Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-06-27Bitstream added on 2014-06-13T18:43:42Z : No. of bitstreams: 1 000736347.pdf: 3203619 bytes, checksum: 506aebfe2bd88bd5a1d7ee4e36e61e4b (MD5) / Foram realizadas caracterizações microbiológicas dos estafilococos coagulase-positivo - ECP (Staphylococcus aureus, Staphylococcus intermedius e Staphylococcus hyicus), a pesquisa de Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae e Escherichia coli pela multiplex-PCR, California Mastitis Test (CMT), a contagem de células somáticas (CCS) automática pelo Somacount 300® calibrado para o leite bovino e CCS microscópica padronizada por Prescott e Breed (1910) em amostras de leite de 257 cabras, 513 metades mamárias e 10 tanques de expansão, além da aplicação de questionário epidemiológico nas 10 propriedades estudadas do estado de São Paulo. A prevalência de mastite subclínica em nível de cabra pela lactocultura foi de 43,6% e de mastite clínica 5,84%. Das 178 metades mamárias positivas na lactocultura, os patógenos mais prevalentes foram: Estafilococos coagulase-negativo - ECN (70%), S. aureus (13,5%), S. intermedius (7,9%) e Enterobacteriaceae (4%). Nenhuma das amostras mostrou-se negativa ao CMT, sendo a distribuição dos escores nas metades mamárias: 1+ (42,69%), 2+ (29,63%) e 3+ (27,68%). As prevalências dos patógenos na multiplex-PCR das metades mamárias foram: S. aureus (9,7%), S. agalactiae (5,5%) e E. coli (16,6%) e nos tanques de expansão: S. aureus (60%), S. agalactiae (10%) e E. coli (40%). Os resultados encontrados indicam que o CMT apresenta baixa sensibilidade e especificidade nos escores 2+ e 3+ para o diagnóstico de mastite subclínica. O Somacount 300® calibrado para o leite bovino superestima em 2,1 vezes a CCS microscópica, sendo que ambas não apresentaram nenhum ponto de corte eficiente para maximização simultânea da sensibilidade e especificidade. A multiplex-PCR apresenta boa acurácia para detecção de S. areus, S. agalactiae e E. coli no leite caprino mastítico Houve algumas diferenças estatísticas significantes nas análises univariadas dos fatores de risco para mastite... / Microbiological characterizations of the coagulase-positive staphylococci - CPS (Staphylococcus aureus, Staphylococcus intermedius and Staphylococcus hyicus), the research of Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae and Escherichia coli by multiplex-PCR, California Mastits Test (CMT), the automatic somatic cell count (SCC) by Somacount 300® equipment calibrated for bovine milk and the microscopic SCC standardized by Prescott and Breed (1910) in milk samples from 257 goats, 513 half-udders and 10 bulk tanks were carried out beyond the application of the epidemiological questionnaire in 10 properties studied of São Paulo State. The prevalence of subclinical and clinical mastitis by microbiological culture was 43.6% and 5.84% respectively. 178 half-udders were positive by microbiological culture, and coagulase-negative staphylococci - CNS (70%), S. aureus (13.5%), S. intermedius (7.9%) e Enterobacteriaceae (4%) were the most prevalent pathogens. No sample was negative to CMT. The distribution of scores CMT in half-udders were: 1+ (42.69%), 2+ (29.63%) and 3+ (27.68%). The prevalence of pathogens in multiplex-PCR in half-udders were: S. aureus (9.7%), S. agalactiae (5.5%) and E. coli (16.6%) and in bulk tanks: S. aureus (60%), S. agalactiae (10%) and E. coli (40%). The results indicate that the CMT scores 2+ and 3+ showed low sensitivity and specificity for the diagnosis of subclinical mastitis. The Somacount 300® calibrated to bovine milk overestimated the microscopic SCC in 2.1 fold, being that both showed no efficient cut-off point for simultaneous maximization of the sensitivity and the specificity. The multiplex-PCR presented good accuracy for the detection of S. aureus, S. agalactiae and E. coli in the mastitic caprine milk. There were some significant differences in the univariate analysis of risk factors for subclinical mastitis, however, when the analysis was adjusted for property, the ...

Orientadora: Lys Mary Bileski Cândido / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Agrárias / Resumo: A utilização de medicamentos antimicrobianos para o tratamento e prevenção de mastites em vacas leiteiras, com administração por qualquer via, pode ocasionar resíduos no leite e derivados. Resíduos antimicrobianos podem afetar a saúde humana nos aspectos imunopatológicos (reações de hipersensibilidade), toxicológicos (ações carcinogênicas e mutagênicas) e microbiológicos (aumento da resistência bacteriana). Os objetivos desse trabalho foram: identificar os riscos associados ao uso de antimicrobianos em vacas leiteiras, verificar a incidência desses resíduos no leite e correlacionar a presença de resíduos com a Contagem de Células Somáticas no Leite (CCS). O levantamento foi realizado durante o período de janeiro a maio de 2001 em 80 propriedades leiteiras da Região Metropolitana de Curitiba (RMC), definidas por amostragem proporcional, que considerou a produção leiteira e o número de produtores. Foi aplicado um questionário e coletadas quatro amostras de leite de tanque das propriedades, em intervalos variados. As análises foram realizadas no Laboratório do Programa de Análise de Rebanhos Leiteiros do Paraná com o kit comercial Charm Farm Test - VIAL, que se baseia na inibição de crescimento bacteriano (Bacíllus sterothermophilus varo calidolacts) e por Somacount 500 - Contador Eletrônico de Células por Fluorescência-Bentley. Os produtores foram agrupados segundo o volume de produção. O estudo dos fatores de risco demonstrou que: em 85,0% das propriedades a assistência veterinária é ocasional, 41,3% dos produtores descartam o leite apenas do quarto tratado, o leite contendo resíduos de antibióticos é utilizado em 82,5% das propriedades para alimentação de bezerros. A identificação no tratamento é realizada em 15,0% das propriedades e o registro de dados em 31,2 %, de forma incompleta. A mastite foi a doença mais significativa, com 70,4% dos casos e o antimicrobiano mais utilizado foi a penicilina associada com 24,7%, seguida de aminoglicosídeo associado, oxitetraciclina e pirlimicina. Na avaliação do uso de antimimicrobianos, 36,3% das propriedades utilizaram produtos proibidos para vacas lactantes. Quanto a dosagem aplicada pelos produtores, foi observado em 45,6% a superdosagem, em 30,1% uso de medicamentos não autorizados para vacas lactantes, 14,7% seguiram a bula e 9,6% praticaram subdosagem. O período de carência não foi respeitado em 16,8% dos casos. Foram detectados resíduos antimicrobianos em 75,0% das propriedades pesquisadas, com incidência entre 1 a 3 vezes nas 4 análises. Em 25,6% das 320 amostras analisadas houve presença de resíduos antimicrobianos. Na análise comparativa entre fatores de risco com incidência de resíduos não foi demonstrada diferença significativa, entretanto produtores que não respeitaram o período de carência apresentaram probabilidade limítrofe. Na avaliação da presença de resíduos com CCS (x 1000 cél./mL), observou-se um maior número de amostras positivas (37,8%) em relação às negativas (26,1%) no intervalo entre 501 a 1000 cél.lmL. Concluiu-se que o alto percentual de propriedades que apresentaram resíduos e o expressivo índice de amostras positivas, bem como a evidência de práticas que possam contribuir para a ocorrência de resíduos antimicrobianos no leite nas propriedades leiteiras da RMC podem acarretar conseqüentes riscos à saúde pública. Palavras-chave: Resíduos Antimicrobianos; Leite; Saúde Pública; Fatores de Risco; Contagem de Células Somáticas. / Abstract: The use of antibiotic therapy for the treatment and prevention of mastitis in dairy cows, with administration by any way, may cause residues in milk and milk products. Antimicrobials residues may affect the human being health in the immunophatological (hypersensitivity reactions), toxicological (mutant actions that might cause cancer) and microbiological (increase of bacterial resistance) aspects. The objectives of this work were: identify the risks associated to the use of antimicrobials in dairy cows, verify the occurrence of those residues in the milk and the relationship between the presence of such residues and the Somatic Cells Count (SCC). The study was made during the period from January to March 2001, in 80 dairy farms of Curitiba Metropolitan Area (CMA), defined by proportional sampling considering the milk production and the number of producers. A questionnaire was applied and collected four samples from the bulk tank for which one of the farms, in varied intervals. The analysis were carried out in the Dairy Herd Analysis Program Laboratory using the Charm Farm Test - VIAL commercial kit, based on the inhibition of bacterial growth (Bacillus sterothermophilus varo calidolacts), and by Somacount 500 - Cells Electronic Counter, by Bentley-Fluorescence. The producers were divided by the production volume. The analysis of the factors of risk showed that: in 85% of the producers the veterinarian assistance is occasional, 41,3% of the producers discard the milk only from the quarter treated, the milk containing antibiotics is used in 82,5% of the farms to feed the calves. The treatment identification is made in 15% of the farms and data record is incomplete in 31,2% of the cases. Mastitis was the most relevant disease in the 70,4% of the cases and penicillin associated was the most used antimicrobial with 24,7%, fo11 owed by aminoglycoside associated, oxytetracycline and pirlimicina. In the evaluation of antimicrobials handling, 36,3% of farms have used prohibited products for lactating cows. In the study of the applied dose by the producers 45,6% have used an overdose, 31,5% have used nonauthorized medicine for lactating cows, 14,7% have followed the label and 9,6% have used underdose. The limit period for further milk was not respected in 16,8% of the cases. Antimicrobial residues were detected in 75,0% of the farms, with occurrence between 1 and 3 times in 4. In 25,6% of the 320 analyzed samples was detected the presence of antimicrobial residues. In the comparative analysis between the factors of risk with residues incidence was not shown significant difference, however producers that did not respect the limit period for further milk production presented limitrophe probability. In the evaluation of the presence of residues with SCC (x1000), was observed a bigger number of positive samples (37,8%) in relation with negative samples (26,1%) in the interval between 501 and 1000 cells/mL. One can conclude that the high percentage of farms that have presented residues and the expressive number of positive samples, as well as the evidences of practices allowing the occurrence of residues in the milk of CMA farms, may contribute to several risks to the public health. Key-words: Antimicrobials residues, milk, public health, factors of risk, Somatic Cells Count (SCC).

Orientador: Helio Langoni / Banca: Paulo Francisco Domingues / Banca: José Carlos de Figueiredo Pantoja / Banca: Alice Maria Melville Paiva Della Libera / Banca: Nilson Roberti Benites / Resumo: Foram realizadas caracterizações microbiológicas dos estafilococos coagulase-positivo - ECP (Staphylococcus aureus, Staphylococcus intermedius e Staphylococcus hyicus), a pesquisa de Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae e Escherichia coli pela multiplex-PCR, California Mastitis Test (CMT), a contagem de células somáticas (CCS) automática pelo Somacount 300® calibrado para o leite bovino e CCS microscópica padronizada por Prescott e Breed (1910) em amostras de leite de 257 cabras, 513 metades mamárias e 10 tanques de expansão, além da aplicação de questionário epidemiológico nas 10 propriedades estudadas do estado de São Paulo. A prevalência de mastite subclínica em nível de cabra pela lactocultura foi de 43,6% e de mastite clínica 5,84%. Das 178 metades mamárias positivas na lactocultura, os patógenos mais prevalentes foram: Estafilococos coagulase-negativo - ECN (70%), S. aureus (13,5%), S. intermedius (7,9%) e Enterobacteriaceae (4%). Nenhuma das amostras mostrou-se negativa ao CMT, sendo a distribuição dos escores nas metades mamárias: 1+ (42,69%), 2+ (29,63%) e 3+ (27,68%). As prevalências dos patógenos na multiplex-PCR das metades mamárias foram: S. aureus (9,7%), S. agalactiae (5,5%) e E. coli (16,6%) e nos tanques de expansão: S. aureus (60%), S. agalactiae (10%) e E. coli (40%). Os resultados encontrados indicam que o CMT apresenta baixa sensibilidade e especificidade nos escores 2+ e 3+ para o diagnóstico de mastite subclínica. O Somacount 300® calibrado para o leite bovino superestima em 2,1 vezes a CCS microscópica, sendo que ambas não apresentaram nenhum ponto de corte eficiente para maximização simultânea da sensibilidade e especificidade. A multiplex-PCR apresenta boa acurácia para detecção de S. areus, S. agalactiae e E. coli no leite caprino mastítico Houve algumas diferenças estatísticas significantes nas análises univariadas dos fatores de risco para mastite ... / Abstract: Microbiological characterizations of the coagulase-positive staphylococci - CPS (Staphylococcus aureus, Staphylococcus intermedius and Staphylococcus hyicus), the research of Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae and Escherichia coli by multiplex-PCR, California Mastits Test (CMT), the automatic somatic cell count (SCC) by Somacount 300® equipment calibrated for bovine milk and the microscopic SCC standardized by Prescott and Breed (1910) in milk samples from 257 goats, 513 half-udders and 10 bulk tanks were carried out beyond the application of the epidemiological questionnaire in 10 properties studied of São Paulo State. The prevalence of subclinical and clinical mastitis by microbiological culture was 43.6% and 5.84% respectively. 178 half-udders were positive by microbiological culture, and coagulase-negative staphylococci - CNS (70%), S. aureus (13.5%), S. intermedius (7.9%) e Enterobacteriaceae (4%) were the most prevalent pathogens. No sample was negative to CMT. The distribution of scores CMT in half-udders were: 1+ (42.69%), 2+ (29.63%) and 3+ (27.68%). The prevalence of pathogens in multiplex-PCR in half-udders were: S. aureus (9.7%), S. agalactiae (5.5%) and E. coli (16.6%) and in bulk tanks: S. aureus (60%), S. agalactiae (10%) and E. coli (40%). The results indicate that the CMT scores 2+ and 3+ showed low sensitivity and specificity for the diagnosis of subclinical mastitis. The Somacount 300® calibrated to bovine milk overestimated the microscopic SCC in 2.1 fold, being that both showed no efficient cut-off point for simultaneous maximization of the sensitivity and the specificity. The multiplex-PCR presented good accuracy for the detection of S. aureus, S. agalactiae and E. coli in the mastitic caprine milk. There were some significant differences in the univariate analysis of risk factors for subclinical mastitis, however, when the analysis was adjusted for property, the ... / Doutor

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2018-06-13T12:50:57Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 739948 bytes, checksum: e22b7ad0fc203f73756f4e4f2c810e59 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-13T12:50:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 739948 bytes, checksum: e22b7ad0fc203f73756f4e4f2c810e59 (MD5) Previous issue date: 2018-03-14 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Biofilmes bacterianos formados em áreas de processamento de alimentos podem se tornar fonte de contaminação cruzada. Dessa forma, torna-se importante a correta manipulação das matérias-primas que chegam até a indústria, além do uso adequado de sanitizantes no processo de higienização de equipamentos e superfícies. Objetivou-se com este estudo avaliar a formação de biofilme e potencial de biotransferência de Pseudomonas aeruginosa em aço inoxidável, em contato com leite integral UHT e caldo de vegetais. E o efeito de três surfactantes, em concentrações abaixo, próxima e acima da concentração crítica de micelas, na redução de biofilmes. Cada meio de cultivo foi inoculado com P. aeruginosa ATCC 15442, distribuídos em poços de microplaca contendo cupons de aço inoxidável AISI 304 # 4 e incubados a 15 °C. O número de células aderidas foi determinado após 24, 48, 72, 96 e 120 h e o potencial de biotransferência a partir de 48 h. Soluções de cloreto de benzalcônio (CB), dodecilbenzeno sulfonato de sódio (DBSS) e Tween 80 foram avaliados sobre os biofilmes formados por 72 h. Cupons de aço, antes e após os tratamentos, foram observados por microscopia confocal de varredura a laser. Verificou-se que, apesar do leite integral conter maior concentração de nutrientes em relação ao caldo de vegetais, não houve diferença na formação de biofilme de P. aeruginosa. O potencial de biotransferência do micro-organismo aos meios de cultivo foi observado durante todo o período avaliado. As soluções surfactantes mostraram-se eficientes na redução do número de células aderidas com o aumento da concentração, principalmente o CB. Tween 80 e DBSS reduziram menos de 2 log UFC∙cm -2 de células viáveis, enquanto o CB reduziu até 6 log UFC∙cm -2 . A partir dos resultados obtidos verificou-se que P. aeruginosa pode produzir biofilmes em superfície utilizada no processamento de alimentos, independente do tipo de resíduo alimentar presente. Os surfactantes aplicados apresentaram melhor eficiência em concentrações mais elevadas, acima da crítica de micelas, e a classe desses agentes também contribuiu para a redução das células aderidas. / Bacterial biofilms formed in food processing areas can become a source of cross-contamination. Thus, the correct handling of the raw materials coming into the industry becomes important, as well as the proper use of sanitizing in the cleaning process of equipment and surfaces. The aim of this study was to evaluate the biofilm formation and biotransferential potential of Pseudomonas aeruginosa in stainless steel, in contact with UHT whole milk and vegetable broth. Also, it was evaluated the effect of three surfactants at concentrations below, above and near the critical micelle concentration, in the reduction of biofilms. Each culture medium was inoculated with P. aeruginosa ATCC 15442, distributed in microplate wells containing stainless steel coupons AISI 304 # 4 and incubated at 15 °C. The number of adhered cells was determined after 24, 48, 72, 96 and 120 h and the potential of biotransference after 48 h. Benzalkonium chloride (BAC), sodium dodecylbenzene sulfonate (SDBS) and Tween 80 solutions were evaluated on biofilms formed for 72 h. Steel coupons, before and after treatments, were observed by confocal laser scanning microscopy. It was verified that, although the milk had higher concentration of nutrients in relation to the vegetable broth, there was no difference in the formation of P. aeruginosa biofilm. The biotransfer potential of the microorganism to the culture media was observed throughout the evaluated period. The surfactant solutions were efficient in reducing the number of cells adhered with the concentration increase, mainly of the BAC. Tween 80 and SDBS reduced less than 2 log CFU∙cm -2 of viable cells, while BAC reduced up to 6 log CFU∙cm -2 . From the results obtained it was verified that P. aeruginosa can produce biofilms on the surface used in food processing, regardless of the type of food residue present. The applied surfactants presented better efficiency at higher concentrations, above the critical micelle, and the class of these agents also contributed to the reduction of the adhered cells.

CAPES / O leite é um alimento com poder nutricional considerável e, por ser rico em componentes nutritivos, apresenta-se como um ótimo meio de crescimento para microrganismos. Portanto, o leite “cru”, deve passar por um tratamento térmico para reduzir ou eliminar as bactérias nocivas. O consumo de leite que tenha passado por um tratamento inadequado pode levar a infecções devido a diversos agentes patogênicos como, por exemplo, a Salmonella spp.. Por ser altamente nociva, a presença desta bactéria em alimentos é intolerável, tornando obrigatórios os testes microbiológicos de amostras de alimentos para determinar a presença deste microrganismo. Os métodos convencionais para a detecção da Salmonella spp. são lentos e trabalhosos, exigem o uso de volumes consideráveis de meios líquidos e sólidos e reagentes. Desta forma, metodologias alternativas que apresentem vantagens, tais como um custo relativamente baixo, rapidez, não ser destrutiva, ser livre de uso de reagentes, e consequentemente, não gerar Q Residuals, são demandas urgentes no controle de qualidade deste tipo de alimento. Assim, esta pesquisa teve como objetivo oferecer uma metodologia alternativa baseada em Espectroscopia no Infravermelho Próximo (NIR) para discriminar entre presença e ausência de Salmonella spp. em leite integral e desnatado UHT (Ultra High Temperature). Para isso, foram adquiridas diferentes amostras de leite integral e desnatado, ambos tratados de forma UHT. O tratamento dos dados foi realizado em software Matlab®, utilizando-se ferramentas do PLS toolbox®. Os modelos PLS-DA obtidos foram centrados na média, utilizando-se validação cruzada com algoritmo “deixe um fora”. O modelo para a discriminação de amostras de leite desnatado foi construído utilizando-se 4 variáveis latentes e apresentou RMSEC = 0,1639; RMSECV = 0,2084 e RMSEP = 0,0971. Já para leite integral, o modelo foi construído utilizandose 6 variáveis latentes com valores de RMSEC = 0,1351; RMSECV = 0,2076 e RMSEP = 0,0928. Os resultados mostraram que a metodologia sugerida foi capaz de discriminar as amostras contaminadas das não contaminadas com êxito, apresentando potencial para implementação no setor de controle de qualidade deste tipo de alimento. / Milk is a food with significant nutritional value and for being rich in nutritional constituents is presented as a great growth medium for microorganisms. Therefore, the "raw" milk, must undergo a thermal treatment to reduce or eliminate the most harmful bacteria. The consumption of milk that has passed through improper treatment, can lead to infections due to various pathogens such as, Salmonella spp.. For being highly detrimental, the presence of these bacteria in food is intolerable, making the microbiological food testing’sto determine the presence of this microorganism, absolutely required. Conventional methods to detect Salmonella spp. are laborious, requiring the use of significant amounts of liquid and solid media and reagents, besides demanding time-consuming procedures. Therefore, alternative methods which provide advantages, such as, relatively low cost, fast, non-destructive, free of reagents and, consequently, which does not generate waste are urgent demand did to the quality control of this kind of food. Thus, this research aimed to offer an alternative methodology based on Near Infrared (NIR) spectroscopy to discriminate between the presence and absence of Salmonella spp. in whole and skimmed UHT milk. Different samples of whole and skimmed milk, both treated through UHT were submitted to data analysis conducted in Matlab ® software, using PLS toolbox® tools. The PLS-DA models were median centered and cross-validated using leave one out algorithm. The model to discriminate skimmed milk samples was constructed using four latent variables and presented RMSEC = 0.1639; RMSECV = 0.2084 and RMSEP = 0.0971. To the whole milk, the model was built using six latent variables with RMSEC = 0.1351 values; RMSECV = 0.2076 and RMSEP = 0.0928. The results showed that the suggested methodology was able to differentiate between contaminated and uncontaminated samples successfully, presenting potential to be implemented in the quality control sector of milk industry.

CNPQ / O leite é uma das principais fontes de nutrientes da dieta humana e é um alimento que acompanha o ser humano durante toda a vida, tanto como leite de consumo como através de seus derivados. O leite pode apresentar contaminação oriunda de diversas fontes, relacionados desde a ordenha até o processo de beneficiamento do mesmo. Dentre esses contaminantes, destacam-se as micotoxinas, que são metabólitos tóxicos produzidos por fungos em condições de estresse. Estudos correlacionam a ocorrência de micotoxinas em leite e derivados lácteos, com ênfase na aflatoxina M1 (AFM1) que é regulamentada pela legislação vigente. Apesar da maior parte da literatura afirmar que a aflatoxina B1 (AFB1) é completamente convertida em AFM1, resultados preliminares tem sugerido que isso não é verdadeiro, o que vem a justificar que a mesma passe, também, a ser analisada, uma vez que a toxicidade da AFB1 é maior que a da AFM1. Na área de leite e derivados lácteos, estudos têm sugerido que as aflatoxinas, em especial a AFM1, localizam-se predominantemente nas frações proteicas. Porém, a elucidação da interação entre AFM1 e fração proteica permanece sem conclusão definitiva, o que sugere um campo amplo de estudo nesta área. Ainda, tendo em vista que a concentração de aflatoxinas é predominante na fração proteica e que pode haver uma interação química entre esta fração e aflatoxinas, os tratamentos térmicos aos quais o leite é submetido podem causar alterações significativas nas estruturas dessas proteínas e, por conseguinte, nas interações entre proteínas e AFM1 e AFB1. Portanto, o entendimento da natureza das ligações entre as AFM1 e AFB1 às proteínas do leite é imprescindível para a compreensão da biodisponibilidade dessas micotoxinas em animais e seres humanos. Desta forma, o objetivo do trabalho foi verificar o efeito do tratamento térmico e da digestibilidade sobre a interação proteína-aflatoxina. Para isso, foram contaminados amostras de solução de caseína bovina e leite desnatado com AFB1 (200 µg.L-1) e AFM1 (20 µg.L-1), posteriormente submetidas a pasteurização e digestão in vitro. As determinações realizadas consistiram na quantificação das AFLB1 e M1 por Cromatografia à Líquido de Ultra Alta Eficiência, Espectroscopia na região do infra vermelho (FTIR), Calorimetria Exploratória Diferencial (DSC) e Espectroscopia de fluorescência. Não houve redução da concentração de AFB1 e AFM1 após o tratamento térmico e a bioacessibilidade foi de 91,2% 70,5% e 90,9% e 69,7%, respetivamente, para caseína bovina e leite desnatado. Avaliando quantitativamente as estruturas secundárias da solução de caseína bovina e leite desnatado contaminados com AFB1 e AFM1 as principais mudanças ocorreram nas estruturas β-volta, β-anti e β-folha. Com a análise de DSC observou-se picos exotérmicos para ambos os ensaios, com variação de entalpia (∆H) após cada ensaio. Em relação aos espectros de fluorescência, foi possível verificar que as AFB1 e AFM1 promoveram redução da fluorescência original das proteínas lácteas. Pelos resultados obtidos, é possível concluir que a concentração das AFB1 e M1 não foram reduzidas pela temperaturaempregada, provavelmente pela interação proteínas do leite-aflatoxina, resultando numa bioacessibilidade relativamente elevada. / Milk and derivates are one of the main sources of nutrients of the human diet and is a food that follow's man during all of your life. The milk may be contaminated from several sources, related since milking until the beneficiation process. Among these contaminants, highlights are the mycotoxins, which are toxic metabolites produced by fungus in conditions of stress. Studies related to the occurrence of mycotoxins in milk and milk products, with the emphasis on aflatoxin M1 (AFM1) which is ruled by Brazilian law. While most of the literature stating that aflatoxin B1 (AFB1) is completely converted into AFM1, preliminary results have suggested that this is not true, justifying that it passes also to analyze because the toxicity of AFB1 is greater than the AFM1. In the milk and dairy products, studies have suggested that aflatoxins, in particular AFM1, are located predominantly in protein fractions. However, the elucidation of the interaction between AFM1 and protein fraction remains without definitive conclusion, suggesting a large broad field of study in this area. Also considering that the concentration of aflatoxins are prevalent in the protein fractions and can have a chemical interaction between these fractions and aflatoxins, the thermal treatments that the milk is subjected can cause significant changes in these proteins structures and consequently in interactions between proteins and AFM1 and AFB1. Therefore, the knowledge of nature of the links between AFM1 and AFB1 to milk proteins is indispensable for understanding the bioavailability of these mycotoxins in animals and humans. Thus, the aim of this study was to investigate the effect of thermal treatment and the digestibility of the interaction protein-aflatoxin. For this, samples of bovine casein solution and skimmed milk were contaminated with AFB1 (200 μg.L-1) and AFM1 (20 μg.L-1), and then submitted to pasteurization and in vitro digestion. The carried analyzes consisted in quantifying AFB1 and AFM1using high performance liquid chromatography, Fourier transform infrared spectroscopy (FTIR), Differential Scanning Calorimetry (DSC) and fluorescence spectroscopy. There was no reduction in the concentration of AFB1 and AFM1 and after the thermal treatment the bioaccessibility was 91.2% and 70.5%, 90.9% and 69.7%, respectively, for bovine casein and skim milk. In quantitative assessments of the secondary structures of bovine casein and skim milk contaminated with AFB1 and AFM1 the major changes occurred in the β-turn structures, β-anti and β-sheet. With the DSC analysis was observed exothermic peaks for both tests, the change of enthalpy (∆H) after each test. Regarding the fluorescence spectra, we found that AFB1 and AFM1 promoted reduction of the original fluorescence of milk proteins. From the results, it may be concluded that the concentration of AFB1 and M1 not been reduced by the temperature applied, probably by the interaction between milk protein and aflatoxin, resulting in a relatively high bioaccessibility.

CAPES / O leite é um alimento com poder nutricional considerável e, por ser rico em componentes nutritivos, apresenta-se como um ótimo meio de crescimento para microrganismos. Portanto, o leite “cru”, deve passar por um tratamento térmico para reduzir ou eliminar as bactérias nocivas. O consumo de leite que tenha passado por um tratamento inadequado pode levar a infecções devido a diversos agentes patogênicos como, por exemplo, a Salmonella spp.. Por ser altamente nociva, a presença desta bactéria em alimentos é intolerável, tornando obrigatórios os testes microbiológicos de amostras de alimentos para determinar a presença deste microrganismo. Os métodos convencionais para a detecção da Salmonella spp. são lentos e trabalhosos, exigem o uso de volumes consideráveis de meios líquidos e sólidos e reagentes. Desta forma, metodologias alternativas que apresentem vantagens, tais como um custo relativamente baixo, rapidez, não ser destrutiva, ser livre de uso de reagentes, e consequentemente, não gerar Q Residuals, são demandas urgentes no controle de qualidade deste tipo de alimento. Assim, esta pesquisa teve como objetivo oferecer uma metodologia alternativa baseada em Espectroscopia no Infravermelho Próximo (NIR) para discriminar entre presença e ausência de Salmonella spp. em leite integral e desnatado UHT (Ultra High Temperature). Para isso, foram adquiridas diferentes amostras de leite integral e desnatado, ambos tratados de forma UHT. O tratamento dos dados foi realizado em software Matlab®, utilizando-se ferramentas do PLS toolbox®. Os modelos PLS-DA obtidos foram centrados na média, utilizando-se validação cruzada com algoritmo “deixe um fora”. O modelo para a discriminação de amostras de leite desnatado foi construído utilizando-se 4 variáveis latentes e apresentou RMSEC = 0,1639; RMSECV = 0,2084 e RMSEP = 0,0971. Já para leite integral, o modelo foi construído utilizandose 6 variáveis latentes com valores de RMSEC = 0,1351; RMSECV = 0,2076 e RMSEP = 0,0928. Os resultados mostraram que a metodologia sugerida foi capaz de discriminar as amostras contaminadas das não contaminadas com êxito, apresentando potencial para implementação no setor de controle de qualidade deste tipo de alimento. / Milk is a food with significant nutritional value and for being rich in nutritional constituents is presented as a great growth medium for microorganisms. Therefore, the "raw" milk, must undergo a thermal treatment to reduce or eliminate the most harmful bacteria. The consumption of milk that has passed through improper treatment, can lead to infections due to various pathogens such as, Salmonella spp.. For being highly detrimental, the presence of these bacteria in food is intolerable, making the microbiological food testing’sto determine the presence of this microorganism, absolutely required. Conventional methods to detect Salmonella spp. are laborious, requiring the use of significant amounts of liquid and solid media and reagents, besides demanding time-consuming procedures. Therefore, alternative methods which provide advantages, such as, relatively low cost, fast, non-destructive, free of reagents and, consequently, which does not generate waste are urgent demand did to the quality control of this kind of food. Thus, this research aimed to offer an alternative methodology based on Near Infrared (NIR) spectroscopy to discriminate between the presence and absence of Salmonella spp. in whole and skimmed UHT milk. Different samples of whole and skimmed milk, both treated through UHT were submitted to data analysis conducted in Matlab ® software, using PLS toolbox® tools. The PLS-DA models were median centered and cross-validated using leave one out algorithm. The model to discriminate skimmed milk samples was constructed using four latent variables and presented RMSEC = 0.1639; RMSECV = 0.2084 and RMSEP = 0.0971. To the whole milk, the model was built using six latent variables with RMSEC = 0.1351 values; RMSECV = 0.2076 and RMSEP = 0.0928. The results showed that the suggested methodology was able to differentiate between contaminated and uncontaminated samples successfully, presenting potential to be implemented in the quality control sector of milk industry.

CNPQ / O leite é uma das principais fontes de nutrientes da dieta humana e é um alimento que acompanha o ser humano durante toda a vida, tanto como leite de consumo como através de seus derivados. O leite pode apresentar contaminação oriunda de diversas fontes, relacionados desde a ordenha até o processo de beneficiamento do mesmo. Dentre esses contaminantes, destacam-se as micotoxinas, que são metabólitos tóxicos produzidos por fungos em condições de estresse. Estudos correlacionam a ocorrência de micotoxinas em leite e derivados lácteos, com ênfase na aflatoxina M1 (AFM1) que é regulamentada pela legislação vigente. Apesar da maior parte da literatura afirmar que a aflatoxina B1 (AFB1) é completamente convertida em AFM1, resultados preliminares tem sugerido que isso não é verdadeiro, o que vem a justificar que a mesma passe, também, a ser analisada, uma vez que a toxicidade da AFB1 é maior que a da AFM1. Na área de leite e derivados lácteos, estudos têm sugerido que as aflatoxinas, em especial a AFM1, localizam-se predominantemente nas frações proteicas. Porém, a elucidação da interação entre AFM1 e fração proteica permanece sem conclusão definitiva, o que sugere um campo amplo de estudo nesta área. Ainda, tendo em vista que a concentração de aflatoxinas é predominante na fração proteica e que pode haver uma interação química entre esta fração e aflatoxinas, os tratamentos térmicos aos quais o leite é submetido podem causar alterações significativas nas estruturas dessas proteínas e, por conseguinte, nas interações entre proteínas e AFM1 e AFB1. Portanto, o entendimento da natureza das ligações entre as AFM1 e AFB1 às proteínas do leite é imprescindível para a compreensão da biodisponibilidade dessas micotoxinas em animais e seres humanos. Desta forma, o objetivo do trabalho foi verificar o efeito do tratamento térmico e da digestibilidade sobre a interação proteína-aflatoxina. Para isso, foram contaminados amostras de solução de caseína bovina e leite desnatado com AFB1 (200 µg.L-1) e AFM1 (20 µg.L-1), posteriormente submetidas a pasteurização e digestão in vitro. As determinações realizadas consistiram na quantificação das AFLB1 e M1 por Cromatografia à Líquido de Ultra Alta Eficiência, Espectroscopia na região do infra vermelho (FTIR), Calorimetria Exploratória Diferencial (DSC) e Espectroscopia de fluorescência. Não houve redução da concentração de AFB1 e AFM1 após o tratamento térmico e a bioacessibilidade foi de 91,2% 70,5% e 90,9% e 69,7%, respetivamente, para caseína bovina e leite desnatado. Avaliando quantitativamente as estruturas secundárias da solução de caseína bovina e leite desnatado contaminados com AFB1 e AFM1 as principais mudanças ocorreram nas estruturas β-volta, β-anti e β-folha. Com a análise de DSC observou-se picos exotérmicos para ambos os ensaios, com variação de entalpia (∆H) após cada ensaio. Em relação aos espectros de fluorescência, foi possível verificar que as AFB1 e AFM1 promoveram redução da fluorescência original das proteínas lácteas. Pelos resultados obtidos, é possível concluir que a concentração das AFB1 e M1 não foram reduzidas pela temperaturaempregada, provavelmente pela interação proteínas do leite-aflatoxina, resultando numa bioacessibilidade relativamente elevada. / Milk and derivates are one of the main sources of nutrients of the human diet and is a food that follow's man during all of your life. The milk may be contaminated from several sources, related since milking until the beneficiation process. Among these contaminants, highlights are the mycotoxins, which are toxic metabolites produced by fungus in conditions of stress. Studies related to the occurrence of mycotoxins in milk and milk products, with the emphasis on aflatoxin M1 (AFM1) which is ruled by Brazilian law. While most of the literature stating that aflatoxin B1 (AFB1) is completely converted into AFM1, preliminary results have suggested that this is not true, justifying that it passes also to analyze because the toxicity of AFB1 is greater than the AFM1. In the milk and dairy products, studies have suggested that aflatoxins, in particular AFM1, are located predominantly in protein fractions. However, the elucidation of the interaction between AFM1 and protein fraction remains without definitive conclusion, suggesting a large broad field of study in this area. Also considering that the concentration of aflatoxins are prevalent in the protein fractions and can have a chemical interaction between these fractions and aflatoxins, the thermal treatments that the milk is subjected can cause significant changes in these proteins structures and consequently in interactions between proteins and AFM1 and AFB1. Therefore, the knowledge of nature of the links between AFM1 and AFB1 to milk proteins is indispensable for understanding the bioavailability of these mycotoxins in animals and humans. Thus, the aim of this study was to investigate the effect of thermal treatment and the digestibility of the interaction protein-aflatoxin. For this, samples of bovine casein solution and skimmed milk were contaminated with AFB1 (200 μg.L-1) and AFM1 (20 μg.L-1), and then submitted to pasteurization and in vitro digestion. The carried analyzes consisted in quantifying AFB1 and AFM1using high performance liquid chromatography, Fourier transform infrared spectroscopy (FTIR), Differential Scanning Calorimetry (DSC) and fluorescence spectroscopy. There was no reduction in the concentration of AFB1 and AFM1 and after the thermal treatment the bioaccessibility was 91.2% and 70.5%, 90.9% and 69.7%, respectively, for bovine casein and skim milk. In quantitative assessments of the secondary structures of bovine casein and skim milk contaminated with AFB1 and AFM1 the major changes occurred in the β-turn structures, β-anti and β-sheet. With the DSC analysis was observed exothermic peaks for both tests, the change of enthalpy (∆H) after each test. Regarding the fluorescence spectra, we found that AFB1 and AFM1 promoted reduction of the original fluorescence of milk proteins. From the results, it may be concluded that the concentration of AFB1 and M1 not been reduced by the temperature applied, probably by the interaction between milk protein and aflatoxin, resulting in a relatively high bioaccessibility.

O presente trabalho visa avaliar a presença de resíduos de oxitetraciclina de longa ação em leite de vacas acometidas de dermatite digital papilomatosa, divididas em dois grupos, tratadas por aplicação tópica e intramuscular, utilizando a técnica de Cromatografia Líquida de Alta Eficiência. Desta forma, objetivando determinar a curva de eliminação da oxitetraciclina de longa ação em múltiplas administr ações e o período de carência desse antibiótico no leite, foram colhidas amostras biológicas em diferentes tempos após a administração do fármaco. O método analítico validado apresentou linearidade, limite de quantificação, recuperação, precisão e exatidão adequados, para a quantificação da oxitetraciclina em leite bovino. Os animais do grupo 2, tratados com a aplicação tópica, não apresentaram resíduos no leite. No grupo 1, onde os animais foram tratados com aplicação intramuscular, o aumento na concentração do resíduo variou de acordo com a proximidade da coleta com a administração, e foram tão altos quanto 4854ng/ml, e os limites máximos de resíduos, foram superiores a tempo de carência preconizado pelos laboratórios farmacêuticos. / The purpose of this present work is to evaluate the presence of long action oxitetracic1ine residues in milk from DDP afflicted cows, treated with topic and intramuscular administration (8 animals per group). Analysis were performed by High Performance Liquid Chromatography after treatment with trichloracetic acid. Therefore, aiming to determine the long action oxitetracic1ine elimination curve in milk residues, after multiple administrations, and withdraw period, biological samples were collected in different times after antibiotic administrations. The validated analytic method showed suitable linearity, quantification limit, accuracy, precision and recovery, for quantification of oxitetraciclina in milk. The group in which oxytetracycline, was administred dermically showed any residues in milk in all analysed samples. In the first group, where the animals were treated with intramuscular administration, values as high as 4854 ng/ml were detected, and concentration were higher than Maximum Residue Levels after the withdraw period, determined for the pharmaceutical laboratories.

O presente trabalho visa avaliar a presença de resíduos de oxitetraciclina de longa ação em leite de vacas acometidas de dermatite digital papilomatosa, divididas em dois grupos, tratadas por aplicação tópica e intramuscular, utilizando a técnica de Cromatografia Líquida de Alta Eficiência. Desta forma, objetivando determinar a curva de eliminação da oxitetraciclina de longa ação em múltiplas administr ações e o período de carência desse antibiótico no leite, foram colhidas amostras biológicas em diferentes tempos após a administração do fármaco. O método analítico validado apresentou linearidade, limite de quantificação, recuperação, precisão e exatidão adequados, para a quantificação da oxitetraciclina em leite bovino. Os animais do grupo 2, tratados com a aplicação tópica, não apresentaram resíduos no leite. No grupo 1, onde os animais foram tratados com aplicação intramuscular, o aumento na concentração do resíduo variou de acordo com a proximidade da coleta com a administração, e foram tão altos quanto 4854ng/ml, e os limites máximos de resíduos, foram superiores a tempo de carência preconizado pelos laboratórios farmacêuticos. / The purpose of this present work is to evaluate the presence of long action oxitetracic1ine residues in milk from DDP afflicted cows, treated with topic and intramuscular administration (8 animals per group). Analysis were performed by High Performance Liquid Chromatography after treatment with trichloracetic acid. Therefore, aiming to determine the long action oxitetracic1ine elimination curve in milk residues, after multiple administrations, and withdraw period, biological samples were collected in different times after antibiotic administrations. The validated analytic method showed suitable linearity, quantification limit, accuracy, precision and recovery, for quantification of oxitetraciclina in milk. The group in which oxytetracycline, was administred dermically showed any residues in milk in all analysed samples. In the first group, where the animals were treated with intramuscular administration, values as high as 4854 ng/ml were detected, and concentration were higher than Maximum Residue Levels after the withdraw period, determined for the pharmaceutical laboratories.