerosis that received an standard diet there was no difference between the plasma clearance of 3H FC and 14C CE. In rabbits with hyperlipidemia and atherosclerosis induced by the cholesterol-rich diet the 3H - FC was removed faster than 14C - CE (p<0.05), however the arch aortic uptake of 14C CE was greater than of 3H - FC (0p<0.05). In both groups, liver, lungs, adrenals and spleen were the principal sites of LDE cholesterol uptake. The FCR and tissue uptake were smaller in rabbits with than those without atherosclerosis. In rabbit aortic endothelial cells the 3H - FC uptake was greater than 14C CE independently of incubated LDE mass (p<0.01). In control rats there was no difference on the arterial uptake of both cholesterol forms of LDE, but when the LCAT activity was diminished by the diazepam treatment, the arterial uptake of 3H FC were greater than 14C CE (p< 0.01). The hyperlipidemia and cholesterol stability alterations may lead to dissociation between lipoproteins FC and CE. This dissociation may increase the risk for atherosclerosis and likewise enhance the severity of atherosclerosis.

Diss. (sammanfattning) Stockholm : Karol. inst., 2003. / Härtill 5 uppsatser.

Made available in DSpace on 2015-12-06T22:54:33Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Objetivos: Lipoproteínas oxidadas e anticorpos (Abs) anti-LDL oxidada (antiLDLox) foram detectados no plasma em resposta à elevação da pressão arterial, sugerindo a participação do sistema imune adaptativo. Postulamos que o tratamento da hipertensão possa modificar a resposta imune diminuindo o estímulo oxidativo. Analisamos os títulos de Abs anti-LDLox após adequado controle da hipertensão arterial. Métodos: Títulos de Abs anti-LDLox foram examinados em pacientes com hipertensão arterial no estágio 1 (n=94), sem manifestação clínica prévia de aterosclerose ou fatores de risco clássicos para a doença coronariana e isentos de medicações anti-hipertensivas. Pacientes foram distribuídos aleatoriamente para terapia com perindopril, hidroclorotiazida ou indapamida por 12 semanas, com adição de perindopril, se necessário para adequado controle pressórico. Títulos de Abs anti-LDLox foram mensurados por ELISA. Resultados: O tratamento anti-hipertensivo reduziu as pressões arteriais casuais e as obtidas pela MAPA (p<0,0005), diminuiu os níveis plasmáticos de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (p<0,05) e aumentou os títulos dos Ab anti-LDLox (p<0,005) e a dilatação mediada pelo fluxo (p<0,0005), independentemente do tratamento instituído. Conclusões: Aumento nos títulos de Abs anti-LDLox após terapia anti-hipertensiva ao lado de melhor função endotelial e diminuição do estresse oxidativo sugerem que a despeito de maior estímulo oxidativo estar presente na hipertensão, os Abs anti-LDLox podem ser potenciais biomarcadores protetores para monitorizar o tratamento da hipertensão. / Objectives: Oxidized lipoproteins and autoantibodies anti-oxidized LDL (antioxLDL) have been detected in human plasma in response to blood pressure elevation. Thus, treatment of hypertension, by decreasing the stimuli for oxidation, may have an effect on the immune response. We aimed to assess early changes on anti-LDLox Abs after blood pressure control. Methods: Titers of human antioxLDL Abs were measured in subjects with recently diagnosed hypertension on stage 1 (n=94), in primary prevention of coronary disease, with no other risk factors, and naïve of anti-hypertensive medication at entry. Subjects were randomly assigned to receive perindopril, hydrochlorothiazide or indapamide during 12 weeks, with addition of perindopril if necessary to achieve blood pressure control. Abs anti-oxLDL were measured by ELISA. Results: Twelve-week antihypertensive treatment reduced both office-based and ambulatory blood pressure monitoring measurements (p<0.0005), decreased plasma TBARS (p<0.05), increased titers of anti-oxLDL Abs (p<0.005), and improved endothelial dependent vasodilation (p<0.0005), independently of treatment assignment. Conclusions: Increase in titers of Abs anti-oxLDL with improvement in endothelial function and reduction in oxidative stress suggests that albeit hypertension increases the oxidation stimuli, Abs anti-oxLDL may be protective and potential markers in the follow-up of hypertension treatment. / FAPESP: 2004/00324-1 / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Introdução: O Diabetes mellitus (DM) está associado a complicações crônicas micro e macrovasculares. A medida da hemoglobina glicada (HbA1c) avalia o grau do controle glicêmico em pacientes diabéticos e seus níveis são capazes de prognosticar o risco de desenvolvimento dessas complicações. Entre as origens das complicações causadas pela hiperglicemia, há a hipótese dos produtos finais de glicação avançada (AGEs) e do estresse oxidativo. A reação de glicação não enzimática das proteínas também está relacionada com as complicações diabéticas e é responsável pela formação da HbA1c. Entretanto, tem sido demonstrado um aumento dessa glicação em pacientes não diabéticos. Um dos prováveis mecanismos para esse aumento é a peroxidação lipídica, com conseqüente aumento nos níveis de malondialdeído (MDA) que modifica a apolipoproteína B (APO B) do colesterol de baixa densidade (LDL). A modificação oxidativa do LDL confere propriedades específicas pró-aterogênicas. A presença do LDL oxidado e o aumento da tendência do LDL à peroxidação lipídica, podem contribuir para o aumento dos níveis de HbA1c. Objetivo: Verificar a associação entre os níveis de HbA1c com o Colesterol LDL e LDL oxidado em Indivíduos não-diabéticos. Métodos: Foi realizado um estudo transversal observacional, no qual um total de 196 indivíduos, classificados como não-diabéticos, foram analisados e divididos em três grupos, conforme os valores de HbA1c e glicemia de jejum (GJ): Grupo 1 (n =64) - HbA1c <5,7% e GJ <100 mg/dL; Grupo 2 (n =69) - HbA1c ≥5,7 e ≤6,4% e GJ <100 mg/dL; Grupo 3 (n =63) - HbA1c ≥5,7 e ≤6,4% e GJ ≥100 e <126mg/dL. Amostras de sangue total e soro foram coletadas. O LDL oxidado foi medido por método imunoensaio enzimático (Mercodia ®), ApoB dosada por imunoturbidimentria, a relação Colesterol LDL(oxi)/Colesterol-HDL foi estimada, além das outras dosagens bioquímicas do perfil lipídico. Esses testes foram comparados e analisados entre os três diferentes grupos. Resultados: Houve diferença significativa nos níveis de LDL(oxi) (p< 0,001), Apo B (p= 0,026) e razão LDL(oxi)/HDL (p< 0,001) entre os três grupos. Os valores de HbA1c apresentaram correlação positiva com os valores de LDL (oxi) (r =0,431; p <0,001), LDL (r =0,148; p =0,039), Col Não-HDL (r =0,192; p =0,007) e Apo B (r =0,171; p <0,001). Estas associações positivas permaneceram significativas, mesmo após ajuste, por análise de regressão linear múltipla para as variáveis álcool, medicamentos, índice de massa corporal (IMC) e idade. Também apresentaram correlações positivas com os valores de HbA1c: razão LDL (oxi)/HDL (r =0,422; p <0,001), CT (r =0,142; p =0,048), triglicerídios (r =0,155; p =0,030) e IMC (r =0,263; p <0,001). Conclusão: Nosso estudo demonstrou associação dos níveis de HbA1c com as partículas lipídicas aterogênicas LDL, Apo B, colesterol não HDL e LDL (oxi). Os níveis de LDL, principalmente LDL (oxi), estão significativamente associados com os níveis de HbA1c e glicose, mesmo em indivíduos não-diabéticos. Os indivíduos classificados com alto risco de desenvolver DM ou DCV apresentam valores mais elevados de partículas de LDL oxidadas. Nossos dados sugerem que a presença de LDL (oxi) está relacionada com a glicação e ao aumento dos níveis sanguíneos de HbA1c em indivíduos não diabéticos. / Background: Diabetes mellitus (DM) is associated with chronic microvascular and macrovascular complications. The measurement of glycated hemoglobin (HbA1c) assesses the degree of glycemic control in diabetics patients and their levels are able to predict the risk of developing these complications. The formation of advanced glycation and products (AGEs) and oxidative stress are some of the hypothesis described to explain the diabetic complications. The reaction of nonenzymatic glycation of proteins is also related to these complications and is responsible for the formation of HbA1c. However, it has been shown an increase in glycation in nondiabetic patients, which is maybe due to lipid peroxidation, consequently, the levels of malondialdehyde (MDA) increase and there is modifications in the apolipoprotein B (apoB) of low-density cholesterol (LDL). The oxidative modification of LDL confers specific proatherogenic properties. The presence of oxidized LDL and an increased tendency to LDL peroxidation contribute to increased levels of HbA1c in diabetic patients. Objective: To investigate the association between HbA1c levels and the levels of LDL cholesterol and oxidized LDL in subjects without diabetes. Methods: We conducted an observational cross-sectional study in which a total of 196 individuals, classified as non-diabetics, were analyzed and divided into three groups according to the values of HbA1c and fasting plasma glucose (FPG): Group 1 (n = 64) - HbA1c <5.7% and FPG <100 mg / dL, Group 2 (n = 69) - HbA1c ≥ 5.7 and ≤ 6.4% and FPG <100 mg / dL, Group 3 (n = 63) - HbA1c ≥ 5.7 and ≤ 6.4% and FPG ≥ 100 and <126mg/dL. Samples of whole blood and serum were collected. Oxidized LDL was measured by enzyme immunoassay method (Mercodia ®), ApoB was measured by imunoturbidimentria and the ratio LDL cholesterol (oxi) / HDL-cholesterol was estimated. Other biochemical measurements of lipid profile were also carried out. Results: There were significant differences in LDL (oxi) (p <0.001), Apo B (p = 0.026), and ratio LDL (oxi) / HDL (p <0.001) between the three groups. HbA1c values showed positive association with LDL (oxi) (r = 0.431, p <0.001), LDL (r = 0.148, p = 0.039), non-HDL Col (r = 0.192, p = 0.007) and Apo B (r = 0.171, p <0.001). These positive associations remained significant even after adjustment for multiple linear regression analysis for variables such as alcohol, drugs, BMI and age. The ratio LDL (oxi) / HDL (r = 0.422, p <0.001), CT (r = 0.142, p = 0.048), triglycerides (r = 0.155, p = 0.030) and BMI (r = 0.263, p <0.001) also showed positive correlations with HbA1c values. Conclusions: Our study demonstrated that there is association between HbA1c levels and the atherogenic lipid particles LDL, Apo B, non-HDL cholesterol and LDL (oxi). LDL levels, especially LDL (oxi), are significantly associated with HbA1c and glucose levels, even in non-diabetics. Individuals classified with high risk of developing diabetes or CVD have higher levels of oxidized LDL particles. Our data suggest that the presence of LDL (oxi) is related to glycation and increased blood levels of HbA1c in nondiabetic individuals.